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hUTP14a在非小细胞肺癌组织中的表达 预览
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作者 张春凤 刘云 +1 位作者 陆敏 杜晓娟 《北京大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期145-150,共6页
目的:hUTP14a通过促进p53和Rb降解以及增强c-Myc致癌活性促进肿瘤的发生,且在人肝癌和结直肠癌组织中表达升高。本研究检测hUTP14a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)组织中的表达,并分析hUTP14a的表达水平与NSCLC患者... 目的:hUTP14a通过促进p53和Rb降解以及增强c-Myc致癌活性促进肿瘤的发生,且在人肝癌和结直肠癌组织中表达升高。本研究检测hUTP14a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)组织中的表达,并分析hUTP14a的表达水平与NSCLC患者临床特征的关系。方法:收集2003年5月至2006年4月在北京大学第三医院接受手术治疗并经过组织病理学确诊的123例NSCLC患者的组织蜡块标本(鳞状细胞癌53例,腺癌70例),采用免疫组织化学染色方法分析癌组织及其邻近癌旁非肿瘤组织中hUTP14a的表达水平,应用SPSS 17.0软件的χ^2检验,以患者的性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、分化程度以及临床分期等临床病理特征进行分组,对组间肺癌组织中hUTP14a的表达率进行比较。结果:hUTP14a在肺癌组织中的阳性表达率为37.4%(46/123),在癌旁组织中的阳性表达率为0(0/123),在肺癌组织中的表达率显著高于癌旁非肿瘤组织(P<0.001);hUTP14a在肺腺癌中的表达率为48.6%(34/70),在鳞状细胞癌中的表达率为22.6%(12/53),均显著高于相应的癌旁组织[0 (0/70),0 (0/53)];hUTP14a在肺腺癌中的表达率显著高于在鳞状细胞癌中的表达率(48.6% vs. 22.6%,χ^2=8.66,P=0.03)。进一步分析肺鳞状细胞癌、腺癌与各临床病理特征之间的关系发现,hUTP14a在病理分期(pTNM)晚期的肺鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达率显著高于pTNM早期的鳞状细胞癌患者,而与肺腺癌的pTNM分期没有显著关联性,未见hUTP14a表达与肺癌的其他临床病理特征存在关联。结论:hUTP14a在肺癌组织中特异性表达升高,而且与肺鳞状细胞癌的pTNM分期具有关联性,提示hUTP14a有可能成为早期筛查诊断NSCLC的候选标志物。 展开更多
关键词 hUTP14a 非小细胞肺癌 免疫组织化学 鳞状细胞癌 腺癌
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采用杆状病毒/昆虫表达系统纯化蛋白制备抗hUTP14a多克隆抗体
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作者 张春凤 刘惠蛟 +1 位作者 任鹏伟 杜晓娟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期341-348,共8页
为制备兔抗人hUTP14a多克隆抗体并鉴定其抗体的特异性,本研究通过杆状病毒/昆虫表达系统制备并纯化Flag-hUTP14a-his蛋白,免疫新西兰家兔。ELISA方法检测免疫兔的抗血清滴度达到1∶10~5(体积比)时取血清,并通过Protein A免疫亲和层析柱... 为制备兔抗人hUTP14a多克隆抗体并鉴定其抗体的特异性,本研究通过杆状病毒/昆虫表达系统制备并纯化Flag-hUTP14a-his蛋白,免疫新西兰家兔。ELISA方法检测免疫兔的抗血清滴度达到1∶10~5(体积比)时取血清,并通过Protein A免疫亲和层析柱纯化抗体。在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中过表达Flag-hUTP14a,或用小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)沉默内源的hUTP14a蛋白表达后,提取细胞总蛋白质。经Western印迹分析制备的多克隆抗体的特异性;通过细胞免疫化学染色、细胞免疫荧光、免疫组织化学染色和免疫沉淀(immunoprecipitation, IP)实验对hUTP14a抗体的特异性进行鉴定。研究证实,制备的抗hUTP14a多克隆抗体能够特异性识别内源及外源表达的hUTP14a蛋白。该抗体可以用于细胞免疫荧光、细胞免疫化学染色、免疫组织化学染色、Western印迹及免疫沉淀等技术,为进一步研究hUTP14a的生物学功能提供了特异性抗体。 展开更多
关键词 hUTP14a 杆状病毒/昆虫表达系统 多克隆抗体
Does not hUTP14a promoter form a regulation feedback loop with P53? 预览
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作者 Jingyi Zhang Yafei Guo +1 位作者 Xiaojuan Du Baocai Xing 《中国癌症研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第2期159-165,共7页
Objective: We previously found that hUTP14a binds P53 and promotes P53 degradation. However, if hUTP14a is a downstream gene of P53 remains to be determined. This study aimed to identify the promoter of hUTP14a and in... Objective: We previously found that hUTP14a binds P53 and promotes P53 degradation. However, if hUTP14a is a downstream gene of P53 remains to be determined. This study aimed to identify the promoter of hUTP14a and investigate if hUTP14a is regulated by P53.Methods: The hUTP14a promoter region was cloned into pGL3-Basic-luciferase reporter plasmid to get pGL3-hUTP14a-luc. The reporter plasmid was transfected into 293T cells and luciferase activity was evaluated by the Dual-Luciferase Reporter Assay System. Putative transcription factors were identified through searching MatInspector Professional and Algorismica i Genetica databases. Either pGL3-hUTP14aluc or p21 promoter reporter plasmid was co-transfected with increasing dose of p53 plasmid, and luciferase activity was evaluated. A series of deletion constructs of pGL3-hUTP14a-luc were constructed and minimal promoter region of hUTP14a was determined. Differences of the luciferase activities between different groups were assessed by statistical analysis.Results: The hUTP14a gene promoter reporter construct was correctly cloned and was demonstrated to possess promoter activity. The transcription of hUTP14a was not regulated by P53. The minimal promoter region of hUTP14a gene is located between-203 to-100 of the transcription initiation site.Conclusion: Unlike other P53-interacting proteins such as MDM2, Pirh2 and Cop I which promote P53 degradation and whose transcriptions are regulated by P53, does not hUTP14a transcription form a regulation feedback loop with P53. 展开更多
关键词 反馈回路 P53 荧光素酶报告基因 p53基因 启动子活性 质粒转染 转录因子 转录起始位点
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