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黏菌素耐药基因mcr-1 TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法的建立 预览
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作者 施开创 尹彦文 +3 位作者 温丽霞 屈素洁 王海清 胡杰 《南方农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1447-1452,共6页
【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料... 【目的】建立针对黏菌素耐药基因mcr-1的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。【方法】针对mcr-1基因保守序列设计特异性引物和MGB探针,构建重组质粒作为阳性标准品,优化引物、探针浓度及Rox参比染料用量、退火温度等反应条件,建立针对mcr-1基因的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法,并通过特异性、敏感性、重复性试验及临床应用验证其实用性。【结果】TaqMan-MGB荧光定量PCR最佳反应体系20.00μL:PremixExTaqTM10.00μL,Rox参比染料(50×)0.25μL,引物MCR-1F/MCR-1R(10μmol/L)各0.50μL,MCR-1-P探针(10μmol/L)0.50μL,重组质粒pMCR-1(模板)2.00μL,灭菌双蒸水6.25μL。扩增程序:95℃预变性20s;95℃10s,60℃20s,进行40个循环。该检测方法能特异性扩增出mcr-1基因,其检测敏感性为2.85拷贝/μL,是常规PCR的100倍,组内和组间重复性试验的变异系数为0.37%~1.18%,均小于1.20%。采用建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR对82株广西鸡源致病性沙门氏菌分离株进行检测,结果未发现有携带mcr-1基因的菌株。【结论】针对mcr-1基因建立的TaqMan-MGB荧光定量PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于临床筛查mcr-1基因,为监控mcr-1基因携带细菌提供技术支持。 展开更多
关键词 黏菌素 mcr-1基因 TAQMAN-MGB探针 荧光定量PCR
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黏菌素耐药细菌mcr-1基因TaqManPCR快速检测方法的建立
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作者 尚伟 代稳 +3 位作者 陈北方 王玫 邹大阳 仓宝成 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第9期710-715,共6页
目的 建立一种快速灵敏准确的分子检测方法用来检测临床分离菌株中的mcr-1基因.方法 根据mcr-1基因的序列设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,同时构建含有mcr-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品,采用TaqMan探针荧光定量PCR方法检测... 目的 建立一种快速灵敏准确的分子检测方法用来检测临床分离菌株中的mcr-1基因.方法 根据mcr-1基因的序列设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,同时构建含有mcr-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品,采用TaqMan探针荧光定量PCR方法检测耐药基因mcr-1,并对方法的敏感性、重复性和特异性进行评价.结果 TaqMan探针荧光定量PCR结果显示起始模板量与Ct值之间存在良好的线性关系(R2〉0.999),检出下限为10拷贝/μl,比常规PCR敏感性高100倍;特异性检测显示只有含mcr-1基因的菌株结果为阳性,其余菌株为阴性;组内及组间重复性试验的变异系数均小于1%.利用所建立的方法对150株临床分离的耐药菌株进行检测,检测到2株菌株携带mcr-1耐药基因,2株菌株鉴定均为大肠杆菌.结论 建立的TaqMan探针荧光定量PCR检测耐药基因mcr-1的方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点,可用于临床检验上特异性检测携带mcr-1基因的临床耐药菌株,为临床药物治疗提供更好的依据. 展开更多
关键词 黏菌素耐药 mcr-1基因 PCR检测 TAQMAN探针
临床分离肠杆菌科细菌中mcr-1的筛查及其阳性菌株的药敏结果 预览
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作者 陆上 毕颖敏 +2 位作者 杨洋 胡付品 杨帆 《中国感染与化疗杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期408-412,共5页
目的了解mcr-1基因在临床分离肠杆菌科细菌中的分布及其阳性菌株对临床常用抗菌药物的敏感性。方法PCR法对1617株临床分离肠杆菌科细菌进行mcr-1基因的筛查,并对阳性扩增产物进行测序分析。微量肉汤稀释法测定mcr-1基因阳性菌株对于临... 目的了解mcr-1基因在临床分离肠杆菌科细菌中的分布及其阳性菌株对临床常用抗菌药物的敏感性。方法PCR法对1617株临床分离肠杆菌科细菌进行mcr-1基因的筛查,并对阳性扩增产物进行测序分析。微量肉汤稀释法测定mcr-1基因阳性菌株对于临床常见抗菌药物的MIC。脉冲场凝胶电泳(PFGE)对mcr-1基因阳性菌株进行同源性分析。结果1617株临床分离肠杆菌科细菌中,仅9株(0.6%)细菌mcr-1基因检测阳性,其中包括8株大肠埃希菌和1株肺炎克雷伯菌。PFGE分析显示8株mcr-1阳性大肠埃希菌分属8个不同型别;9株mcr-1阳性菌株对多黏菌素E均耐药,MIC为4~8mg/L;9株细菌对头孢美唑、碳青霉烯类药物及替加环素均敏感,对庆大霉素、环丙沙星和左氧氟沙星均耐药,仅1株大肠埃希菌对头孢他啶、头孢噻肟敏感;1株肺炎克雷伯菌和1株大肠埃希菌对哌拉西林-他唑巴坦耐药;1株肺炎克雷伯菌和2株大肠埃希菌对阿米卡星耐药。结论mcr-1基因在受试临床分离肠杆菌科细菌中检出率很低,mcr-1基因阳性菌中以大肠埃希菌多见,未发现克隆传播,其介导的多黏菌素耐药水平也较低。mcr-1阳性菌株对第三代头孢菌素、氨曲南及喹诺酮类等药物耐率高,但对头霉素、碳青霉烯类、替加环素敏感,提示mcr-1阳性菌株感染仍有多种抗菌药物可供选择。 展开更多
关键词 肠杆菌科细菌 多黏菌素耐药 mcr-1基因
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猪禽源大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药性及MCR-1耐药基因检测 预览
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作者 李振斌 姜雯 +5 位作者 宋传周 赵建梅 李月华 迟良 刘焕奇 曲志娜 《动物医学进展》 北大核心 2018年第12期20-26,共7页
为了解猪禽源大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药性以及MCR-1基因的流行情况,选取2008年-2015年采集的18203株大肠埃希菌和2009年-2015年采集的1729株沙门菌为研究对象,使用WPS Office2016软件对菌株的MIC值分布和耐药结果进行统计分析,... 为了解猪禽源大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药性以及MCR-1基因的流行情况,选取2008年-2015年采集的18203株大肠埃希菌和2009年-2015年采集的1729株沙门菌为研究对象,使用WPS Office2016软件对菌株的MIC值分布和耐药结果进行统计分析,用PCR对部分菌株进行MCR-1基因检测。统计发现,在MIC≥4μg/mL时,大肠埃希菌和沙门菌所占比例分别为17.97%和29.38%;而EUCAST的结果分别为1.84%和5.63%,在耐药浓度范围内,大肠埃希菌和沙门菌均在MIC值为4μg/mL时所占比例最高,分别为15.93%和21.86%。自2013年两种菌开始出现MIC>16μg/mL的菌株。大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素的耐药率分别为17.97%和29.38%,猪禽源大肠埃希菌和沙门菌耐药率分别为24.25%、12.3%和17.26%、38.94%。MCR-1基因检出率为11.73%,大肠埃希菌检出率比沙门菌高15.39%,MIC值为4μg/mL时阳性菌株分布最多(72.18%),2008年-2015年阳性菌株比例分别为0.19%、5.26%、4.68%、30.99%、12.28%、12.67%、14.81%、19.10%。大肠埃希菌和沙门菌对黏菌素耐药率相对不高,多数为MIC=4μg/mL的低水平耐药且逐渐出现了MIC>16μg/mL的高水平耐药菌,与EUCAST相比,其MIC值分布相对后移。沙门菌对黏菌素的耐药率高于大肠埃希菌,但后者耐药日趋严重,不同动物源菌株对黏菌素的耐药程度存在差异,猪源大肠埃希菌和禽源沙门菌耐药程度相对严重。MCR-1检出率较低,但呈现增长趋势,该基因主要引起MIC=4μg/mL的低水平耐药且主要在大肠埃希菌中被检出。 展开更多
关键词 黏菌素 大肠埃希菌 沙门菌 MIC值 MCR-1基因
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多黏菌素耐药基因mcr-1研究进展
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作者 徐虹 雷晓婷 +5 位作者 赵丽华 史庆丰 刘聚源 王广芬 朱越燕 乔甫 《中华医院感染学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第24期5741-5744,共4页
多黏菌素是治疗鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌等革兰阴性菌感染的最后防线;2015年中国科学家首次报道了由质粒介导的多黏菌素耐药基因mcr-1;不同于已经发现的多黏菌素耐药机制,mcr-1基因整合于质粒,而非染色体上,可以随着... 多黏菌素是治疗鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌等革兰阴性菌感染的最后防线;2015年中国科学家首次报道了由质粒介导的多黏菌素耐药基因mcr-1;不同于已经发现的多黏菌素耐药机制,mcr-1基因整合于质粒,而非染色体上,可以随着质粒的接合转移在不同细菌中水平传播,多种细菌及动物宿主均能携带mcr-1基因。mcr-1基因还能与其他耐药基因共存于质粒上,产生多药耐药,引起临床患者的严重感染;目前,五大洲30多个国家相继报道检测到该基因,对全球抗菌药物耐药带来巨大挑战;本文从食物链传播模式、环境和人群的流行现状、携带mcr-1基因的肺炎克雷伯菌感染暴发研究等方面进行综述,为应对抗菌药物耐药提供参考。 展开更多
关键词 多黏菌素 mcr-1基因 耐药 感染 暴发
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