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RNA干扰水牛MTPN基因对颗粒细胞增殖、凋亡及激素分泌的影响 预览
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作者 陈超 李俊 +4 位作者 华丽萍 安志高 胡祥维 刘深贺 杨利国 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期800-807,共8页
本研究旨在探讨敲低MTPN基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖、凋亡及雌激素、孕酮分泌的影响。应用RNAi技术敲低颗粒细胞中MTPN基因的表达水平,通过实时荧光定量PCR方法检测体外培养水牛颗粒细胞中MTPN基因及增殖和周期相关基因的表达情况,... 本研究旨在探讨敲低MTPN基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖、凋亡及雌激素、孕酮分泌的影响。应用RNAi技术敲低颗粒细胞中MTPN基因的表达水平,通过实时荧光定量PCR方法检测体外培养水牛颗粒细胞中MTPN基因及增殖和周期相关基因的表达情况,CCK-8法检测细胞增殖,借助流式细胞仪检测细胞周期的分布,采用ELISA试剂盒检测细胞培养液中雌激素与孕酮含量。结果显示,经siRNA(si-MTPN)转染颗粒细胞后,MTPN基因相对表达量下降60%(P<0.01);细胞增殖受到显著抑制(P<0.05),G1期细胞数量下降,S期细胞数量上升,G2期细胞数量极显著上升(P<0.01),细胞被阻滞在G2期;增殖与周期相关基因Cyclin D2、Cytochrom C表达量显著上升(P<0.05),Caspase9、Fas基因表达量极显著上升(P<0.01);ELISA检测雌激素和孕酮分泌水平均显著下降(P<0.05)。综上表明,敲低MTPN基因能通过调控相关基因的表达抑制体外培养水牛颗粒细胞的增殖及雌激素、孕酮的分泌水平,为阐明MTPN基因参与家畜卵泡发生的分子机制提供参考。 展开更多
关键词 水牛 MTPN基因 颗粒细胞 增殖 凋亡 雌激素 孕酮
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固醇类物质对鹅颗粒细胞胆固醇转运相关基因表达的影响 预览
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作者 荣玉静 夏露 +1 位作者 胡深强 王继文 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期103-109,共7页
【目的】揭示胆固醇转运相关基因在鹅不同发育阶段卵泡中的表达模式及固醇类物质对颗粒细胞上述基因表达的影响。【方法】首先应用RT-qPCR技术检测SREBP-2、STADR4、STAR和CYP11A1在产蛋高峰期鹅卵巢内不同发育阶段卵泡中的mRNA表达水平... 【目的】揭示胆固醇转运相关基因在鹅不同发育阶段卵泡中的表达模式及固醇类物质对颗粒细胞上述基因表达的影响。【方法】首先应用RT-qPCR技术检测SREBP-2、STADR4、STAR和CYP11A1在产蛋高峰期鹅卵巢内不同发育阶段卵泡中的mRNA表达水平;然后分离鹅F1卵泡颗粒细胞体外培养,24 h后分别添加不同浓度胆固醇、25-羟胆固醇和洛伐他汀(胆固醇合成限速酶抑制剂)处理,最后使用MTT法检测细胞活性和RT-qPCR技术检测上述基因表达量。【结果】四个基因在不同发育阶段卵泡中的表达模式相似;高浓度胆固醇显著增加细胞活性(P<0.05),25-羟胆固醇和洛伐他汀则降低细胞活性。随着胆固醇浓度升高,四个基因表达量均先升高后下降;25-羟胆固醇显著抑制SREBP-2和STAR的表达(P<0.05);升高洛伐他汀浓度使SREBP-2表达量先降低后升高,与其余三个基因相反。【结论】胆固醇转运和类固醇激素合成相关基因表达量受固醇种类和浓度调节,并且与卵泡类固醇激素合成密切相关,这为揭示鹅卵泡发育机制和提高产蛋量提供了理论参考。 展开更多
关键词 卵泡发育 颗粒细胞 SREBP-2 STARD4 STAR CYP11A1
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脂肪因子Chemerin对牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的影响 预览
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作者 段银平 薛瑛 +3 位作者 周爽 张敏 张宾 李惠侠 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期145-151,共7页
[目的]本试验旨在探讨脂肪因子Chemerin在牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬中的作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞并用重组Chemerin蛋白(0.2μg·mL^-1)处理24h,采用流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡,通过免疫荧光检测细胞中活性氧(ROS)含... [目的]本试验旨在探讨脂肪因子Chemerin在牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬中的作用。[方法]体外培养牛卵巢颗粒细胞并用重组Chemerin蛋白(0.2μg·mL^-1)处理24h,采用流式细胞术和CCK-8检测细胞凋亡,通过免疫荧光检测细胞中活性氧(ROS)含量变化,测定细胞超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;RT-qPCR分析凋亡与自噬相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3、P62和Atg7mRNA表达,Westernblot技术检测凋亡与自噬相关蛋白表达情况。[结果]与对照组相比,Chemerin处理卵巢颗粒细胞后,细胞中ROS和MDA含量显著上升(P<0.05),SOD和GSH-px活性极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Bax和Caspase-3mRNA及蛋白表达水平显著升高,P62和Atg7mRNA等的表达也显著上调(P<0.05)。[结论]Chemerin可通过调控相关基因的表达诱导牛卵巢颗粒细胞凋亡并伴随自噬的发生。 展开更多
关键词 CHEMERIN 自噬 凋亡 卵巢颗粒细胞
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颗粒细胞EGF类因子信号通路在调控卵母细胞成熟和发育中的作用 预览
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作者 杨鑫宇 贾振伟 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期137-145,共9页
动物体内卵泡排卵前促黄体素(luteinizing hormone,LH)诱导了卵丘颗粒细胞扩散,并启动卵母细胞恢复减数分裂。普遍认为,卵泡壁层颗粒细胞表达LH受体,卵母细胞及其周围卵丘细胞不表达LH受体,LH通过作用于卵泡壁层颗粒细胞产生信号分子,... 动物体内卵泡排卵前促黄体素(luteinizing hormone,LH)诱导了卵丘颗粒细胞扩散,并启动卵母细胞恢复减数分裂。普遍认为,卵泡壁层颗粒细胞表达LH受体,卵母细胞及其周围卵丘细胞不表达LH受体,LH通过作用于卵泡壁层颗粒细胞产生信号分子,这些信号分子作用于卵丘颗粒细胞介导了LH生物作用。然而,一直以来,关于排卵前介导LH作用而诱导卵母细胞成熟的机制一直存在争议。目前研究认为,LH作用于卵泡壁层颗粒细胞后产生了EGF类因子,并与颗粒细胞的受体结合,促进了卵母细胞的成熟和发育。由于体外成熟的卵丘卵母细胞复合体来源于生长卵泡,其卵丘颗粒细胞EGF类因子信号系统不完善,目前的体外成熟培养体系难以模拟卵泡内的生理环境,导致卵母细胞体外发育能力较差,限制了这些卵母细胞的利用效率。本文综述了颗粒细胞EGF类因子信号系统、EGF类因子在调控卵母细胞成熟中的作用及对卵母细胞发育能力的影响,为优化卵母细胞体外成熟培养体系,完善卵丘颗粒细胞的EGF类因子的信号系统,进而提高卵母细胞体外成熟效率提供理论依据。 展开更多
关键词 颗粒细胞 EGF类因子 卵母细胞成熟 卵母细胞发育能力
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PGRMC1介导孕酮抑制卵泡发育的作用及机制研究 预览
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作者 袁晓华 张莉莉 +2 位作者 盛喜霞 杨春荣 王亚琴 《海南医学》 CAS 2019年第1期1-5,共5页
目的探讨孕酮膜受体(PGRMC1)在孕激素抑制卵泡发育及颗粒细胞分化中的作用及作用机制。方法将10只21 d的SD大鼠按随机数表法分为两组(n=5),其中一组注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(20 IU/mL)48 h后取卵巢,另外一组注射PMSG 24 h后注射孕... 目的探讨孕酮膜受体(PGRMC1)在孕激素抑制卵泡发育及颗粒细胞分化中的作用及作用机制。方法将10只21 d的SD大鼠按随机数表法分为两组(n=5),其中一组注射孕马血清促性腺激素(PMSG)(20 IU/mL)48 h后取卵巢,另外一组注射PMSG 24 h后注射孕酮(30μg/只),再经过24 h后取卵巢,通过测量卵巢大小、HE染色研究孕酮对卵泡发育的影响。PMSG (20 IU/mL)促排卵48 h后取卵巢,后通过免疫组化观察PGRMC1受体分布情况。用PMSG促排卵48 h后分离卵泡颗粒细胞,加入孕酮(100 ng/mL、250 ng/mL)和PGRMC1抑制剂AG205(10μmol/L)后,采用Western blot检测卵巢颗粒细胞甾体激素生成相关的细胞外信号调节酶(ERK1/2)、甾体激素快速调节蛋白(StAR)、细胞色素P450胆固醇侧链切割酶(P450scc)的表达情况,采用ELISA试剂盒检测培养上清中的孕烯醇酮分泌情况。结果 PMSG处理组卵巢大小为(8.6±0.93) mm,明显大于PMSG联合孕酮处理组的(5.2±0.58) mm,差异有统计学意义(P<0.05);PMSG联合孕酮处理组始基卵泡数明显高于PMSG处理组[(62±8.6) vs(39±2.9)],而有腔卵泡及成熟卵泡显著低于PMSG处理组[(3.8±1.0) vs (8.0±1.2)、(3.7±0.4) vs (8.1±0.6)],差异均有统计学意义(P<0.05);孕酮(100 ng/mL、250 ng/mL)抑制甾体激素生成相关的pERK1/2、StAR、p450scc的表达,进而抑制甾体激素的前体孕烯醇酮的合成[(2.9±0.23) ng/mL vs (5.3±0.18) ng/mL、[(3.0±0.67) ng/mL vs (5.3±0.18) ng/mL],差异均有统计学意义(P<0.05);然而PGRMC1抑制剂AG205(10μM)逆转孕酮的这种抑制作用升高pERK1/2、StAR、p450scc的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05);AG205逆转孕酮(100 ng/mL、250 ng/mL)对孕烯醇酮合成的抑制作用[(9.6±0.67) ng/mL vs (2.9±0.18) ng/mL、(9.8±0.91) ng/mL vs (3.0±0.67) ng/mL]差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论孕酮抑制卵泡的发育,孕酮的这种抑制作用主要体现在对窦前卵泡的抑制作用。孕酮对卵巢颗粒细胞甾体激素的合� 展开更多
关键词 卵巢颗粒细胞 孕酮膜受体 孕酮 孕烯醇酮 卵泡发育
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过表达miR-21的骨髓间充质干细胞对化疗性卵巢早衰的修复作用 预览
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作者 汪庆如 陈小莹 +2 位作者 李欣然 王清 付霞霏 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期203-209,共7页
目的 探讨过表达miR-21的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对化疗性卵巢早衰大鼠模型的修复作用。方法 构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),转染BMSCs构建miR-21-BMSCs。实验分为5组:正常组、模型组、miR-21 组、BMSCs组、miR-21-BMSCs组,每... 目的 探讨过表达miR-21的骨髓间充质干细胞(BMSCs)对化疗性卵巢早衰大鼠模型的修复作用。方法 构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),转染BMSCs构建miR-21-BMSCs。实验分为5组:正常组、模型组、miR-21 组、BMSCs组、miR-21-BMSCs组,每组20只大鼠。大鼠腹腔内注射环磷酰胺(CTX)构建化疗性卵巢早衰大鼠模型。正常组及模型组大鼠双侧卵巢注射生理盐水,其余3组分别注射LV-miR-21、BMSCs、miR-21-BMSCs。检测各组大鼠动情周期、雌二醇(E2)及卵泡刺激素(FSH)水平、卵巢重量及各级卵泡计数、卵巢颗粒细胞凋亡率。结果 正常组大鼠动情周期不变,其余4组注射CTX后均出现动情周期紊乱,其中miR-21-BMSCs组恢复动情周期的大鼠数量明显多于其余3组。在注射CTX后30、45、60d,miR-21-BMSCs组卵巢重量及各级卵泡计数明显高于模型组、miR-21及BMSCs组(P<0.05);各组大鼠基础E2、FSH水平差异无统计学意义,正常组大鼠E2、FSH在实验期间无明显改变,其余4组大鼠E2 浓度下降、FSH浓度升高,miR-21-BMSCs组激素水平与miR-21组及BMSCs组相比差异均有统计学意义[E2:F30d=43.10, F45d=43.57,F60d=44.98,P<0.05;FSH:F30d=14.71,F45d=13.16,F60d=15.20,P<0.05)];与模型组、miR-21组、BMSCs组相比,miR-21-BMSCs组颗粒细胞凋亡率明显下降(F15d=27.20,F30d=23.60,F45d=21.80,F60d=21.20,P<0.05)。结论 miR-21 能增强BMSCs对化疗性卵巢早衰的治疗作用,显著减轻卵巢结构及功能损伤。 展开更多
关键词 MIR-21 骨髓间充质干细胞 卵巢早衰 卵巢颗粒细胞
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基于Illumina平台转录组测序筛选牛卵泡发育调控基因 预览
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作者 郝庆玲 景炅婕 +2 位作者 朱芷葳 吕丽华 李鹏飞 《湖南农业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期60-67,共8页
运用超声波监测技术,采集母牛发情期出现偏差前的第一大卵泡PDF1和出现偏差后的第二大卵泡ODF2,分别分离卵泡颗粒细胞(GCs),构建RNA文库,用Illumina2000测序;测序结果经数据库搜索和差异表达筛选,采用DAVID软件GO和KEGGpathway分析,经Ge... 运用超声波监测技术,采集母牛发情期出现偏差前的第一大卵泡PDF1和出现偏差后的第二大卵泡ODF2,分别分离卵泡颗粒细胞(GCs),构建RNA文库,用Illumina2000测序;测序结果经数据库搜索和差异表达筛选,采用DAVID软件GO和KEGGpathway分析,经Genecards功能查询,筛选牛卵泡发育相关基因。结果表明:数据库搜索共获得35325个基因,其中有意义的表达基因15645个,从中筛选获得差异表达基因608个;GO分析表明,608个差异表达基因中参与生物过程的基因占60.46%,细胞组分的基因占20.08%,分子功能的基因占11.46%;KEGGpathway分析表明,608个差异表达基因通过9条信号通路参与牛卵泡发育调控(P<0.05),经Genecards功能筛选,共获得11个与牛卵泡发育密切相关的调控基因-SESN3、COL3A1、CCNE1、CAV1、CACNA1H、ITPR1、PIK3R3、MYC、PTGFR、CDK6、GAPDH,它们直接参与细胞增殖分化及信号通路调节。 展开更多
关键词 卵泡 颗粒细胞 转录组 调控基因
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柠檬酸对小鼠卵泡组织形态的影响 预览
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作者 邓雯 吕琼霞 +2 位作者 刘玉梅 陈晓光 马彦博 《家畜生态学报》 北大核心 2018年第2期39-44,共6页
通过观察小鼠卵泡形态结构的变化,研究柠檬酸对雌性小鼠卵泡发育的影响。将60只20~22g昆明小鼠随机分为生理盐水对照组和柠檬酸低、中、高剂量处理组,各组小鼠每天每只依次分别腹腔注射0.2mL的O.9%生理盐水、7.5mg/mL、15mg/mL... 通过观察小鼠卵泡形态结构的变化,研究柠檬酸对雌性小鼠卵泡发育的影响。将60只20~22g昆明小鼠随机分为生理盐水对照组和柠檬酸低、中、高剂量处理组,各组小鼠每天每只依次分别腹腔注射0.2mL的O.9%生理盐水、7.5mg/mL、15mg/mL及30mg/mL的柠檬酸。第21天在乙醚麻醉条件下,每组随机取lO只小鼠断颈处死,摘取卵巢浸泡于4%的甲醛溶液中固定24h,制作常规石蜡切片,HE染色,光学显微镜进行组织切片观察。结果表明:对照组小鼠各级卵泡的形态正常,7.5mg/mL、15mg/mL柠檬酸处理组可观察到正常形态的原始卵泡、初级卵泡,30mg/mL柠檬酸处理组因原始卵泡、初级卵泡退化,使原始卵泡、初级卵泡的数量显著减少;15mg/mL柠檬酸处理组主要使次级卵泡发育受阻,某些小的有腔卵泡部分颗粒细胞凋亡,卵泡膜细胞分化障碍,大的有腔卵泡的卵母细胞和卵泡内膜细胞退化,以及卵泡膜层血管数量减少或消失;30mg/mL柠檬酸处理组卵母细胞发育周期阻滞或退化、消失,导致原始卵泡和初级卵泡数量显著减少,以及次级卵泡、有腔卵泡的闭锁。结果提示:低、中剂量的柠檬酸对原始卵泡、初级卵泡的发育无影响;中剂量柠檬酸使次级卵泡发育受阻,有腔卵泡退化;高剂量柠檬酸对各级卵泡的发育均有显著影响,造成卵泡的闭锁。 展开更多
关键词 柠檬酸 小鼠 卵泡 颗粒细胞 卵泡膜
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miR-21对化疗药物诱导卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制 预览
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作者 汪庆如 陈小莹 +2 位作者 李欣然 王清 付霞霏 《广东医学》 2018年第18期2709-2712,共4页
目的探讨慢病毒介导miR-21对化疗诱导卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制。方法采用分子生物学方法构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),分离培养大鼠卵巢颗粒细胞。分为正常组、磷酰胺氮芥(PM)组、miR-21组。正常组卵巢颗粒细胞培养... 目的探讨慢病毒介导miR-21对化疗诱导卵巢颗粒细胞凋亡的影响及其机制。方法采用分子生物学方法构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21),分离培养大鼠卵巢颗粒细胞。分为正常组、磷酰胺氮芥(PM)组、miR-21组。正常组卵巢颗粒细胞培养基中不加PM,PM组加入30μmol/L的PM诱导卵巢颗粒细胞凋亡,miR-21组卵巢颗粒细胞培养基中加PM诱导凋亡24 h,随后转染LV-miR-21。48 h后采用流式细胞仪检测法检测3组卵巢颗粒细胞凋亡率,用荧光定量PCR及Western blot法检测同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)、程序性死亡蛋白4(PDCD4)的mRNA及蛋白质表达水平。结果正常组、PM组、miR-21组的凋亡率差异有统计学意义(F=78. 00,P=0. 00),miR-21组凋亡率低于PM组(P 〈0. 05),但仍高于正常组(P 〈0. 05)。3组的miR-21表达水平差异有统计学意义(F=1 226. 35,P=0. 00),miR-21组的miR-21表达水平显著高于正常组及PM组(P 〈0. 05)。3组PTEN的mRNA和蛋白质表达水平差异均有统计学意义(F=90. 37,P=0. 00; F=44. 34,P=0. 00),miR-21组的表达水平显著低于PM组(P 〈0. 05)。3组PDCD4的mRNA和蛋白表达水平差异均有统计学意义(F=198. 59,P=0. 00; F=60. 25,P=0. 00),miR-21组的表达水平显著低于PM组(P 〈0. 05)。结论 miR-21通过下调靶基因PTEN、PDCD4的表达,抑制化疗药物诱导的卵巢颗粒细胞凋亡。 展开更多
关键词 MIRNA-21 卵巢颗粒细胞 化疗 PTEN PDCD4
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不同浓度白藜芦醇激动SIRT1对卵巢颗粒细胞凋亡的调控
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作者 石洁 韩莹 +1 位作者 罗海宁 张云山 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2018年第5期326-329,共4页
目的:研究SIRT1激动剂白藜芦醇(RES)调控卵巢颗粒细胞凋亡的最佳作用浓度。方法:选取人卵巢颗粒细胞瘤细胞系COV434细胞,分别采用不同浓度20、50、75μmol/L和100μmol/L RES激动SIRT1,qRT-PCR法检测RES对SIRT1基因的激活作用,Weste... 目的:研究SIRT1激动剂白藜芦醇(RES)调控卵巢颗粒细胞凋亡的最佳作用浓度。方法:选取人卵巢颗粒细胞瘤细胞系COV434细胞,分别采用不同浓度20、50、75μmol/L和100μmol/L RES激动SIRT1,qRT-PCR法检测RES对SIRT1基因的激活作用,Western blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3及Bcl-2表达,CCK-8毒性实验检测细胞增殖状况,Annxin V-FITC/PI双染流式细胞术测定细胞凋亡。结果:随着RES作用浓度的增加,COV434细胞数增多,SIRT1表达增高,细胞凋亡抑制因子Bcl-2表达增加,促凋亡因子Caspase-3表达降低,细胞凋亡率降低,细胞增殖率升高;RES作用浓度达50μmol/L时,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:50μmol/L RES作为研究SIRT1对卵巢颗粒细胞凋亡作用的有效激活浓度,可作为研究早发性卵巢功能不全的药物干预浓度依据。 展开更多
关键词 白藜芦醇 SIRT1 颗粒细胞 凋亡
chi-miR-4110对奶山羊Smad2基因的靶向调控作用 预览 被引量:1
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作者 侯金星 雷颖楠 +5 位作者 梁玉发 安小鹏 宋宇轩 曹斌云 李云甫 张周 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期10-15,共6页
为揭示chi-miR-4110对奶山羊繁殖机能的调控作用,在前期构建的多羔(1胎3~5羔)和单羔(1胎1羔)关中奶山羊发情期卵巢差异表达miRNA文库的基础上,利用生物信息学、qRT-PCR和Western blot等技术验证chi-miR-4110的靶基因及其对靶基因的... 为揭示chi-miR-4110对奶山羊繁殖机能的调控作用,在前期构建的多羔(1胎3~5羔)和单羔(1胎1羔)关中奶山羊发情期卵巢差异表达miRNA文库的基础上,利用生物信息学、qRT-PCR和Western blot等技术验证chi-miR-4110的靶基因及其对靶基因的调控作用。荧光素酶检测结果表明,chi-miR-4110通过与Smad2基因的3′UTR相互作用导致荧光素酶活性降低,初步鉴定Smad2为chi-miR-4110的靶基因。将chimiR-4110mimics和阴性对照分别转染到奶山羊卵巢颗粒细胞中,qRT-PCR和Western blotting结果表明,在奶山羊卵巢颗粒细胞中,过表达chi-miR-4110使Smad2 mRNA以及Smad2蛋白的表达量均显著降低,表明chi-miR-4110在转录后水平对Smad2起负调控作用。表明Smad2是chi-miR-4110的靶基因,在奶山羊卵巢颗粒细胞中,chi-miR-4110靶向调控Smad2的表达。 展开更多
关键词 chi-miR-4110 SMAD2 双荧光素酶 颗粒细胞
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西藏林芝地区牦牛卵泡颗粒细胞体外分离培养和形态观察
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作者 王玉恒 索朗斯珠 +4 位作者 强巴央宗 徐业芬 牛家强 姚一龙 王英杰 《畜牧与兽医》 北大核心 2018年第5期12-14,共3页
旨在建立牦牛卵泡颗粒细胞模型以研究牦牛生殖生理机制。从林芝市牛屠宰场采集牦牛卵巢,并采用口吸管法在体视显微镜下分离卵巢表面直径为2-5 mm卵泡内的颗粒细胞,用于体外培养。结果表明:原代颗粒细胞培养12-48 h时处于潜伏期,此时细... 旨在建立牦牛卵泡颗粒细胞模型以研究牦牛生殖生理机制。从林芝市牛屠宰场采集牦牛卵巢,并采用口吸管法在体视显微镜下分离卵巢表面直径为2-5 mm卵泡内的颗粒细胞,用于体外培养。结果表明:原代颗粒细胞培养12-48 h时处于潜伏期,此时细胞刚刚贴壁并且黏附不牢固,增殖分化速度较慢;培养72-96 h时,细胞进入指数增殖期,此时细胞多呈放射状,增殖分化速度最快;培养144 h时形成颗粒细胞单层;然而传代颗粒细胞生长速度较快,48 h后细胞进入指数增殖期,72 h后颗粒细胞生长至培养皿的90%左右,形成颗粒细胞单层。 展开更多
关键词 牦牛 卵泡 颗粒细胞
SIRT1对牛卵泡颗粒细胞凋亡及雌激素分泌的影响 预览 被引量:1
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作者 陈洋 单雪松 +1 位作者 吕文发 赵志辉 《中国畜牧杂志》 北大核心 2018年第8期56-60,共5页
本实验旨在研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞凋亡及雌激素分泌的影响。构建SIRT1基因干扰载体,并转染体外培养的颗粒细胞。实验分为转染SIRT1-sh RNA的干扰组、转染NC-sh RNA的对照组和未转染的空白组,每组设3个重复。... 本实验旨在研究沉默信息调节因子1(SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞凋亡及雌激素分泌的影响。构建SIRT1基因干扰载体,并转染体外培养的颗粒细胞。实验分为转染SIRT1-sh RNA的干扰组、转染NC-sh RNA的对照组和未转染的空白组,每组设3个重复。流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量PCR检测细胞内Bax、Bcl-2 m RNA表达;Western Blot检测细胞内Bax、Bcl-2蛋白表达;ELISA试剂盒检测雌激素水平。结果表明:干扰组颗粒细胞SIRT1 m RNA表达量显著低于对照组与空白组(P〈0.05),而对照组与空白组之间差异不显著(P〉0.05);干扰组颗粒细胞凋亡率显著低于对照组与空白组(P〈0.05);干扰组颗粒细胞Bax m RNA和蛋白质表达显著低于对照组与空白组(P〈0.05),而Bcl-2 m RNA和蛋白质表达均显著高于对照组与空白组(P〈0.05);干扰组颗粒细胞培养液中雌激素含量显著低于对照组与空白组(P〈0.05)。SIRT1基因可以促进牛卵泡颗粒细胞的凋亡,并促进雌激素分泌。 展开更多
关键词 SIRT1基因 颗粒细胞 凋亡 雌激素
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PCOS患者颗粒细胞CYP19A1、AMH、AMHR2的启动子区CpG岛位点的甲基化水平 预览
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作者 朱金虎 杨秀玮 +2 位作者 洪小山 毛婷 万迎香 《广东医学》 2018年第8期1171-1176,共6页
目的研究卵巢颗粒细胞特异性表达基因CYP19A1、抗苗勒管激素(AMH)、AMHR2的启动子区CpG岛位点甲基化水平,并分析甲基化与基因的表达是否具有相关性。方法收集体外受精一胚胎移植(IVF—ET)过程中剩余的颗粒细胞60例,其中包括维族... 目的研究卵巢颗粒细胞特异性表达基因CYP19A1、抗苗勒管激素(AMH)、AMHR2的启动子区CpG岛位点甲基化水平,并分析甲基化与基因的表达是否具有相关性。方法收集体外受精一胚胎移植(IVF—ET)过程中剩余的颗粒细胞60例,其中包括维族多囊卵巢综合征(PCOS)患者的颗粒细胞30例和正常的维族女性颗粒细胞30例。采集研究对象的临床资料,行IVF前于卵泡期抽取静脉血测定基础激素指标[卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、催乳素(PRL)]。于采卵后收集患者的卵泡液,ELISA法检测卵泡液中E2、雄烯二酮(A)、AMH水平。采用MSP技术对芯片筛选出来的甲基化差异基因CYP19A1、AMH、AMHR2的甲基化位点进行检测。同时采用Real—time PCR和Western blot技术检测这些基因的mRNA及蛋白质表达水平,采用Pearson correlation法计算这些基因的甲基化与表达的相关性。结果维族PCOS患者基础水平的LH、T、LH/FSH明显高于正常维族女性,E2/T明显低于正常维族女性。维族P—COS患者的卵泡液中A、AMH明显高于正常维族女性,E2/T明显低于正常维族女性。维族PCOS患者颗粒细胞中CYP19A1基因的甲基化水平高于正常维族女性,AMH和AMHR2基因的甲基化水平低于正常维族女性,差异有统计学意义(P〈0.05)。维族PCOS患者颗粒细胞中CYP19A1基因的表达水平低于正常维族女性,AMH和AMHR2基因的表达水平高于正常维族女性,这些基因的表达水平与其启动子的甲基化水平呈负相关(P〈0.05)。CYP19A1与AMH和AMHR2的mRNA表达呈负相关(P〈0.05)。结论维族PCOS患者颗粒细胞存在CYP19A1、AMH和AMHR2基因的甲基化改变,且这种改变与其对应分子的表达变化相关。CYP19A1甲基化水平与卵泡液E2/A比值相关,提示CYP19A1基因的甲基化抑制了芳香化酶的活性,使卵巢局部雄激素合成� 展开更多
关键词 甲基化 颗粒细胞 多囊卵巢综合征
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晚期糖基化终末产物诱导人卵巢颗粒细胞株COV434凋亡并上调促炎因子HMGB1自分泌 预览
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作者 曾真 李建华 谢新平 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期1711-1714,共4页
目的:探讨晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)是否诱导人卵巢颗粒细胞株COV434凋亡,并探究其可能的机制。方法:采用不同浓度AGEs牛血清白蛋白与人卵巢颗粒细胞株COV434共同孵育,流式细胞术观察细胞凋亡率,Wester... 目的:探讨晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)是否诱导人卵巢颗粒细胞株COV434凋亡,并探究其可能的机制。方法:采用不同浓度AGEs牛血清白蛋白与人卵巢颗粒细胞株COV434共同孵育,流式细胞术观察细胞凋亡率,Western blot观察caspase-3和cleaved caspase-3的蛋白水平,ELISA检测细胞培养液上清中高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)的含量。结果:与对照组比较,100 mg/L AGEs组和200 mg/L AGEs组早、晚期凋亡率显著增加,各组caspase-3蛋白水平的差异无统计学显著性,但与对照组比较,100 mg/L AGEs组和200 mg/L AGEs组cleaved caspase-3的蛋白水平显著增加(P<0.05)。此外,与对照组比较,100 mg/L AGEs组和200 mg/L AGEs组细胞培养液上清中HMGB1促炎介质的水平显著上升(P<0.05)。结论:晚期糖基化终末产物诱导人卵巢颗粒细胞株COV434凋亡可能与促炎反应有关。 展开更多
关键词 多囊卵巢综合征 颗粒细胞 晚期糖基化终末产物 细胞凋亡 高迁移率族蛋白B1
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长链非编码RNA在卵泡与早期胚胎发育中的研究进展 预览
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作者 孔月 姚桂东(审校) 孙莹璞(审校) 《国际生殖健康/计划生育杂志》 CAS 2018年第6期504-507,512共5页
长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 nt并且缺乏蛋白质编码能力的一类RNA分子。卵泡及早期胚胎发育与女性生殖健康密切相关,lncRNA在其中发挥重要作用。目前的研究认为lncRNA可能通过影响女性生殖干细胞的增殖... 长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是长度大于200 nt并且缺乏蛋白质编码能力的一类RNA分子。卵泡及早期胚胎发育与女性生殖健康密切相关,lncRNA在其中发挥重要作用。目前的研究认为lncRNA可能通过影响女性生殖干细胞的增殖和体外存活能力以及调节卵丘扩张和卵母细胞成熟参与卵泡发育。lncRNA也可通过影响颗粒细胞增殖、分化与凋亡在排卵、黄体形成和早期胚胎发育等阶段发挥重要作用。对lncRNA的深入研究有助于进一步了解卵泡及早期胚胎发育的分子机制,为评价女性卵巢储备及移植前胚胎质量提供新的诊断标准,同时为不孕症的治疗提供新思路。现就lncRNA在卵泡与早期胚胎发育中的研究进行综述。 展开更多
关键词 RNA 卵泡 胚胎发育 粒层细胞 黄体形成
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抑制素免疫对动物卵泡发育的影响
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作者 阳美霞 张虹亮 +1 位作者 张羽芳 王水莲 《中兽医医药杂志》 2018年第1期32-34,共3页
抑制素主要是由卵巢颗粒细胞和睾丸支持细胞分泌的一类异二聚体蛋白质激素,具有反馈性抑制垂体前叶释放促卵泡激素的作用。抑制素免疫能通过中和内源性抑制素,降低其对垂体的负反馈,增加促卵泡激素的分泌,促进卵泡发育的作用。本文综述... 抑制素主要是由卵巢颗粒细胞和睾丸支持细胞分泌的一类异二聚体蛋白质激素,具有反馈性抑制垂体前叶释放促卵泡激素的作用。抑制素免疫能通过中和内源性抑制素,降低其对垂体的负反馈,增加促卵泡激素的分泌,促进卵泡发育的作用。本文综述了抑制素免疫对卵泡数目与直径、颗粒细胞增殖和卵母细胞成熟的影响,为抑制素免疫的研究和临床应用提供理论依据。 展开更多
关键词 抑制素免疫 卵泡数 颗粒细胞 卵母细胞
过表达miR-21的骨髓间充质干细胞在化疗性卵巢早衰大鼠模型中的治疗潜能及机制
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作者 李欣然 何援利 +4 位作者 王雪峰 彭冬先 陈小莹 王清 付霞霏 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2018年第12期924-928,931共6页
目的:探讨过表达miR-21的BMMSCs对化疗性卵巢早衰的治疗作用及可能机制。方法:采用分子生物学方法构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21)。使用LV-miR-21转染体外分离培养的大鼠BMMSCs,获得过表达miR-21的BMMSCs(miR-21-BMMSCs)。建立化... 目的:探讨过表达miR-21的BMMSCs对化疗性卵巢早衰的治疗作用及可能机制。方法:采用分子生物学方法构建miR-21慢病毒表达载体(LV-miR-21)。使用LV-miR-21转染体外分离培养的大鼠BMMSCs,获得过表达miR-21的BMMSCs(miR-21-BMMSCs)。建立化疗性卵巢早衰大鼠模型,双侧卵巢注射miR-21-BMMSCs,分别于注射后第15天、30天、45天、60天分批处死大鼠。采用阴道涂片测定动情周期,卵巢称重,HE染色进行卵泡计数,化学发光法测定性激素水平,TUNEL法测定卵巢颗粒细胞凋亡率,qRT-PCR、Western blot法检测miR-21及PTEN、PDCD4的mRNA及蛋白水平。结果:双侧卵巢注射miR-21-BMMSCs后,化疗诱导的POF大鼠动情周期恢复率、卵巢重量、各级卵泡数和E 2水平增加,而FSH水平及卵巢颗粒细胞凋亡率下降。此外,miR-21表达水平的上升伴随PTEN、PDCD4 mRNA及蛋白水平的下降。结论:过表达miR-21的BMMSCs能更有效地治疗化疗性卵巢早衰,可能与其调控靶基因PTEN、PDCD4密切相关。 展开更多
关键词 MICRORNA-21 骨髓间充质干细胞 卵巢颗粒细胞 卵巢早衰 化疗
牛卵泡CMKLR1基因CDS区克隆及结构分析 预览
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作者 郝庆玲 朱芷葳 +1 位作者 许冬梅 李鹏飞 《山西农业大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2018年第7期57-63,共7页
[目的]旨在确定牛卵泡趋化因子样受体1(Chemokine-like receptor 1,CMKLR1)全CDS区序列结构并对其分子特征和三级结构进行预测。[方法]采集正常发育牛卵泡分离颗粒细胞(Granulosa cells,GCs),提取总RNA后反转录,特异性引物扩增、测... [目的]旨在确定牛卵泡趋化因子样受体1(Chemokine-like receptor 1,CMKLR1)全CDS区序列结构并对其分子特征和三级结构进行预测。[方法]采集正常发育牛卵泡分离颗粒细胞(Granulosa cells,GCs),提取总RNA后反转录,特异性引物扩增、测序,获得全CDS区后生物信息学方法进行结构分析和功能预测。[结果]CMKLR1CDS区全长1 089bp,编码362个氨基酸;蛋白质一级结构中分别包含4个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和50个磷酸化位点;三级结构和功能域分析表明,CMKLR1有7个横跨胞膜的平行的α螺旋结构,属于典型的G蛋白偶联受体。[结论]多糖基化、磷酸化位点的存在以及蛋白定位的特殊性,提示该蛋白功能较为复杂。该研究为后期深入探讨CMKLR1与牛卵泡发育的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 颗粒细胞 CMKLR1 生物信息学分析 G蛋白偶联受体
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FSH处理对猪颗粒细胞中类固醇合成酶基因的表达及其调控区组蛋白H3修饰的影响 预览
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作者 张金璧 姚望 +1 位作者 潘增祥 刘红林 《中国农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第18期3582-3590,共9页
【目的】研究FSH处理对猪卵巢颗粒细胞类固醇合成酶、垂体激素受体、凋亡相关等基因表达的影响及此过程中组蛋白H3修饰的变化情况。【方法】首先,采集猪卵巢组织并用注射器抽取方法收集卵泡颗粒细胞,用含血清体系体外培养颗粒细胞至... 【目的】研究FSH处理对猪卵巢颗粒细胞类固醇合成酶、垂体激素受体、凋亡相关等基因表达的影响及此过程中组蛋白H3修饰的变化情况。【方法】首先,采集猪卵巢组织并用注射器抽取方法收集卵泡颗粒细胞,用含血清体系体外培养颗粒细胞至贴壁,血清饥饿16h后用终浓度5IU·mL^-1的FSH处理24h,并收集细胞。其次,提取细胞mRNA,采用qRT-PCR方法检测类固醇合成酶(STAR、CYP11A1、HSD3B和CYP19A1)、垂体激素受体(FSHR和LHR)、凋亡相关基因(XIAP和FasL)mRNA的表达变化,最后,相同处理后固定细胞,采用染色质免疫沉淀结合qPCR(ChIP-qPCR)方法检测类固醇合成酶基因STAR、CYP19A1和HSD3B上游转录调控区组蛋白H3修饰(H3K4me2、H3K4me3、H3K9ac和H3K14ac)状况。【结果】5IU·mL-1的FSH处理引起类固醇合成酶基因STAR、CYP19A1和HSD3B分别为2倍(P<0.01)、2.8倍(P<0.01)和3.6倍(P<0.05)的显著上调,而CYP11A1表达水平没有显著变化;FSH处理对垂体激素受体FSHR、LHR和凋亡相关基因XIAP、FasL影响不显著。在上调的三个类固醇合成酶基因中,HSD3B调控区组蛋白H3修饰变化最为显著,H3K4me2、H3K4me3、H3K9ac和H3K14ac结合分别有14.7倍(P<0.01)、13.6倍(P<0.01)、19.7(P<0.01)倍和2.5倍(P<0.05)的显著上调;STAR基因调控区的H3K9ac在处理后有11.1倍的显著下降(P<0.05);CYP19A基因调控区的H3K4me3和H3K9ac分别有0.5倍的上调(P<0.01)和10.4倍(P<0.01)的下降,其余组蛋白修饰在处理前后没有显著变化。【结论】FSH处理24h对颗粒细胞类固醇合成酶基因转录有显著上调作用,对其转录过程有H3组蛋白修饰参与,组蛋白修饰模式具有基因特异性。垂体激素受体和凋亡相关基因的应答可能需要FSH和其他因素的联合作用。 展开更多
关键词 FSH 颗粒细胞 类固醇合成酶 组蛋白修饰
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