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酶联免疫法检测混合植物油中黄曲霉毒素B1含量
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作者 王重阳 吴小慧 +4 位作者 张喆昌 魏鸿媛 金珠 汤晶晶 王丹 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第4期881-885,共5页
目的建立酶联免疫法测定混合植物油中黄曲霉毒素B1含量的分析方法。方法采用直接竞争酶联免疫吸附法对样品进行测定。样品经甲醇溶液提取,提取的抗原及黄曲霉毒素B1标记物与微孔板上的黄曲霉毒素B1特异性单克隆抗体竞争结合,洗涤除去未... 目的建立酶联免疫法测定混合植物油中黄曲霉毒素B1含量的分析方法。方法采用直接竞争酶联免疫吸附法对样品进行测定。样品经甲醇溶液提取,提取的抗原及黄曲霉毒素B1标记物与微孔板上的黄曲霉毒素B1特异性单克隆抗体竞争结合,洗涤除去未结合杂质。将底物加入孵育,产生蓝色产物,加入终止液终止反应蓝色产物变成黄色产物,450nm处测量吸光度。结果本方法在2h内完成混合植物油中黄曲霉毒素B1含量的测定。黄曲霉毒素B1的加标浓度在1.0~20.0μg/kg之间时的回收率为76.5%~120.2%,方法定量限为1.00μg/kg。结论该方法快速、准确、灵敏,适合测定混合植物油中黄曲霉毒素B1。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 直接竞争酶联免疫吸附法 混合植物油
直接竞争ELISA法快速检测豆芽中2,4-二氯苯氧乙酸的残留 被引量:1
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作者 王乾龙 丁立生 +2 位作者 王甜甜 梁健 谢静 《食品科技》 北大核心 2017年第5期290-295,共6页
利用碳二亚胺法合成2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的包被抗原,用高碘酸钠法制备了辣根过氧化物酶标记的2,4-D抗体,随后用包被原包被酶标板并建立了快速准确检测豆芽样品中2,4-D残留的直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法。结果表明:包被... 利用碳二亚胺法合成2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的包被抗原,用高碘酸钠法制备了辣根过氧化物酶标记的2,4-D抗体,随后用包被原包被酶标板并建立了快速准确检测豆芽样品中2,4-D残留的直接竞争酶联免疫吸附分析(ELISA)法。结果表明:包被抗原与酶标记抗体的最佳稀释比例分别为1:160和1:32000。该方法的线性范围为(2~250)ng/mL(R~2=0.997),检测限为0.63 ng/mL,在该范围其相关性良好。其日内和日间的变异系数(CV)分别在3.03%~7.58%和2.81%~6.87%之间,均小于10%,精密度良好。平均回收率为95.5%,有较高的准确度和良好的特异性。因此,该直接竞争ELISA法可以快速准确地实现对豆芽中残留的2,4-D检测。 展开更多
关键词 2 4-二氯苯氧乙酸 直接竞争ELISA 豆芽 残留检测
抗孔雀石绿单链抗体—碱性磷酸酶融合表达和活性鉴定 预览
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作者 伍伟健 董洁娴 +3 位作者 饶美芳 詹屋强 王弘 孙远明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第17期121-126,共6页
采用重叠延伸的方法成功将抗孔雀石绿(malachite green,MG)单克隆细胞的轻链VL和重链VH用连接肽(Gly4Ser)3连接,形成单链抗体(single chain variable fragment,scFv)基因,并将其酶切连接进入含有碱性磷酸酶(alkaline phosphatase... 采用重叠延伸的方法成功将抗孔雀石绿(malachite green,MG)单克隆细胞的轻链VL和重链VH用连接肽(Gly4Ser)3连接,形成单链抗体(single chain variable fragment,scFv)基因,并将其酶切连接进入含有碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,PhoA)基因的载体plip6/GN中,成功构建重组质粒plip6/GN-MG-scFv。随后重组质粒转入大肠杆菌BL21,经诱导表达后,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blotting鉴定结果表明所获得的融合蛋白sc Fv-PhoA大小约72 kD。利用scFv与MG特异性结合的活性和PhoA催化对硝基苯磷酸二钠的显色机制,经过直接竞争酶联免疫吸附法测定融合蛋白scFv-PhoA的IC50为9.81 ng/mL。本方法操作简单、灵敏度高且检测时间短,这为进一步进行MG免疫法快速检测提供了参考。 展开更多
关键词 孔雀石绿 单链抗体 碱性磷酸酶 融合表达 直接竞争酶联免疫吸附法
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动物性食品中氨苯砜dcELISA的检测 预览 被引量:1
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作者 郑小娇 张晶 +2 位作者 张亚卓 史晨杉 王向红 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期189-192,共4页
建立了动物性食品中氨苯砜残留快速检测技术。将氨苯砜重氮化后连接到牛血清蛋白(BSA)上制得免疫原BSA-DDS,免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,经ProteinA-Sephros 4B对抗体进行纯化,在此基础上建立直接竞争ELISA方法。结果显示:... 建立了动物性食品中氨苯砜残留快速检测技术。将氨苯砜重氮化后连接到牛血清蛋白(BSA)上制得免疫原BSA-DDS,免疫新西兰大耳白兔获得多克隆抗体,经ProteinA-Sephros 4B对抗体进行纯化,在此基础上建立直接竞争ELISA方法。结果显示:该方法可制备目标抗原BSA-DDS和抗体,氨苯砜与载体蛋白偶联比可达到1:10;建立的直接竞争ELISA方法的IC50为4.78ng/mL,最低检测限达0.03ng/mL,加标回收率为75.45%~91.75%。 展开更多
关键词 氨苯砜 多克隆抗体 ELISA
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直接竞争ELISA法检测蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸 被引量:2
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作者 魏茂琼 刘宏程 +4 位作者 林涛 林昕 兰珊珊 沙凌杰 王丽 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第12期4961-4965,共5页
目的研究竞争性酶联免疫法分析测定蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)残留量。方法样品用乙腈进行前处理后采用ELISA试剂盒检测蔬菜中2,4-D的残留,分析方法的灵敏度、回收率和稳定性;并比较其与超高效液相... 目的研究竞争性酶联免疫法分析测定蔬菜中2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-dichlorophenoxyacetic acid,2,4-D)残留量。方法样品用乙腈进行前处理后采用ELISA试剂盒检测蔬菜中2,4-D的残留,分析方法的灵敏度、回收率和稳定性;并比较其与超高效液相色谱-质谱法(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry,UPLC-MS)在灵敏度、稳定性等方法学参数上的差异。结果经过有机溶剂提取等前处理过程,ELISA与UPLC-MS的检测灵敏度分别可以达到1.739μg/kg和3μg/kg,回收率分别为80.19%~117.37%和80.04%~112.5%;试剂盒稳定性的测定证明其可以在4℃至少保存8个月。结论与UPLC-MS法相比,直接竞争ELISA法简单、高效,检测快速,灵敏度高,适合大批量筛选样品。因此,ELISA法更加适合快速检测蔬菜中2,4-D的残留。 展开更多
关键词 2 4-二氯苯氧乙酸 蔬菜 直接竞争法酶联免疫 超高效液相色谱-质谱法 快速检测
直接竞争酶联免疫法测定呋喃妥因代谢物 被引量:1
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作者 李亚楠 王瑞 +5 位作者 孙元媛 杨典原 黄种乾 王云贵 李涛 黄登宇 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第9期3723-3729,共7页
目的建立动物组织中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲的直接竞争酶联免疫(ELISA)检测法,为检测食品中呋喃妥因代谢物残留提供快速检测的方法。方法采用活化酯法制备辣根过氧化物酶标记抗原,并用棋盘法确定酶标抗原和抗体的稀释度,优化反应... 目的建立动物组织中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲的直接竞争酶联免疫(ELISA)检测法,为检测食品中呋喃妥因代谢物残留提供快速检测的方法。方法采用活化酯法制备辣根过氧化物酶标记抗原,并用棋盘法确定酶标抗原和抗体的稀释度,优化反应条件,建立检测呋喃妥因代谢物的直接竞争酶联免疫法,并对其进行方法学评价。结果该方法的线性方程为Y=-34.723X+158.01(r2=0.9922),线性检测范围为0.177~11.508ng/m L,IC50为1.291 ng/m L;猪肉、鸡肉、鱼肉的最低检测限分别为0.115、0.113、0.109μg/kg,加标回收率在82.6%~104.7%之间,批内变异系数在3.6%~9.3%之间,批间变异系数在4.3%~12.4%之间。结论本方法快速准确,适用于动物组织中呋喃妥因代谢物的检测。 展开更多
关键词 呋喃妥因代谢物 直接竞争酶联免疫检测法 动物组织
直接竞争酶联免疫法测定食品中的丙烯酰胺含量 预览 被引量:6
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作者 吴璟 罗林 +6 位作者 肖治理 杨金易 孙远明 雷红涛 沈玉栋 王弘 徐振林 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1149-1154,共6页
丙烯酰胺由于分子量小、结构简单,制备其特异性抗体难以实现。本研究将丙烯酰胺与对巯基苯乙酸衍生合成半抗原,偶联载体蛋白并免疫动物制备针对丙烯酰胺衍生物的特异性抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,进而建立通过检测丙烯酰胺衍生物实... 丙烯酰胺由于分子量小、结构简单,制备其特异性抗体难以实现。本研究将丙烯酰胺与对巯基苯乙酸衍生合成半抗原,偶联载体蛋白并免疫动物制备针对丙烯酰胺衍生物的特异性抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,进而建立通过检测丙烯酰胺衍生物实现对丙烯酰胺定量分析的直接竞争酶联免疫分析方法。本方法对丙烯酰胺的检出限为3.0μg/L,线性范围为9.2~195μg/L,对饼干、薯片及咖啡样品中丙烯酰胺的平均添加回收率为83.6%~112.7%,结果与标准检测方法 HPLC-MS/MS符合。本方法可用于食品样品中丙烯酰胺的快速检测。 展开更多
关键词 丙烯酰胺 多克隆抗体 直接竞争酶联免疫分析 衍生
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新霉素的直接竞争酶联免疫分析法 预览 被引量:3
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作者 徐乃丰 胥传来 +3 位作者 匡华 屈昌龙 许阳 彭池方 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期212-217,共6页
首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测... 首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测方法。通过一系列参数的优化,包括包被溶液、封闭溶液、竞争时间、抗体稀释液、pH值、反应温度、显色时间等,最终得到其IC20(抑制率为20%时的标准溶液质量浓度)〈1ng/mL、半数抑制量(IC50)为7.6ng/mL,线性方程为y=-0.2798x+0.7456,R2=0.991。直接ELISA总耗时只需大约1h。 展开更多
关键词 新霉素 间接竞争酶联免疫吸附试验 直接竞争酶联免疫吸附试验
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直接竞争酶联免疫吸附分析法测定氰戊菊酯 预览 被引量:7
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作者 尤海琴 刘浪 刘曙照 《分析化学》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第4期 577-580,共4页
采用活性酯法,将氰戊菊酯半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]4-氨基丁酸与载体蛋白共价偶联合成突出氰戊菊酯分子结构特征的人工抗原和包被原。以人工抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,采用(NH4)2SO4分步盐析和DEAE纤维素柱层析法... 采用活性酯法,将氰戊菊酯半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]4-氨基丁酸与载体蛋白共价偶联合成突出氰戊菊酯分子结构特征的人工抗原和包被原。以人工抗原免疫新西兰白兔制备抗血清,采用(NH4)2SO4分步盐析和DEAE纤维素柱层析法从抗血清中分离纯化对氰戊菊酯具特异性亲和力的抗体,采用活性酯法,以辣根过氧化物酶标记半抗原N-[2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酰基]-6-氨基己酸。采用固定抗体、氰戊菊酯和酶标半抗原直接竞争结合固相抗体的模式,建立对氰戊菊酯具高特异性的酶联免疫吸附分析方法。在优化条件下,测定氰戊菊酯标样检测的线性浓度范围为0.001~10.0mg/L;检出限0.001mg/L;相对标准偏差(RSD,n=5)为9.19%。小白菜中分别添加0.10和5.0mg/kg氰戊菊酯,直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA)测定,重复6次,回收率分别为83.8%~109%和93.6%~110%;RSD分别为11.7%和7.25%。对实际样品的有效检出限为0.007mg/L。其它常用拟除虫菊酯类杀虫剂(氯氰菊酯、溴氰菊脂、功夫菊酯、醚菊酯、联苯菊酯)不干扰氰戊菊酯的测定。 展开更多
关键词 氰戊菊酯 半抗原 人工抗原 抗体 直接竞争酶联免疫吸附分析
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检测T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法的研究 预览 被引量:7
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作者 曹艳红 孟宪清 +2 位作者 冯杰 惠洋 孙殿军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期 132-135,共4页
目的 本研究在自制T-2毒素酶标半抗原的基础上,结合市售抗T-2毒素单克隆抗体,建立了检测谷物中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法(ELISA)。方法粮食样品经70%甲醇-水溶液提取,用滤纸过滤并稀释后。再用0.45μm滤器过滤净化... 目的 本研究在自制T-2毒素酶标半抗原的基础上,结合市售抗T-2毒素单克隆抗体,建立了检测谷物中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法(ELISA)。方法粮食样品经70%甲醇-水溶液提取,用滤纸过滤并稀释后。再用0.45μm滤器过滤净化,该滤液用于ELISA检测。结果本方法最低检出量为0.125ng/ml,添加70-280ng/g T-2毒素的大米样品和面粉样品的平均回收率分别为85~117.5%和98.1~102.5%。结论结果表明,该方法简化了粮样提取步骤。可用于谷物及加工产品中T-2毒素的检测。 展开更多
关键词 T-2毒素 直接竞争性酶联免疫吸附测定 谷物
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单克隆抗体酶联免疫法测定谷物中T—2毒素的研究 预览 被引量:10
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作者 计融 阳传和 +1 位作者 罗雪云 刘畅 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1992年第2期 12-16,共5页
运用抗T-2毒素的单克隆抗体,建立了检测谷物(小麦、大米)中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法。样品经三氯甲烷—无水乙醇(4∶1)提取,用中性氧化铝/活性炭柱净化,制备成样液,供ELISA检测之用。本方法最低检出量为0.1ng/检测孔(1ng/... 运用抗T-2毒素的单克隆抗体,建立了检测谷物(小麦、大米)中T-2毒素的直接竞争性酶联免疫吸附测定法。样品经三氯甲烷—无水乙醇(4∶1)提取,用中性氧化铝/活性炭柱净化,制备成样液,供ELISA检测之用。本方法最低检出量为0.1ng/检测孔(1ng/ml),敏感范围为4~1000ng/ml,平均回收率为97.2%~113.2%,精密度为5.1%~14.2%。运用该方法,首次从引起食物中毒的大米中检出T-2毒素,其含量为178.2~418.8ppb。 展开更多
关键词 谷物 T-2毒素 单克隆抗体 ELISA
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直接竞争酶联免疫吸附分析法测定小白菜中溴氰菊酯的残留量 被引量:3
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作者 孙宁浩 周引怡 +1 位作者 王翠翠 刘曙照 《农药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期219-226,共8页
应用作者所在实验室自制的、对溴氰菊酯具有特异性亲和力的多克隆抗体和酶标半抗原,建立了包被抗体-酶标半抗原直接竞争酶联免疫吸附分析法(DC-ELISA)。小白菜样品经超声提取、浓缩和10%甲醇定容后采用DC-ELISA法测定,并采用高效液相... 应用作者所在实验室自制的、对溴氰菊酯具有特异性亲和力的多克隆抗体和酶标半抗原,建立了包被抗体-酶标半抗原直接竞争酶联免疫吸附分析法(DC-ELISA)。小白菜样品经超声提取、浓缩和10%甲醇定容后采用DC-ELISA法测定,并采用高效液相色谱法进行验证。结果表明:在抗体包被浓度为2.0 mg/L、辣根过氧化物酶(HRP)标记溴氰菊酯半抗原稀释2.0×105倍、包被介质为p H 7.2 PB、反应介质为含0.125 mol/L Na Cl p H 6.8 PB的优化条件下,DCELISA法检测溴氰菊酯的线性范围为0.10~10 mg/L,溴氰菊酯对抗体-酶标半抗原反应的抑制中浓度(IC50)为1.68 mg/L,相对标准偏差(RSD,n=5)为2.11%,IC10值为0.16 mg/L。在5、1和0.2 mg/kg 3个添加水平下,DC-ELISA法测定小白菜中溴氰菊酯的平均回收率分别为97%、106%和95%,RSD(n=5)分别为8.5%、8.1%和8.1%。高效液相色谱法同步测定小白菜中添加0.2 mg/kg溴氰菊酯的回收率为107%。本研究建立的DC-ELISA法可用于小白菜中溴氰菊酯含量的快速测定。 展开更多
关键词 直接竞争酶联免疫吸附分析 高效液相色谱 小白菜 溴氰菊酯 残留
基于HRP标记抗体的黄曲霉毒素M1的直接竞争-ELISA快速检测方法 预览 被引量:10
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作者 裴世春 肖理文 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期221-224,共4页
为构建快速检测乳制品中黄曲霉毒素M1(AFM1)的直接竞争-酶联免疫吸附(dc-ELISA)体系,将辣根过氧化物酶(HRP)与高纯度抗AFM1单克隆抗体进行偶联后对其与AFM1竞争性反应条件进行优化,并利用AFM1污染标准物质ERMI-BD282(0)、ERMI-B... 为构建快速检测乳制品中黄曲霉毒素M1(AFM1)的直接竞争-酶联免疫吸附(dc-ELISA)体系,将辣根过氧化物酶(HRP)与高纯度抗AFM1单克隆抗体进行偶联后对其与AFM1竞争性反应条件进行优化,并利用AFM1污染标准物质ERMI-BD282(0)、ERMI-BD 283(0.11μg/kg)、ERMI-BD 284(0.44μg/kg)等对检测体系的灵敏度和精确性进行验证。结果当AFM1-BSA包被质量浓度0.25μg/L、抗AFM1 mAb-HRP稀释2000倍时dc-ELISA检测AFM1的IC50为0.75μg/L,检测范围为0.015~4.05μg/L,添加AFM1至0.45μg/L的鲜奶样品中检测回收率平均为80%,dc-ELISA可满足鲜乳中AFM1国家残留限量标准0.5μg/kg的检测要求。该体系可应用于鲜奶制品中AFM 1大于0.5μg/kg污染样品的快速初筛。 展开更多
关键词 直接竞争-酶联免疫法(dc-ELISA) 黄曲霉毒素M1(AFM1) 乳品 检测
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