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RNA干扰水牛MTPN基因对颗粒细胞增殖、凋亡及激素分泌的影响 预览
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作者 陈超 李俊 +4 位作者 华丽萍 安志高 胡祥维 刘深贺 杨利国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期800-807,共8页
本研究旨在探讨敲低MTPN基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖、凋亡及雌激素、孕酮分泌的影响。应用RNAi技术敲低颗粒细胞中MTPN基因的表达水平,通过实时荧光定量PCR方法检测体外培养水牛颗粒细胞中MTPN基因及增殖和周期相关基因的表达情况,... 本研究旨在探讨敲低MTPN基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖、凋亡及雌激素、孕酮分泌的影响。应用RNAi技术敲低颗粒细胞中MTPN基因的表达水平,通过实时荧光定量PCR方法检测体外培养水牛颗粒细胞中MTPN基因及增殖和周期相关基因的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖,借助流式细胞仪检测细胞周期的分布,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中雌激素与孕酮含量。结果显示,经siRNA(si-MTPN)转染颗粒细胞后,MTPN基因相对表达量下降60%(P<0.01);细胞增殖受到显著抑制(P<0.05),G1期细胞数量下降,S期细胞数量上升,G2期细胞数量极显著上升(P<0.01),细胞被阻滞在G2期;增殖与周期相关基因Cyclin D2、Cytochrom C表达量显著上升(P<0.05),Caspase9、Fas基因表达量极显著上升(P<0.01);ELISA检测雌激素和孕酮分泌水平均显著下降(P<0.05)。综上表明,敲低MTPN基因能通过调控相关基因的表达抑制体外培养水牛颗粒细胞的增殖及雌激素、孕酮的分泌水平,为阐明MTPN基因参与家畜卵泡发生的分子机制提供参考。 展开更多
关键词 水牛 MTPN基因 颗粒细胞 增殖 凋亡 雌激素 孕酮
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带有雌激素受体编码区的KLF4表达载体的构建及其转染后对细胞的可调控表达 预览
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作者 吴巍 关邯峰 +2 位作者 李勇 谭鹏 李锋 《骨科》 CAS 2013年第2期57-61,共5页
目的构建KLF4-ER基因表达的带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)的博来霉素抗性的pCGF5IEGZ载体,利用其对小鼠巨噬细胞系RAW264.7进行稳定转染株的筛选并鉴定。方法以pEGFP-KLF4质粒为模板,设计带有酶切位点的KLF4上下游引物,以PCR扩增... 目的构建KLF4-ER基因表达的带有加强型绿色荧光蛋白(EGFP)的博来霉素抗性的pCGF5IEGZ载体,利用其对小鼠巨噬细胞系RAW264.7进行稳定转染株的筛选并鉴定。方法以pEGFP-KLF4质粒为模板,设计带有酶切位点的KLF4上下游引物,以PCR扩增获得编码序列,其产物电泳鉴定后纯化回收,并将改良型小鼠雌激素受体的激素链接区序列与之融合,KLF4-ER片段纯化回收后插入pCGF5-IEGZ载体中;重组体转化细菌,筛选扩增后酶切鉴定;重组质粒转染细胞,倒置荧光显微镜观察EGFP的表达,使用zeocin筛选稳定株,流式细胞术检测转染率;WesternBlot、RT-PCR检测转染后的KLF4表达;经Tamoxifen诱导后,DAPI核染色观察重组载体转运胞核中的表达以及抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测目的基因表达的效应。结果电泳鉴定KLF4全长片段及pCGF5IEGZ-KLF4ER重组体双酶切结果符合设定要求,重组质粒构建成功;目的载体成功转入细胞中,转染19d后流式细胞测定稳定株转染效率达95.31%;20dKLF4蛋白及mRNA水平均明显高于空转组和阴性组(P〈O.01)。Tamoxifen诱导靶基因的表达生物效应优于对照组。结论该实验成功地用pCGF5IEGZ型载体将带有可受调控的雌激素受体编码区的目的基因导入通用的小鼠巨噬细胞系中,为今后研究靶基因在破骨细胞中可诱导性过表达提供了新的途径。 展开更多
关键词 受体 雌激素 基因表达调控 诱变力试验 Krüppel样转录因子
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重庆地区正常汉族人群雌激素受体基因多态性的分布特征 预览 被引量:2
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作者 付华斌 杨清武 +2 位作者 安建宏 杨程 王琳 《四川医学》 CAS 2007年第3期 267-269,共3页
目的观察雌激素受体(ER)基因多态性在重庆地区正常汉族人群中的分布特征。方法通过PCR-限制性片段长度多态性分析(RFLP)方法,检测448名重庆地区正常人ER基因多态性的分布特点,并与国内外研究比较。结果重庆地区正常人群ER基因型... 目的观察雌激素受体(ER)基因多态性在重庆地区正常汉族人群中的分布特征。方法通过PCR-限制性片段长度多态性分析(RFLP)方法,检测448名重庆地区正常人ER基因多态性的分布特点,并与国内外研究比较。结果重庆地区正常人群ER基因型以Pp型,xx型和ppxx型发生率最高,这种分布特点在两性间差异无统计学意义(P〉0.05)。我国不同地域男性间ER基因型的分布差异有统计学意义(P〈0.01-0、05),女性无差异(P〉0.05);我国女性ER基因型的分布与日拳和韩国相似(P〉0.05),与瑞典和美国差异有统计学意义(P〈0.01-0.05)。结论ER基因型的分布在不同地域、不同种族间存在显著差异,这种差异可能与某些疾病在不同地域、不同种族间不同的发病率和临床表现有关。 展开更多
关键词 雌激素受体 基因多态性 地域 种族
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