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大鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体对退变髓核细胞的影响
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作者 蒋长青 蓝蔚仁 +2 位作者 李海音 路康 李长青 《中国脊柱脊髓杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期147-155,共9页
目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体对退变髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的影响。方法:利用全骨髓法提取SD大鼠骨髓内贴壁细胞,通过成骨、成脂、成软骨三系分化及流式细胞技术鉴定所提取细胞是否为BMSCs,鉴定成功... 目的:探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)来源外泌体对退变髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的影响。方法:利用全骨髓法提取SD大鼠骨髓内贴壁细胞,通过成骨、成脂、成软骨三系分化及流式细胞技术鉴定所提取细胞是否为BMSCs,鉴定成功后,收取细胞培养液上清,对上清液进行差速离心,Western-blot(WB)法测定离心沉淀物质CD63、CD81、TSG101、Calnexin蛋白表达情况,并对沉淀物进行透射电镜观察鉴定是否为外泌体。取SD大鼠尾NPCs,传代培养,通过细胞衰老β-半乳糖苷酶染色法鉴定P6 NPCs是否较P2 NPCs产生退变;在激光共聚焦显微镜下观察BMSCs外泌体被P6 NPCs摄取情况;设置P6 NPCs为对照组,BMSCs和P6 NPCs一起培养为共培养组,直接加入BMSCs外泌体诱导P6 NPCs为实验组。培养3d、7d、10d、14d后用RT-PCR法检测3组NPCs中蛋白聚糖(ACAN)、Ⅱ型胶原(COL2)、性别决定区Y方框9(SOX-9)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)、基质金属蛋白酶1(MMP1)基因mRNA的相对表达量;WB法检测ACAN、COL2、SOX-9、TIMP1、MMP1对应蛋白的相对表达情况。结果:通过成骨、成脂、成软骨三系分化及流式细胞技术鉴定利用全骨髓法提取的贴壁细胞为BMSCs。BMSCs培养液上清利用差速离心法提取的沉淀物形态为直径30~100nm的圆形或椭圆形,与文献记载的经典外泌体大小吻合,沉淀物CD63、CD81、TSG101高表达,Calnexin未表达。通过细胞衰老β-半乳糖苷酶染色法鉴定P6 NPCs较P2 NPCs产生明显退变。在激光共聚焦显微镜下观察到外泌体能够被P6 NPCs所摄取。ACAN、COL2、SOX-9、TIMP1基因mRNA的相对表达量在3d、7d、10d、14d共培养组较对照组明显升高(P<0.05),实验组较共培养组明显升高(P<0.05),共培养组和实验组组内7d较3d明显升高(P<0.05)、10d较7d明显升高(P<0.05)、14d较10d明显升高(P<0.05);MMP1基因mRNA的相对表达量在3d、7d、10d、14d共培养组较对照组明显降低(P<0.05),实验� 展开更多
关键词 髓核细胞 骨髓间充质干细胞 外泌体 共培养 SD大鼠
低清除率药物的代谢稳定性预测模型研究进展 预览
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作者 阮婷婷 鞠武建 +3 位作者 熊海伟 姜利芳 许悦 王广基 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期152-160,共9页
药物代谢的稳定性测试是新药发现阶段的关键环节,实现药物的低清除率通常是药物代谢稳定性设计中的重要目标。如何准确评估低清除率药物的代谢稳定性参数,并用体外代谢数据预测人体药动学已经成为新药研发阶段的挑战。传统的肝微粒体模... 药物代谢的稳定性测试是新药发现阶段的关键环节,实现药物的低清除率通常是药物代谢稳定性设计中的重要目标。如何准确评估低清除率药物的代谢稳定性参数,并用体外代谢数据预测人体药动学已经成为新药研发阶段的挑战。传统的肝微粒体模型和悬浮肝细胞模型的孵育时间短,低清除率药物无法产生足够的代谢转化,因此进一步模拟体内环境和延长肝细胞培养时间的新型模型逐渐发展起来。本文重点介绍了新型的低清除率药物代谢稳定性预测模型的原理和优缺点等,包括肝细胞传递式培养模型、单层贴壁肝细胞培养模型、共培养模型和微灌流模型等,同时对模型的发展趋势进行展望,以期为早期先导化合物的代谢稳定性检测提供借鉴和优化。 展开更多
关键词 代谢稳定性 低清除率 传递式培养 共培养 微灌流 原药消除
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体内外共培养体系中肝癌细胞对肝星状细胞活化的影响 预览
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作者 谢群 林丽彬 +2 位作者 张金添 杨学明 林扬元 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期227-234,共8页
目的 探讨共培养体系中肝癌细胞(MHCC97H)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化的影响。方法 建立MHCC97H细胞与HSC直接接触式共培养、纤维蛋白原-凝血酶法共培养、条件培养液共培养、Transwell小室法共培养体系及两种细胞联合... 目的 探讨共培养体系中肝癌细胞(MHCC97H)对肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)活化的影响。方法 建立MHCC97H细胞与HSC直接接触式共培养、纤维蛋白原-凝血酶法共培养、条件培养液共培养、Transwell小室法共培养体系及两种细胞联合荷裸鼠动物模型,免疫细胞化学染色法与Western blot法检测α-SMA表达,CCK-8法检测HSC增殖能力,划痕法及小室法检测HSC迁移运动能力。结果 各种共培养体系中HSC均呈现活化型状态,直接接触式共培养、条件培养液共培养、Transwell小室法共培养体系及细胞联合荷裸鼠动物模型中HSC的α-SMA蛋白表达明显增强;直接接触式共培养、纤维蛋白原-凝血酶法共培养体系及荷裸鼠动物模型中细胞之间的趋化性增强;肝癌细胞条件培养液与Transwell小室共培养体系中HSC的增殖与迁移运动能力均明显增强。结论 在成功构建的多种体内外共培养体系中,肝癌细胞能够促进HSC活化、细胞增殖及迁移运动能力。 展开更多
关键词 肝癌细胞 肝星状细胞 共培养 Α-SMA
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Three kinds of mesenchymal stem cells:differentiating into neuron-like cells 预览
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作者 Yang Ying Xu Qian +1 位作者 Wang Hui-ling Yao Min-xiu 《中国组织工程研究》 北大核心 2018年第33期5356-5360,共5页
BACKGROUND:Stem cells,characterized with convenient collection,wide sources and great potential,have been developed in the cell therapy.The most commonly used stem cells include bone marrow mesenchymal stem cells,plac... BACKGROUND:Stem cells,characterized with convenient collection,wide sources and great potential,have been developed in the cell therapy.The most commonly used stem cells include bone marrow mesenchymal stem cells,placental mesenchymal stem cells and umbilical cord blood mesenchymal stem cells.OBJECTIVE:To compare the biological changes in bone marrow mesenchymal stem cells,placental mesenchymal stem cells and umbilical cord blood mesenchymal stem cells after co-cultured with nerve cells.METHODS:Human bone marrow mesenchymal stem cells,human placental mesenchymal stem cells and human umbilical cord blood mesenchymal stem cells were isolated and cultured in vitro.The morphological changes of mesenchymal stem cells differentiated into nerve cells were observed by co-culture with Transwell culture plates.The expression of neuron-specific enolase was detected after induction.RESULTS AND CONCLUSION:In the co-culture system,these three kinds of mesenchymal stem cells gradually formed a star-like shape and were interconnected.Moreover,all the cells were positive for neuron-specific enolase.These findings reveal that the microenvironment provided by nerve cells can induce and promote the differentiation of three kinds of mesenchymal stem cells into neuron-like cells. 展开更多
关键词 MESENCHYMAL STEM Cells COCULTURE TECHNIQUES TISSUE Engineering
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人肺动脉平滑肌细胞对人肺动脉内皮细胞增殖的影响 预览
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作者 刘宇伟 樊再雯 +2 位作者 吴娟娟 张帅 张波 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第7期25-29,共5页
目的探讨缺氧条件下,细胞共培养体系中人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)经由Survivin信号通路调控人肺动脉内皮细胞(HPAECs)的增殖。方法建立Transwell共培养体系将HPASMCs和HPAECs分别接种于下室和上室,根据HPASMCs是否行YMl55(Surv... 目的探讨缺氧条件下,细胞共培养体系中人肺动脉平滑肌细胞(HPASMCs)经由Survivin信号通路调控人肺动脉内皮细胞(HPAECs)的增殖。方法建立Transwell共培养体系将HPASMCs和HPAECs分别接种于下室和上室,根据HPASMCs是否行YMl55(Survivin抑制剂)预处理进行实验分组:常氧条件下HPASMCs与HAPECs共培养对照组(N组),常氧条件下YMl55(终浓度100nmol/1)预处理HPASMCs与HPAECs共培养组(NY组),缺氧条件下HPASMCs与HAPECs共培养组(H组)和缺氧条件下YM155预处理HPASMCs与HPAECs共培养组(HY组)。采用活细胞计数(CCK8)法检测各组中HPASMCs与HPAECs的增殖活性(吸光度,A值),实时定量PCR检测HPASMCs中Survivin mRNA的表达,Western blot检测HPASMCs中Survivin蛋白的表达。结果N组HPASMCs与HPAECs增殖活性(0.561±0.007)、(0.619±0.013)与H组(0.777±0.030)、(0.875±0.021)比较,差异有统计学意义(q=16.615和21.333,P〈0.05)。HY组HPASMCs与HPAECs增殖活性为(0.661±0.027)、(0.723±0.025),与H组比较差异有统计学意义(q=8.923和12.667,P〈0.05)。共培养体系中N组HPASMCs未见mKNA和Survivin蛋白(0.017±0.001)表达,H组中HPASMCs可见mRNA(4506±849)和Survivin蛋白(0.932±0.018)表达。HY组HPASMCsmRNA和Survivin蛋白含量为(677±183)和(0.426±0.022),与H组比较差异有统计学意义(q=15.25和50.6,P〈0.05)。结论缺氧导致HPASMCs和HPAECs异常增殖,缺氧条件下共培养体系中HPASMCs经由Survivin信号通路调控HpAECs的增殖。 展开更多
关键词 肌细胞 平滑肌 内皮细胞 缺氧 生存素 共培养
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阿魏蘑与胶红酵母共培养中促进产漆酶物质的初步研究 预览
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作者 郭超林 丁重阳 +3 位作者 陆健 顾正华 张梁 石贵阳 《生物加工过程》 CAS 2017年第4期40-44,共5页
阿魏蘑在液态发酵过程中经胶红酵母共培养后,漆酶的产量得到提高,但对其起促进作用的物质尚不清楚。本文中,笔者首先考察阿魏蘑和胶红酵母发酵上清液混合对漆酶酶活测定的影响,发现胶红酵母并没有表达漆酶的能力,同时,发酵上清液的混合... 阿魏蘑在液态发酵过程中经胶红酵母共培养后,漆酶的产量得到提高,但对其起促进作用的物质尚不清楚。本文中,笔者首先考察阿魏蘑和胶红酵母发酵上清液混合对漆酶酶活测定的影响,发现胶红酵母并没有表达漆酶的能力,同时,发酵上清液的混合会导致漆酶酶活的下降。因此,排除了两种微生物发酵液之间发生的协同或促进作用对漆酶酶活的影响。在分别添加高温灭活和70℃灭活的胶红酵母后发现,添加30 g/L的70℃灭活的胶红酵母,阿魏蘑漆酶酶活增加至6 605 U/L,而高温灭活未有相应的促进效果。因此,在共培养中促进漆酶合成的活性物质存在于酵母中并对温度敏感。通过比较70℃灭活胶红酵母的添加时间和添加量后,在阿魏蘑培养第2天添加50 g/L胶红酵母获得最高漆酶产量7 579 U/L。通过研究发现了胶红酵母中某种对热敏感的物质促进了阿魏蘑漆酶表达量的提高,此结果对研究漆酶及其他发酵产物在共培养中表达量的提高有重要意义。 展开更多
关键词 漆酶 共培养 促进物质 热处理酵母细胞 PLEUROTUS ferulae RHODOTORULA mucilaginosa
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Production of early monozygotic twin bovine embryos in vitro by the blastomere separation and coculture technique 预览
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作者 ZHAO Shan-jiang ZHAO Xue-ming +5 位作者 DU Wei-hua HAO Hai-sheng LIU Yan QIN Tong WANG Dong ZHU Hua-bin 《农业科学学报:英文版》 SCIE CSCD 2015年第10期2034-2041,共8页
The objective of this study was to establish an efficient system of producing early monozygotic twin bovine embryos in vitro using the blastomere separation and coculture technique. In this study, early eight-cell emb... The objective of this study was to establish an efficient system of producing early monozygotic twin bovine embryos in vitro using the blastomere separation and coculture technique. In this study, early eight-cell embryos were chosen to optimize the separation method, and multi-coculture tactics were applied to improve the efficiency of this production system. Bovine embryo blastomeres(groups of at least 30 at the eight-cell stage) were separated into eight segments(to regard an eight-cell embryo as a tangerine, a blastomere as one segment) and one, two and four segments(blastomeres) were cultured respectively in microwells on the bottom of the four-well dish(Nunc, Denmark) with 400 μL of culture medium under paraffin oil. Four different types of coculture tactics(cocultured with nothing, intact embryos, bovine cumulus cells(b CCs), intact embryos & b CCs) were applied to the group of four segments(blastomeres). Finally, diameter and inner cell mass(ICM):trophectoderm(TE) cell ratio was measured as a criterion to assess the quality of the twin embryos which were derived from bovine separated blastomeres. Our results showed that rate of blastocyst formation of the four segments group was significantly greater than one or two group(P<0.05). In addition, rate of blastocyst formation was significantly increased when the four segments were cocultured with intact embryo & b CCs(P<0.05). Although the ICM, TE and total cells of blastocysts derived from separated blastomeres was less than the control group from intact embryo(P<0.05), more important quality indicator of the blastocyst diameter and ICM:TE cell ratio was similar between our experimental group and the control group(P>0.05). Thus, these results suggest that combined with intact embryos & b CCs coculture system, culturing four isolated segments(blastomeres) per microwell is an efficient system of producing early monozygotic twin bovine embryos. Furthermore, our results also indicate that the quality of blastocysts derived from separated blastomere may be simil 展开更多
关键词 培养技术 早期胚胎 生产体系 牛胚胎 卵裂球 分离段 双胞胎 体外
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牵张力促进BMSCs与VECs共培养体系成骨分化的体外研究
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作者 王宇 唐国华 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2015年第5期400-404,共5页
目的:研究牵张力对骨髓基质细胞(BMSCs)与血管内皮细胞(VECs)共培养体系成骨分化的作用及相关机制。方法:分离培养大鼠原代BMSCs与VECs。应用Flexcell 5000加力系统,分别对BMSCs与VECs共培养组、BMSCs单独培养组和VECs单独培养组... 目的:研究牵张力对骨髓基质细胞(BMSCs)与血管内皮细胞(VECs)共培养体系成骨分化的作用及相关机制。方法:分离培养大鼠原代BMSCs与VECs。应用Flexcell 5000加力系统,分别对BMSCs与VECs共培养组、BMSCs单独培养组和VECs单独培养组施加6%等轴循环牵张力。加力6、12、24和48 h后,利用实时定量PCR检测Runx2和血管内皮细胞生长因子(VEGF)m RNA的表达量,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF的含量,碱性磷酸酶(ALP)半定量检测ALP活性。通过加入VEGF受体抑制剂Tivozanib,观察VEGF的旁分泌作用。采用SAS 8.0软件包对数据进行统计学分析。结果:1加力6 h时,共培养体系Runx2 m RNA的表达量上调4.3倍(P〈0.05);加力48 h时,ALP活性升高1.5倍(P〈0.05)。2加力12 h时,共培养体系VEGF m RNA的表达量上调2倍(P〈0.05),上清液中VEGF的含量增加10倍(P〈0.05),BMSCs分泌大量VEGF,而VECs分泌极少量VEGF。3加入Tivozanib后,共培养组Runx2的表达量下调90%(P〈0.05),ALP活性下调48%(P〈0.05);而BMSCs单独培养组Runx2的表达量和ALP活性分别下降30%和18%。结论:牵张力促进BMSCs与VECs共培养体系中BMSCs的成骨分化,这种作用可能通过牵张应力诱导BMSCs分泌的VEGF以旁分泌方式由VECs作用于BMSCs来实现。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 血管内皮细胞 共培养 牵张应力 成骨分化 VEGF
小鼠子宫蜕膜基质细胞促进树突状细胞的增殖 预览
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作者 李娜 高美华 《泰山医学院学报》 CAS 2015年第5期481-485,共5页
目的建立小鼠子宫蜕膜基质细胞(DSC)和小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)细胞共培养体系,探讨DSC对DC增殖的影响。方法应用白细胞介素-4(IL-4)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,FACS检测细胞表面分... 目的建立小鼠子宫蜕膜基质细胞(DSC)和小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)细胞共培养体系,探讨DSC对DC增殖的影响。方法应用白细胞介素-4(IL-4)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导小鼠骨髓细胞分化为DC,FACS检测细胞表面分子和细胞增殖,ELISA检测其分泌的细胞因子,构建DSC和DC共培养体系模型,动态观察DSC对DC增殖的影响。结果小鼠骨髓来源DC高表达CD11c,共刺激分子CD80和CD86,MHCⅡ类分子Ia和MHCⅠ类分子H-2Kb。经LPS刺激的DC分泌细胞因子IL-12(p70)、IL-6、TNF-α和IL-1β的水平明显上调(P〈0.05),并能够促进抗原肽特异性T淋巴细胞增殖反应能力(P〈0.05)。在DSC和DC共培养10天后观察到DSC明显促进DC增殖。结论小鼠子宫蜕膜基质细胞能够促进树突状细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 蜕膜基质细胞 树突状细胞 共培养 细胞增殖
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脂肪间充质干细胞向髓核样细胞定向分化研究 预览
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作者 高春生 方煌 +4 位作者 陈安民 刘维财 徐志刚 戴俊 王欢 《生物骨科材料与临床研究》 CAS 2014年第6期1-5,83共6页
目的探讨SD大鼠来源的髓核(nucleus pulposus,NP)细胞促使脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)向NP样细胞定向分化的分子机制。方法采用酶消化法取脂肪细胞,极限稀释法纯化细胞;采用组织块培养法培... 目的探讨SD大鼠来源的髓核(nucleus pulposus,NP)细胞促使脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,AMSCs)向NP样细胞定向分化的分子机制。方法采用酶消化法取脂肪细胞,极限稀释法纯化细胞;采用组织块培养法培养NP细胞。利用流式细胞技术,免疫荧光及RT-PCR检测对AMSCs及NP细胞进行鉴定。结果 AMSCs中Sca-1和CD44的阳性率较高,而CD45和CD11b阴性,共培养组荧光强度明显亮于单纯AMSCs组,AMSCs在NP细胞的诱导下聚焦蛋白聚糖(Aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)、Sox-9等表达水平较对照组高。结论共培养环境中髓核细胞分泌的可溶性因子TGF-1能促使AMSCs向NP样细胞定向分化。 展开更多
关键词 脂肪间充质干细胞 髓核细胞 共培养 转化生长因子Β1
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血清及山羊卵丘细胞共培养对猪胚胎体外发育的促进作用 预览
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作者 王慧利 李静心 +5 位作者 王婧 孟春花 朱前明 张俊 钱勇 曹少先 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期73-79,共7页
为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后... 为进一步完善猪胚胎体外发育系统,以孤雌激活胚胎为研究对象,依次对胚胎培养液种类、培养期间血清添加方式、卵丘细胞共培养体系进行筛选优化。结果表明,与常规的PZM3培养液相比,CR1aa并不适合猪胚胎的体外发育;猪胚胎在PZM3中培养4d后添加10%胎牛血清培养至第6天,体外发育能力得到显著改善,卵裂率、囊胚率、囊胚孵化率、囊胚细胞数分别达到95.1%、56.5%、27.3%、79.3;在此基础上,利用山羊卵丘细胞与猪胚胎进行共培养,将囊胚孵化率进一步提高至36.6%,初步建立了一套高效稳定的猪胚胎体外发育系统。 展开更多
关键词 猪胚胎 体外发育 血清 共培养 凋亡
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异基因人骨髓间充质干细胞与外周血单个核细胞体外共培养的相互影响 预览 被引量:1
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作者 魏开鹏 潘兴南 +2 位作者 魏梅娟 张小曼 许正锯 《海南医学》 CAS 2014年第17期2507-2509,共3页
目的:探讨异基因骨髓间充质干细胞(BMSC)与外周血单个核细胞(PBMC)在体外共培养的相互影响。方法将异基因成人来源的BMSC与PBMC在体外分别按1:10混合共培养,采用氚胸腺嘧啶核甙掺入方法检测PHA刺激PBMC增殖的活性,采用ELISA方... 目的:探讨异基因骨髓间充质干细胞(BMSC)与外周血单个核细胞(PBMC)在体外共培养的相互影响。方法将异基因成人来源的BMSC与PBMC在体外分别按1:10混合共培养,采用氚胸腺嘧啶核甙掺入方法检测PHA刺激PBMC增殖的活性,采用ELISA方法检测培养液中分泌的IL-6、IL-8和PGE2水平。结果 BMSC与PBMC共培养组的PBMC增殖率明显减少(P〈0.01),抑制率均超过50%。加入PBMC共培养后,BMSC分泌IL-6、IL-8和PGE2显著增加(P〈0.01)。结论 BMSC可以抑制PHA刺激引起的PBMC增殖,PBMC可以促进BMSC分泌免疫活性因子,BMSC可能具有双向的免疫调控作用。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 外周血单个核细胞 共培养
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Bone regeneration using coculture of mesenchymal stem cells and angiogenic cells
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作者 Jin-Ling MA Jeroen J. J. P. van den BEUCKEN +2 位作者 Ju-Li PAN Fu-Zhai CUI Su CHEN 《材料科学前沿:英文版》 SCIE CSCD 2014年第1期32-38,共7页
关键词 骨髓间充质干细胞 共培养 血管化 细胞培养物 再生 临床试验 动物模型 临床应用
体外胰岛细胞共培养及化学因子联合诱导NOD鼠源性诱导性多能干细胞分化为胰岛素分泌细胞的研究 被引量:2
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作者 余丹峰 蔡德鸿 +6 位作者 严婷 刘锻 李迪 刘海明 杨锐 张振 张桦 《中国糖尿病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期170-173,共4页
目的 建立更为高效的NOD鼠体外胰岛素分泌细胞诱导体系. 方法 化学因子分步加入培养基,将大鼠胰岛细胞以半透膜相隔与NOD鼠源性诱导性多能干细胞(NOD-iPSCs)共培养约20 d,检测胰岛素分泌细胞的相关功能,并与纯化学因子诱导方法进行对... 目的 建立更为高效的NOD鼠体外胰岛素分泌细胞诱导体系. 方法 化学因子分步加入培养基,将大鼠胰岛细胞以半透膜相隔与NOD鼠源性诱导性多能干细胞(NOD-iPSCs)共培养约20 d,检测胰岛素分泌细胞的相关功能,并与纯化学因子诱导方法进行对比. 结果 诱导后成团生长,双硫腙染色呈棕红色,RT-PCR显示胰十二脂肠同源异型盒基因1(PDX-1)从第8天起开始表达,并逐渐增强.免疫荧光染色显示细胞表达胰岛素及C-P,联合组及纯化学因子组诱导培养每隔4d检测至20 d,高糖刺激后两组胰岛素分泌均呈逐渐升高趋势. 结论 NOD-iPSCs能够在体外诱导生成胰岛素分泌细胞.联合培养体系提供大鼠胰岛细胞功能因子可加速分化,提高效率,可能为一种更高效的诱导方法. 展开更多
关键词 NOD鼠源性诱导性多能干细胞 共培养 胰岛细胞 化学因子 胰岛素分泌细胞
大肠癌细胞及相关成纤维细胞18F-脱氧葡萄糖摄取能力研究 被引量:1
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作者 吴永友 彭巍 +5 位作者 章斌 吴昊 徐小慧 苏玉飞 张钰明 邢春根 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期242-244,共3页
目的 观察人大肠癌细胞及其相关成纤维细胞(CCAFs)共培养前后的18F-脱氧葡萄糖(18 F-FDG)摄取能力的变化,分析CCAFs的糖代谢特征及其对肿瘤代谢的影响.方法 分别改变反应细胞数(1 ×104、5×104、1 ×105、3×105... 目的 观察人大肠癌细胞及其相关成纤维细胞(CCAFs)共培养前后的18F-脱氧葡萄糖(18 F-FDG)摄取能力的变化,分析CCAFs的糖代谢特征及其对肿瘤代谢的影响.方法 分别改变反应细胞数(1 ×104、5×104、1 ×105、3×105、5×105)、18F-FDG反应时间(40、60、80、100、120 min)、反应放射性活度(1.85、3.70、7.40、14.80、29.60 kBq)以及初始葡萄糖浓度(0、2.78、5.55、11.10 mmol/L),筛选出CCAFs与18F-FDG结合的最佳条件,并测定CCAFs-大肠癌细胞共培养4d前后Caco-2及HCT116两种大肠癌细胞和CCAFs的18F-FDG摄取率.结果 CCAFs结合18F-FDG的最佳条件为:细胞数为5×105个/瓶,18F-FDG放射性活度为3.70 kBq,反应时间为100 min,葡萄糖浓度为0mmol/L,细胞结合率为(42.80 ±4.47)%.线性回归方程为:Y=(2.661+0.463E4X1-0.195X2-2.412X3)×100%,F=51.140,P<0.05;共培养前后CCAFs的18F-FDG结合率差异无统计学意义(P>0.05),Caco-2细胞共培养前后结合率分别为(28.650 0±4.760 0)%、(18.821 5±1.5100)% (P<0.05);HCT116细胞共培养前后18F-FDG结合率分别为(24.974 3±2.8300)%、(17.7202 ±2.6200)%,共培养的CCAFs与肿瘤细胞比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 CCAFs的18F-FDG摄取能力明显大于大肠癌细胞,而且CCAFs与大肠癌细胞共培养,可明显抑制后者对18F-FDG的摄取而对CCAFs的摄取能力无明显影响,提示CCAFs可能是大肠癌组织中葡萄糖摄取的重要细胞成分. 展开更多
关键词 大肠癌相关成纤维细胞 18F-脱氧葡萄糖 共培养
肿瘤相关巨噬细胞在肝癌上皮细胞间质转型中的作用 被引量:1
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作者 王皓 李霞 +5 位作者 王超 李国盛 郭春 朱法良 张利宁 石永玉 《山东大学学报:医学版》 CAS 北大核心 2014年第4期8-12,共5页
目的:检测肿瘤相关巨噬细胞对肝癌细胞迁移能力的作用及机制。方法将肝癌细胞与THP-1细胞来源的巨噬细胞共培养,利用Transwell细胞迁移实验与细胞划痕实验检测肝癌细胞迁移能力的变化情况,观察肝癌细胞形态变化,并用RT-PCR检测上皮... 目的:检测肿瘤相关巨噬细胞对肝癌细胞迁移能力的作用及机制。方法将肝癌细胞与THP-1细胞来源的巨噬细胞共培养,利用Transwell细胞迁移实验与细胞划痕实验检测肝癌细胞迁移能力的变化情况,观察肝癌细胞形态变化,并用RT-PCR检测上皮细胞间充质转化相关分子E-cadherin与N-cadherin的变化。结果与THP-1细胞来源的巨噬细胞共培养后,肝癌细胞的迁移能力明显增强,由上皮细胞形态向间质细胞形态转变,E-cadherin表达降低,而N-cadherin表达则升高。结论在肝癌中,肿瘤相关巨噬细胞可能通过EMT增强肝癌细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 肝癌 肿瘤相关巨噬细胞 共培养 上皮细胞间充质转化
GATA-4过表达增加大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞 预览 被引量:4
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作者 李红霞 周亚峰 +1 位作者 杨向军 蒋文平 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第1期60-65,共6页
目的研究GATA-4转染骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞及表达心肌细胞特异性标志物的能力。方法分离培养MSCs及心肌细胞(CM)。第3代MSCs转染GATA-4基因(MSCGATA-4)并通过实时定量聚合酶链反应(PCR)、Western blot和免疫组... 目的研究GATA-4转染骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞及表达心肌细胞特异性标志物的能力。方法分离培养MSCs及心肌细胞(CM)。第3代MSCs转染GATA-4基因(MSCGATA-4)并通过实时定量聚合酶链反应(PCR)、Western blot和免疫组化鉴定GATA-4的表达。MSCGATA-4与CM嵌套式共培养1周,通过real-time PCR和Western blot检测其心肌基因BNP、α-actinin和Islet-1的表达,用免疫组化观察α-actinin的表达。与CM混合共培养后1周后,观察MSCs的搏动情况,并用流式细胞仪检测心肌分化率。结果 MSCGATA-4组GATA-4的表达明显高于对照组(只表达GFP)。MSC与CM嵌套式共培养后,MSCGATA-4组的BNP、α-actinin和Islet-1的mRNA和蛋白表达明显高于对照组(P〈0.05)。混合共培养后,可见部分MSCGATA-4的搏动,同时部分MSC的α-actinin染色阳性。用流式细胞仪检测心肌分化率,MSCGATA-4组的心肌分化率明显高于对照组(P〈0.05)。结论 GATA-4过表达可以增加MSCs分化成心肌样细胞,高表达BNP、α-actinin和Islet-1。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 GATA-4 共培养
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基础研究 旋转生物反应器内微载体共培养CL-1肝细胞与人肝星形细胞 预览 被引量:1
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作者 潘康明 周焕城 +2 位作者 张志 高毅 徐小平 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期902-905,共4页
目的评估cL-1肝细胞跟人肝星形细胞(HSC)的微载体微重力共培养来提高CL-1肝细胞的活力与功能的可行性。方法实验分为两组:CL-1肝细胞微载体微重力单培养组和CL-1肝细胞、HSC微载体微重力共培养组。通过倒置显微镜观察、细胞计数、MT... 目的评估cL-1肝细胞跟人肝星形细胞(HSC)的微载体微重力共培养来提高CL-1肝细胞的活力与功能的可行性。方法实验分为两组:CL-1肝细胞微载体微重力单培养组和CL-1肝细胞、HSC微载体微重力共培养组。通过倒置显微镜观察、细胞计数、MTT染色及扫描电子显微镜比较两组肝细胞的形态、细胞活力差异,并通过、培养上清中ALT、白蛋白浓度等功能指标测定,比较两组肝细胞活力和功能差异。结果共培养组较单培养组细胞生长迅速,细胞从24h贴壁后开始增长,到第5天进入高峰。共培养组1~7d的肝细胞密度明显高于单培养组的细胞密度(P〈0.05)。两组肝细胞ALT、白蛋白从第1天开始不断分泌增加,第5天达到峰值,第6、7天有所下降。ALT功能比较,共培养组明显低于单培养组(P〈0.05)。白蛋白功能比较,共培养组明显高于单培养组(P〈O.05)。倒置显微镜、扫描电镜及MTT均提示共培养组肝细胞形态、活力优于单培养组。结论人肝细胞、HSC微载体微重力共培养研究有利于维持及增强旋转生物反应器的肝细胞活力及功能,对人工肝的培养模式发展具有重要意义。 展开更多
关键词 旋转生物反应器 CL-1肝细胞 人肝星形细胞 共培养
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胃癌细胞FoxP3的表达及其与外周血单个核细胞(PBMCs)的相互作用 预览
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作者 马桂芬 缪青 +1 位作者 刘以梅 陈世耀 《复旦学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期180-186,共7页
目的检测叉头样蛋白3(forkhead box protein 3,FoxP3)在胃癌细胞中的表达分布,并探讨其在外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和胃癌细胞共培养过程中的作用。方法应用免疫荧光技术检测FoxP3蛋白的表达定位... 目的检测叉头样蛋白3(forkhead box protein 3,FoxP3)在胃癌细胞中的表达分布,并探讨其在外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)和胃癌细胞共培养过程中的作用。方法应用免疫荧光技术检测FoxP3蛋白的表达定位;建立胃癌细胞和PBMCs的体外共培养体系,然后用CCK-8法检测共培养后胃癌细胞的生长抑制情况;通过Real-time PCR技术检测共培养后胃癌细胞和PBMCs中FoxP3mRNA表达情况;并采用流式细胞技术和Western blot技术检测共培养后两种细胞中FoxP3蛋白表达情况。结果 FoxP3表达于胃癌细胞的胞质和胞核。胃癌细胞与PBMCs共培养时能明显抑制胃癌细胞的增殖。直接和间接共培养后MKN28胃癌细胞的FoxP3蛋白的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)均增加(P=0.031;P=0.015);与单培养相比,来源于胃癌患者和健康对照组的淋巴细胞与胃癌细胞共培养后其FoxP3 MFI均明显增加(P=0.016;P=0.034),且IL-2能促进间接培养条件下PBMCs的FoxP3表达(P=0.024),而对直接共培养影响不大。共培养后胃癌细胞的FoxP3mRNA和蛋白表达均增加,直接共培养较间接共培养增加更明显(P=0.035)。结论胃癌细胞与PBMCs的相互作用主要依赖细胞间的直接接触方式,FoxP3的表达变化在这一过程中发挥了重要作用,这可能跟肿瘤免疫逃逸有关。 展开更多
关键词 叉头样蛋白3(FoxP3) 胃癌 外周血单个核细胞(PBMCs) 共培养
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不同培养方法对冻融人卵巢组织内卵泡生长发育的影响 预览 被引量:1
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作者 张媛媛 周平 +3 位作者 彭广兰 陈大蔚 章志国 曹云霞 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第5期541-544,共4页
目的比较不同培养方法对冻融人卵巢组织内卵泡生长发育的影响。方法实验分3组:冻融的人卵巢组织单独培养组(A组);冻融的人卵巢组织与人早孕蜕膜单层细胞共培养组(B组);Matrigel培养基培养的冻融的人卵巢组织组(C组)。冻融人卵... 目的比较不同培养方法对冻融人卵巢组织内卵泡生长发育的影响。方法实验分3组:冻融的人卵巢组织单独培养组(A组);冻融的人卵巢组织与人早孕蜕膜单层细胞共培养组(B组);Matrigel培养基培养的冻融的人卵巢组织组(C组)。冻融人卵巢组织在不同培养条件下培养14d后,固定并检测各组卵巢组织中总体卵泡存活率(TFSR)及卵泡生长率(GFR)。结果与B、C组比较,A组TFSR和GFR均降低,差异有统计学意义(P〈0.05)。与C组比较,B组TFSR和GFR无明显变化,差异无统计学意义。结论冻融卵巢组织中的原始 卵泡在不同体外培养体系中有不同程度的生长;冻融卵巢组织与人早孕蜕膜细胞共培养或Matrigel培养基培养相对于单独培养更有利于卵泡存活和生长;但这两种培养方法之间没有明显差异。 展开更多
关键词 卵巢组织 体外培养 共培养
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