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噬菌体裂解酶作为抗菌剂的潜在价值 预览
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作者 袁玉玉 丛聪 +3 位作者 王丽丽 李晓宇 李淑英 徐永平 《国外医药:抗生素分册》 CAS 2019年第5期420-424,共5页
多耐药病原细菌的不断出现和传播给公共医疗造成了严峻的威胁和挑战,开发新的抗菌药物迫在眉睫。噬菌体裂解酶是噬菌体在感染细菌后期表达的一类细胞壁水解酶。噬菌体裂解酶来源于噬菌体,具有独特的进化选择优势,不仅能高效迅速杀灭多... 多耐药病原细菌的不断出现和传播给公共医疗造成了严峻的威胁和挑战,开发新的抗菌药物迫在眉睫。噬菌体裂解酶是噬菌体在感染细菌后期表达的一类细胞壁水解酶。噬菌体裂解酶来源于噬菌体,具有独特的进化选择优势,不仅能高效迅速杀灭多重耐药细菌,且不易引起细菌产生新的耐药性。本文对噬菌体裂解酶的结构和功能进行了简要的介绍,重点综述了裂解酶作用机制与应用前景。 展开更多
关键词 噬菌体 裂解酶 抗菌剂 应用
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提高噬菌体裂解酶抗菌活性的研究进展 预览 被引量:2
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作者 渠坤丽 徐永平 +5 位作者 李振 张建成 宋亚雄 付丽娜 王丽丽 李晓宇 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2017年第1期88-93,共6页
随着细菌耐药性问题的日益严重,人们开始寻求新型抗菌制剂。噬菌体裂解酶是一种由ds DNA噬菌体编码的水解酶,能高效特异性地裂解细菌细胞壁且不易使细菌产生耐药性。由于天然裂解酶具有宿主谱窄,不能裂解革兰阴性菌等缺点,研究者对裂解... 随着细菌耐药性问题的日益严重,人们开始寻求新型抗菌制剂。噬菌体裂解酶是一种由ds DNA噬菌体编码的水解酶,能高效特异性地裂解细菌细胞壁且不易使细菌产生耐药性。由于天然裂解酶具有宿主谱窄,不能裂解革兰阴性菌等缺点,研究者对裂解酶进行了大量的设计改造。本研究主要对提高噬菌体裂解酶抗菌活性的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 噬菌体 噬菌体裂解酶 抗菌活性 抗生素
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噬菌体裂解酶作为抗菌药物的研究进展 预览 被引量:8
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作者 王铮 沈文彬 +3 位作者 张浩天 么娆 崔泽林 何平 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期368-373,共6页
传统抗菌药物的耐药问题日益突出,促使人们开始寻求更好的新型抗菌物质。噬菌体裂解酶是由双链DNA噬菌体编码、依靠宿主菌合成的酶,其能特异、高效地水解细菌的细胞壁,使细菌裂解死亡。噬菌体裂解酶在体外及动物体内模型实验中显示... 传统抗菌药物的耐药问题日益突出,促使人们开始寻求更好的新型抗菌物质。噬菌体裂解酶是由双链DNA噬菌体编码、依靠宿主菌合成的酶,其能特异、高效地水解细菌的细胞壁,使细菌裂解死亡。噬菌体裂解酶在体外及动物体内模型实验中显示出良好的杀菌作用,且至今尚无直接对人体产生毒性的报道,噬菌体裂解酶的特性使其在预防、治疗细菌感染方面拥有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 噬菌体裂解酶 抗菌药物 耐药性
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dsDNA噬菌体裂解系统作用机制的研究进展
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作者 韩晗 李雪敏 +2 位作者 程博幸 王小青 王冉 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第7期132-139,共8页
噬菌体作抗生素替代物用于动物生产,已被逐步认可和积极评价。将噬菌体应用于抗菌,主要是应用其裂解作用。为更科学地研发和应用噬菌体,本文综述了应用较普遍的dsDNA噬菌体近年来相关裂解机制的研究。目前发现,绝大多数dsDNA噬菌体均采... 噬菌体作抗生素替代物用于动物生产,已被逐步认可和积极评价。将噬菌体应用于抗菌,主要是应用其裂解作用。为更科学地研发和应用噬菌体,本文综述了应用较普遍的dsDNA噬菌体近年来相关裂解机制的研究。目前发现,绝大多数dsDNA噬菌体均采用"穿孔素-内溶素"裂解系统,其主要由穿孔素和内溶素组成,分别破坏细菌细胞膜和肽聚糖层,致使细菌被裂解;而对革兰阴性菌的裂解,还需膜融合蛋白的参与。此外,还存在一种"针穿孔素-SAR内溶素"裂解系统,其主要由针穿孔素、信号锚定释放内溶素和膜融合蛋白组成,作用机制与上述裂解系统存在明显差异。本文为开发和应用噬菌体及其裂解相关蛋白提供了理论基础。 展开更多
关键词 噬菌体 裂解 分子机制 内溶素 穿孔素 膜融合蛋白
铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的克隆表达及活性 预览
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作者 赵晨 李端华 +2 位作者 李进军 葛燕 王辂 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2019年第8期874-878,889,共6页
为了研究使用酵母表达系统表达重组铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的效果,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)将铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶基因ly23克隆至酵母表达载体pSEP1和pSEP1alpha上,并分别转化至酿酒酵母细胞,对胞内... 为了研究使用酵母表达系统表达重组铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶的效果,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)将铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶基因ly23克隆至酵母表达载体pSEP1和pSEP1alpha上,并分别转化至酿酒酵母细胞,对胞内表达及分泌表达重组噬菌体裂解酶LY23的表达水平及裂解活性进行测定。结果表明,用酿酒酵母表达系统分泌表达的LY23粗酶液处理10min后,铜绿假单胞菌菌液的OD620值下降约50%,且比浊法测定显示LY23对铜绿假单胞菌具有较为显著且专一的裂解活性。本文研究使用酵母表达系统可分泌表达具备裂解活性的噬菌体裂解酶,可为后期探讨其分离纯化提供基础。 展开更多
关键词 生物技术 噬菌体裂解酶 铜绿假单胞菌 酵母表达系统 分泌表达
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噬菌体在控制细菌感染中的临床应用 预览 被引量:1
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作者 李婷华 郭晓奎 《中国抗生素杂志》 CSCD 2018年第8期939-945,共7页
近年来,由于多重耐药菌感染引起新的威胁,而新型抗生素的研发进展缓慢且成本昂贵,使得噬菌体被重新考虑作为抗生素的替代疗法。本文旨在阐述噬菌体疗法在控制人类常见病原菌感染领域的研究进展以及开发噬菌体的新策略,并总结描述多种方... 近年来,由于多重耐药菌感染引起新的威胁,而新型抗生素的研发进展缓慢且成本昂贵,使得噬菌体被重新考虑作为抗生素的替代疗法。本文旨在阐述噬菌体疗法在控制人类常见病原菌感染领域的研究进展以及开发噬菌体的新策略,并总结描述多种方法学理念,以促进对其进一步研究,早日使噬菌体作为治疗或预防药物应用于临床实践中。 展开更多
关键词 噬菌体 工程噬菌体 内溶素 噬菌体疗法
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金黄色葡萄球菌噬菌体qdsa001内溶素的特性预测及克隆表达 预览
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作者 吕晓倩 王静雪 林洪 《食品科学》 CSCD 北大核心 2018年第18期133-138,共6页
为获得噬菌体qdsa001的内溶素,本实验首先利用多种在线软件对内溶素lys56(GenBank:ARQ95812.1)的理化性质、信号肽、跨膜域和结构域等特性进行分析,然后选择克隆表达法制备目的蛋白。将合成的目的基因插入原核表达载体pET-30a中,构建重... 为获得噬菌体qdsa001的内溶素,本实验首先利用多种在线软件对内溶素lys56(GenBank:ARQ95812.1)的理化性质、信号肽、跨膜域和结构域等特性进行分析,然后选择克隆表达法制备目的蛋白。将合成的目的基因插入原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET-30a-lys56,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,获得表达稳定的基因工程菌,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,利用镍琼脂糖亲和层析纯化表达产物。经在线软件预测结果显示,该蛋白分子质量为35.1 kDa,无信号肽和跨膜域,仅含有一个Ami_2结构域。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示重组蛋白表达成功,且以可溶性蛋白的形式存在于细胞破碎上清液,分子质量约35 kDa,与预期蛋白大小一致。重组蛋白最佳表达条件为:IPTG浓度0.5 mmol/L,20℃过夜诱导。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 噬菌体 生物信息分析 内溶素 克隆表达
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重组大肠杆菌制备副溶血弧菌噬菌体内溶素Lys qdvp001 CHAP域及诱导条件初步优化 预览
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作者 鞠晓晨 吕新伟 +1 位作者 王静雪 林洪 《食品工业科技》 CSCD 北大核心 2018年第6期86-91,共6页
目的:为了利用噬菌体内溶素防控副溶血弧菌,通过克隆表达工程菌pET30a—CHAP制备目的蛋白,并将以包涵体存在的目的蛋白复性得到有活性的噬菌体内溶素蛋白。方法:首先克隆工程菌pET30a—CHAP,经IPTG的诱导表达后,检测菌液上清中内... 目的:为了利用噬菌体内溶素防控副溶血弧菌,通过克隆表达工程菌pET30a—CHAP制备目的蛋白,并将以包涵体存在的目的蛋白复性得到有活性的噬菌体内溶素蛋白。方法:首先克隆工程菌pET30a—CHAP,经IPTG的诱导表达后,检测菌液上清中内溶素含量判断表达形式,再进行诱导条件初步优化。通过将表达的pET30a—CHAP包涵体蛋白先用洗涤剂洗涤去除杂蛋白,然后用尿素变性荆溶解,并用Ni2+ SepharoseTM6 FastFlow亲和层析柱进行层析纯化,用EDTA、氧化型谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽等为折叠复性促进剂,经过透析制备可溶性的pET30a—CHAP蛋白,再检测目的蛋白的抑菌活性。结果:本实验确定了重组菌内溶素的表达形式为没有活性的包涵体;初步确定最佳诱导条件为诱导温度为16℃,IPTG终浓度0.5mmol/L,诱导时间为7h;复性后的内溶素具有抑菌活性。结论:本研究为利用内溶素防控副溶血弧菌以及其他革兰氏阴性细菌提供了制备方法。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 副溶血弧菌噬菌体 内溶素 包涵体复性
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Phage therapy: An alternative to antibiotics in the age of multi-drug resistance 预览
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作者 Derek M Lin Britt Koskella Henry C Lin 《世界胃肠药理与治疗学杂志:英文版(电子版)》 2017年第3期162-173,共12页
The practice of phage therapy, which uses bacterial viruses(phages) to treat bacterial infections, has been around for almost a century. The universal decline in the effectiveness of antibiotics has generated renewed ... The practice of phage therapy, which uses bacterial viruses(phages) to treat bacterial infections, has been around for almost a century. The universal decline in the effectiveness of antibiotics has generated renewed interest in revisiting this practice. Conventionally, phage therapy relies on the use of naturally-occurring phages to infect and lyse bacteria at the site of infection. Biotechnological advances have further expanded the repertoire of potential phage therapeutics to include novel strategies using bioengineered phages and purified phage lytic proteins. Current research on the use of phages and their lytic proteins against multidrug-resistant bacterial infections, suggests phage therapy has the potential to be used as either an alternative or a supplement to antibiotic treatments. Antibacterial therapies, whether phage-or antibiotic-based, each have relative advantages and disadvantages; accordingly, many considerations must be taken into account when designing novel therapeutic approaches for preventing and treating bacterial infection. Although much about phages and human health is still being discovered, the time to take phage therapy serious again seems to be rapidly approaching. 展开更多
关键词 抗菌素 抗菌素治疗 噬菌体 噬菌体治疗 ENDOLYSIN 细胞溶解酵素 Multidrug 抵抗 抗菌素抵抗 噬菌体安全 Methicillin 抵抗的 S。aureus
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李斯特菌噬菌体裂解酶CBD蛋白的克隆与表达 预览 被引量:1
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作者 葛怀娜 刘珊娜 +1 位作者 刘金福 范志华 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期234-237,共4页
单核细胞增生李斯特菌噬菌体的裂解酶中细胞壁结合结构域(CBD)能够特异识别李斯特菌细胞。本研究将CBDP40基因扩增后插入p ET32a(+)载体,导入大肠杆菌表达系统,获得重组菌株,并对其进行IPTG诱导表达,分析重组蛋白的活性。聚丙烯酰... 单核细胞增生李斯特菌噬菌体的裂解酶中细胞壁结合结构域(CBD)能够特异识别李斯特菌细胞。本研究将CBDP40基因扩增后插入p ET32a(+)载体,导入大肠杆菌表达系统,获得重组菌株,并对其进行IPTG诱导表达,分析重组蛋白的活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)表明,经0.1 mmol/L IPTG诱导的重组大肠杆菌BL21(DE3)在38 ku处有明显诱导条带,与预期蛋白分子量相符。经过超声细胞破碎,重组蛋白CBDP40分布在上清液中,通过镍离子螯合亲和层析纯化重组蛋白,洗脱后的蛋白浓度为0.908 mg/m L。经菌体结合和间接ELISA验证,重组蛋白CBDP40具有生物学活性,即对李斯特菌具有识别功能。CBD蛋白的重组表达、纯化及其活性验证,为深入研究裂解酶的理化性质和作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 噬菌体裂解酶 基因表达 亲和层析
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李斯特菌噬菌体裂解酶的研究进展 预览
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作者 刘珊娜 范志华 +2 位作者 孙溪 付荣霞 吴海清 《天津农学院学报》 CAS 2016年第1期62-65,共4页
单核细胞增生李斯特菌是重要的食源性致病菌,可通过污染的食品进入人体,引发食品安全事件。噬菌体作为李斯特菌生物防治的有效手段,能够特异性识别菌体细胞,造成细菌裂解死亡。噬菌体发挥抑菌活性的关键在于其双链DNA所编码的裂解酶(... 单核细胞增生李斯特菌是重要的食源性致病菌,可通过污染的食品进入人体,引发食品安全事件。噬菌体作为李斯特菌生物防治的有效手段,能够特异性识别菌体细胞,造成细菌裂解死亡。噬菌体发挥抑菌活性的关键在于其双链DNA所编码的裂解酶(肽聚糖水解酶类)能够在增殖过程的后期有效裂解宿主菌的细胞壁,将子代噬菌体释放到胞外环境中。本文综述了李斯特菌噬菌体裂解酶的种类、作用原理和结构特征,并探讨了裂解酶的应用领域和未来发展方向。 展开更多
关键词 李斯特菌 噬菌体 裂解酶 研究进展
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副溶血弧菌噬菌体qdvp001重组内溶素诱导表达以及理化性质初步研究 预览 被引量:3
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作者 王伟宇 林洪 王静雪 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第16期205-209,共5页
对重组内溶素Lysqdvp001诱导表达条件进行探讨,发现适当降低诱导温度,可以避免包涵体的形成。最终确定诱导表达条件为25℃、IPTG浓度为1 mmol/L、诱导4 h,此时不仅蛋白表达量大并且不形成包涵体。为研究Lyqdvp001抑菌以及理化性能,采用... 对重组内溶素Lysqdvp001诱导表达条件进行探讨,发现适当降低诱导温度,可以避免包涵体的形成。最终确定诱导表达条件为25℃、IPTG浓度为1 mmol/L、诱导4 h,此时不仅蛋白表达量大并且不形成包涵体。为研究Lyqdvp001抑菌以及理化性能,采用浊度法对p H、温度、离子强度对裂解活性的影响进行探讨。结果表明,Lysqdvp001具有宽p H适应性,p H3~10均能很好发挥作用;耐高温,在75℃处理30 min仍能维持70%活性;低浓度(0.1 mmol/L)的Zn^2+、Fe^2+以及各浓度(10、1、0.1 mmol/L)的Ca^2+可以明显提高重组内溶素Lysqdvp001活性。结果显示重组内溶素有作为抑菌剂的潜力。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 副溶血弧菌噬菌体 内溶素
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猪链球菌7型噬菌体裂解酶Ly7917催化域的裂菌活性
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作者 吉文汇 孙亮 +3 位作者 黄庆庆 王恒安 严亚贤 孙建和 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期156-163,共8页
【目的】揭示链球菌噬菌体裂解酶Ly7917催化域CHAP的核心功能域,为进一步改造裂解酶提供理论依据。【方法】通过表达纯化分别从N端截短的Ly7917及从C端截短的Ly CHAP各蛋白,基于平板裂解试验和浊度递减试验,比较各截短蛋白之间的活性差... 【目的】揭示链球菌噬菌体裂解酶Ly7917催化域CHAP的核心功能域,为进一步改造裂解酶提供理论依据。【方法】通过表达纯化分别从N端截短的Ly7917及从C端截短的Ly CHAP各蛋白,基于平板裂解试验和浊度递减试验,比较各截短蛋白之间的活性差异,以及添加Ca^2+后各蛋白的活性变化。【结果】发现催化域蛋白Ly CHAP与Ly7917全酶的活性差异不显著,Ly CHAP的N端序列对其活性影响较大,不宜截短;而C端依次截短后,活性逐渐降低。C端截短20个氨基酸的Ly CHAP1-130,在添加1 mmol/L Ca^2+后活性最强。【结论】Ly7917催化域CHAP的核心功能域为1-130 aa,推测其具有Ca^2+结合区域,并发现Ly CHAP1-130在Ca^2+参与下裂菌活性可媲美Ly7917全酶。预示着Ly CHAP1-130可以替代全酶应用于之后的临床试验。 展开更多
关键词 猪链球菌 噬菌体裂解酶 催化结构域 裂菌活性
沙门氏菌噬菌体STP4-a重组内溶素抑菌特性分析 预览 被引量:3
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作者 林洪 李萌 王静雪 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期104-108,共5页
为研究内溶素重组蛋白Lys STP4对沙门氏菌的抑菌性能,采用扩散法和浊度法探讨不同p H值、温度、离子强度等条件对其裂解稳定性的影响。结果表明,Lys STP4在p H 5~10和温度30~50℃的条件下均能保持较高的活性,在-80℃条件下保存6个月仍有... 为研究内溶素重组蛋白Lys STP4对沙门氏菌的抑菌性能,采用扩散法和浊度法探讨不同p H值、温度、离子强度等条件对其裂解稳定性的影响。结果表明,Lys STP4在p H 5~10和温度30~50℃的条件下均能保持较高的活性,在-80℃条件下保存6个月仍有85%的残留酶活力,与膜通透剂乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetic acid,EDTA)协同作用能够有效抑制高浓度沙门氏菌的生长。 展开更多
关键词 沙门氏菌 烈性噬菌体 内溶素
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利用生物信息学技术预测副溶血弧菌噬菌体VPp1内溶素基因及其裂解机制 预览 被引量:1
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作者 金延秋 庄松娟 +2 位作者 林洪 王静雪 孙翌 《中国渔业质量与标准》 2015年第5期67-71,共5页
通过对副溶血弧菌噬菌体VPp1全基因组分析,利用相似性比对数据库BLAST和序列模体数据库,初步推定该基因组的ORF31编码内溶素,预测该开放式阅读框编码一种糖苷水解酶。预测内溶素不含信号肽、跨膜区域。从生物信息学角度推定噬菌体VPp1... 通过对副溶血弧菌噬菌体VPp1全基因组分析,利用相似性比对数据库BLAST和序列模体数据库,初步推定该基因组的ORF31编码内溶素,预测该开放式阅读框编码一种糖苷水解酶。预测内溶素不含信号肽、跨膜区域。从生物信息学角度推定噬菌体VPp1内溶素的裂解机制可能是联合孔蛋白协同作用裂解细菌肽聚糖。本研究为进一步揭示内溶素生物学特性提供基础数据。 展开更多
关键词 噬菌体 副溶血弧菌 内溶素 蛋白结构 生物信息分析
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高效广谱猪链球菌7型前噬菌体裂解酶的挖掘及活性研究 被引量:1
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作者 黄庆庆 吉文汇 +2 位作者 杜斌 程玉强 孙建和 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1052-1059,共8页
【目的】噬菌体具有防控耐药性病原菌的抗菌应用潜力,但是有些病原菌噬菌体的获得非常困难,研究发现大多数病原菌存在前噬菌体(Prophage),且由前噬菌体编码的裂解酶(Endolysin)具有良好的抗菌应用前景,本研究将挖掘猪链球菌前噬菌... 【目的】噬菌体具有防控耐药性病原菌的抗菌应用潜力,但是有些病原菌噬菌体的获得非常困难,研究发现大多数病原菌存在前噬菌体(Prophage),且由前噬菌体编码的裂解酶(Endolysin)具有良好的抗菌应用前景,本研究将挖掘猪链球菌前噬菌体及其编码的裂解酶。【方法】通过对Gen Bank中登录的数株猪链球菌前噬菌体裂解酶的基因信息分析,挖掘出一株猪链球菌7型菌株前噬菌体编码的裂解酶,研究其生物学活性。以猪链球菌7型菌株7917的基因组为模板,采用PCR技术扩增获得裂解酶基因ly7917,将其克隆至质粒p ET28a(+)并转化大肠杆菌DH5α细胞,挑选基因序列正确的阳性克隆、抽提质粒、转化表达菌株大肠杆菌BL21,经IPTG诱导可高效表达裂解酶Ly7917。【结果】平板裂解试验结果显示Ly7917具有高效裂菌活性,能够裂解猪链球菌2型高致病力菌株HA9801;浊度递减试验结果显示该裂解酶能够高效裂解猪链球菌2型、7型、9型和马链球菌兽疫亚种参考株、金黄色葡萄球菌(包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)等多种革兰氏阳性菌。【结论】基于前噬菌体挖掘的裂解酶Ly7917,具有高效广谱裂菌活性,为临床上利用裂解酶治疗耐药菌的混合感染提供了可能。 展开更多
关键词 前噬菌体 裂解酶 裂菌活性 猪链球菌 金黄色葡萄球菌
噬菌体内溶素对奶牛乳房炎致病菌的溶解作用 预览 被引量:5
17
作者 王方正 田中杰 田文儒 《动物医学进展》 北大核心 2015年第4期113-116,共4页
奶牛乳房炎一直是困扰养牛业的顽疾。诱发奶牛乳房炎的致病菌通常包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌等致病菌,停乳链球菌、乳房链球菌、大肠埃希菌等环境致病菌以及表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、模仿葡萄球菌等机会性致病菌。噬菌体是一... 奶牛乳房炎一直是困扰养牛业的顽疾。诱发奶牛乳房炎的致病菌通常包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌等致病菌,停乳链球菌、乳房链球菌、大肠埃希菌等环境致病菌以及表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、模仿葡萄球菌等机会性致病菌。噬菌体是一类细菌依赖性的病毒,可通过内溶素抑制肽聚糖的合成,或利用穿孔素-内溶素系统水解肽聚糖。在体外试验中,噬菌体及其内溶素可溶解、抑制细菌生物膜,裂解乳房炎致病菌;在体内试验中,可清除感染动物体内的乳房炎致病菌,对奶牛乳房炎具有治疗效果。因此,噬菌体及其内溶素在奶牛乳房炎治疗方面具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 噬菌体 内溶素 乳房炎致病菌 细菌生物膜
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两性多肽结构影响鲍曼不动杆菌外膜通透性的实验研究*两性多肽结构影响鲍曼不动杆菌外膜通透性的实验研究 预览
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作者 张劼 陈永 +1 位作者 曾颖 李秀娟 《重庆医学》 CAS 北大核心 2015年第9期1162-1164,1167共4页
目的:明确两性多肽结构对鲍曼不动杆菌(AB)外膜通透性的影响。方法 PCR扩增LysAB3基因及删除两性多肽结构的LysAB3-D基因,以pET28a(+)为载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达LysAB3及LysAB3-D ,金属离子螯合亲和层析... 目的:明确两性多肽结构对鲍曼不动杆菌(AB)外膜通透性的影响。方法 PCR扩增LysAB3基因及删除两性多肽结构的LysAB3-D基因,以pET28a(+)为载体构建重组质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达LysAB3及LysAB3-D ,金属离子螯合亲和层析法纯化重组蛋白。将AB分别经LysAB3及LysAB3-D处理后,用扫描电子显微镜观察菌体形态,荧光显微镜观察菌体中是否有绿色荧光的聚集。结果经LysAB3处理后的AB ,在扫描电子显微镜下可见菌体表面粗糙、皱缩,部分裂解为碎片;在荧光显微镜下可见菌体内有绿色荧光聚集。而删除两性多肽结构的LysAB3-D作用AB后,却没有上述现象的发生。结论两性多肽结构可增加AB外膜通透性,有助于裂解酶进入其中,达到抗菌目的。 展开更多
关键词 噬菌体 裂解酶 两性多肽结构 鲍曼不动杆菌 外膜通透性
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铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶LysYH6的表达与活性 被引量:2
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作者 杨梅 杜崇涛 +4 位作者 顾敬敏 韩文瑜 宫鹏娟 雷连成 孙长江 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期357-362,共6页
以耐药性铜绿假单胞菌为宿主菌分离并筛选出1株烈性噬菌体YH6,根据电镜下的形态特征,YH6为短尾噬菌体家族的成员。通过对YH6的全基因组序列测定和分析,确定了其裂解酶基因,并通过原核表达获得了噬菌体的裂解酶Lys YH6。菌落计数及浊度... 以耐药性铜绿假单胞菌为宿主菌分离并筛选出1株烈性噬菌体YH6,根据电镜下的形态特征,YH6为短尾噬菌体家族的成员。通过对YH6的全基因组序列测定和分析,确定了其裂解酶基因,并通过原核表达获得了噬菌体的裂解酶Lys YH6。菌落计数及浊度下降法表明:该裂解酶在EDTA(25 mmol/L)存在的条件下对铜绿假单胞菌表现出了显著的抑菌活性。具有抑菌活性裂解酶Lys YH6的获得为治疗和预防耐药性铜绿假单胞菌引起的感染开辟了新思路。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 噬菌体 裂解酶 抗菌活性
噬菌体AB3裂解酶的抗菌谱及其抗菌机制 预览
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作者 张劼 李秀娟 陈永 《世界科技研究与发展》 CSCD 2014年第2期142-145,共4页
目的明确噬菌体AB3裂解酶LysAB3的抗菌谱及其抗菌机制。方法利用扩散法检测裂解酶LysAB3的抗菌谱;扩增裂解酶LysAB3基因序列前端的354bp,以pET28a(+)为载体构建重组质粒,在大肠杆菌Bk21(DE3)中表达,Ni^2+-NTA亲和层析柱纯化... 目的明确噬菌体AB3裂解酶LysAB3的抗菌谱及其抗菌机制。方法利用扩散法检测裂解酶LysAB3的抗菌谱;扩增裂解酶LysAB3基因序列前端的354bp,以pET28a(+)为载体构建重组质粒,在大肠杆菌Bk21(DE3)中表达,Ni^2+-NTA亲和层析柱纯化重组蛋白,得到删除了两性多肽结构的裂解酶LysAB3-D,并测定其抗菌率。结果裂解酶LysAB3可以裂解全部40株鲍曼不动杆菌菌株;删除了两性多肽结构后,裂解酶LysAB3-D的抗菌率由95.8%下降至33.3%。结论裂解酶LysAB3的抗菌谱较宽;其杀菌机制可能是通过其两性多肽结构增加细菌外膜通透性,辅助酶解催化域进入其中降解肽聚糖。 展开更多
关键词 噬菌体 裂解酶 抗菌谱 抗菌机制
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