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家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化
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作者 彭建 刘巍巍 +3 位作者 吴兆颖 杨燕琴 尚小丽 吴建伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第2期182-185,共4页
目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克... 目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆。用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX 4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18 h,表达相对分子质量约为26×10~3上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml。结论成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 家蝇 CEC4 克隆 原核表达
人HNA-3a基因的克隆及其在HEK-293细胞的表达 预览
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作者 陈丽 周浩 +1 位作者 何宏天 管政 《蚌埠医学院学报》 CAS 2019年第1期6-8,13共4页
目的:构建人HNA-3a基因全长的真核表达载体,探索一种检测抗人HNA-3a抗体的实验方法,观察HNA-3a蛋白表达情况。方法:参照GeneBank中人HNA-3a基因序列,设计并合成引物,采用RT-PCR方法反转录HNA-3a基因外显子片段全长,定向克隆到pEGFP-N3... 目的:构建人HNA-3a基因全长的真核表达载体,探索一种检测抗人HNA-3a抗体的实验方法,观察HNA-3a蛋白表达情况。方法:参照GeneBank中人HNA-3a基因序列,设计并合成引物,采用RT-PCR方法反转录HNA-3a基因外显子片段全长,定向克隆到pEGFP-N3载体中,然后采用Lipofectamine TM 2000试剂将含目的基因的pEGFP-N3表达载体转染至HEK-293细胞中进行稳定表达,并以免疫荧光和蛋白质免疫印迹法(WB)鉴定目的基因的表达情况。结果:免疫荧光和免疫印迹结果显示,目的基因在HEK-293细胞中获高效表达。结论:成功构建了高效表达HNA-3a蛋白的真核表达载体,为检测人血浆中抗HNA-3a抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 基因表达 克隆 HNA-3a HEK293细胞
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南洋楹无性系种子园生长种实评价
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作者 古巧云 胡德活 +3 位作者 黄光亮 韦如萍 王润辉 晏姝 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期16-21,共6页
研究了南洋楹无性系种子园53个无性系的生长、结实和种子特征。发现不同无性系生长、结实性状的变异程度比较大,除冠幅浓密度性状以外,均存在极显著差异(P<0.001);不同性状的重复力在0.30~0.97之间;无性系生长和种实性状间无显著相... 研究了南洋楹无性系种子园53个无性系的生长、结实和种子特征。发现不同无性系生长、结实性状的变异程度比较大,除冠幅浓密度性状以外,均存在极显著差异(P<0.001);不同性状的重复力在0.30~0.97之间;无性系生长和种实性状间无显著相关性。采用层次分析法(AHP)研究发现,生长、结实和种子特征等3类性状的子准则层间分别存在显著或极显著正相关关系;每层次判断矩阵具有满意一致性(CR<0.1),冠高比和结实量的总权重值最高。采用综合数量评价值(N)和系统聚类法将53个无性系分为3组,筛选出第Ⅰ、Ⅱ组共计15个无性系,结实量比平均值提高2.3倍,冠高比达到1.33,生长种实性状均得到综合提升,可为种子园的改良或重建提供依据。 展开更多
关键词 南洋楹 无性系 种子园 种子性状 评价与选择
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三疣梭子蟹NF-κB家族基因Relish和Dorsal的克隆及表达特征 预览
4
作者 赵姣姣 陶震 +3 位作者 周素明 金珊 王国良 周岐存 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期298-304,共7页
为研究Relish和Dorsal在三疣梭子蟹免疫过程中所起到的作用,研究利用RACE技术克隆获得三疣梭子蟹Relish(Pt-Rel)、Dorsal基因(Pt-Dor)cDNA全长,并通过实时荧光定量PCR技术分析了Pt-Rel和Pt-Dor基因在健康蟹不同组织及其原代培养的血淋... 为研究Relish和Dorsal在三疣梭子蟹免疫过程中所起到的作用,研究利用RACE技术克隆获得三疣梭子蟹Relish(Pt-Rel)、Dorsal基因(Pt-Dor)cDNA全长,并通过实时荧光定量PCR技术分析了Pt-Rel和Pt-Dor基因在健康蟹不同组织及其原代培养的血淋巴细胞在感染不同微生物后的表达情况。结果显示,Pt-Rel cDNA长3254 bp,ORF长2949 bp,编码983个氨基酸,Pt-Dor cDNA长2348 bp,ORF长1911 bp,编码637个氨基酸;蛋白结构预测分析发现Pt-Rel和Pt-Dor均包含RHD(Rel homology domain)及IPT(Immunoglobulin-like fold,Plexins,TranscriPtion factors)Rel/NF-κB家族蛋白经典结构域。Pt-Rel和Pt-Dor与其他节肢动物Relish、Dorsal氨基酸序列具有很高的相似性;在系统进化分析中Pt-Rel和Pt-Dor分别与中华绒螯蟹等甲壳动物的Relish、Dorsal聚在一支,而昆虫类聚在另一支。Pt-Rel和Pt-Dor在检测的6种组织中均有表达,且2个基因均在血淋巴细胞中表达量最高。蟹血淋巴细胞体外感染实验结果表明,不同病原微生物对2个基因表达的影响非常相似,假丝酵母在2h明显诱导了Pt-Rel和Pt-Dor基因的表达,而金黄色葡萄球菌及溶藻弧菌在感染4h后使Pt-Rel和Pt-Dor基因的表达显著上调。上述研究结果表明Pt-Rel和Pt-Dor基因很有可能参与了三疣梭子蟹的抗感染免疫过程。 展开更多
关键词 三疣梭子蟹 NF-ΚB 基因克隆 表达分析
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甜樱桃GalDH、Gal LDH的克隆及在果实发育过程的表达 预览
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作者 黄晓婧 赵雪雯 +1 位作者 吕秀兰 梁东 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期47-52,共6页
【目的】探究GalDH和GalLDH在甜樱桃果实AsA生物合成中的作用。【方法】本研究以甜樱桃‘佐藤锦’(Satonishiki)果实为材料,采用改良CTAB法提取总RNA,运用RT-PCR法,克隆并分析了抗坏血酸L-半乳糖合成途径PacGalDH和PacGalLDH基因的cDNA... 【目的】探究GalDH和GalLDH在甜樱桃果实AsA生物合成中的作用。【方法】本研究以甜樱桃‘佐藤锦’(Satonishiki)果实为材料,采用改良CTAB法提取总RNA,运用RT-PCR法,克隆并分析了抗坏血酸L-半乳糖合成途径PacGalDH和PacGalLDH基因的cDNA全长序列。此外,采用实时荧光定量PCR分析了两基因在甜樱桃果实发育过程的表达。【结果】获得了1 253 bp长的PacGalDH cDNA序列,其中含有975 bp完整的开放阅读框(ORF),编码324个氨基酸残基。获得了1 914 bp长的PacGalLDH c DNA序列,含有1 791 bp完整的ORF,编码596个氨基酸。通过氨基酸序列比对发现,PacGalDH和PacGalLDH氨基酸序列均与梅和桃对应的氨基酸序列具有较高的同源性,达98%。实时荧光定量PCR分析表明,PacGalDH和PacGalLDH在甜樱桃果实不同发育阶段均有表达,均在花后10 d达到最大表达量,随后逐渐下降。并且,果实总抗坏血酸(T-AsA)含量在花后0 d最高,达44.7 ng/g,此后呈下降趋势。【结论】在果实生长发育过程中,PacGalDH的表达量变化与T-AsA水平变化趋势基本一致,初步推测PacGalDH可能是甜樱桃AsA生物合成的关键酶。 展开更多
关键词 甜樱桃 抗坏血酸 GalDH GalLDH 克隆 表达分析
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羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因的克隆及生物信息学分析 预览
6
作者 李宝宝 张振兴 +11 位作者 黄海峰 张萌萌 郑义盈 王成强 章泸尹 安琪 杨小健 聂鑫 曹瑞勇 朱姝 王凤阳 杜丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第1期28-36,共9页
试验旨在克隆羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌HN07株ompW基因序列(登录号:CP007040.1),使用DNAMAN 5.0软件设计1对引物,选取高保真酶PrimeSTARMax DNA Polymerase进行PCR反应... 试验旨在克隆羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因,并对其序列进行生物信息学分析。根据GenBank中多杀性巴氏杆菌HN07株ompW基因序列(登录号:CP007040.1),使用DNAMAN 5.0软件设计1对引物,选取高保真酶PrimeSTARMax DNA Polymerase进行PCR反应获取目的基因片段,并对ompW基因的核苷酸序列及预测的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果表明,PCR扩增产物约为615bp,编码204个氨基酸。核苷酸同源性比对分析显示,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源、牛源、禽源多杀性巴氏杆菌同源性较高,而与兔源同源性较低。系统进化树结果发现,羊源多杀性巴氏杆菌ompW基因与猪源多杀性巴氏杆菌ompW基因亲缘关系最近。经生物信息学分析发现,ompW蛋白分子式为C1007H1567N257O283S3,分子质量为21.90ku,理论等电点(pI)为9.16,属碱性蛋白质,疏水指数为96.57,总平均疏水性(GRAVY)为0.173(>0),属于疏水类蛋白;前21位氨基酸为信号肽,第5-27位氨基酸区域存在1个跨膜区,存在N-糖基化位点及磷酸化位点,不存在O-糖基化位点,具有多个B细胞、CTL细胞及Th细胞抗原表位;二级结构的α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占17.65%、35.29%、3.92%和43.14%;三级结构是呈β-桶状的单聚体,隶属于外膜蛋白家族成员之一。本研究结果为进一步阐明羊源多杀性巴氏杆菌侵染宿主过程中自身的抗宿主免疫胁迫机制及疫苗的开发与研制提供了理论依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 ompW基因 克隆 生物信息学分析
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柚木无性系生长性状的遗传变异与选择效应 预览
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作者 黄桂华 梁坤南 +3 位作者 周再知 周树平 杨光 王西洋 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期101-106,共6页
【目的】掌握柚木Tectona grandis无性系性状遗传变异规律以及无性系与立地的互作效应,选育优良无性系。【方法】采用随机完全区组设计,开展柚木无性系区域性两点试验。【结果】方差分析结果显示,3.5年生柚木无性系树高、胸径、单株材... 【目的】掌握柚木Tectona grandis无性系性状遗传变异规律以及无性系与立地的互作效应,选育优良无性系。【方法】采用随机完全区组设计,开展柚木无性系区域性两点试验。【结果】方差分析结果显示,3.5年生柚木无性系树高、胸径、单株材积在试验地点间、无性系间、无性系×立地互作间均呈极显著差异。海南定安试验点柚木无性系树高的变异系数较小(0.092),定安试验点胸径的变异系数和云南景谷试验点树高、胸径的变异系数都较大(0.118~0.167),定安和景谷试验点3.5年生单株材积的变异系数分别达到0.327和0.305。定安试验点柚木无性系树高和胸径的重复力分别为0.873和0.852,景谷试验点柚木无性系树高和胸径的重复力分别为0.851和0.773,定安和景谷试验点3.5年生单株材积的重复力分别为0.863和0.784。【结论】为海南定安地区筛选出速生柚木无性系3078-5、7029、7122、7514和7559,入选无性系的平均树高、胸径和单株材积分别比对照提高21.11%、19.82%和60.53%;为云南景谷地区筛选出速生柚木无性系7029、Z408、7509、7559和8301,入选无性系的平均树高、胸径和单株材积分别比对照提高31.69%、33.66%和128.24%;选择后,2个试验点的材积遗传增益分别达到40.26%和34.57%,其中优良无性系7029和7559为两地共有。 展开更多
关键词 柚木 无性系 区域测定 遗传变异 互作效应
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山羊痘病毒059蛋白表达及鉴定 预览
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作者 米丽开姆·托合提尼亚孜 张雪萍 +3 位作者 何川川 童剑军 杨倩 李有文 《塔里木大学学报》 2019年第1期12-18,共7页
为研究山羊痘病毒的059蛋白,本研究用PCR技术扩增山羊痘病毒THX株059基因,并构建了融合表达His标签的原核表达载体,测序鉴定并分析了059基因的核苷酸序列特征和推测的氨基酸序列结构特征,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,用S... 为研究山羊痘病毒的059蛋白,本研究用PCR技术扩增山羊痘病毒THX株059基因,并构建了融合表达His标签的原核表达载体,测序鉴定并分析了059基因的核苷酸序列特征和推测的氨基酸序列结构特征,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,用SDS-PAGE和Western-blot鉴定其蛋白表达情况。结果成功扩增并构建了山羊痘病毒059基因的原核表达载体PET-42b-059,THX株059基因全长为765bp,与参考株的相似性高达99.34%,与山羊痘病毒在亲缘关系上较近,而与疙瘩皮肤病病毒与绵羊痘病毒的亲缘关系较远。059蛋白会长255aa,由多个α螺旋和β片层交错构成,分子量大小为29KDa,SDS-PAGE结果显示其以包涵体的形式表达,大小与理论相符,WesternBlot结果证明059蛋白与His标签进行了融合表达。结果表明059蛋白可以较好原核表达,为进一步研究该蛋白的其他生物学特性奠定了基础。 展开更多
关键词 羊痘病毒 059 基因 克隆 原核表达
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白桦BpSPL2基因启动子的克隆及表达分析 预览
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作者 王晟宇 张淇 +4 位作者 张正一 胡晓晴 田晶 张勇 刘雪梅 《植物研究》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期96-103,共8页
SPL(SQUAMOSA promoter-binding protein-like)是植物特有的转录因子,研究表明其在参与发育阶段转变、花和果实发育等方面起着重要作用。利用PCR技术从白桦基因组DNA中扩增获得BpSPL2基因上游1 960 bp启动子序列,使用PLACE和PlantCARE... SPL(SQUAMOSA promoter-binding protein-like)是植物特有的转录因子,研究表明其在参与发育阶段转变、花和果实发育等方面起着重要作用。利用PCR技术从白桦基因组DNA中扩增获得BpSPL2基因上游1 960 bp启动子序列,使用PLACE和PlantCARE在线软件分析序列,发现BpSPL2基因启动子序列中含有与开花、非生物胁迫及激素响应等相关的顺式作用元件,暗示其在植物的生长发育和胁迫应答中起重要作用。进而构建了BpSPL2基因启动子驱动GUS报告基因的植物表达载体,并利用农杆菌介导将其瞬时转化至白桦和拟南芥,通过GUS组织化学染色检测BpSPL2基因启动子的组织表达特性,结果表明BpSPL2基因启动子具有启动子活性,能够驱动GUS基因在白桦和拟南芥中表达;而其表达活性在白桦的叶片、芽及根部中较强,在拟南芥的花药、雌蕊和叶片较强,为进一步研究白桦BpSPL2基因的表达调控及其功能分析提供参考。 展开更多
关键词 白桦 BpSPL2启动子 顺式作用元件 克隆 表达分析
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鱼类PPARs的克隆表达及其研究进展 预览
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作者 张祺照 王伟平 《科技资讯》 2019年第2期242-244,共3页
该研究主要从鱼类PPARs的结构与分类、生物学功能、鱼类组织及胚胎发育过程中PPARs的克隆表达及影响进行综述,以期为科研工作者进一步探索鱼类PPARs的基因结构表达,以及在生物学功能产品开发上奠定相关的理论基础。
关键词 PPARs基因 克隆 表达 功能研究
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番茄不同截短U3启动子的克隆及功能分析
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作者 蒲艳 刘晓东 +2 位作者 阿尔祖古丽·塔什 魏倩 刘超 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期33-39,共7页
从中蔬四号番茄品种中克隆能在番茄叶片中高效转录的SlU3启动子,为今后利用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行分子育种奠定了基础。采用2轮PCR的方法,第1轮PCR从中蔬四号番茄品种中克隆了3种SlU3启动子,再采用Transfer PCR方法分别对3个启动... 从中蔬四号番茄品种中克隆能在番茄叶片中高效转录的SlU3启动子,为今后利用CRISPR/Cas9基因编辑技术进行分子育种奠定了基础。采用2轮PCR的方法,第1轮PCR从中蔬四号番茄品种中克隆了3种SlU3启动子,再采用Transfer PCR方法分别对3个启动子进行截短,共得到6个不同长度的启动子,并分别构建6个截短的SlU3启动子驱动GUS融合植物表达载体,利用农杆菌转化法分别转染番茄叶片。运用DNAMAN软件对已克隆的SlU3和拟南芥AtU3启动子序列具有转录功能的必要元件进行序列分析;经过2轮PCR,首先从中蔬四号番茄品种中克隆了3种SlU3-1P、SlU3-3P、SlU3-4P启动子,其长度分别是1 156,1 114,1 147 bp,再采用Transfer PCR方法分别对3个启动子进行截短,共得到6个不同长度的启动子,其长度依次是489,318,450,248,457,248 bp,并分别构建6个截短SlU3启动子驱动GUS融合植物表达载体,启动子序列比对分析发现,番茄U3启动子与拟南芥U3启动子一样,也含有比较保守的2个元件,USE和TATA框,2个元件之间的位置比较固定。利用农杆菌转化法分别转染番茄叶片,结果显示,成功侵染后的番茄叶片均被染成蓝色,表明已克隆的6种不同截短番茄SlU3启动子均具有转录活性。成功克隆了6种在番茄叶片中高效转录的SlU3启动子,为构建番茄CRISPR/Cas9基因编辑载体提供更多高效的内源启动子。 展开更多
关键词 番茄 SlU3启动子 克隆 农杆菌转化 番茄叶片
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天山雪莲SikFBP1基因的抗寒性研究 预览
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作者 彭业军 成凤凤 +4 位作者 何亚玲 刘珊珊 刘兆书 王爱英 祝建波 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期14-21,共8页
在植物体内,FBPase酶是卡尔文循环内一个不可缺少的酶,在干旱、高温、盐碱等非生物胁迫中FBPase同样起着重要的作用。本试验从典型的耐极端低温的植物天山雪莲(Saussurea involucrata Kar.ER Kir.)中克隆了一段FBPase序列,命名为SikFBP1... 在植物体内,FBPase酶是卡尔文循环内一个不可缺少的酶,在干旱、高温、盐碱等非生物胁迫中FBPase同样起着重要的作用。本试验从典型的耐极端低温的植物天山雪莲(Saussurea involucrata Kar.ER Kir.)中克隆了一段FBPase序列,命名为SikFBP1,同时也克隆出了一段SBPase序列命名为SikSBP。实时荧光定量显示2个基因对寒冷胁迫都做出了响应,为验证其抗寒性功能分别转入了烟草中。通过RT-PCR验证获得转化植株,低温胁迫下,通过丙二醛(MDA)含量、相对电子渗透率(REL)、过超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、PSⅡ最大光化学效率(Fv/Fm)及光合效率(Pn)的测量,发现转SikFBP1基因株系与转SikSBP基因株系在光合效率上提高较为微弱,但在耐寒性方面得到了一定的提高,为FBPase的功能研究提供一定参考。 展开更多
关键词 天山雪莲 烟草 SikFBP1 SikSBP 克隆 耐寒性 光合效率
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微小毛霉凝乳酶蛋白质工程改造研究 预览
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作者 王兴吉 贾仁洁 +1 位作者 张志来 刘文龙 《江苏调味副食品》 2019年第1期31-33,共3页
微小毛霉凝乳酶(MPC)是微生物凝乳酶的主要来源之一。本研究将微小毛霉凝乳酶基因克隆到表达载体pET30a中并转化宿主BL21(DE3),使微小毛霉凝乳酶蛋白在大肠杆菌中表达。通过易错PCR技术对MPC进行随机突变建库,从中筛选出两株具有优良蛋... 微小毛霉凝乳酶(MPC)是微生物凝乳酶的主要来源之一。本研究将微小毛霉凝乳酶基因克隆到表达载体pET30a中并转化宿主BL21(DE3),使微小毛霉凝乳酶蛋白在大肠杆菌中表达。通过易错PCR技术对MPC进行随机突变建库,从中筛选出两株具有优良蛋白特性的突变体,为蛋白质结构与功能研究以及菌种改造奠定基础。 展开更多
关键词 微小毛霉 凝乳酶 克隆 易错PCR 蛋白质
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黄檗3种生物碱质量分数的变异规律 预览
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作者 唐晓杰 张悦 +2 位作者 王井源 王忠良 程广有 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期54-58,共5页
利用无性系对比林,研究了黄檗药根碱、掌叶防己碱和小檗碱质量分数变异规律。结果表明:不同种源间生物碱质量分数差异极显著,3种生物碱质量分数均以临江种源2最高,临江种源1次之,黑龙江种源1最低;不同无性系间3种生物碱质量分数差异极显... 利用无性系对比林,研究了黄檗药根碱、掌叶防己碱和小檗碱质量分数变异规律。结果表明:不同种源间生物碱质量分数差异极显著,3种生物碱质量分数均以临江种源2最高,临江种源1次之,黑龙江种源1最低;不同无性系间3种生物碱质量分数差异极显著,临江种源2内药根碱质量分数较高的无性系是L2F12、L2F7、L2F15和L2M5,掌叶防己碱质量分数较高的无性系是L2F12、L2F16、L2F7和L2F14,小檗碱质量分数较高的无性系是L2F12、L2F15、L2M5和L2F10,黑龙江种源1内小檗碱质量分数较高的无性系是H1F6、H1M4和H1M13。3种生物碱总质量分数较高的无性系是L2F12、L2F10、L2M1和L2M5。 展开更多
关键词 黄檗 种源 无性系 生物碱质量分数
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多杀性巴氏杆菌中recN基因的克隆、原核表达及生物信息学分析 预览
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作者 章泸尹 郑义盈 +11 位作者 王成强 安琪 张萌萌 黄海峰 张振兴 李宝宝 朱姝 杨小健 曹瑞勇 聂鑫 杜丽 王凤阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期661-668,共8页
试验旨在对多杀性巴氏杆菌recN基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中recN基因序列(登录号:CP003313.1)设计1对引物,通过PCR扩增获得目的基因片段,构建pET-28a(+)-recN重组质粒并转化E.coli DH5α感... 试验旨在对多杀性巴氏杆菌recN基因进行克隆和原核表达,并对其表达蛋白进行生物信息学分析。参照GenBank中recN基因序列(登录号:CP003313.1)设计1对引物,通过PCR扩增获得目的基因片段,构建pET-28a(+)-recN重组质粒并转化E.coli DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定,将鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,对融合蛋白进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定。结果表明,试验成功克隆了大小约为1677bp的recN基因序列,通过诱导表达的His-Tag融合蛋白大小约为66.94ku,主要以包涵体形式存在。经生物信息学分析,recN蛋白的分子式为C2735H4428N786O855S16,消光系数为24785,不稳定系数为43.99,属于不稳定蛋白;理论等电点(pI)为5.62,为酸性蛋白;总平均亲水性为-0.316,与试验表达的包涵体蛋白性质相同,即同为疏水性蛋白;recN蛋白在哺乳动物网织红细胞的半衰期为30h,在酵母(体内)中的半衰期>20h,在大肠杆菌(体内)中的半衰期>10h;二级结构主要以α-螺旋(64.87%)及无规则卷曲(21.00%)为主;经疏水性分析,预测该蛋白有3个高疏水性区域和9个高亲水性区域。本试验结果为进一步探究多杀性巴氏杆菌recN基因的功能提供了参考依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 recN基因 克隆 原核表达 生物信息学分析
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刺五加GPS基因克隆及表达特征与皂苷含量相关性研究
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作者 张佳桢 邢可心 +3 位作者 冯文昭 国红玉 王卓 邢朝斌 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期1227-1231,共5页
目的 克隆刺五加香叶基焦磷酸合成酶(geranyl pyrophosphate synthase,GPS)基因的cDNA序列并分析基因序列特征、不同器官中基因表达水平及其与皂苷含量的相关性。方法 提取刺五加的RNA,逆转录为cDNA。根据转录组测序结果中编码GPS的unig... 目的 克隆刺五加香叶基焦磷酸合成酶(geranyl pyrophosphate synthase,GPS)基因的cDNA序列并分析基因序列特征、不同器官中基因表达水平及其与皂苷含量的相关性。方法 提取刺五加的RNA,逆转录为cDNA。根据转录组测序结果中编码GPS的unigene(c37362.graph_c0),设计特异性引物,经过PCR扩增GPS基因的cDNA全长。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析GPS基因在不同器官中的表达水平,并通过分光光度法检测刺五加总皂苷含量。结果 克隆得到长1260bp、编码419个氨基酸的刺五加GPS基因cDNA。GPS蛋白定位于线粒体内且不存在跨膜区域。GPS基因在各个器官中均有表达,在叶片中的表达量最高,是根中表达量的5.26倍。GPS基因的相对表达量与皂苷量呈现出同升同降的变化趋势,表现为显著正相关关系(r=0.851,P<0.05)。结论 首次克隆获得刺五加GPS基因的cDNA全长序列,明确了刺五加GPS基因的表达量与皂苷含量之间存在正相关关系。 展开更多
关键词 刺五加 香叶基焦磷酸合成酶 克隆 实时荧光定量PCR 皂苷
Bioinformatics and Expression Pattern Analysis of Tomato ns LTP 2-like cDNA full-length Gene Clone 预览
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作者 Zhang Jia He Shan-shan +3 位作者 Zhao Ting-ting Jiang Jing-bin Li Jing-fu Xu Xiang-yang 《东北农业大学学报:英文版》 CAS 2019年第1期28-36,共9页
TDF1(transcription-drived fragment) was homologous to the predicted S. lycopersicum nonspecific lipid-transfer protein,nsLTP 2-like(91%), and it was significantly upregulated in response to C. fulvum(cladosporium fulv... TDF1(transcription-drived fragment) was homologous to the predicted S. lycopersicum nonspecific lipid-transfer protein,nsLTP 2-like(91%), and it was significantly upregulated in response to C. fulvum(cladosporium fulvum) infection in tomato plants.In this experiment, the full-length cDNA of nsLTP 2-like was cloned using RACE technology based on the sequence of TDF1(GenBank: JZ717725). A full-length, 625 bp(GenBank: KU366289), cDNA sequence, which with 98% similarity to nsLTP 2-like gene(GenBank: XM015233692) was obtained. This cDNA contains an ORF(open reading frame) with full-length of 345 bp, coding of 114 amino acids, including 12.3% Ala and Gly. Protein molecular weight was 11.51 ku, the isoelectric point(pI) was 8.99, and average overall hydrophilicity was 0.412, with one phosphorylation sites, belonging to volatile acidic nuclear protein. Secondary structure prediction showed that α-Helix accounts for 30.7%, extension chain for 12.28%, β-corner for 9.65%, and random coil for 47.37%. Through comparative analysis of the homology among species, it was found that the amino acid sequence of tomato nsLTP 2-like protein had a high similarity with other plants, and with a specific conserved sequence which might related features in nsLTP 2-like protein. It also be analyzed the gene expression pattern of tomato in different parts and under different stress conditions.The results showed that nsLTP 2-like gene was up-regulated in varying degrees, under the condition of cold stress, exogenous hormone spraying and cladosporium fulvum infection. Therefore, it was speculated that the gene played a role in response to abiotic and biotic stress in tomato. 展开更多
关键词 TOMATO NSLTP 2-like CDNA CLONE BIOINFORMATICS analysis expression pattern
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白桦BpTCP7基因启动子的克隆及表达分析
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作者 任丽 董京祥 +2 位作者 杨洋 黄海娇 李慧玉 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期32-38,共7页
【目的】研究Bp TCP7启动子的表达模式,为深入分析Bp TCP7基因功能提供一定参考。【方法】克隆了Bp TCP7基因上游1 791 bp启动子序列,通过PLACE和Plant CARE网址对顺式作用元件进行分析,然后转入拟南芥,并分析Bp TCP7启动子的组织表达... 【目的】研究Bp TCP7启动子的表达模式,为深入分析Bp TCP7基因功能提供一定参考。【方法】克隆了Bp TCP7基因上游1 791 bp启动子序列,通过PLACE和Plant CARE网址对顺式作用元件进行分析,然后转入拟南芥,并分析Bp TCP7启动子的组织表达特性及盐、旱胁迫应答反应。【结果】Bp TCP7启动子序列中含有与细胞周期、开花、叶片发育、激素及胁迫响应等相关的顺式作用元件。该启动子在拟南芥中的表达模式呈现为营养生长阶段和生殖生长阶段均有表达,且在叶片中表达明显,与此同时,Bp TCP7启动子在幼嫩、成熟叶片的边缘均有表达。与对照相比,Na Cl、PEG胁迫诱导处理后Bp TCP7基因表达量有升高的现象。【结论】Bp TCP7基因参与白桦的叶片发育、激素应答、胁迫响应(盐、干旱)等生物学过程,对营养、生殖生长阶段各组织器官的发育也有一定的调控作用。 展开更多
关键词 白桦 BpTCP7启动子 顺式作用元件 克隆 表达分析
芹菜β-胡萝卜素羟化酶基因AgBCH1的克隆及表达特性分析
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作者 王雨薇 郝建楠 +5 位作者 罗鑫 李静文 段奥其 刘洁霞 冯凯 熊爱生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期14-22,共9页
胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase, BCH)在植物类胡萝卜素生物合成中起着重要的作用。芹菜是伞形科一种重要的叶菜类蔬菜作物,含有丰富的类胡萝卜素。本文以芹菜‘六合黄心芹’为实验材料,从中克隆获得编码芹菜β-胡萝卜素羟化... 胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase, BCH)在植物类胡萝卜素生物合成中起着重要的作用。芹菜是伞形科一种重要的叶菜类蔬菜作物,含有丰富的类胡萝卜素。本文以芹菜‘六合黄心芹’为实验材料,从中克隆获得编码芹菜β-胡萝卜素羟化酶的基因AgBCH1。序列分析结果显示,该基因全长933 bp,编码310个氨基酸。进化树分析表明,芹菜AgBCH1蛋白的进化高度保守,与同科的胡萝卜DcBCH1蛋白的进化关系最为相近。序列比对分析显示,植物BCH1氨基酸序列具有较高的同源性,芹菜与同科的胡萝卜BCH1氨基酸序列一致性达到87.94%。Ag BCH1蛋白相对分子质量34 505.73,理论等电点9.10,为亲水性蛋白。芹菜Ag BCH1蛋白三级蛋白结构包括5个α螺旋及6个β折叠,无序化比例为14.84%。利用实时定量PCR对经过低温(4°C)、高温(38°C)、盐(0.2mol·L-1 Na Cl)、干旱(200 g·L-1 PEG) 4种非生物胁迫处理的60 d芹菜叶片中Ag BCH1基因的相对表达量进行检测,发现Ag BCH1基因对这4种逆境胁迫均有响应,尤其对高温胁迫响应明显,且高温处理8 h后表达量最高。 展开更多
关键词 芹菜 β-胡萝卜素羟化酶基因 克隆 非生物胁迫 基因表达
油梨PaWRI1和PaWRI2基因的克隆、序列分析及表达研究
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作者 葛宇 董相书 +7 位作者 张腾 程志号 林兴娥 王甲水 臧小平 徐梓宁 宋勇 马蔚红 《中国果树》 北大核心 2019年第2期37-42,共6页
以‘哈斯’油梨(PerseaamericanaMill.)为试材,通过RACE及RT-PCR技术分别克隆得到2个AP2/EREBP类转录因子WRI1和WRI2基因的c DNA全长,分别命名为PaWRI1(GenBank登录号:MH367865)和PaWRI2(GenBank登录号:MH367866)。其中,PaWRI1基因全长... 以‘哈斯’油梨(PerseaamericanaMill.)为试材,通过RACE及RT-PCR技术分别克隆得到2个AP2/EREBP类转录因子WRI1和WRI2基因的c DNA全长,分别命名为PaWRI1(GenBank登录号:MH367865)和PaWRI2(GenBank登录号:MH367866)。其中,PaWRI1基因全长为1 396 bp,含1 155 bp开放阅读框,编码384个氨基酸;PaWRI2基因全长为1 782 bp,含1 287 bp开放阅读框,编码428个氨基酸。PaWRI1和PaWRI2基因属于AP2/EREBP类转录因子家族,其编码氨基酸序列中分别均存在2个和1个典型的AP2/ERF DNA结合位点。实时荧光定量PCR检测结果表明:在油梨果实发育过程中,果肉中PaWRI1基因的相对表达量始终快速上升,PaWRI2基因的相对表达量先少量下降,而后缓慢上升;PaWRI1基因相对表达量变化与油脂积累的变化较一致,PaWRI2基因相对表达量变化与油脂积累的变化不一致。因此,推测在油梨果实发育过程中,果肉中PaWRI1基因可能参与调控油脂积累过程。 展开更多
关键词 油梨 果肉 PaWRI1 PaWRI2 基因 克隆 油脂积累
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