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miR-134通过介导CCND1表达下调抑制食管癌细胞增殖 预览
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作者 李丽娜 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第21期5356-5358,共3页
目的探讨人食管鳞状细胞癌组织中miR-134的表达及对癌症细胞增殖、凋亡的影响。方法食管癌组织及体外培养细胞中的miR-134表达水平采用PCR法检测;在TE-1细胞内过表达miR-134,细胞活力检测采用噻唑蓝(MTT)实验,细胞增殖检测采用平板克隆... 目的探讨人食管鳞状细胞癌组织中miR-134的表达及对癌症细胞增殖、凋亡的影响。方法食管癌组织及体外培养细胞中的miR-134表达水平采用PCR法检测;在TE-1细胞内过表达miR-134,细胞活力检测采用噻唑蓝(MTT)实验,细胞增殖检测采用平板克隆实验;细胞凋亡检测采用流式细胞仪;PCR及蛋白免疫印迹检测miR-134潜在靶点CCND1表达变化。结果miR-134在食管癌组织中的表达水平较食管黏膜组织显著降低(P<0.001);过表达miR-134能够抑制食管鳞状细胞癌TE-1的细胞活力(P=0.023)和增殖能力(P=0.029),并促进细胞凋亡(P=0.010);过表达miR-134后显著抑制TE-1细胞中CCND1mRNA(P=0.011)及蛋白(P=0.042)的表达水平。结论食管鳞状细胞癌组织中miR-134表达水平降低,过表达miR-134能够通过下调CCND1的表达发挥抗食管鳞状细胞癌生长作用。 展开更多
关键词 miR-134 食管鳞癌 凋亡 增殖 细胞周期蛋白D1
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细胞游离miR-185、miR-134、miR-22和CEA组合谱对肺癌相关的恶性胸腔积液诊断价值研究
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作者 邬旦蓉 廖于峰 +2 位作者 马建波 陈军锋 邹俊勇 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第17期2053-2056,2063共5页
目的研究循环细胞外miR-185、miR-134、miR-22对肺癌相关的恶性胸腔积液的诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR方法(RT-q PCR)检测58例肺癌恶性胸腔积液(MPE)和40例良性胸腔积液(BPE)中胸液3个游离miRNA的相对表达水平。曲线下面积... 目的研究循环细胞外miR-185、miR-134、miR-22对肺癌相关的恶性胸腔积液的诊断价值。方法采用实时荧光定量PCR方法(RT-q PCR)检测58例肺癌恶性胸腔积液(MPE)和40例良性胸腔积液(BPE)中胸液3个游离miRNA的相对表达水平。曲线下面积(AUC)用来评估3个miRNAs和CEA的诊断价值。结果肺癌恶性胸腔积液中miR-185、miR-134和miR-22的表达水平较BPE减少,差异有统计学意义(P〈0.01)。miR-185、miR-134和miR-22的AUC分别为0.861(95%CI:0.776~0.922)、0.818(95%CI:0.727~0.888)和0.827(95%CI:0.738~0.896)。当3个miRNAs和CEA联合检测时,敏感度增高到91.9%,特异度为92.5%,AUC升高到0.942(95%CI:0.864~0.982)。结论胸液游离miR-185、miR-134和miR-22可作为肺癌恶性胸腔积液诊断的分子标志物。 展开更多
关键词 肺癌 胸腔积液 miR-185 miR-134 miR-22 癌胚抗原
miR-134通过调控FOXM1抑制食管鳞癌细胞的迁移及侵袭能力 预览
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作者 周海波 周殷杰 +6 位作者 李云霄 罗秀萍 刘洋 苏进 杨丽 郭蓉 许新华 《巴楚医学》 2018年第3期13-19,共7页
目的:研究miR-134是否通过靶向调节forkheadbox M1 (FOXM1)基因抑制食管鳞癌细胞系EC9706细胞的迁移和侵袭。方法:收集54例接受手术治疗食道癌患者的食管鳞癌组织和邻近正常食管组织。采用RT-PCR法检测miR-134、miR-10a、miR-29c、miR-... 目的:研究miR-134是否通过靶向调节forkheadbox M1 (FOXM1)基因抑制食管鳞癌细胞系EC9706细胞的迁移和侵袭。方法:收集54例接受手术治疗食道癌患者的食管鳞癌组织和邻近正常食管组织。采用RT-PCR法检测miR-134、miR-10a、miR-29c、miR-942、miR-93和miR-218的表达;采用Western blot方法检测MMP-2、MMP-9、COL1A1、COL1A5和FOXM1的表达。体外实验中,将miR-134mimics转染EC9706细胞后,采用划痕愈合试验检测EC9706细胞的迁移能力,用transwell小室试验检测转染细胞的侵袭能力,Western blot法检测COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9和FOXM1的表达。荧光素酶法检测FOXM1与miR-134的靶向作用位点。过表达FOXM1质粒转染EC9706细胞,观察miR-134介导的细胞迁移和侵袭能力变化。结果:与正常食管组织相比,食管鳞癌组织中miR-134表达降低(P<0.01),而COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9和FOXM1表达均显著升高(P<0.01)。在体外实验中,与模拟对照组相比,miR-134转染组COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9和FOXM1的表达明显降低(P<0.01或P<0.05);EC9706细胞的迁移和侵袭活性也显著降低(P<0.01);miR-134显著抑制FOXM1-3′-UTR质粒的荧光素酶活性(P<0.01);FOXM1过表达可部分消除miR-134对EC9706细胞迁移和侵袭能力的抑制效应。结论:在食管鳞癌组织中miR-134的表达降低,miR-134通过靶向调控FOXM1抑制EC9706细胞的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 miR-134 FOXM1 迁移 侵袭
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离体癫痫持续状态模型中抑制miR-134对树突棘的影响 预览
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作者 王小木 李德帅 +4 位作者 姜曌 万群 王津存 王卫蝉 夏峰 《脑与神经疾病杂志》 2018年第9期559-563,共5页
目的 探讨抑制miR-134对原代培养神经元树突棘的影响。方法 ①构建大鼠miR-134抑制慢病毒载体并验证;②培养海马神经元,建立无镁离体癫痫持续状态SE模型,利用离子扫描显微镜研究miR-134抑制对癫痫持续状态SE模型中神经元树突棘密度的影... 目的 探讨抑制miR-134对原代培养神经元树突棘的影响。方法 ①构建大鼠miR-134抑制慢病毒载体并验证;②培养海马神经元,建立无镁离体癫痫持续状态SE模型,利用离子扫描显微镜研究miR-134抑制对癫痫持续状态SE模型中神经元树突棘密度的影响。结果 ①将一段362bp包含2个miR-134竞争结合位点的DNA片段经XhoI和EcoRI酶切后插入质粒pCDH-CMV-MCS-EG(R)FP-MCS中E(R)GFP序列的下游,该片段转录产物与miR-134互补形成稳定的复合物,从而阻止了miR-134对靶mRNA的降解或翻译抑制,得到大鼠miR-134抑制慢病毒载体;②同对照病毒组相比,miR-134抑制慢病毒预处理组经无镁细胞外液处理后(离体癫痫持续状态模型)神经元树突棘密度减少(P<0.05)。结论 MiR-134可能在树突棘重塑过程中扮演重要角色。 展开更多
关键词 癫痫持续状态 miR-134 慢病毒 树突棘
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抑制miR-134治疗大鼠癫痫持续状态实验研究 预览
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作者 王小木 贾瑞华 +2 位作者 姜瞾 王津存 夏峰 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2018年第4期327-331,共5页
目的探讨微小核糖核酸-134(miR-134)在癫痫持续状态发生中的作用。方法 (1)构建大鼠miR-134抑制慢病毒载体;(2)建立大鼠氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型,观察miR-134抑制对大鼠发作潜伏期,癫痫持续状态时间,发作严重程度,脑电图... 目的探讨微小核糖核酸-134(miR-134)在癫痫持续状态发生中的作用。方法 (1)构建大鼠miR-134抑制慢病毒载体;(2)建立大鼠氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型,观察miR-134抑制对大鼠发作潜伏期,癫痫持续状态时间,发作严重程度,脑电图功率以及海马神经元凋亡的影响。结果(1)将一段362 bp的包含2个miR-134竞争结合位点的脱氧核糖核酸(DNA)片段经Xho I和EcoRI酶切后插入质粒p CDH-CMV-MCS-EG(R)FP-MCS中EG(R)FP序列的下游,该片段转录产物与miR-134互补形成稳定的复合物,从而阻止了miR-134对靶信使核糖核酸(mRNA)的降解或翻译抑制,得到大鼠miR-134抑制慢病毒载体。(2)立体定向注射miR-134抑制慢病毒于大鼠海马并放置海马电极,2 w后建立氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态模型,进行脑电图监测,结果提示miR-134抑制慢病毒组较相应对照病毒组Ⅴ级发作潜伏期延长(P〈0.01),脑电图总功率降低(P〈0.001),癫痫持续状态时间缩短(P〈0.05)。癫痫持续状态后3 d制备脑片进行免疫荧光染色,结果提示miR-134抑制慢病毒组海马齿状回(DG)、CA1及CA3区较相应对照病毒组神经元核(Neu N)染色阳性细胞数增多,末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记(TUNEL)阳性细胞减少。结论抑制大鼠海马miR-134能够减轻癫痫持续状态发作并具有神经保护作用。 展开更多
关键词 癫痫持续状态 微小核糖核酸-134 慢病毒 海马
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氟西汀对CUMS模型组大鼠血浆miR-34a miR-134 miR-143表达的影响
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作者 荣晗 刘铁榜 +3 位作者 杨海晨 徐丹 张建 王高华 《临床心身疾病杂志》 CAS 2017年第3期1-5,共5页
目的 探讨血浆miR-34a、miR-134、miR-143成为抑郁行为严重程度和药物疗效的客观评估指标的可能性.方法 将40只雄性SD大鼠分为4组,干预组、模型组、模型+干预组、对照组各10只,采用慢性不可预见性应激的方法建立抑郁模型,采用旷场实验... 目的 探讨血浆miR-34a、miR-134、miR-143成为抑郁行为严重程度和药物疗效的客观评估指标的可能性.方法 将40只雄性SD大鼠分为4组,干预组、模型组、模型+干预组、对照组各10只,采用慢性不可预见性应激的方法建立抑郁模型,采用旷场实验评价大鼠行为. 结果 应激前4组大鼠各项实验指标比较差异无统计学意义 (P〉0.05);而应激后,模型组和模型+干预组大鼠24 h饮用1%糖水消耗量及体质量、水平运动格子数与垂直运动格子数较应激前显著减少,排便次数较应激前显著增多(P〈0.05或0.01),对照组和干预组则无显著变化(P〉0.05).本研究未检测到miR-143的表达水平.与对照组相比,模型组大鼠血浆miR-34a表达增强(P〈0.05),miR-134表达下降(P〈0.05);与模型组相比,模型+干预组、干预组大鼠血浆miR-34a表达下降(P〈0.05),miR-134表达增强(P〈0.05).结论 应激抑郁模型小鼠糖水代谢消耗下降,动力及探索活动减少,而氟西汀可增加糖水消耗动力及探索活动.miR-143在血浆中基本不表达,血浆miR-134与miR-34a有可能成为抑郁症的生物学标记物,值得进一步研究. 展开更多
关键词 大鼠 抑郁症 MIR-34A miR-134 MIR-143
MMiR-134在MA诱导神经元损伤中的表达及其对神经诱发动作电位的影响 预览 被引量:1
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作者 李涛 王洪杰 +5 位作者 刘桂阳 张博 赵文博 刘天蔚 朱凯文 孙晋浩 《中山大学学报:医学科学版》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期36-41,共6页
【目的】探讨微小非编码RNA分子miR-134在甲基苯丙胺(MA)诱导PC12神经细胞损伤中的表达变化及其对神经兴奋性的影响,为理解MA导致神经损伤的机制提供实验基础。【方法】将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组和MA组。MA组应用800μmol... 【目的】探讨微小非编码RNA分子miR-134在甲基苯丙胺(MA)诱导PC12神经细胞损伤中的表达变化及其对神经兴奋性的影响,为理解MA导致神经损伤的机制提供实验基础。【方法】将处于对数生长期的PC12细胞分为对照组和MA组。MA组应用800μmol/L MA处理,建立体外神经元损伤模型,观察培养神经细胞损伤及细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR技术测定miR-134的表达水平变化;并构建miR-134干扰载体,抑制miR-134后分析神经诱发动作电位的变化。【结果】MA可明显诱导PC12细胞损伤,神经突起变短,细胞凋亡数目增多;荧光定量PCR结果显示miR-134表达升高;电生理学检测结果显示,干扰miR-134后诱发动作电位增多。【结论】高浓度MA诱导神经细胞损伤、诱发神经元凋亡并升高miR-134表达,沉默miR-134表达,可增加神经兴奋性。本实验为阐明MA的神经损伤机制,以及miR-134在神经元毒性损伤及神经兴奋性中的可能作用提供了实验依据。 展开更多
关键词 miR-134 甲基苯丙胺 神经毒性 动作电位
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miR-134通过下调叉头盒蛋白M1抑制肝细胞癌细胞增殖
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作者 姜珊 熊浩君 +5 位作者 何家琳 李波 杨帆 杨腾 张艳 何凤田 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-8,共8页
目的 探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用。方法 应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常... 目的 探讨miR-134下调叉头盒蛋白M1(forkhead box M1,FOXM1)的机制及其影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞增殖的作用。方法 应用CCK-8法检测miR-134对HCC细胞增殖的作用;经Western blot和Real-time PCR检测人正常肝细胞L02和5种HCC细胞系中FOXM1和miR-134的表达;用miR-134模拟物(miR-134 mimic)或miR-134抑制剂 (miR-134 inhibitor)转染HCC细胞后,经Western blot和Real-time PCR检测FOXM1及其下游靶基因CyclinD1的表达;应用生物信息学分析miR-134在人FOXM1 3' UTR的可能结合位点,通过报告基因检测实验分析miR-134与FOXM1的3′UTR的特异性结合;将miR-134 mimic和FOXM1表达质粒(无3′ UTR)共转染于HCC细胞后,经CCK-8法检测细胞的增殖情况。结果 miR-134可显著抑制HCC细胞增殖(P〈0.05);与人正常肝细胞L02相比,miR-134在HCC细胞中的表达明显降低(P〈0.05),而FOXM1蛋白表达明显增强,二者存在负相关(R^2=0.705,P〈0.05);miR134可显著下调FOXM1蛋白及其下游靶基因CyclinD1的表达(P〈0.05);报告基因检测实验证实miR134可特异性结合于FOXM1 mRNA 的3′UTR(P〈0.01);细胞增殖实验检测结果显示,过表达缺失3′ UTR 的FOXM1可显著减弱miR-134对HCC细胞增殖的抑制效应(P〈0.05)。结论 miR-134通过靶向结合于FOXM1的3′ UTR而下调FOXM1蛋白的表达,从而抑制HCC细胞的增殖。 展开更多
关键词 癌细胞增殖 蛋白表达 肝细胞癌 CYCLIND1 HCC细胞 carcinoma CCK-8法 人正常肝细胞
博尔纳病病毒通过磷蛋白调节miR-134影响人少突胶质瘤细胞的增殖研究 预览
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作者 白顺杰 周婵娟 +1 位作者 王明菊 谢鹏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1181-1185,共5页
目的:探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)在感染宿主细胞中,miR-134对人少突胶质瘤细胞(oligodendrocyte,OL)增殖水平的影响。方法:应用real-time PCR方法检测正常的OL细胞和BDV感染的OL细胞(OL/BDV)中的miR-134表达水... 目的:探讨博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)在感染宿主细胞中,miR-134对人少突胶质瘤细胞(oligodendrocyte,OL)增殖水平的影响。方法:应用real-time PCR方法检测正常的OL细胞和BDV感染的OL细胞(OL/BDV)中的miR-134表达水平,同时分别将BDV phosphoprotein(P24),nucleoprotein(P40)蛋白真核表达载体转染OL细胞,检测对miR-134的作用;通过miR-134过表达和BDV感染OL细胞,采用流式细胞仪检测miR-134和BDV对OL细胞增殖的影响。结果:real-time PCR表明miR-134在OL、OL/BDV细胞中的表达出现明显差异(P=0.000),并且BDV中的P24蛋白对miR-134有明显的上调作用(P=0.000),但P40对miR-134没有明显作用(P=0.139);流式细胞仪结果显示miR-134过表达(P=0.016)和BDV感染(P=0.001)均可以抑制OL细胞的增殖能力。结论:BDV感染可通过P24蛋白上调OL细胞中miR-134的表达,进而导致细胞增殖水平下降。 展开更多
关键词 博尔纳病病毒 少突胶质瘤细胞 miR-134 P24 增殖
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miR-134在氧-糖缺失神经元损伤中的作用 预览 被引量:1
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作者 迟文英 李燕 +3 位作者 王桂芝 孟凡军 韩松 李俊发 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期274-277,共4页
目的探讨miR-134在乳鼠脑皮层神经元氧-糖缺失(oxygen glucosedeprivation,OGD)致缺血损伤中的作用及其可能分子机制。方法离体培养乳鼠脑皮层神经元10d后,随机分为五组,正常组和OGD组,后者包括非转染组、miR对照组、miR-134抑制剂组... 目的探讨miR-134在乳鼠脑皮层神经元氧-糖缺失(oxygen glucosedeprivation,OGD)致缺血损伤中的作用及其可能分子机制。方法离体培养乳鼠脑皮层神经元10d后,随机分为五组,正常组和OGD组,后者包括非转染组、miR对照组、miR-134抑制剂组、miR-134前体组。按照分组加入饲养液中感染24h换液,72h后对OGD组进行OGD处理。利用噻唑蓝(MTT)法检测神经元生存率,Western blotting检测热休克蛋白A12B(HSPA12B)表达水平,实时定量RT-PCR方法检测miR-134和HSPA12BmRNA表达水平以及通过双荧光素酶报告基因技术验证miR-134对HSPA12BmRNA 3’UTR的直接调控作用。结果与非转染组比较,在OGD致神经元缺血损伤中miR-134前体组,miR-134的表达水平明显提高,细胞存活率明显降低,HSPA12B蛋白水平明显降低,荧光素酶活性也明显降低(P〈0.05);而miR-134抑制剂组miR-134的表达水平明显降低,细胞存活率显著提高,HSPA12B蛋白水平明显提高,荧光素酶活性也明显升高(P〈0.05);但各组之间HSPA12BmRNA水平差异无统计学意义。结论miR-134通过负性调控HSPA12B蛋白表达水平,在OGD所致神经元缺血损伤中发挥重要作用,在mRNA水平上为治疗缺血性脑卒中提供了可能的分子靶标。 展开更多
关键词 miR-134 热休克蛋白A12B 氧-糖剥夺 缺血性脑损伤
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乳腺癌中miR-134的表达及其与上皮-间质转化的关系 预览 被引量:2
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作者 黄雅菁 吴正升 +1 位作者 王弦 吴强 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期648-651,共4页
目的 探讨miR-134在乳腺癌中的表达及临床意义,分析其表达与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物的相关性。方法 采用原位分子杂交法检测97例乳腺癌组织中miR-134的表达,同时应用免疫组化MaxVision两步法检测... 目的 探讨miR-134在乳腺癌中的表达及临床意义,分析其表达与上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物的相关性。方法 采用原位分子杂交法检测97例乳腺癌组织中miR-134的表达,同时应用免疫组化MaxVision两步法检测E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达,并分析三者表达与临床病理特征的关系。结果 miR-134在乳腺癌中的阳性率随组织学分级的升高而降低,其表达与HER-2表达呈负相关。miR-134的阳性率随E-cadherin表达下调及N-cadherin、vimentin表达上调而降低;E-cadherin在乳腺癌中表达下调以及N-cadherin、vimentin在乳腺癌中表达上调均与组织学分级升高、淋巴结转移和HER-2阳性以及ER、PR阴性有关。结论 miR-134在乳腺癌组织中的表达随肿瘤恶性程度的升高而下调,并与EMT关系密切,是乳腺癌的潜在生物学标志物。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 miR-134 上皮-间质转化
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miR-134miR-17~92基因簇与卵巢癌耐药的关系 被引量:2
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作者 王丹丹 王敏 +5 位作者 双婷 史聪 张萍 陶陶 史春雪 吴建磊 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期118-122,共5页
目的检测并验证miR-134及miR-17~92基因簇在紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞中的差异表达并探讨两者参与卵巢癌耐药的可能机制。方法2010年10月至2012年12月于中国医科大学附属盛京医院,用Affymetrix GeneChip miRNA芯片对紫杉醇耐药与敏... 目的检测并验证miR-134及miR-17~92基因簇在紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞中的差异表达并探讨两者参与卵巢癌耐药的可能机制。方法2010年10月至2012年12月于中国医科大学附属盛京医院,用Affymetrix GeneChip miRNA芯片对紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞miRNA基因表达谱进行分析。选取差异表达明显的miR-134和miR-17~92基因簇,采用Real-timePCR方法进一步验证芯片结果。应用生物信息学分析软件预测miR-134和miR-17~92基因簇各自潜在的靶基因并通过WesternBlot对部分靶基因进行验证。结果与敏感卵巢癌SKOV3细胞相比,耐药卵巢癌SKOV3-TR30细胞中miR-134低表达,miR-17~92基因簇高表达。软件预测得到miR-134基因簇潜在靶基因c-Myc,MRP1/ABCCl等共128个,软件预测得到miR-17~92基因簇潜在靶基因BIM,PTEN,ABCAl等共30个。与敏感卵巢癌SKOV3细胞相比,耐药卵巢癌SKOV3-TR30细胞中miR-134潜在靶基因c-Myc蛋白高表达;miR-17~92基因簇潜在靶基因BIM蛋白低表达(P均〈0.05),PTEN蛋白虽表达增高但差异无统计学意义。结论MicroRNA表达谱基因芯片可筛查出紫杉醇耐药与敏感卵巢癌细胞的差异表达基因。低表达miR-134和高表达的miR-17~92基因簇可能分别通过调节其潜在靶基因c-Myc及BIM蛋白表达参与卵巢癌化疗耐药。 展开更多
关键词 miRNA表达谱基因芯片 卵巢癌 耐药 miR-17~92 miR-134
miR-134靶基因筛选与鉴定在卵巢癌耐药中的应用研究 被引量:1
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作者 双婷 王敏 +4 位作者 常爽 周莹莹 闫效宇 史聪 胡婷 《中国实用妇科与产科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期51-54,共4页
目的应用Hybrid-FCR技术,筛选miR-134在人卵巢癌紫杉醇耐药SKOV3-TR30细胞中潜在靶基因,为卵巢癌耐药的研究提供理论依据。方法2011年9月至2013年9月在中国医科大学附属盛京医院通过RNA抽提,Hybrid-PCR引物设计,Hybrid-PCR及测序,B... 目的应用Hybrid-FCR技术,筛选miR-134在人卵巢癌紫杉醇耐药SKOV3-TR30细胞中潜在靶基因,为卵巢癌耐药的研究提供理论依据。方法2011年9月至2013年9月在中国医科大学附属盛京医院通过RNA抽提,Hybrid-PCR引物设计,Hybrid-PCR及测序,BioEdit和DNAclub分析所有测序结果并运用BLAST分析确定候选靶mRNA的确切信息。最后通过候选靶基因的3’UTR荧光素酶报告基因质粒及miRNA共转染HEK293细胞进行双荧光素酶报告基因检测。结果Hybrid-PCR方法筛选出SKOV3-TR30中miR-134的潜在靶基因有:C160orf72、PNAS-105、spermidinesynthase、VIM2、F-boxprotein2、GAPDH、PRPF6和RPL41,成功构建以上8个靶基因3’-UTR荧光素酶报告基因质粒;通过荧光素酶报告基因检测显示miR-134对8个候选靶基因3’-UTR区均具有直接结合作用。结论在SKOV3-T1t30细胞中,运用Hybrid-PCR方法共筛选得到8个miR-134候选靶基因;miR-134可能通过调控这些靶基因在卵巢癌耐药形成中发挥作用。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 耐药 miR-134 靶基因筛选
人miR-134真核表达载体的构建及其鉴定 预览
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作者 王明菊 张亮 +4 位作者 白顺杰 杨柳 周婵娟 房亮 谢鹏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期520-523,共4页
目的:构建包含外源性miR-134前体的真核表达载体,并使其在人类少突胶质瘤(oligodendroglia,OL)细胞中表达,为进一步研究miR-134的功能及作用靶标提供技术支持。方法:从人类OL细胞基因组DNA扩增miR-134前体,将所得目的片段克隆到... 目的:构建包含外源性miR-134前体的真核表达载体,并使其在人类少突胶质瘤(oligodendroglia,OL)细胞中表达,为进一步研究miR-134的功能及作用靶标提供技术支持。方法:从人类OL细胞基因组DNA扩增miR-134前体,将所得目的片段克隆到pEGFP—N1载体上,重组质粒经测序鉴定后将其转染至人类OL细胞中,荧光倒置显微镜观察增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein。EGFP)的表达情况,并采用荧光定量PCR检测miR-134基因水平的表达。结果:pEGFP—miR-134重组质粒经酶切、PCR鉴定可见目的条带与预期结果一致,经测序可见插入序列正确。将重组质粒转染0L细胞后,荧光定量PCR结果示pEGFP—N1空质粒转染组与空白对照组的miR-134表达水平无统计学差异(P=0.882);pEGFP—miR-134质粒转染组miR-134表达水平是pEGFP—N1空质粒转染组的52倍,两者具有统计学差异(P=0.023)。结论:通过构建真核细胞表达质粒可以高效表达外源性microRNA分子,为后续的研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 miR-134 微小RNA 真核表达载体 转染
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MiR-134通过靶向调节KRAS抑制786-0肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程 预览 被引量:4
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作者 鲍美玲 钱健 +6 位作者 张少波 李双 张磊 赵睿哲 秦超 邵鹏飞 殷长军 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2014年第6期393-398,共6页
目的 探索miR-134在肾癌组织中的表达并研究其对肾透明细胞癌细胞786-0上皮间质转化的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR 134在20对肾癌组织和786-0细胞中的表达情况;miR-134模拟物转染786-0后,划痕实验和Transwell... 目的 探索miR-134在肾癌组织中的表达并研究其对肾透明细胞癌细胞786-0上皮间质转化的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR 134在20对肾癌组织和786-0细胞中的表达情况;miR-134模拟物转染786-0后,划痕实验和Transwell实验分别检测肾癌细胞迁移和侵袭能力的改变情况,Western blot检测细胞中靶蛋白KRAS及其相关信号通路蛋白表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-134与KRAS 3'-UTR结合情况.结果 MiR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中明显低表达(P<0.01);miR-134模拟物转染后能够抑制肿瘤细胞侵袭(P<0.01)和迁移的能力(P<0.05),显著降低肿瘤细胞中KRAS蛋白的水平(P<0.05)并抑制RAS/MAPK/ERK通路中关键蛋白p-ERK的表达(P<0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-134能与KRAS 3’-UTR结合,显著降低荧光值(P<0.05).结论 MiR-134在肾透明细胞癌中显著低表达,能通过靶向抑制KRAS表达调控下游RAS/MAPK/ERK通路活性,阻滞786-0细胞上皮间质转化过程,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移. 展开更多
关键词 miR-134 微小RNA 上皮间质转化 KRAS 肾癌
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MicroRNA-134/CREB/pCREB通路在癫痫中的表达及意义 预览 被引量:2
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作者 王倩 陈阳美 +2 位作者 郭靖 杨小兰 谢运兰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第6期28-33,I0002,I0003共8页
目的探讨miR-134、CREB、pCREB在癫痫大鼠海马及难治性癫痫患者颞叶脑组织中的表达及意义。方法难治性癫痫患者及非癫痫对照组颞叶组织、氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠及空白对照组海马组织中,应用实时荧光定量PCR技术检测microRNA-134(miR-... 目的探讨miR-134、CREB、pCREB在癫痫大鼠海马及难治性癫痫患者颞叶脑组织中的表达及意义。方法难治性癫痫患者及非癫痫对照组颞叶组织、氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠及空白对照组海马组织中,应用实时荧光定量PCR技术检测microRNA-134(miR-134)的表达,用Western blot方法检测CREB及p CREB的表达,用免疫组织化学方法检测人脑颞叶皮质及大鼠海马区CREB、p CREB的表达。结果与对照组相比miR-134表达在难治性癫痫患者中明显降低(P〈0.05),在癫痫模型组中点燃后3、7、14、60 d明显降低(P〈0.05),1 d与30 d表达降低较对照组差异无显著性(P〉0.05);癫痫模型组CREB在3、7、14、60 d时间点明显升高(P〈0.05)、pCREB各时间点表达均高于空白对照组(P〈0.05)。结论难治性癫痫患者颞叶皮质及癫痫动物海马中miR-134表达下降,CREB、pCREB表达升高,提示其可能在癫痫发生发展机制中起重要作用。 展开更多
关键词 miR-134 CREB PCREB 难治性癫痫 突触重塑
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miR-134在人垂体腺瘤组织中的表达及其意义
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作者 庞其军 赵颖 +2 位作者 郗艳国 段世博 李国京 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第17期3328-3333,共6页
目的:探讨垂体腺瘤患者miR-134的表达及意义,分析其表达水平与无功能垂体腺瘤(non—functioningpimitaryadenomas,NFPA)增殖侵袭能力的相关性。方法:选择2010年6月至2013年7月本院收集垂体腺瘤标本104例以及8例尸检正常腺垂体的... 目的:探讨垂体腺瘤患者miR-134的表达及意义,分析其表达水平与无功能垂体腺瘤(non—functioningpimitaryadenomas,NFPA)增殖侵袭能力的相关性。方法:选择2010年6月至2013年7月本院收集垂体腺瘤标本104例以及8例尸检正常腺垂体的临床资料。采用实时荧光定量PCR、免疫组织化学技术检测Ki-67、MEG3、miR-134等在NFPA组织中的表达水平,并分析数据。结果:miR-134在NFPA组织中表达水平显著低于正常腺垂体和其他类型垂体腺瘤(P〈0.01);miR-134的表达水平与NFPA患者肿瘤侵袭性、肿瘤细胞Ki-67阳性率及发病年龄呈负相关(P〈0.01)。结论:miR-134表达下调可能是NFPA肿瘤发生及肿瘤呈侵袭样生长的重要因素,miR-134可作为诊断和评估NFPA预后的参考指标。 展开更多
关键词 无功能垂体腺瘤 miR-134 增殖侵袭能力
miR-134在无功能垂体腺瘤中的表达及其与肿瘤增殖侵袭能力的关系
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作者 蔡锋 姚勇 +3 位作者 焦永辉 代从新 刘小海 王任直 《神经疾病与精神卫生》 2013年第2期117-120,124共5页
目的检测miR-134在正常垂体组织和各垂体腺瘤亚型中的表达情况,分析其表达水平与无功能垂体腺瘤(NFPA)增殖侵袭能力的相关性。方法收集垂体腺瘤标本52例(NFPA33例,PRL腺瘤5例,GH腺瘤9例,ACTH腺瘤5例)和尸检正常腺垂体4例及临床... 目的检测miR-134在正常垂体组织和各垂体腺瘤亚型中的表达情况,分析其表达水平与无功能垂体腺瘤(NFPA)增殖侵袭能力的相关性。方法收集垂体腺瘤标本52例(NFPA33例,PRL腺瘤5例,GH腺瘤9例,ACTH腺瘤5例)和尸检正常腺垂体4例及临床相关病例资料,利用免疫组织化学、实时荧光定量PCR(qRT—PCR)等实验技术检测miR-134、MEG3和Ki-67等在各标本中的表达量,并结合病例资料分析数据。结果mIR-134在NFPA中表达水平明显低于其他类型垂体腺瘤和正常腺垂体(P〈0.01);并且miR-134的表达水平与NFPA患者发病年龄、肿瘤细胞Ki-67阳性率及肿瘤侵袭性呈负相关(P〈0.01)。结论miR-134表达下调可能是NFPA肿瘤发生及肿瘤呈侵袭样生长的重要原因之一;miR-134有望成为用于NFPA诊疗的新靶点。 展开更多
关键词 无功能垂体腺瘤 miR-134 MEG3 印迹基因 增殖侵袭能力
MicroRNA-134靶向下调Nanog影响胶质瘤细胞增殖和凋亡研究 预览 被引量:2
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作者 杨洋 牛朝诗 +3 位作者 程传东 李仲颖 汪炎 李冬雪 《中华神经外科疾病研究杂志》 CAS 2013年第4期300-304,共5页
目的探讨微小RNA-134(microRNA-134,miR-134)靶向下调Nanog基因对胶质瘤细胞增殖和凋亡水平的影响。方法建立稳定表达miR-134的胶质瘤细胞株,通过逆转录酶-聚合酶链反应(RT—PCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)法分别检测细胞中... 目的探讨微小RNA-134(microRNA-134,miR-134)靶向下调Nanog基因对胶质瘤细胞增殖和凋亡水平的影响。方法建立稳定表达miR-134的胶质瘤细胞株,通过逆转录酶-聚合酶链反应(RT—PCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)法分别检测细胞中Nanog的mRNA和蛋白水平改变;四唑盐比色法(MTF)检测细胞增殖水平改变;流式细胞术和透射电镜检测细胞凋亡变化。结果建立稳定表达miR-134的胶质瘤细胞株;miR-134高表达的胶质瘤细胞中Nanog的mRNA和蛋白表达水平显著下调;miR-134高表达的胶质瘤细胞增殖水平下降、细胞凋亡增加。结论胶质瘤细胞中miR-134高表达可下调靶基因Nanog的mRNA和蛋白水平,从而抑制胶质瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡增加。 展开更多
关键词 微小RNA-134 NANOG基因 胶质瘤 增殖 凋亡
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miRNA-134的功能研究及展望 预览
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作者 杨洋(综述) 牛朝诗(审校) 《中国临床神经外科杂志》 2013年第4期248-250,共3页
MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码单链RNA,可通过与靶基因mRNA的3'UTR完全或不完全配对形成双链体,引起靶基因mRNA降解或翻译后抑制。其具有最广泛的基因调节功能,能够在发育时间、增殖分化、细... MicroRNAs(miRNAs)是在真核生物中发现的具有调控功能的内源性非编码单链RNA,可通过与靶基因mRNA的3'UTR完全或不完全配对形成双链体,引起靶基因mRNA降解或翻译后抑制。其具有最广泛的基因调节功能,能够在发育时间、增殖分化、细胞凋亡、细胞应激等n,细胞进程中进行调节。研究显示,miRNAs在调控神经系统的发育和成熟中亦发挥关键作用。 展开更多
关键词 MIRNAS miR-134 胚胎干细胞
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