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柳树NAC基因的克隆与表达模式分析 认领
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作者 田雪瑶 周洁 +2 位作者 王保松 何开跃 何旭东 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期119-124,共6页
【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345'的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克... 【目的】研究柳树重要抗逆转录因子基因家族,为揭示柳树抗逆分子机制提供理论依据。【方法】以‘苏柳2345'的转录组测序数据为基础,克隆了柳树NAC家族,并分析其序列结构、组织表达特异性以及不同胁迫条件下的表达模式。【结果】克隆的两个柳树NAC转录因子基因分别命名为SlNAC1和SlNAC2。生物信息学分析表明:SlNAC1序列全长为1126 bp,编码产物含343个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于细胞核;SlNAC2序列全长为1139 bp,编码产物含291个氨基酸残基,为稳定的亲水蛋白,定位于叶绿体。两个基因均具有典型的NAM结构域及A、B、C、D、E 5个亚结构域,还包括共同的LPPG、YPNG和DEE保守基序及NAC抑制结构域。系统进化树分析显示,SlNAC1基因与木薯亲缘关系最近,SlNAC2基因与茄子亲缘关系最近。定量PCR结果显示SlNAC1和SlNAC2均在叶片表达,根中没有表达,为叶片特异性转录因子。定量PCR结果显示SlNAC1基因在脱落酸(ABA)和赤霉素(GA)处理24 h后显著上调,SlNAC2基因在聚乙二醇(PEG)、ABA和GA胁迫后显著上调。【结论】柳树SlNAC1基因在非生物胁迫下表达较为稳定,受ABA和GA胁迫诱导;SlNAC2受干旱、ABA和GA胁迫诱导,受影响明显高于SlNAC1,不受乙烯剂(ETH)胁迫影响。推测SlNAC1和SlNAC2参与GA、ABA信号传导,可能不参与ETH的信号途径。 展开更多
关键词 柳树 NAC基因家族 基因克隆 基因表达
烟草BELL基因家族鉴定及其温室条件下的表达模式分析 认领
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作者 宋卫娜 赵森森 +6 位作者 武明珠 王根发 罗朝鹏 王晨 李泽锋 杨军 王中 《烟草科技》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-11,共11页
BELL基因是植物中普遍存在的一类基因,其编码的同源异型结构域转录因子参与调控了植物叶片、花序等多个组织的发育过程。为明确烟草BELL基因的结构和功能,通过同源序列比对和功能域分析鉴定了普通烟草BELL基因,结合系统进化和基因表达... BELL基因是植物中普遍存在的一类基因,其编码的同源异型结构域转录因子参与调控了植物叶片、花序等多个组织的发育过程。为明确烟草BELL基因的结构和功能,通过同源序列比对和功能域分析鉴定了普通烟草BELL基因,结合系统进化和基因表达模式分析对烟草BELL基因的功能进行了初步预测。结果表明,从普通烟草基因组中共鉴定出28个NtBELLs基因,分布于15条不同的染色体上。系统进化分析表明,烟草NtBELLs基因可分为4组,每组参与调控烟草不同的发育过程。NtBELLs基因在6个烟草组织中呈现不同的表达模式,且具有明显的组织特异性。干旱和盐胁迫能显著诱导部分NtBELLs基因的表达,表明该基因家族可能参与了植物抵御非生物胁迫的过程。 展开更多
关键词 烟草 BEL1-like基因家族 基因结构 系统发育 基因表达
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家蝇三龄幼虫Mdctl基因原核表达及生物信息学分析 认领
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作者 常振策 李忠旬 +3 位作者 贾利娜 修江帆 国果 吴建伟 《贵州医科大学学报》 CAS 2020年第2期145-150,共6页
目的:构建家蝇C型凝集素基因(Mdctl)原核表达体系,对Mdctl基因及编码蛋白进行生物信息学分析。方法:采用生物信息学方法,分析Mdctl基因及编码蛋白;将构建的pET28a(+)/Mdctl重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(I... 目的:构建家蝇C型凝集素基因(Mdctl)原核表达体系,对Mdctl基因及编码蛋白进行生物信息学分析。方法:采用生物信息学方法,分析Mdctl基因及编码蛋白;将构建的pET28a(+)/Mdctl重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21-DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白并通过SDS-PAGE对表达产物进行分析;Ni-IDA法纯化重组蛋白,Western-Blot对其鉴定。结果:生物信息学分析显示,Mdctl基因开放阅读框全长333 bp,共编码110个氨基酸,理论分子量为13.13 kDa,等电点为4.49,信号肽位于1~22位氨基酸之间;Mdctl蛋白中存在Clect结构域,属于C型凝集素超家族;Mdctl重组蛋白在大肠杆菌BL21-DE3中主要以包涵体形式表达,重组蛋白的相对分子质量与Mdctl蛋白两端融合6×His标签后的总分子量相一致。结论:成功构建Mdctl原核表达系统,并获得重组蛋白。 展开更多
关键词 家蝇 Mdctl基因 原核表达 蛋白纯化 生物信息学 基因表达
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巨桉EgrBBX基因家族鉴定及其在非生物逆境处理下的表达分析 认领
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作者 杨宁 从青 +2 位作者 王晓荣 倪晓祥 程龙军 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期658-671,共14页
BBX (B-box)蛋白是锌指结构转录因子蛋白家族的一个亚家族,广泛参与植物的生长和发育,在非生物逆境响应中也具有重要作用。桉树(Eucalyptus)是我国南方用材树种,但其抗逆性较差,限制了桉树栽培范围的扩大和栽培效益提高。为丰富桉树抗... BBX (B-box)蛋白是锌指结构转录因子蛋白家族的一个亚家族,广泛参与植物的生长和发育,在非生物逆境响应中也具有重要作用。桉树(Eucalyptus)是我国南方用材树种,但其抗逆性较差,限制了桉树栽培范围的扩大和栽培效益提高。为丰富桉树抗逆基因资源,给桉树抗逆分子辅助育种提供参考依据,本研究从巨桉(Eucalyptus grandis)全基因组范围内搜寻并鉴定出21个BBX基因家族成员,利用mg2c、Protparam、MEGA和PlantCARE软件进行染色体分布、序列结构特征以及启动子上顺式作用元件的种类和分布等分析,并对EgrBBX家族基因的组织特异性表达及其在低温、干旱及高盐处理下的表达模式进行qRT-PCR检测分析。结果表明,21个EgrBBX基因分别分布在9条染色体上;编码蛋白序列中含有典型的B1、B2和CCT结构域,可分为B1+B2+CCTⅠ和Ⅱ型、B1+B2、B1+CCT以及B1五个类型。启动子元件分析结果表明,EgrBBX家族基因启动子上除含有大量光响应元件,还含有ABRE (ABA-responsive element)、MBS (MYB binding site)、LTR (low-temperature responsiveness)、HSE (heat-stress responsive element)等非生物逆境响应相关元件。以qRT-PCR方法进行根、茎和叶的组织表达分析表明,EgrBBX1、EgrBBX7、EgrBBX9、EgrBBX13和EgrBBX18主要在叶片中表达,EgrBBX3、EgrBBX6和EgrBBX15在茎中具有相对较高的表达量。在不同时间低温、干旱和高盐的非生物逆境胁迫条件下,大部分EgrBBX基因发生响应:低温处理下EgrBBX4、EgrBBX7、EgrBBX8、EgrBBX14、EgrBBX16和EgrBBX17在整个处理时间周期内均表现为强烈的表达抑制;EgrBBX8、EgrBBX11、EgrBBX12和EgrBBX18在干旱处理1 d即出现明显的上调表达,2 d后该诱导效应减弱或消失;高盐处理下,21个EgrBBX基因中13个在12 h后表达达到峰值,然后逐渐回落。本研究可为深入揭示EgrBBX基因家族在非生物逆境胁迫响应中的具体功能,筛选桉树抗逆性EgrBBX基因资源提供参� 展开更多
关键词 巨桉 BBX(B-box)基因家族 转录因子 基因表达 非生物逆境胁迫响应
忽地笑ABCG5转运蛋白基因(LaABCG5)的克隆和表达分析 认领
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作者 刘彦彤 王蓉 汪仁 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期8-15,27共9页
通过分析忽地笑〔Lycoris aurea(L'Hér.)Herb.〕比较转录组数据,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆到1个ABC转运蛋白基因LaABCG5。LaABCG5基因全长1896 bp,编码631个氨基酸。LaABCG5的理论相对分子质量为70451,理论等电点为p... 通过分析忽地笑〔Lycoris aurea(L'Hér.)Herb.〕比较转录组数据,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆到1个ABC转运蛋白基因LaABCG5。LaABCG5基因全长1896 bp,编码631个氨基酸。LaABCG5的理论相对分子质量为70451,理论等电点为pI 8.37。LaABCG5的二级结构中,α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲的氨基酸所占比例分别为48.81%、13.47%、5.07%和32.65%。聚类分析结果显示:LaABCG5与拟南芥〔Arabidopsis thaliana(Linn.)Heynh.〕ABCG5转运蛋白的亲缘关系最近。LaABCG5与海枣(Phoenix dactylifera Linn.)、油棕(Elaeis guineensis Jacq.)、番木瓜(Carica papaya Linn.)、毛果杨(Populus trichocarpa Torr.et Gray)和银白杨(Populus alba Linn.)的ABCG5转运蛋白的同源性在62%~67%之间。qRT-PCR检测结果显示:LaABCG5基因在忽地笑的根、鳞茎、叶片、花瓣和雌蕊中均有表达,其中,在叶片和雌蕊中的相对表达量显著高于其他组织;100μmol·L^-1 MeJA处理后6 h,忽地笑叶片中LaABCG5基因的相对表达量显著高于对照(DMSO处理后6 h)。跨膜结构域和亚细胞定位结果显示:LaABCG5定位于细胞膜。研究结果显示:LaABCG5基因的表达具有组织特异性,且受MeJA调控;LaABCG5的定位与其功能相吻合。 展开更多
关键词 忽地笑 ABC转运蛋白 基因克隆 基因表达 亚细胞定位
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核桃TT1类转录因子的筛选及干旱响应分析 认领
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作者 王艺 张尚昆 +4 位作者 赵翔 刘玉梅 赵焕元 杨桂燕 马凯恒 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2020年第1期86-93,共8页
TT1基因(transparent testa1)在植物逆境响应中有重要作用。核桃是重要的经济树种,其产量和质量均受环境影响。为进一步探索核桃(Juglans regia)抗逆机制,以‘香玲’核桃为试验材料,克隆获得核桃JrTT1基因,并进行基因表达和生物信息学分... TT1基因(transparent testa1)在植物逆境响应中有重要作用。核桃是重要的经济树种,其产量和质量均受环境影响。为进一步探索核桃(Juglans regia)抗逆机制,以‘香玲’核桃为试验材料,克隆获得核桃JrTT1基因,并进行基因表达和生物信息学分析,预测该基因的基本生物功能。结果表明,JrTT1-1、JrTT1-2、JrTT1-3基因的开放阅读框(OFR)分别为1014、1023、1029 bp,蛋白分子量分别为37763.51、38492.94、38136.36 u,含有氨基酸数分别为337、340、342,理论等电点分别为7.88、7.19、8.89。与其他物种的同源TT1蛋白具有较近的进化关系。且其上游1200 bp启动子中含有多种与干旱逆境响应相关的顺式作用元件。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)发现,JrTT1-1、JrTT1-2、JrTT1-3基因在PEG 6000胁迫下能不同程度地被诱导表达,且在叶和根中的表达趋势不同。表明JrTT1基因可以响应干旱胁迫诱导,并具有组织表达特异性,推测其在核桃逆境响应中具有一定作用。 展开更多
关键词 核桃 TT1基因 基因表达 干旱胁迫
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桂花OfFCA基因的克隆及在花芽分化时期的表达分析 认领
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作者 吴琪 吴鸿飞 +4 位作者 周敏舒 徐倩霞 杨丽媛 赵宏波 董彬 《浙江农林大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期195-200,共6页
【目的】桂花Osmanthus fragrans是著名的香化植物,其花芽分化受到环境温度影响。研究环境温度对桂花花芽分化的影响对桂花的花期调控具有重要的指导意义。【方法】以桂花品种‘堰虹桂’O.fragrans‘Yanhonggui’为材料,采用石蜡切片观... 【目的】桂花Osmanthus fragrans是著名的香化植物,其花芽分化受到环境温度影响。研究环境温度对桂花花芽分化的影响对桂花的花期调控具有重要的指导意义。【方法】以桂花品种‘堰虹桂’O.fragrans‘Yanhonggui’为材料,采用石蜡切片观察其花芽分化进程,运用聚合酶链式反应和实时荧光定量技术对影响温度FCA(FLOWERING LOCUS CA)基因分别进行克隆及表达特异性分析。【结果】克隆得到OfFCA cDNA序列长为1319 bp,其开放阅读框为864 bp,编码287个氨基酸。序列比对及进化分析发现:OfFCA与木犀科Oleaceae油橄榄Olea europaea和胡麻科Pedaliaceae芝麻Sesamum indicum的FCA相似度较高,同源性可达68%以上。在桂花花芽分化的不同时期,无论叶还是花芽中,19℃环境低温下OfFCA基因的表达水平均显著高于25℃常温生长条件下的表达水平。【结论】桂花OfFCA基因响应环境相对低温的变化,参与桂花的花芽分化,使桂花的花期提前。 展开更多
关键词 林木育种学 桂花 FCA基因 花芽分化 基因表达
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SV2A基因真核表达质粒构建及其在HEK293T细胞中的表达 认领
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作者 张晓敏 王培昌 刘静 《国际检验医学杂志》 CAS 2020年第3期274-277,共4页
目的构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定。方法以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2239 bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×... 目的构建鼠突触囊泡蛋白2A(SV2A)基因的真核表达质粒,并瞬时转染至人胚肾细胞(HEK293T)中,对其表达进行鉴定。方法以APP/PS1双转基因小鼠海马组织的cDNA为模板,扩增得到长2239 bp的SV2A基因编码序列,将此序列插入到真核表达载体p3×Flag-CMV-10多克隆位点区域中,得到真核表达质粒p3×Flag-CMV-10-SV2A,转化后挑取单克隆菌落经双酶切鉴定后送公司测序,将构建成功的重组质粒转染至HEK293T细胞中,利用蛋白质印迹法(Western blot)检测SV2A基因的表达情况。结果成功构建p3×Flag-CMV-10-SV2A重组质粒,并在转染至HEK293T细胞后,验证了相应蛋白表达。结论利用分子克隆技术成功构建了p3×Flag-CMV-10-SV2A真核表达质粒并在HEK293T细胞中正确表达,为后续实验奠定了基础。 展开更多
关键词 SV2A基因 分子克隆 重组质粒 基因表达
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向日葵MADS-box家族基因HaAGL11的克隆及表达分析 认领
9
作者 何卓远 韦小英 +4 位作者 苏周 吴雨 雷豆 杨军 邹建 《植物遗传资源学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期260-268,共9页
花发育是被子植物生命周期史中的重要阶段,直接关系到植物的子代繁殖和物种延续。在植物花发育进程中,MADS-box基因发挥着关键的调控作用。本研究从向日葵转录组数据库中筛选并克隆到了一个MADS-box基因家族新成员HaAGL11基因,并对其进... 花发育是被子植物生命周期史中的重要阶段,直接关系到植物的子代繁殖和物种延续。在植物花发育进程中,MADS-box基因发挥着关键的调控作用。本研究从向日葵转录组数据库中筛选并克隆到了一个MADS-box基因家族新成员HaAGL11基因,并对其进行了系统的分析。系统发育分析结果显示,向日葵HaAGL11基因与拟南芥中的AGL11基因具有较近的同源关系。另外,花发育不同时期的表达模式结果显示,HaAGL11基因在向日葵花器官成熟后期、小花开放期和胚胎发育早期高表达;精细的花器官表达模式结果显示,HaAGL11基因在花器官成熟后期和小花开放期的子房中特异性高表达。本研究结果表明,向日葵HaAGL11基因在向日葵花发育后期子房和果实的发育进程中具有重要的调控作用。本研究结果为初步探究HaAGL11基因在向日葵中的花发育及果实形成的调控作用奠定基础,有助于进一步探究向日葵生长发育的分子调控机制,为向日葵的遗传育种提供了一定的指导线索。 展开更多
关键词 向日葵 花发育 MADS-BOX HaAGL11基因 基因克隆 表达分析
蝴蝶兰AP2/ERF家族基因的克隆及在低温下表达特性分析 认领
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作者 崔波 郝平安 +5 位作者 梁芳 张燕 王喜蒙 李俊霖 蒋素华 许申平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期85-97,共13页
用RT-PCR方法从‘大辣椒’蝴蝶兰叶片中克隆得到4个AP2/ERF家族基因,命名为PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4。蛋白结构域和序列比对发现PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4均含有1个AP2结构域,PhAP2/ERF2还含有1个B3结构域。进化树分析表明4个蛋白与兰科AP2/... 用RT-PCR方法从‘大辣椒’蝴蝶兰叶片中克隆得到4个AP2/ERF家族基因,命名为PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4。蛋白结构域和序列比对发现PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4均含有1个AP2结构域,PhAP2/ERF2还含有1个B3结构域。进化树分析表明4个蛋白与兰科AP2/ERF家族成员亲缘关系最近,PhAP2/ERF1属于AP2/ERF家族DREB亚家族中的A1类,PhAP2/ERF2属于RAV亚家族,PhAP2/ERF3属于ERF亚家族的B4类,PhAP2/ERF4属于DREB亚家族中的A2类。用实时荧光定量PCR方法检测低温驯化和低温胁迫条件下PhAP2/ERF1~PhAP2/ERF4在‘大辣椒’和‘富乐夕阳’蝴蝶兰叶片中的表达特性,结果表明:4个基因在‘大辣椒’叶片中的表达趋势一致,表达量在低温胁迫早期达到最高,在胁迫中晚期有所下降;而4个基因在‘富乐夕阳’叶片中的表达趋势有较大差异,PhAP2/ERF1和PhAP2/ERF2的表达在低温处理整个过程中没有被诱导或仅有较小幅度增加,PhAP2/ERF3对低温的响应时间显著晚于‘大辣椒’,PhAP2/ERF4的表达趋势与‘大辣椒’差异较小。蝴蝶兰AP2/ERF在抗冷品种‘大辣椒’和不抗冷品种‘富乐夕阳’叶片中的表达差异暗示AP2/ERF基因家族在蝴蝶兰低温胁迫响应中起重要调控作用。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 低温胁迫 AP2/ERF基因 基因克隆 表达分析
重组人淋巴细胞活化基因-3蛋白胞外段的真核表达及鉴定 认领
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作者 熊镇越 张坤明 +1 位作者 潘勇兵 李策生 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第4期390-394,共5页
目的真核表达重组人淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)蛋白胞外段,并进行鉴定。方法用植物血球凝集素(phytohaemagg lutinin,PHA)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测Jurkat细胞中LAG-3蛋白的表达;提取Jurkat细胞总mRN... 目的真核表达重组人淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3)蛋白胞外段,并进行鉴定。方法用植物血球凝集素(phytohaemagg lutinin,PHA)刺激Jurkat细胞,流式细胞术检测Jurkat细胞中LAG-3蛋白的表达;提取Jurkat细胞总mRNA,RT-PCR法扩增人LAG-3蛋白胞外段基因片段,同时在蛋白C-末端引入His标签,将其克隆入载体pcDNA3. 1+,构建重组质粒,转染Expi293F真核细胞,当细胞活率低于50%时收获细胞上清,经镍柱亲合层析纯化。纯化产物进行4%~20%SDS-PAGE、HPLC及Western blot分析,BCA法测定浓度。结果经菌液PCR、双酶切及测序鉴定,表明质粒构建正确。重组表达蛋白的相对分子质量约60 000,纯化后纯度达95%以上,与鼠抗LAG-3单克隆抗体可发生特异性结合,浓度为2. 4 mg/mL。结论成功构建了重组真核表达质粒LAG-3/pcDNA3. 1+,并于Expi293F细胞中表达,纯化获得了纯度较高的LAG-3蛋白,为后期LAG-3蛋白的相关研究及其单抗的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 人淋巴细胞活化基因-3 基因重组 真核表达 Expi293F细胞
水稻OsNCED4基因的克隆及功能初探 认领
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作者 周丽 李梦婷 +6 位作者 朱骞 Sadia Nadir 李伟 郭效琼 冯天 陈丽娟 李东宣 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期2087-2096,共10页
脱落酸(abscisic acid,ABA)是一种抑制植物生长的植物激素,因能促使叶子脱落而得名,在植物逆胁迫中发挥关键作用。由NCED基因编码的9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED),是ABA在高等植物中的关键酶。本研究已成功从水稻Ilmibyeo(O.sativa... 脱落酸(abscisic acid,ABA)是一种抑制植物生长的植物激素,因能促使叶子脱落而得名,在植物逆胁迫中发挥关键作用。由NCED基因编码的9-顺-环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED),是ABA在高等植物中的关键酶。本研究已成功从水稻Ilmibyeo(O.sativa L.ssp.japonica)基因组中克隆得到Os NCED4,生物信息学分析表明,Os NCED4基因位于水稻第7号染色体上,ORF全长1749 bp,无内含子结构,编码582个氨基酸,具有NCED家族的RPE65保守结构;以该基因和其启动子序列构建组织表达载体pOsNCED4::GUS、pCaMV35S::OsNCED4:EGFP和RNAi干扰载体p Ca MV35S::OsNCED4:RNAi,用于基因表达和功能分析,并利用农杆菌介导的方法,成功获得了相应遗传载体的转基因植株;GUS染色结果表明,该基因在叶片、叶耳、小穗等组织部位均有表达;RT-PCR结果显示,Os NCED4在水稻不同生育期的根、茎、叶、叶鞘和穗子中均有不同程度的表达,但表达量具有明显的差异;亚细胞定位结果显示,OsNCED4基因编码的蛋白定位于细胞核;与野生型植株相比,RNAi植株的花粉育性无明显差异,而结实率显著下降。该研究结果为进一步研究水稻OsNCED4基因表达的调控,以及为水稻生长发育上的功能研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 水稻(Oryza sativa L.) OsNCED4 基因克隆 生物信息学分析 基因表达
STYK1激活Akt信号通路促进肺癌细胞增殖 认领
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作者 刘威 张艳 朱剑军 《实用肿瘤杂志》 CAS 2020年第2期134-139,共6页
目的探讨酪氨酸蛋白激酶1(tyrosine-protein kinase 1,STYK1)在肺癌组织中的表达水平、对肺癌细胞生存的影响及其作用机制。方法定量PCR检测STYK1在35例肺癌组织中的表达水平,分析其与患者临床病理特征间的关系。沉默肺癌细胞A549和HCC... 目的探讨酪氨酸蛋白激酶1(tyrosine-protein kinase 1,STYK1)在肺癌组织中的表达水平、对肺癌细胞生存的影响及其作用机制。方法定量PCR检测STYK1在35例肺癌组织中的表达水平,分析其与患者临床病理特征间的关系。沉默肺癌细胞A549和HCC827中STYK1基因,定量PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果STYK1在肺癌组织中表达水平升高(P<0.01)。其表达水平在肺癌病理分期方面比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。沉默STYK1后,肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,差异均具有统计学意义(均P<0.01)。沉默STYK1抑制Akt磷酸化,下调Bcl-2和Bcl-xL表达水平(均P<0.01)。结论STYK1在肺癌组织中呈高表达。其可能通过激活Akt信号通路,促进肺癌细胞增殖。 展开更多
关键词 肺肿瘤/病理学 蛋白酪氨酸激酶类 蛋白激酶类 基因表达 基因沉默 衔接蛋白质类 信号转导/生理学 细胞存活
甘蔗乙烯信号转导途径关键基因CTR1的克隆与表达分析 认领
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作者 王凡伟 肖冬 +2 位作者 李杨瑞 何龙飞 王爱勤 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期827-833,共7页
为了研究CTR1基因与甘蔗糖分积累的关系,本研究利用同源克隆的方法,以甘蔗品种‘桂糖28’(GT28)幼嫩叶片的cDNA为模板,成功克隆得到2103 bp的甘蔗CTR1基因(ScCTR1;GenBank登录号为MK158246)。ScCTR1基因的开放阅读框(ORF)序列长1656 bp... 为了研究CTR1基因与甘蔗糖分积累的关系,本研究利用同源克隆的方法,以甘蔗品种‘桂糖28’(GT28)幼嫩叶片的cDNA为模板,成功克隆得到2103 bp的甘蔗CTR1基因(ScCTR1;GenBank登录号为MK158246)。ScCTR1基因的开放阅读框(ORF)序列长1656 bp,编码551个氨基酸,预测蛋白质的分子质量为62.78 kD。ScCTR1蛋白具有CTR1同源蛋白典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域。实时荧光定量PCR结果表明,ScCTR1基因在茎和叶中都有表达,在茎中其表达量呈先增加后降低的趋势,在未成熟叶、成熟叶和老叶中,其基因表达呈降低的趋势。本研究结果对阐明乙烯调控甘蔗茎糖分积累和叶发育的机理提供了重要的参考依据。 展开更多
关键词 甘蔗(Saccharum ssp.Hybrids) CTR1 基因克隆 基因表达
芹菜水孔蛋白基因AgPIP2;1的克隆及其对非生物胁迫的响应 认领
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作者 尚珂含 杨舒婷 +4 位作者 卞诗村 刘梦婷 安亚虹 王广龙 熊爱生 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期231-239,共9页
为了研究芹菜质膜内在蛋白基因的序列特征及其在非生物胁迫条件下的表达特性,探讨其抗逆功能,以芹菜品种六合黄心芹为试验材料,通过RT-PCR技术克隆AgPIP2;1基因,通过生物信息学软件分析其核苷酸和氨基酸序列特征,并采用荧光定量PCR技术... 为了研究芹菜质膜内在蛋白基因的序列特征及其在非生物胁迫条件下的表达特性,探讨其抗逆功能,以芹菜品种六合黄心芹为试验材料,通过RT-PCR技术克隆AgPIP2;1基因,通过生物信息学软件分析其核苷酸和氨基酸序列特征,并采用荧光定量PCR技术检测其在不同组织的表达及其对非生物胁迫的响应。结果表明,AgPIP2;1基因含有1个861 bp的开放阅读框,编码286个氨基酸,其编码的蛋白属于PIP2类蛋白。氨基酸序列分析显示,AgPIP2;1含有高度保守的NPA基序以及高等植物PIP蛋白的保守序列,与其他物种PIP2类蛋白具有较高的同源性,与胡萝卜DcPIP2;1的氨基酸序列同源性达到97.90%。在亲缘关系上与大豆GmPIP2;1、胡萝卜DcPIP2;1和绿豆VrPIP2;1较为接近。实时荧光定量PCR技术分析表明,AgPIP2;1基因在芹菜根、叶柄和叶片中均有表达,其中在叶片中的表达量最高,在根中的表达量最低,呈现比较明显的组织特异性。此外,AgPIP2;1基因受到高温、低温、干旱和盐等非生物胁迫的诱导,说明该基因可能参与芹菜抵御非生物胁迫的过程。本研究为进一步了解AgPIP2;1基因的功能及其在非生物胁迫中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 芹菜 非生物胁迫 AgPIP2 1基因 基因克隆 表达分析
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Assessment of internal controls for data normalization of gene expression after different bacterial stimulation by quantitative real-time PCR in golden pompano Trachinotus blochii 认领
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作者 CHEN Xiaojuan ZHANG Xiaoqi +4 位作者 SUN Yun TU Zhigang CAO Zhenjie WANG Shifeng ZHOU Yongcan 《海洋湖沼学报(英文)》 SCIE CAS CSCD 2020年第2期480-489,共10页
Trachinotus blochii is one of the important commercial fish species.In this study,we aim to confirm the reliability reference genes in T.blochii during different bacterial challenge through quantitative real-time PCR(... Trachinotus blochii is one of the important commercial fish species.In this study,we aim to confirm the reliability reference genes in T.blochii during different bacterial challenge through quantitative real-time PCR(qRT-PCR).The expression of the seven selected genes in four immune organs(i.e.,spleen,kidney,intestine,and gill)stimulated with Vibrio harveyi,Edwardsiella tarda,and Streptococcus agalactiae were determined by qRT-PCR.The PCR data was analyzed using the geNorm and NormFinder algorithms.The results showed the selection of the internal controls should be tissue specific when studying gene expression in response to bacterial stimulation.After 48 h of stimulation with V.harveyi,geNorm ranked EF1 A/Actin,18 S rRNA/B2M,UBCE/B2M,and 18 S rRNA/B2M,as the most stably expressed genes in spleen,kidney,intestine,and gill,respectively.After 48 h of stimulation with E.tarda,geNorm ranked 18 S rRNA/EF1 A,18 S rRNA/B2M,B2M/RPL13,and 18 S rRNA/EF1 A,as the most stably expressed genes in spleen,kidney,intestine,and gill,respectively.After 48 h of stimulation with S.agalactiae,18 S rRNA/EF1 A,18 S rRNA/B2 M,B2 M/Actin,and 18 S rRNA/B2M were ranked as the most stably expressed genes in spleen,kidney,intestine,and gill,respectively.Compared to the results analyzed by geNorm,reference genes received similar rankings when using NormFinder software.The results showed that the reference genes appeared to be not only tissue specific,but also specific to the infecting species of bacteria.If one gene is preferred when T.blochii were infected by bacteria,18 S rRNA,B2M,B2M,18 S rRNA may be used in spleen,kidney,intestine,and gill,respectively. 展开更多
关键词 Trachinotus blochii HOUSEKEEPING GENE expression stability reference GENE
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薄壳山核桃CiSULTR2.1基因的克隆与表达分析 认领
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作者 倪钟涛 李财运 +4 位作者 胡旭雅 李阳 曾皓 舒李露 王正加 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期26-35,共10页
为探究薄壳山核桃CiSULTR2.1基因功能及表达特征,以一年生薄壳山核桃实生苗为材料,利用RT-PCR和PCR技术克隆CiSULTR2.1基因全长,利用RT-qPCR技术分析其在不同浓度硒酸盐处理下的表达情况。结果表明,克隆得到1902 bp的序列,经分析此序列... 为探究薄壳山核桃CiSULTR2.1基因功能及表达特征,以一年生薄壳山核桃实生苗为材料,利用RT-PCR和PCR技术克隆CiSULTR2.1基因全长,利用RT-qPCR技术分析其在不同浓度硒酸盐处理下的表达情况。结果表明,克隆得到1902 bp的序列,经分析此序列属硫转运蛋白基因CiSULTR2.1全长开放阅读框的cDNA,编码633个氨基酸。CiSULTR2.1蛋白分子质量为68943.37 Da,为疏水性的非分泌蛋白,无信号肽,结构稳定,二级结构主要由α-螺旋(51.18%)、延伸链(12.64%)和无规则卷曲(31.28%)构成,包含硫转运蛋白典型的Sulfate-transp结构域(PF00916)和STAS结构域(PF01740)。RT-qPCR分析结果表明,CiSULTR2.1在薄壳山核桃幼苗根与叶中均有表达,40、80μmol·L-1硒酸盐处理下,12 h出现表达高峰,此后表达量明显下降;而0.5μmol·L-1硒酸盐处理下,CiSULTR2.1表达高峰出现时间延后至48 h。硒酸盐浓度过高时,CiSULTR2.1表达量显著下降且低于对照。CiSULTR2.1基因能够快速响应40、80μmol·L-1高浓度硒酸盐的诱导,而0.5μmol·L-1低浓度硒酸盐需要较长时间才能诱导其高表达。高浓度硒酸盐处理较长时间对植物产生毒性效应,植物对硒酸盐的吸收减少,硒含量降低。本研究结果为薄壳山核桃CiSULTR2.1基因功能及硒吸收机制的研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 薄壳山核桃 硫转运蛋白基因 硒元素 基因克隆 表达分析
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辣椒β–酮脂酰辅酶A合酶基因家族的鉴定与表达分析 认领
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作者 易婷 张志硕 +2 位作者 汤冰倩 谢玲玲 邹学校 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期370-380,共11页
为深入了解β–酮脂酰辅酶A合酶(β-ketoacyl-CoAsynthase,KCS)基因家族在辣椒基因组中的特征,利用生物信息学方法鉴定所有KCS基因家族成员,对基因染色体定位、系统发育关系、基因结构、蛋白保守基序和组织表达模式等进行分析,并通过qRT... 为深入了解β–酮脂酰辅酶A合酶(β-ketoacyl-CoAsynthase,KCS)基因家族在辣椒基因组中的特征,利用生物信息学方法鉴定所有KCS基因家族成员,对基因染色体定位、系统发育关系、基因结构、蛋白保守基序和组织表达模式等进行分析,并通过qRT-PCR方法检测基因在高温、低温和NaCl胁迫下的响应。从辣椒基因组中共鉴定出22个KCS家族基因,其不均匀地分布在辣椒的9条染色体上;系统发育分析表明辣椒KCS基因家族可分为4组,每组含有不同数量的基因;该家族成员含有0~3个内含子,保守基序有6~14个;KCS家族基因具有不同的表达模式;高温、低温和NaCl处理可以抑制或激活该家族成员的表达。 展开更多
关键词 辣椒 KCS基因家族 基因表达
苹果多胺氧化酶(PAO)基因家族鉴定与表达分析 认领
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作者 秦玲 张鑫 +5 位作者 荣春笑 莫传园 范露 闫婕 孟莹 张满让 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期262-273,共12页
从金冠基因组数据库中,利用BLAST网站在苹果中鉴定得到8个编码多胺氧化酶(polyamine oxidase,PAO)的家族基因(命名为MdPAO1~8),对其进行理化性质、系统进化、蛋白结构、基因结构和启动子元件分析。结果表明,MdPAO蛋白的分子量为54.053~6... 从金冠基因组数据库中,利用BLAST网站在苹果中鉴定得到8个编码多胺氧化酶(polyamine oxidase,PAO)的家族基因(命名为MdPAO1~8),对其进行理化性质、系统进化、蛋白结构、基因结构和启动子元件分析。结果表明,MdPAO蛋白的分子量为54.053~64.813 ku,等电点介于5.16~6.02。根据进化树分析,MdPAO被分为3个亚家族(Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ),且同一亚家族的成员具有相似的蛋白结构、基因结构和蛋白保守基序分布。利用GEO数据库检测出8个MdPAO在不同组织器官中的表达具有明显差异。以苹果主栽品种长富2号为材料,利用实时荧光定量PCR检测分析得出8个MdPAO在不同组织中的表达情况,结果表明,MdPAO3、MdPAO4、MdPAO5/6和MdPAO8在花中有较高的表达水平;MdPAO1/2和MdPAO7在茎和果中有较高的表达水平。外源亚精胺处理后发现,除MdPAO3以外,其余MdPAO的转录水平显著提高,表明MdPAO在PA代谢途径中具有重要作用。 展开更多
关键词 苹果 多胺氧化酶(PAO)基因家族 生物信息学 基因表达
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芝麻抗裂蒴基因SiIND1的克隆与原核表达 认领
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作者 刘艳阳 武轲 +4 位作者 梅鸿献 杜振伟 崔承齐 江晓林 郑永战 《河南农业科学》 北大核心 2020年第5期63-68,共6页
LOC105167765基因属于KANADI(KAN)基因家族,与芝麻裂蒴性有关。从芝麻裂蒴品种豫芝11号和抗裂蒴品种郑芝InD01中分别克隆得到LOC105167765基因cDNA序列SiIND1,并进行序列生物信息学分析和原核表达分析。结果表明,豫芝11号SiIND1基因cDN... LOC105167765基因属于KANADI(KAN)基因家族,与芝麻裂蒴性有关。从芝麻裂蒴品种豫芝11号和抗裂蒴品种郑芝InD01中分别克隆得到LOC105167765基因cDNA序列SiIND1,并进行序列生物信息学分析和原核表达分析。结果表明,豫芝11号SiIND1基因cDNA序列全长为1320 bp,编码439个氨基酸,推测的蛋白质分子质量为50.0 ku,等电点7.53,编码SHAQKYF类MYB家族的转录因子,具有GARP保守结构域,属于KAN家族。郑芝InD01 SiIND1基因cDNA序列长度为1246 bp,包括1个最大的开放阅读框900 bp,编码299个氨基酸,推测的蛋白质分子质量为32.9 ku,等电点8.37,GARP结构域发生缺失突变,翻译提前终止,可能导致基因功能丧失。将SiIND1连接到原核表达载体pET30a,并转化大肠杆菌BL21,通过IPTG诱导和SDS-PAGE电泳检测,表达的融合蛋白与预测蛋白大小相符合,进一步证实了抗裂蒴品种和裂蒴品种SiIND1基因的蛋白质表达存在差异,抗裂蒴材料SiIND1基因在翻译过程中发生提前终止。 展开更多
关键词 芝麻 抗裂蒴基因 基因克隆 生物信息学分析 原核表达
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