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低水平葡萄糖对奶牛乳腺上皮细胞促炎症因子表达的影响 预览
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作者 张金友 黄鹤 +4 位作者 李伟 韩欢胜 甘文平 宋伟红 卫喜明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期1525-1531,共7页
本研究旨在探讨低葡萄糖水平对奶牛乳腺上皮细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、溶菌酶(LYZ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、乳铁蛋白(LF)和白细胞介素-8(CXCL8)等促炎症因子mRNA表达的影响。采用酶消化法将奶牛乳腺上... 本研究旨在探讨低葡萄糖水平对奶牛乳腺上皮细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、溶菌酶(LYZ)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、乳铁蛋白(LF)和白细胞介素-8(CXCL8)等促炎症因子mRNA表达的影响。采用酶消化法将奶牛乳腺上皮细胞分离纯化后,分别在含有0.25、1.00和4.50mg/mL葡萄糖的完全培养液中培养24h,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞中相关基因的表达。结果表明,上述基因的mRNA相对表达量在各葡萄糖浓度之间没有明显差异(P>0.05)。其中TNF-α和LYZ在各浓度葡萄糖中的表达量均非常少,iNOS的表达量居中,而IL-6、LF和CXCL8在各浓度组中的表达量相对较高。试验结果提示,葡萄糖浓度的减少并没有直接影响乳腺上皮细胞中TNF-α、LYZ、iNOS、IL-6、LF和CXCL8mRNA的基础性表达;乳腺上皮细胞在未受到感染的情况下,能够表达一定数量的iNOS、IL-6、LF和CXCL8,这些因子可以作为先天性免疫防御的储备,在受到感染的情况下能迅速应对病菌的入侵。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 葡萄糖 炎症
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雌激素对奶牛乳腺上皮细胞增殖及细胞周期变化规律的影响 预览
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作者 武开乐 库西塔别克·买买提依不拉音 +2 位作者 马静 邵伟 余雄 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期570-579,共10页
【目的】研究雌激素对乳腺上皮细胞增殖及细胞生长周期变化规律的影响。【方法】选取扩增生长状态良好的乳腺上皮细胞,添加0、50、100、200μmol/L雌激素孵育乳腺上皮细胞后,分别在0、12、24、48、72h后检测各组细胞增殖及细胞周期。【... 【目的】研究雌激素对乳腺上皮细胞增殖及细胞生长周期变化规律的影响。【方法】选取扩增生长状态良好的乳腺上皮细胞,添加0、50、100、200μmol/L雌激素孵育乳腺上皮细胞后,分别在0、12、24、48、72h后检测各组细胞增殖及细胞周期。【结果】培养12h时,50μmoL/L雌激素组的OD值显著高于对照组及100μmoL/L雌激素组(P<0.05),且极显著高于200μmoL/L雌激素添加组(P<0.01);培养至12h时,对照组及添加50μmoL/L雌激素组其G1期极显著高于其他两组(P<0.01),对照组S期极显著高于其他各组(P<0.01),添加100μmoL/L雌激素组其G2期极显著高于其他各组(P<0.01)。【结论】添加雌激素可以促进乳腺上皮细胞的增殖,且50μmoL/L、12h时雌激素促进乳腺上皮细胞的增殖效果最好。添加雌激素不影响乳腺上皮细胞在各时期时细胞生长的基本规律,各雌激素添加组在12h时的细胞周期由G1、S期向G2期转化较快。 展开更多
关键词 雌激素 乳腺上皮细胞 细胞增殖 细胞周期
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MiR-3880对奶山羊乳腺上皮细胞OGR1基因的靶向调控作用 预览
3
作者 侯金星 安小鹏 +3 位作者 杜晓岩 曹斌云 沈文正 李云甫 《家畜生态学报》 北大核心 2019年第5期13-17,共5页
为研究miR-3880对奶山羊OGR1基因的靶向调节作用,试验选用泌乳期奶山羊乳腺上皮细胞为研究材料,采用生物信息学和双荧光素酶报告载体试验,初步确定OGR1为miR-3880的靶基因。利用RT-qPCR和Westernblot方法进一步研究miR-3880对OGR1的靶... 为研究miR-3880对奶山羊OGR1基因的靶向调节作用,试验选用泌乳期奶山羊乳腺上皮细胞为研究材料,采用生物信息学和双荧光素酶报告载体试验,初步确定OGR1为miR-3880的靶基因。利用RT-qPCR和Westernblot方法进一步研究miR-3880对OGR1的靶向作用。结果显示,miR-3880通过与OGR1基因3ˊUTR结合调控其mRNA和蛋白的表达。本试验为研究miR-3880对乳腺上皮细胞泌乳功能的调节作用提供试验基础。 展开更多
关键词 MiR-3880 OGR1 乳腺上皮细胞 奶山羊
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雷帕霉素对大肠杆菌诱发的大鼠乳腺上皮细胞炎症反应的影响 预览
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作者 卢劲晔 顾蓓蓓 +1 位作者 卢炜 刘静 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期740-745,共6页
[目的]阐明雷帕霉素(Rapa)对大肠杆菌诱发的乳腺感染的保护作用机制,为临床上寻找乳腺炎防控新方法提供理论依据。[方法]原代培养大鼠乳腺上皮细胞,待细胞贴壁后,试验组采用100nmol·L^-1的Rapa处理4h后,细胞经感染比(MOI)为10的大... [目的]阐明雷帕霉素(Rapa)对大肠杆菌诱发的乳腺感染的保护作用机制,为临床上寻找乳腺炎防控新方法提供理论依据。[方法]原代培养大鼠乳腺上皮细胞,待细胞贴壁后,试验组采用100nmol·L^-1的Rapa处理4h后,细胞经感染比(MOI)为10的大肠杆菌处理2h后用细胞刮刀刮取细胞,收集细胞上清液,用于Toll样受体4(TLR-4)及髓样分化因子(MyD88)蛋白、促炎性细胞因子表达及活性氧(ROS)释放检测。[结果]大肠杆菌刺激原代培养的乳腺上皮细胞后,TLR-4和MyD88蛋白表达显著升高;而Rapa预处理可降低MyD88蛋白表达;同时,大肠杆菌刺激后,乳腺上皮细胞中促炎性细胞因子,如肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)的表达及ROS的释放均显著升高。雷帕霉素能下调促炎性细胞因子的释放,显著降低ROS的释放量。[结论]Rapa抑制MyD88信号通路后可减轻大肠杆菌诱导的大鼠乳腺炎症反应。 展开更多
关键词 大肠杆菌 炎症反应 雷帕霉素 乳腺上皮细胞
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FADS2基因在奶牛乳腺细胞中的过表达和干扰研究 预览
5
作者 马小娅 庞春英 +4 位作者 邓廷贤 段安琴 陆杏蓉 梁莎莎 梁贤威 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第3期652-660,共9页
为了研究脂肪酸脱氢酶2(fatty acid desaturases 2,FADS2)基因在奶牛乳腺细胞脂肪酸代谢中的作用,本研究在奶牛乳腺上皮细胞中对FADS2基因进行过表达和干扰,研究FADS2基因表达对脂肪酸合成相关基因的调控及对奶牛乳腺上皮细胞中甘油三... 为了研究脂肪酸脱氢酶2(fatty acid desaturases 2,FADS2)基因在奶牛乳腺细胞脂肪酸代谢中的作用,本研究在奶牛乳腺上皮细胞中对FADS2基因进行过表达和干扰,研究FADS2基因表达对脂肪酸合成相关基因的调控及对奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯含量的影响。针对FADS2基因的CDS序列设计siRNA和过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP,转染奶牛乳腺细胞检测FADS2基因过表达和干扰对脂肪酸代谢相关基因表达的影响及细胞中甘油三酯含量的变化。结果显示,试验成功获得过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP和干扰片段,转染细胞后具有良好的过表达和干扰效果。FADS2基因过表达后,1-酰基甘油磷酸酰基转移酶(AGPAT1)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、3-磷酸甘油转移酶(GPAM)、脂肪酸延长链5(ELOVL5)、乙酰辅酶A酰基转移酶1(ACAA1)、脂肪酸脱氢酶1(FADS1)、二酰基甘油转酰基酶1(DGAT1)和过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因显著下调(P<0.05),脂滴蛋白2(PLIN2)基因极显著上调(P<0.01)。FADS2基因干扰过后可引起AGPAT1、GPAM、ELOVL5、ACAA1、PLIN2和FADS1基因显著上调(P<0.05),脂肪酸合成胰岛素诱导基因1(INSIG1)极显著上调(P<0.01),DGAT1和PPARα基因显著下调(P<0.05)。甘油三酯检测结果显示,FADS2基因过表达和干扰均可降低奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯的含量。综上所述,在奶牛乳腺上皮细胞中,FADS2基因能调控脂质合成相关基因的表达,对乳腺脂质合成具有调控作用。 展开更多
关键词 奶牛乳腺细胞 FADS2基因 过表达 干扰 脂肪酸合成
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脂磷壁酸体外诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症模型的建立与评价
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作者 孙静 冶冬阳 +7 位作者 王旭荣 侯艳华 张凯 张景艳 王磊 张康 李建喜 杨志强 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第8期1057-1065,共9页
旨在通过脂磷壁酸(LTA)诱导的方法,体外建立奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症模型,为奶牛乳腺炎的研究提供合理模型。采用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养BMECs,利用差时胰酶消化法纯化BMECs。通过测定BMECs骨架蛋白——角蛋白18对所培养的细... 旨在通过脂磷壁酸(LTA)诱导的方法,体外建立奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)炎症模型,为奶牛乳腺炎的研究提供合理模型。采用Ⅱ型胶原酶消化法分离培养BMECs,利用差时胰酶消化法纯化BMECs。通过测定BMECs骨架蛋白——角蛋白18对所培养的细胞进行鉴定,以确定其为BMECs,并用LTA侵染BMECs,以培养细胞的形态学特征和炎性因子作为炎症发生和发展的判断指标。用不同质量浓度(0、10、20、40、80 g/m L)的LTA对BMECs作用不同时间(12、24、48 h),采用MTT法检测细胞活力;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)快速检测奶牛肿瘤坏死因子(TNF-α)和奶牛白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达水平;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎性应答标志TNF-α和IL-1β基因的表达水平,以确定建立模型的最佳质量浓度与时间。结果表明,在体外培养的BMECs特异性蛋白——角蛋白18表达呈阳性;MTT、ELISA和qRT-PCR试验结果显示LTA质量浓度为40 g/m L时处理BMECs 24 h可明显提高TNF-α和IL-1β的蛋白和基因表达水平。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 体外培养 脂磷壁酸 细胞因子 炎症模型
SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞TLR4致炎信号通路的负调控作用
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作者 周秋格 刘畅 +2 位作者 赖金伦 郭爱珍 胡长敏 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期404-410,共7页
旨在探究SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)TLR4信号通路的负调控作用。构建SIGIRR—pEGFP真核表达载体,脂质体法转染HEK293T及BMECs,荧光显微镜观察及Westernblot验证融合蛋白SIGIRR—pEGFP的表达;LPS刺激转染后BMECs,检测TLR4及... 旨在探究SIGIRR对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)TLR4信号通路的负调控作用。构建SIGIRR—pEGFP真核表达载体,脂质体法转染HEK293T及BMECs,荧光显微镜观察及Westernblot验证融合蛋白SIGIRR—pEGFP的表达;LPS刺激转染后BMECs,检测TLR4及其信号通路分子IRAK1、IRAK4和TRAF6的变化,以及下游炎性因子IL-6、IL-8、IL-18和TNF-a的表达量。结果显示,成功构建SIGIRR-pEGFP真核表达载体,荧光检测重组质粒转染到HEK293T和BMECs中;Westernblot鉴定融合蛋白SIGIRR—pEGFP表达正确;重组质粒转染BMECs后,SIGIRR表达量较转染空载质粒组及空白未转染组显著升高(P〈0.01);炎性因子IL-6、IL-8、IL-10、TNFa、TLR4及下游信号分子IRAK1、IRAK4、TRAF6表达量显著降低(P〈0.01),转染空载质粒组与空白未转染组相比仅IRAKl表达量有差异(P〈0.05)。结果表明,本试验通过研究牛SIGIRR在BMECs中的作用,证实sIGIRR基因具有炎性负调控LPS-TLR4信号通路的作用,具有潜力成为临床治疗奶牛乳腺炎的新靶标。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺炎 乳腺上皮细胞 SIGIRR TLR4信号通路 负性调控
PRSS23基因干扰与过表达载体构建及对牛MEC的影响
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作者 李晓慧 耿亚楠 +6 位作者 姜平 夏立新 刘小川 葛言亮 孙豪 杨润军 赵志辉 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期1008-1012,1034共6页
以奶牛乳腺上皮细胞为材料,在克隆PRSS23基因的基础上,构建真核过表达栽体和干扰栽体并将其转染到奶牛乳腺上皮细胞中,利用qRTPCR的方法检测PRSS23基因在mRNA水平上的表达情况,同时测定细胞内甘油三酯的含量。结果显示:在mRNA水平... 以奶牛乳腺上皮细胞为材料,在克隆PRSS23基因的基础上,构建真核过表达栽体和干扰栽体并将其转染到奶牛乳腺上皮细胞中,利用qRTPCR的方法检测PRSS23基因在mRNA水平上的表达情况,同时测定细胞内甘油三酯的含量。结果显示:在mRNA水平上,过表达组与对照组相比表达量差异显著,其甘油三酯水平显著升高;干扰组与对照组相比,在mRNA水平上差异表达显著,甘油三酯含量也显著升高。 展开更多
关键词 PRSS23 乳脂代谢 过表达载体 干扰载体 乳腺上皮细胞
奶牛乳腺上皮细胞中SCAP和SREBP1蛋白调控SCD基因表达的作用研究 预览 被引量:1
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作者 韩立强 孙宇 +2 位作者 付彤 廉红霞 高腾云 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期652-658,共7页
旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和... 旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理,采用双荧光素酶报告基因系统检测转染SREBP1和SCAP对SCD基因启动子活性的影响;采用免疫荧光技术观察SREBP1在细胞核的表达,采用荧光定量PCR检测SCD基因mRNA的表达。结果表明,与转染pcDNA3.1载体的对照组相比,转染SCAP对SCD启动子活性无显著影响;转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1极显著增加SCD基因启动子活性值(P〈0.01),并且SCAP的转染剂量与SCD的启动子活性值之间具有极显著的量效关系(P〈0.01);在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增强SREBP1在细胞核的表达;细胞转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1后,SCD基因mRNA的表达分别显著上调1.23倍和1.54倍(P〈0.05)。本研究表明,奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对SCD基因的转录激活作用。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 固醇调节元件结合蛋白 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白 基因表达调控
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黄曲霉毒素B1在乳畜中的转化 预览
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作者 吴坤坦 齐德生 《饲料工业》 北大核心 2018年第20期59-64,共6页
黄曲霉毒素主要是由曲霉菌产生的一类具有高致癌性的次级代谢产物,我国饲料及饲料原料普遍受到黄曲霉毒素B1污染。乳畜摄入黄曲霉毒素B1后,代谢生成的羟基化产物黄曲霉毒素M1可通过乳汁污染乳及乳制品,并因这两种毒素都具有极强的毒... 黄曲霉毒素主要是由曲霉菌产生的一类具有高致癌性的次级代谢产物,我国饲料及饲料原料普遍受到黄曲霉毒素B1污染。乳畜摄入黄曲霉毒素B1后,代谢生成的羟基化产物黄曲霉毒素M1可通过乳汁污染乳及乳制品,并因这两种毒素都具有极强的毒性越来越受到人们的关注。黄曲霉毒素B1在乳畜的肝脏、瘤胃和乳腺等部位均可代谢转化,黄曲霉毒素M1向乳中的转移受到多种因素的影响。文章从黄曲霉毒素Bl的代谢与转移排泄、影响黄曲霉毒素M1的转化因素以及黄曲霉毒素B1对乳腺上皮细胞和瘤胃微生物的影响进行论述。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 瘤胃微生物 乳腺上皮细胞 黄曲霉毒素M1 转化效率
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苜蓿黄酮对脂多糖刺激下乳成分合成相关基因表达的影响
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作者 占今舜 陈小连 +1 位作者 詹康 赵国琦 《中国农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期50-56,共7页
为探索苜蓿黄酮对脂多糖(LPS)刺激下乳成分合成相关基因表达的影响,采用体外细胞培养技术,将奶牛乳腺上皮细胞分成4个组:1)基础培养基(Con);2)基础培养基中加入1μg/mL的LPS(L);3)基础培养基中加入1μg/mL的LPS和75μg/mL苜... 为探索苜蓿黄酮对脂多糖(LPS)刺激下乳成分合成相关基因表达的影响,采用体外细胞培养技术,将奶牛乳腺上皮细胞分成4个组:1)基础培养基(Con);2)基础培养基中加入1μg/mL的LPS(L);3)基础培养基中加入1μg/mL的LPS和75μg/mL苜蓿黄酮(L+F);4)基础培养基中加入75μg/mL苜蓿黄酮(F)。细胞在37℃,5%CO2的培养箱中培养12h后,对其乳成分合成相关基因的表达进行测定。结果表明:1)相对于对照组,L组和L+F组的酪氨酸激酶(JAK2)表达显著降低(P〈0.01),信号转导子和转录激活子(STAT5)和真核起始因子4E(eIF4E)表达显著升高(P〈0.05)。L+F组真核细胞始动因子4E结合蛋白1(4EBP1)的表达显著高于F组(P〈0.01),核糖体S6蛋白激酶1(S6K1)的表达显著高于L组和对照组(P〈0.05)。2)F组胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)的表达显著低于L组(P〈0.05),过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)的表达则相反;F组脂肪酸转运蛋白1(FATP1)和脂肪酸转运蛋白4(FATP4)的表达显著低于L和L+F组(P〈0.01),脂肪酸结合蛋白3(FABP3)和乙酰辅酶A羧化酶(ACACA)的表达则相反;对照组硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)的表达显著高于其他各组(P〈0.01)。3)L+F组葡萄糖转运蛋白1(Glut1)(P〈0.05)、葡萄糖转运蛋白4(Glut4)(P〈0.05)和葡萄糖转运蛋白8(Glut8)(P〈0.01)的表达显著高于对照组,F组己糖激酶2(HK2)的表达显著低于L组和L+F组(P〈0.05),而β-1,4-半乳糖基转移酶(β-1,4-Gal T)的表达最低。因此,在无LPS刺激下,添加苜蓿黄酮可能会抑制乳脂合成;在LPS刺激下,添加苜蓿黄酮可能会促进乳蛋白和乳糖的合成。 展开更多
关键词 苜蓿黄酮 脂多糖 乳腺上皮细胞 奶牛
脐带间充质干细胞通过类胰岛素样生长因子-Ⅰ介导的Janus激酶/信号转导及转录活化因子信号通路抑制奶牛乳腺上皮细胞凋亡的体外研究 预览
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作者 赵艳坤 邵伟 +2 位作者 雒诚龙 武开乐 余雄 《动物营养学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期1335-1342,共8页
本试验旨在探究Janus激酶/信号转导及转录活化因子(JAK/STAT)信号通路是否参与脐带间充质干细胞(UC-MSCs)通过类胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)抑制奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)凋亡的调节。将UC-MSCs和BMECs利用TranswellTM小室双层... 本试验旨在探究Janus激酶/信号转导及转录活化因子(JAK/STAT)信号通路是否参与脐带间充质干细胞(UC-MSCs)通过类胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)抑制奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)凋亡的调节。将UC-MSCs和BMECs利用TranswellTM小室双层共培养,以BMECs单纯培养为对照,给予类胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-ⅠR)抑制剂AG1024进行干预,并用信号阻断剂AG490处理细胞,24 h后采用实时荧光定量PCR检测各组细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤/白血病基因伴随蛋白x(Bax)、半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)基因的相对表达丰度,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果表明:UC-MSCs和BMECs共培养组BMECs的凋亡率极显著低于其他各组(P〈0.01);UC-MSCs和BMECs共培养组Bcl-2基因的相对表达丰度较BMECs组极显著上调(P〈0.01),Caspase-3、Bax基因的相对表达丰度则显著或极显著下调(P〈0.05或P〈0.01);AG1024和AG490单独处理或二者共同处理升高了单独培养的BMECs和与UC-MSCs共培养的BMECs的凋亡率,并上调了Bax、Caspase-3基因的相对表达丰度,下调了Bcl-2基因的相对表达丰度,均具有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01)。由此得出,UC-MSCs能够通过IGF-Ⅰ介导JAK/STAT信号通路调节BMECs凋亡相关基因的表达,降低BMECs的凋亡率。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 乳腺上皮细胞 共培养 IGF-Ⅰ JAK/STAT 凋亡
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与脐带间充质干细胞共培养对乳腺上皮细胞乳脂合成及关键基因表达的影响 预览 被引量:1
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作者 赵艳坤 邵伟 +1 位作者 王立文 余雄 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期846-853,共8页
旨在探究奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)与脐带间充质干细胞(UC-MSCs)共培养对(BMECs)乳脂合成及关键基因表达的影响。试验共分为8组:共培养组为UC-MSCs和BMECs共培养条件下的不处理组、IGF-1R抑制剂AG1024处理组、Janus激酶和转录活... 旨在探究奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)与脐带间充质干细胞(UC-MSCs)共培养对(BMECs)乳脂合成及关键基因表达的影响。试验共分为8组:共培养组为UC-MSCs和BMECs共培养条件下的不处理组、IGF-1R抑制剂AG1024处理组、Janus激酶和转录活化因子(JAK/STAT)信号通路信号阻断剂AG490处理组及AG1024+AG490处理组,对照组为BMECs单培养条件下的不处理组、IGF-1R抑制剂AG1024组、Janus激酶和转录活化因子(JAK/STAT)信号通路信号阻断剂AG490组及AG1024+AG490处理组。检测各组上清IGF-1、甘油三酯(TG)含量变化;RT-qPCR检测乙酰辅酶A羧化酶(ACACA),脂肪酸合成酶(FASN)和固醇调节元件结合蛋白(Sterol regulatory element binding proteins,SREBP1)基因的相对表达丰度。结果表明,共培养组IGF-1、TG含量均显著高于对照组(P〈0.05);AG1024处理对IGF-1具有极显著抑制效果(P〈0.01),显著降低TG含量及ACACA、FASN、SREBP1mRNA相对表达丰度(P〈0.05);AG490处理对ACACA、FASN、SREBP1mRNA的表达无显著影响(P〉0.05);AG1024和AG490共同处理较AG1024单独处理各项指标表现差异不显著(P〉0.05)。综上表明,脐带间充质干细胞能够通过IGF-1促进乳腺上皮细胞乳脂合成及关键基因的表达,JAK2/STAT5信号通路不参与脐带间充质干细胞对乳腺上皮细胞乳脂调控。 展开更多
关键词 脐带间充质干细胞 乳腺上皮细胞 共培养 乳脂 基因表达
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牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因的克隆及其在乳腺上皮细胞中的表达 被引量:3
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作者 李月琴 潘阳阳 +5 位作者 田奎丽 赵天 张译夫 樊江峰 崔燕 余四九 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期21-31,共11页
乳腺中葡萄糖摄取主要依赖葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,GLUT),不同GLUT对葡萄糖摄取所起作用不同。为研究GLUT1、GLUT3和GLUT8参与牦牛(Bos grunniens)泌乳机能调节的分子机制,本研究采用胰酶消化法离体培养牦牛乳腺上皮细... 乳腺中葡萄糖摄取主要依赖葡萄糖转运蛋白(glucose transporter,GLUT),不同GLUT对葡萄糖摄取所起作用不同。为研究GLUT1、GLUT3和GLUT8参与牦牛(Bos grunniens)泌乳机能调节的分子机制,本研究采用胰酶消化法离体培养牦牛乳腺上皮细胞,通过免疫细胞化学方法检测角蛋白18、β-酪蛋白和波形蛋白;从纯化的细胞中分别克隆牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因,并分析其相关生物学特性;采用q RT-PCR和Western blot分别从基因和蛋白水平分析三者在乳腺上皮细胞表达差异性,间接免疫荧光检测其在乳腺上皮细胞中的分布。结果显示,角蛋白18和β-酪蛋白在分离得到的细胞中表达,波形蛋白不表达,所分离的细胞为乳腺上皮细胞。成功克隆出包含完整编码区的牦牛GLUT1、GLUT3和GLUT8基因序列(Gen Bank登录号分别为:KU902419,KX094556和KX268646),其编码区核苷酸长度分别为1479、1 485和1 437 bp,分别编码492、494和478个氨基酸;三者在进化过程中均有较高的保守性,编码的蛋白具有相似理化性质,均具有12个跨膜螺旋区的疏水性膜蛋白。在乳腺上皮细胞中,GLUT1的表达量最高,GLUT8的表达量次之,GLUT3的表达量最低,且三者之间的表达差异极显著(P〈0.01)。牦牛乳腺上皮细胞胞质和胞核均有GLUT1、GLUT3和GLUT8蛋白表达,且主要分布在细胞核。研究结果为了解牦牛GLUT生理学功能提供了重要信息,为进一步研究其调控牦牛泌乳机能的生物学作用提供了新的理论依据。 展开更多
关键词 牦牛 葡萄糖转运蛋白1(GLUT1) GLUT3 GLUT8 乳腺上皮细胞
奶牛乳腺上皮细胞模型的建立与鉴定 被引量:1
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作者 卢金霞 何芳 +2 位作者 刘丛玲 周学章 刘军红 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2017年第5期30-33,291,292共6页
为了建立奶牛乳腺上皮细胞模型,并对建立的细胞模型生物学特性进行鉴定,试验采用组织块培养法和乳汁分离法分离培养奶牛乳腺上皮细胞,利用差时胰酶消化法纯化奶牛乳腺上皮细胞,通过测定生长曲线、细胞群体倍增时间、核型、奶牛乳腺... 为了建立奶牛乳腺上皮细胞模型,并对建立的细胞模型生物学特性进行鉴定,试验采用组织块培养法和乳汁分离法分离培养奶牛乳腺上皮细胞,利用差时胰酶消化法纯化奶牛乳腺上皮细胞,通过测定生长曲线、细胞群体倍增时间、核型、奶牛乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白等对所培养细胞进行鉴定,以确定其为奶牛乳腺上皮细胞,并用金黄色葡萄球菌侵染奶牛乳腺上皮细胞,用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)检测奶牛乳腺上皮细胞的凋亡率和坏死率。结果表明:显微镜下观察可见纯化的乳腺上皮细胞为典型上皮细胞形态,呈多角形或乳滴形。细胞生长曲线呈“S”形;细胞群体倍增时间最短为36.6h;细胞核型正常(2n=60,XX);细胞特异性蛋白-角蛋白表达呈阳性,金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞3h,AnnexinV/PI双染法检测发现感染组细胞凋亡率和坏死率均明显升高,差异极显著(P〈0.01)。说明试验成功建立了奶牛乳腺上皮细胞模型。 展开更多
关键词 奶牛 乳腺上皮细胞 细胞培养 组织块培养法 乳汁分离法 凋亡率
干扰TIP47基因对奶山羊乳腺上皮细胞脂滴形成及相关基因表达的影响
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作者 张倡珲 郝娟 +3 位作者 罗军 石恒波 史怀平 许会芬 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期250-257,共8页
47kD尾部相互作用蛋白(tail—interacting protein47,TIP47)在脂滴形成与代谢过程中具有重要调控作用,研究其在乳脂滴形成过程中的作用对调控羊(Capra hircus)乳品质具有重要意义。本研究采用BLOCK-iT小发夹RNA(short hairpin RN... 47kD尾部相互作用蛋白(tail—interacting protein47,TIP47)在脂滴形成与代谢过程中具有重要调控作用,研究其在乳脂滴形成过程中的作用对调控羊(Capra hircus)乳品质具有重要意义。本研究采用BLOCK-iT小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)腺病毒(Adenovirus)干扰系统,根据奶山羊TIP47基因序列,在线设计并合成干扰shRNA。将有效shRNA序列构建载体,并在293A细胞中包装腺病毒。利用腺病毒载体干扰乳腺上皮细胞TIP47基因表达后,检测胞内脂肪酸代谢基因及脂滴的变化。结果表明,筛选到有效shRNA序列并获得高滴度TIP47基因的干扰腺病毒Ad-shRNA-888。Ad-shRNA-888感染山羊原代乳腺上皮细胞后发现,TIP47mRNA表达量下调61%(P〈0.01)。干扰TIP47基因的表达后,甘油三酯水解酶基因(adipose triglycende lipase,ATGL)下调了15%,而脂肪酸合酶基因(fatty acid synthase,FASN)和激素敏感脂酶基因(hormone—sensitive lipase,HSL)分别上调1.77(P〈0.05)和2.8(P〈0.01)倍,硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(stearoyl—CoA desaturase,SCD)表达水平变化不显著。油红O结果显示干扰TIP47基因可以降低细胞脂滴(1ipid droplets,LD)的形成。本研究对TIP47基因进行干扰,发现其在奶山羊乳腺细胞脂滴形成过程中有重要调控作用,为进一步研究TIP47基因对脂滴代谢的影响提供一定的理论依据。 展开更多
关键词 奶山羊 47 kD尾部相互作用蛋白基因(TIP47) RNA干扰 乳腺上皮细胞
热应激诱导奶牛乳腺上皮细胞凋亡及其对HSP70基因表达的影响 预览 被引量:2
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作者 张响英 唐现文 +1 位作者 陈静波 李腾腾 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第8期142-146,共5页
为探讨热应激对乳腺上皮细胞凋亡的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的乳腺上皮细胞分别置于39 ℃和41 ℃热处理1 h(以37 ℃正常培养的细胞为对照),在37 ℃恢复培养0、6、12 h后收集细胞,采用MTT法检测细胞... 为探讨热应激对乳腺上皮细胞凋亡的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,取对数生长期的乳腺上皮细胞分别置于39 ℃和41 ℃热处理1 h(以37 ℃正常培养的细胞为对照),在37 ℃恢复培养0、6、12 h后收集细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率,Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡,比色法分析Caspase-3活性,荧光定量PCR检测HSP70基因的表达水平。结果表明,39 ℃热应激组细胞生长抑制率和死亡率高峰期均发生在热修复6 h,细胞死亡率为15.42%,而41 ℃热应激组发生在热修复12 h,细胞死亡率高达23.18%;高温处理后,Caspase-3活性呈上升趋势;39 ℃热应激组在热恢复6 h,HSP70基因表达量显著高于对照组,41 ℃热应激组在热恢复0、6、12 h,HSP70基因的表达量分别为对照组的3.53倍、5.61倍和2.93倍。综上可知,高温应激激活了Caspase-3活性,从而诱导乳腺上皮细胞凋亡,并随高温强度的增加而作用增强,同时高温诱导了HSP70基因过表达,协助细胞获得热耐受性。 展开更多
关键词 乳腺上皮细胞 热应激 细胞凋亡 HSP70基因
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牦牛SND1基因特征序列分析及其蛋白在乳腺的表达 被引量:1
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作者 田奎丽 潘阳阳 +2 位作者 李月琴 崔燕 余四九 《兽类学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期207-214,共8页
Staphylococcalnucleaseandtudordomaincontaining1(SNDl,Tudor-SN)是一种参与基因调控的转录共激活因子蛋白,本研究意在克隆牦牛泌乳相关基因SNDl,分析其生物学特性,研究其蛋白在乳腺的表达。采集牦牛泌乳期乳腺组织,胰蛋白酶... Staphylococcalnucleaseandtudordomaincontaining1(SNDl,Tudor-SN)是一种参与基因调控的转录共激活因子蛋白,本研究意在克隆牦牛泌乳相关基因SNDl,分析其生物学特性,研究其蛋白在乳腺的表达。采集牦牛泌乳期乳腺组织,胰蛋白酶消化法得到原代乳腺上皮细胞,纯化到3代,采用RT-PCR扩增克隆SND1基因,测序并拼接,用相关生物信息软件分析牦牛SND1基因特性;用免疫组织化学和免疫荧光技术对牦牛SND1基因编码蛋白进行定位分析。获得如下结果:牦牛SND1基因全序列为3294bp,含有2733bp的ORF,共包含20种氨基酸。SND1基因编码蛋白为非分泌蛋白,非跨膜蛋白;同源性分析显示,牦牛SND1基因与野牛、家牛、藏羚羊、山羊、猪、野骆驼、马、黑猩猩、人、褐家鼠的同源性分别为99%、98%、96%、94%、91%、90%、90%、89%、89%、85%;系统进化树表明牦牛与野牛和家牛的进化水平较近,与人和鼠的进化水平较远。免疫组织化学染色结果显示,SND1蛋白在分泌上皮细胞(乳腺上皮细胞)和导管上皮细胞呈阳性高表达,在肌上皮细胞呈弱表达。免疫荧光显示,SND1蛋白在乳腺上皮细胞胞核高表达,胞质弱表达。上述研究结果为进一步探究SND1对牦牛泌乳机能的调节提供了相关依据,也为高寒哺乳动物的研究提供了参考资料。 展开更多
关键词 牦牛 SND1 乳腺上皮细胞 生物学特性 表达
炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎性反应中的表达及miR-223真核表达载体的构建 预览 被引量:1
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作者 郝俊芳 黄凯 +2 位作者 王月影 杜丽丽 钟凯 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期183-189,共7页
小分子RNA(miRNA)是近年来发现的一类内源性、非编码单链小RNA,其在乳腺组织免疫防御过程中发挥的调控作用逐渐引起了人们的关注。作者拟用qRT-PCR检测炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应中的表达变化;构建3种miR-22... 小分子RNA(miRNA)是近年来发现的一类内源性、非编码单链小RNA,其在乳腺组织免疫防御过程中发挥的调控作用逐渐引起了人们的关注。作者拟用qRT-PCR检测炎症相关miRNAs在LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应中的表达变化;构建3种miR-223真核表达载体并检验重组载体的转染效率。用不同浓度LPS处理小鼠乳腺上皮细胞(EpH4-Ev)48h,qRT-PCR检测miR-223、miR-146a、miR-181a和miR-155的表达变化。以EpH4-Ev细胞基因组DNA为模板,PCR扩增pre-miR-223序列,以质粒Minicircle、pcDNA3.1(+)和转座子piggyBac为母本构建3种miR-223真核表达载体,将其转染EpH4-Ev细胞,通过观察荧光、qRT-PCR检测miR-223的表达,评价重组质粒转染效率。结果:qRT-PCR检测结果表明,LPS诱导EpH4-Ev细胞炎症反应时,4种炎症相关miRNAs的表达均显著(P〈0.05或P〈0.01)增加,并呈现不同程度的剂量依赖性;重组质粒转染EpH4-Ev细胞后,qRT-PCR检测结果显示,Mini-miR-223质粒转染组的miR-223表达水平无统计学差异(P〉0.05);PBmiR-223和pcDNA-miR-223转染EpH4-Ev细胞后,miR-223的表达均极显著(P〈0.001)增加。本研究表明炎症相关miRNAs参与LPS诱导小鼠EpH4-Ev细胞的炎性反应过程。成功构建3种miR-223真核表达载体,为后续miRNAs在乳腺炎症反应中的功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 炎症相关miRNAs 乳腺上皮细胞 LPS 真核表达载体 乳腺炎
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奶山羊乳腺上皮细胞与骨髓间充质干细胞混合培养下最适共培养体系的建立 预览
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作者 木合依扎·热很别克 邵伟 +1 位作者 赵艳坤 余雄 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1954-1960,共7页
【目的】研究乳腺上皮细胞与骨髓间充质于细胞混合培养促进细胞增殖作用的机制,提高奶山羊乳腺上皮增殖水平。【方法】采用分离培养的1月龄健康萨能奶山羊乳腺上皮细胞和骨髓间充质干细胞,分别设乳腺上皮细胞单纯培养组和不同比例的... 【目的】研究乳腺上皮细胞与骨髓间充质于细胞混合培养促进细胞增殖作用的机制,提高奶山羊乳腺上皮增殖水平。【方法】采用分离培养的1月龄健康萨能奶山羊乳腺上皮细胞和骨髓间充质干细胞,分别设乳腺上皮细胞单纯培养组和不同比例的乳腺上皮细胞与骨髓间充质干细胞混合培养组,培养24、48、72、96、120和168h时观察各组细胞的生长状态并检测细胞增殖率和贴壁率。【结果】混合培养组增值率和贴壁率比单纯培养组高,且细胞扁平时间晚于单纯培养组,混合培养体系可促进BMEC的增殖,减缓细胞凋亡。当BMEC与BMSCs以2:1的比例混合培养到96h时细胞的增值率和贴壁率最高。【结论】奶山羊乳腺上皮细胞和骨髓间充质于细胞共培养体系能够减缓乳腺仁皮细胞的凋亡,促进乳腺上皮细胞增殖,提高细胞贴壁率。最佳共培养浓度为2:1,最佳作用时间为96h。 展开更多
关键词 乳腺上皮细胞 骨髓间充质干细胞 共培养 细胞因子
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