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微RNA?203在七氟醚抑制肺癌A549细胞侵袭和迁移中的作用及其机制
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作者 安波 王庆锋 刘峥嵘 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2019年第2期166-171,共6页
目的 探讨微RNA(miR)?203在七氟醚抑制肺癌A549细胞侵袭和迁移中的作用及其机制.方法 以2%、4%和6%七氟醚处理A549细胞4 h后,采用Transwell小室实验检测细胞的侵袭和迁移能力,RT?PCR检测细胞中miR?203的表达.生物信息学软件预测和双荧... 目的 探讨微RNA(miR)?203在七氟醚抑制肺癌A549细胞侵袭和迁移中的作用及其机制.方法 以2%、4%和6%七氟醚处理A549细胞4 h后,采用Transwell小室实验检测细胞的侵袭和迁移能力,RT?PCR检测细胞中miR?203的表达.生物信息学软件预测和双荧光素酶报告基因实验检测miR?203和BCAT1的靶向关系.采用脂质体法转染miR?203抑制剂或pcDNA3.1?BCAT1过表达载体质粒后,RT?PCR检测miR?203的表达,免疫印迹检测BCAT1蛋白的表达,Transwell小室实验观察下调miR?203或上调BCAT1表达对七氟醚处理的A549细胞侵袭和迁移的影响.结果 七氟醚能够呈浓度依赖性抑制A549细胞侵袭和迁移,并促进miR?203的表达.双荧光素酶报告基因实验证实BCAT1是miR?203的靶基因.下调miR?203表达可逆转七氟醚对A549细胞侵袭和迁移的抑制作用,并上调BCAT1蛋白的表达;同时上调BCAT1表达可逆转七氟醚对A549细胞侵袭和迁移的抑制作用.结论 miR?203参与七氟醚抑制肺癌A549细胞侵袭和迁移的作用,其作用机制可能与靶向抑制BCAT1的表达有关. 展开更多
关键词 七氟醚 微RNA?203 侵袭 迁移 BCAT1
微小RNA-203通过靶点LASP1对喉癌细胞侵袭性及凋亡的调控作用研究
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作者 谭杰 韩琳 +4 位作者 静媛媛 郑宏伟 申金霞 张立红 余力生 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期171-175,共5页
目的:探讨微小RNA-203(microRNA-203)在喉癌发生中的作用及潜在机制,阐明microRNA-203与LASP1的关系及相互作用。方法:通过实时定量聚合酶连反应(qRT-PCR)检测microRNA-203在喉癌及癌周组织中的表达。分别通过Transwell检测法和流式细... 目的:探讨微小RNA-203(microRNA-203)在喉癌发生中的作用及潜在机制,阐明microRNA-203与LASP1的关系及相互作用。方法:通过实时定量聚合酶连反应(qRT-PCR)检测microRNA-203在喉癌及癌周组织中的表达。分别通过Transwell检测法和流式细胞计数检测microRNA-203对喉癌细胞的侵袭和凋亡的调控作用。双荧光素酶报告基因检测使microRNA-203与LASP1达到结合状态。通过qRT-PCR和Western blot方法检测转染microRNA-203类似物或microRNA-203抑制剂后喉癌细胞中mRNA和蛋白质水平的LASP1表达。最后通过拯救实验来检测microRNA-203是否通过其靶点LASP1来调控喉癌的进展。结果:microRNA-203在喉癌组织和细胞内有低度表达。人喉癌细胞Hep-2中敲除microRNA-203可以促进其侵袭性,并抑制其凋亡。通过双荧光素酶报告基因检测发现LASP1是microRNA-203基因的靶点。LASP1的表达由microRNA-203基因负相调节。拯救实验表明,microRNA-203基因通过其靶点LASP1对喉癌细胞的侵袭和凋亡进行调控。结论:低度表达的microRNA-203可以通过抑制LASP1来促进喉癌细胞的侵袭并抑制其凋亡。 展开更多
关键词 微小RNA-203 喉肿瘤 细胞侵袭 凋亡 LASP1
胃癌中miR-203的表达水平及其与临床病理参数和预后的关系 被引量:1
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作者 季超 王梦桥 黄河 《中国临床研究》 CAS 2018年第7期870-874,共5页
目的检测微小核糖核酸(microRNA,miR)-203在胃癌组织中的表达水平,探讨其与胃癌患者临床病理参数和预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测86例胃癌组织及相应癌旁组织中miR-203表达水平,分析miR-203表达水平对胃癌... 目的检测微小核糖核酸(microRNA,miR)-203在胃癌组织中的表达水平,探讨其与胃癌患者临床病理参数和预后的关系。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测86例胃癌组织及相应癌旁组织中miR-203表达水平,分析miR-203表达水平对胃癌患者临床病理参数和3年总生存率的影响。结果 miR-203在胃癌组织中相对表达水平明显低于癌旁组织,差异有统计学意义(0.34±0.06 vs 1.02±0.19,P〈0.05)。miR-203的表达与胃癌患者肿瘤大小、病理分化程度及TNM分期有关(P均〈0.01),与患者年龄、性别及淋巴结转移无关(P均〉0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明,miR-203低表达者3年生存率显著低于miR-203高表达者3年生存率(46.38%vs 88.24%,P〈0.01)。COX分析结果表明,miR-203低表达、TNM分期高是影响胃癌患者预后的独立危险因素(HR=0.477,95%CI:0.298~0.762,P〈0.01;HR=2.503,95%CI:1.110~5.644,P〈0.01)。结论 miR-203在胃癌组织中低表达,与患者肿瘤大小、病理分化程度、TNM分期及3年生存率有关,是影响胃癌患者预后的独立危险因素。 展开更多
关键词 胃癌 微小核糖核酸-203 临床病理参数 3年生存率 预后
微小RNA-203通过SNAI2的靶向作用对胃癌细胞SGC7901侵袭和凋亡的影响 被引量:1
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作者 张伟强 杨文革 丁立腾 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期618-620,共3页
目的观察微小RNA(miRNA,miR)-203通过SNAI2对胃癌细胞SGC7901侵袭和凋亡的影响。 方法(1)脂质体转染将miR-203 mimics转入胃癌细胞SGC7901,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染效果,Transwell实验和流式细胞术检测... 目的观察微小RNA(miRNA,miR)-203通过SNAI2对胃癌细胞SGC7901侵袭和凋亡的影响。 方法(1)脂质体转染将miR-203 mimics转入胃癌细胞SGC7901,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染效果,Transwell实验和流式细胞术检测细胞侵袭和凋亡。(2)Real-time PCR和Western blot检测转染miR-203 mimics后在胃癌细胞中SNAI2的表达水平。(3)小干扰RNA(siRNA)干扰胃癌细胞SGC7901中SNAI2的表达水平,Western blot验证敲减效果,并检测敲减SNAI2后细胞侵袭和凋亡。(4)转染miR-203 mimics后,脂质体转染SNAI2表达质粒,检测细胞侵袭和凋亡情况。 结果(1)胃癌细胞SGC7901转染miR-203 mimics后,miR-203的表达水平为6.34±0.73,对照组的表达水平为1.26±0.21,两组比较差异有统计学意义(t=1.528,P=0.024)。(2)转染miR-203 mimics组穿透滤膜的细胞数明显少于对照组穿膜细胞数,两组比较差异有统计学意义(t=1.781,P=0.016)。(3)流式细胞术结果显示,对照组细胞凋亡率为(7.27±1.37)%,转染miR-203 mimics组胃癌细胞SGC7901的凋亡明显增加,为(38.62±6.27)%,两组比较差异有统计学意义(χ2=7.373,P=0.009)。(4)转染SNAI2后,miR-203对胃癌细胞SGC7901的促凋亡作用被反转,转染SNAI2组的细胞凋亡率降低为(14.03±3.60)%,和miR-203 mimics组比较,差异有统计学意义(χ2=4.162,P=0.036)。(5)与对照组比较,siRNA抑制SNAI2后,SGC7901细胞的凋亡明显增加,为(47.92±7.14)%,两组比较差异有统计学意义(χ2=10.373,P=0.004)。 结论miR-203能够通过靶向调控SNAI2而降低胃癌细胞SGC7901的侵袭能力并促进其凋亡。 展开更多
关键词 胃癌 微小RNA-203 SNAI2 侵袭 凋亡
微小RNA-203在乳腺导管增生性疾病中表达及其临床意义
5
作者 张娜 孙华朋 廖晓锋 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期1030-1033,共4页
目的检测微小RNA(miRNA,miR)-203mRNA在乳腺浸润性导管癌(IDC)及增生性病变中的表达,探讨在各病变中的作用和临床病理间的关系。方法应用一步法反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测IDC及癌旁组织各60例及99例乳腺增生性病变和22... 目的检测微小RNA(miRNA,miR)-203mRNA在乳腺浸润性导管癌(IDC)及增生性病变中的表达,探讨在各病变中的作用和临床病理间的关系。方法应用一步法反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)检测IDC及癌旁组织各60例及99例乳腺增生性病变和22例正常乳腺新鲜标本中miR-203mRNA表达;并结合临床病理特征分析。结果miR-203mRNA表达强度在正常乳腺组织、导管上皮普通性增生(UDH)、导管上皮非典型增生(ADH)和导管原位癌(DCIS)及IDC中分别为1.36、0.98、0.79、0.66和0.42,逐渐减弱且差异有统计学意义(P=0.005)。RT-PCR结果显示miR-203mRNA:(1)在IDC60例和癌旁组织中的表达水平分别为12%、89%,差异有统计学意义(P=0.003);(2)区域淋巴结转移:表达强度显示阳性组显著低于阴性组,NO〉N1〉N2期(P=0.000);(3)临床TNM分期:表达强度两两比较显示Ⅰ期〉Ⅲ期(P=0.000);(4)组织学分级中:表达强度Ⅰ级〉Ⅱ级〉Ⅲ级(P=0.000)。(5)雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(C-erbB-2)表达的关系:表达强度在ER、PR、C-erbB-2(-)与ER、PR、C-erbB-2(++)、( )比较,差异有统计学意义(P=0.003)。结论在IDC和不同乳腺增生性组织中其蛋白表达强度存在差异。miR-203基因异常表达在IDC发生发展过程中起重要的调控作用。 展开更多
关键词 微小RNA-203 乳腺浸润性导管癌 乳腺增生性病变
微小RNA-203在结直肠癌中的表达及其对细胞侵袭、迁移能力的影响
6
作者 李茶香 罗云春 胡汉卿 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期1265-1267,共3页
目的观察微小RNA(miRNA,miR)-203在结直肠癌细胞株中的表达,及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-203在结直肠癌细胞株中表达,根据细胞转染不同的片段,分别将结直肠癌... 目的观察微小RNA(miRNA,miR)-203在结直肠癌细胞株中的表达,及其对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响。方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测miR-203在结直肠癌细胞株中表达,根据细胞转染不同的片段,分别将结直肠癌细胞分为3组:空白对照组、miR-203模拟物组和miR-203抑制物组。Transwell法及细胞划痕实验检测miR-203对结直肠癌细胞株侵袭及迁移能力的影响;噻唑蓝(MTT)法检测结直肠癌细胞黏附能力。结果miR-203在结直肠癌细胞系中表达均显著下调。miR-203模拟物组细胞的侵袭数为(45.9±6.5)个,与对照组比较,差异有统计学意义(P=0.001);细胞划痕实验显示miR-203模拟物组的细胞迁移率显著低于对照组(P=0.023),细胞黏附实验表明miR-203可抑制结直肠癌细胞的黏附能力。结论miR-203在结直肠癌中表达下调,过表达miR-203可抑制结直肠癌细胞的侵袭及迁移能力。 展开更多
关键词 微小RNA-203 结直肠癌 侵袭 迁移
miR-203与肿瘤关系的研究进展 被引量:2
7
作者 冯磊 徐明清 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2017年第2期259-263,共5页
目的从微小RNA-203(microRNA-203,miR-203)的生成、组织分布以及其与肿瘤的关系方面对其做一综述。方法通过查阅并筛选国内外的相关文献,归纳并总结有关miR-203的生成、组织分布及其与肿瘤关系的最新研究情况。结果尽管目前有关miR-... 目的从微小RNA-203(microRNA-203,miR-203)的生成、组织分布以及其与肿瘤的关系方面对其做一综述。方法通过查阅并筛选国内外的相关文献,归纳并总结有关miR-203的生成、组织分布及其与肿瘤关系的最新研究情况。结果尽管目前有关miR-203在恶性肿瘤中的作用的研究结果令人振奋,但是只有miR-203的少部分生物学功能得到了鉴定,与之相对应的下游靶基因的调控机制亦尚未完全阐明。结论随着相关研究的不断深入,miR-203有可能在肿瘤的分级、分类、诊断、治疗及预后方面起到更加积极的作用。 展开更多
关键词 微小RNA-203 靶基因 肿瘤 研究进展
MicroRNA-203在结直肠癌研究中的进展 被引量:4
8
作者 彭易 彭秀达 +4 位作者 刘龙飞 卢先州 彭扬娥 李峰 周筱筠 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第12期2394-2396,2400共4页
结直肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤。目前认为结直肠癌的形成是一个多因素、多步骤的过程,其具体发病机制尚不清楚。microRNA是一类非编码小分子RNA,能在转录后水平调控靶基因的表达,参与肿瘤的增殖、侵袭和转移,甚至调节肿瘤化... 结直肠癌是我国常见的消化道恶性肿瘤。目前认为结直肠癌的形成是一个多因素、多步骤的过程,其具体发病机制尚不清楚。microRNA是一类非编码小分子RNA,能在转录后水平调控靶基因的表达,参与肿瘤的增殖、侵袭和转移,甚至调节肿瘤化疗敏感性。学者普遍认为mircroRNA-203(mir-203)是抗癌小分子RNA,但与以往不同的是mir-203在结直肠癌肿的表达水平仍存在争议。本文将概述mir-203在结直肠癌的发生、发展、诊断、预后以及药物抗性中发挥的各类生物学作用。阐述mir-203在结直肠癌不同信号通路中的作用,探索其在结直肠癌研究中的全部潜能。 展开更多
关键词 结直肠癌 mircroRNA-203 靶蛋白 信号通路 耐药性
MicroRNA-203抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移的机制研究 预览 被引量:2
9
作者 郭清皓 蔡钧 +1 位作者 杨世疆 蒋林涛 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期32-37,共6页
目的 探讨microRNA-203(miR-203)对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响及机制.方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定miR-203在正常成骨细胞hFOB及骨肉瘤细胞系中的表达,将MG-63细胞系分成miR-203组、Scramble组、RAB22A组、NC组,Lipofe... 目的 探讨microRNA-203(miR-203)对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响及机制.方法 通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定miR-203在正常成骨细胞hFOB及骨肉瘤细胞系中的表达,将MG-63细胞系分成miR-203组、Scramble组、RAB22A组、NC组,Lipofectamine 2000分别转染miR-203 mimics、Scrambles、pcDNA3.1-RAB22A、空白对照质粒;通过噻唑蓝(MTT)实验测定增殖能力,细胞划痕实验测定迁移能力;通过Target Scan和双荧光素酶实验预测及验证miR-203与RAB22A基因的靶向调节关系;RT-PCR测定RAB22A mRNA表达水平;Western blot测定E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平.结果 miR-203在骨肉瘤细胞系SAOS-2、SOSP-9607、U2OS及MG-63中较hFOB细胞系表达降低.MTT显示,在培养48和72 h后,miR-203组相对细胞数少于Scramble组(P〈0.05);培养24 h后,Scramble组细胞相对划痕面积小于miR-203组(P〈0.05);双荧光素酶实验示,miR-203与RAB22A基因存在靶向调节关系.RAB22A组相对划痕面积小于NC组(P〈0.05);MTT显示,在培养24、48和72 h后,RAB22A组相对细胞数多于NC组(P〈0.05);RAB22A组与NC组比较,E-cadherin下调表达,N-cadherin上调表达,Vimentin上调表达.结论 miR-203通过下调RAB22A基因表达,抑制上皮间质转化,进而抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移. 展开更多
关键词 miR-203 骨肉瘤 增殖 迁移 microRNA-203
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微小RNA-203在宫颈癌调控机制作用的研究进展 预览
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作者 高雅茹 赵卫红 郝敏 《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》 CAS 2016年第1期88-91,共4页
宫颈癌是发展中国家女性最常见的恶性肿瘤之一,为导致女性死亡的主要原因之一。目前已在宫颈癌中发现多种微小RNA(miRNA)表达异常。miRNA-203为上皮特异性miRNA,作为抑癌因子参与宫颈癌的发生、发展。miRNA-203在宫颈癌增殖、侵袭、... 宫颈癌是发展中国家女性最常见的恶性肿瘤之一,为导致女性死亡的主要原因之一。目前已在宫颈癌中发现多种微小RNA(miRNA)表达异常。miRNA-203为上皮特异性miRNA,作为抑癌因子参与宫颈癌的发生、发展。miRNA-203在宫颈癌增殖、侵袭、迁移及凋亡等肿瘤生物学特性中,扮演重要角色。近年关于miRNA-203在恶性肿瘤调控机制中作用的研究日益增多。最新研究表明,miRNA-203在宫颈癌的表达受DNA甲基化、人乳头状瘤病毒(HPV)蛋白、转录因子等上游机制调控,并通过调控下游靶蛋白而发挥其抑癌作用。笔者拟就miRNA-203的生物学功能及其在宫颈癌调控机制中的作用研究进展进行综述如下。 展开更多
关键词 微RNA-203 宫颈肿瘤 调控
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微小RNA-203抑制胶质母细胞瘤干细胞的干细胞特性 被引量:2
11
作者 邓一帆 祝刚 +2 位作者 黄小山 李百升 秦忠宗 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期675-677,共3页
目的培养胶质母细胞瘤干细胞,观察微小RNA(miR)-203对其干细胞的影响,探讨其在胶质母细胞瘤基因治疗中的应用。方法体外原代培养胶质母细胞瘤组织,免疫磁珠法分选CD133^+细胞;免疫荧光染色检测分选后细胞CD133、巢蛋白(Nestin... 目的培养胶质母细胞瘤干细胞,观察微小RNA(miR)-203对其干细胞的影响,探讨其在胶质母细胞瘤基因治疗中的应用。方法体外原代培养胶质母细胞瘤组织,免疫磁珠法分选CD133^+细胞;免疫荧光染色检测分选后细胞CD133、巢蛋白(Nestin)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)的表达。将人miR-203模拟体和无意义寡核苷酸链(NC)分别转染胶质母细胞瘤干细胞作为miR-203组、NC组,用成球试验检测miR-203对胶质母细胞瘤干细胞自我更新能力的影响。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫荧光染色分别检测两组细胞CD133、Nestin、GFAP、MAP2的mRNA和蛋白的表达。结果培养的胶质母细胞瘤干细胞表达干细胞标记物CD133、Nestin,分化后细胞表达星形胶质细胞的标志物GFAP、神经元的标志物MAP2;转染后7d,当NC组细胞球数目为100%时,miR-203组一、二次球数目分别为(67.84±13.79)%和(30.53±8.91)%,差异均有统计学意义(P〈0.05);RT-PCR结果显示与NC组比较,miR-203组细胞CD133mRNA的相对表达水平为0.29士0.15,nestinmRNA为0.27±0.18;GFAP、MAP2mRNA表达升高,分别为7.89±3.99和2.59±1.16,差异有统计学意义(P〈0.05)。结论miR-203可以抑制胶质母细胞瘤干细胞的自我更新能力并促进其多向分化,可能成为新的针对胶质母细胞瘤的治疗策略。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 胶质母细胞瘤干细胞 微小RNA-203 自我更新 多向分化
微小RNA-203表达与骨肉瘤细胞生物学特征相关性的实验研究 预览 被引量:4
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作者 缪吴军 宋滇文 +6 位作者 周磊 孟通 范天奇 林在俊 万维 蔡小攀 肖建如 《海南医学院学报》 CAS 2016年第4期316-319,共4页
目的:研究微小RNA-203表达与骨肉瘤细胞生物学特征的相关性。方法:收集骨肉瘤组织和肉瘤旁正常组织,检测miRNA-203的表达量;培养骨肉瘤细胞株MG63和成骨细胞细胞株hFOBl.19,检测细胞中miRNA-203的表达量;转染miRNA-203的模拟物... 目的:研究微小RNA-203表达与骨肉瘤细胞生物学特征的相关性。方法:收集骨肉瘤组织和肉瘤旁正常组织,检测miRNA-203的表达量;培养骨肉瘤细胞株MG63和成骨细胞细胞株hFOBl.19,检测细胞中miRNA-203的表达量;转染miRNA-203的模拟物后6h、12h、18h、24h时,检测细胞增殖、侵袭能力以及相关基因的表达量。结果:骨肉瘤组织中miRNA-203的表达量低于肉瘤旁正常组织,骨肉瘤细胞株MG63中miRNA-203的表达量低于成骨细胞细胞株hFOBl.19;在骨肉瘤细胞株MG63中,miRNA-203的模拟物能够以时间依赖性的方式降低细胞活力、减少侵袭细胞的数目,抑制Bcl-2、cMet、Notch-3、MMP-9的表达。结论:骨肉瘤组织中微小RNA-203的表达量显著降低,增加微小RNA-203的表达能够抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭,其靶基因为Bcl-2、cMet、Notch-3、MMP-9。 展开更多
关键词 骨肉瘤 微小RNA-203 增殖 侵袭 靶基因
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微小RNA-203的生物学功能及其在口腔疾病中的作用 预览
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作者 耿奉雪 潘亚萍 《国际口腔医学杂志》 CAS 北大核心 2016年第6期685-689,共5页
微tbRNA-203(miR-203)具有多种生物学功能,可在不同水平调控下游基因的表达,参与肿瘤和炎症的形成和进展,是肿瘤早期诊断和预后判断的可靠分子标志物及治疗靶点。随着对炎症微环境下肿瘤形成机制的深入研究,miR-203调节炎症相关... 微tbRNA-203(miR-203)具有多种生物学功能,可在不同水平调控下游基因的表达,参与肿瘤和炎症的形成和进展,是肿瘤早期诊断和预后判断的可靠分子标志物及治疗靶点。随着对炎症微环境下肿瘤形成机制的深入研究,miR-203调节炎症相关肿瘤的机制成为新的研究热点。近年来,miR-203在口腔疾病中的作用引起了学者的关注,本文就miR-203的生物学功能,miR-203与口腔疾病的关系等研究进展作一综述。 展开更多
关键词 微小RNA-203 肿瘤 炎症 抑癌基因 炎症微环境
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微小RNA-203通过锌指神经转录因子2的靶向作用对胃癌细胞SGC7901侵袭和凋亡的影响 被引量:1
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作者 陈林昊 林达佳 王襄瑜 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2147-2150,共4页
目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-203通过锌指神经转录因子2(SNAI2)对胃癌细胞SGC7901侵袭和凋亡的影响.方法 胃癌细胞SGC7901使用含10%胎牛血清的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基,在37℃、5% C02培养箱培养.采用脂质体转染法将miR... 目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-203通过锌指神经转录因子2(SNAI2)对胃癌细胞SGC7901侵袭和凋亡的影响.方法 胃癌细胞SGC7901使用含10%胎牛血清的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基,在37℃、5% C02培养箱培养.采用脂质体转染法将miR-203 mimics转入胃癌细胞SGC7901,转染48 h后,提取SGC7901-miRNAcon、SGC7901-miR-203 mimic两组细胞总RNA,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染效果,Transwell实验和流式细胞术检测细胞侵袭和凋亡.Real-time PCR和Western blot检测转染miR-203后在胃癌细胞中SNAI2的表达水平.小干扰RNA(siRNA)干扰胃癌细胞SGC7901中SNAI2的水平,Western blot验证敲减效果,并检测敲减SNAI2后细胞侵袭和凋亡.转染miR-203 mimics后,脂质体转染SNAI2表达质粒,检测细胞侵袭和凋亡.结果 (1)胃癌细胞SGC7901转染miR-203 mimics后,miR-203的表达水平(6.68±0.53)明显高于miRNA con组(0.84±0.12),两组间差异有统计学意义(P<0.05).(2)流式细胞术结果显示,与miRNA con组的凋亡率(9.25±1.19)%比较,转染miR-203 mimics组胃癌细胞SGC7901的凋亡率为(32.73±5.94)%,较miRNA con组明显增加,两组间差异有统计学意义(P<0.05).(3)与miRNA con组比较,转染miR-203 mimics 48 h后,胃癌细胞株SGC7901、MGC-803、BGC-823中SNAI2的表达都下调,分别为16.52±3.28、13.37 ±3.06和14.93 ±3.49,两组间差异有统计学意义(P<0.05).(4)敲减SNAI2之后,细胞的侵袭能力明显下降,siRNA con组、siRNA-1组和siRNA-2组的侵袭细胞数量分别为(71.04 ±6.83)×10^6/L,(20.47 ±2.37)×10^6/L和(23.29±2.58)×10^6/L,与对照组比较,两组间差异有统计学意义(P<0.05).(5)流式细胞术的结果表明,转染SNAI2后,miR-203对胃癌细胞SGC7901的促凋亡作用被反转,siRNA con组、siRNA-1组和siRNA-2组的SGC7901细胞凋亡率分别为(10.74±1.26)%、(30.73±5.58)%和(16.29±2.14)%,siRNA-2组的 展开更多
关键词 胃癌 微小RNA-203 锌指神经转录因子2 侵袭 脱噬作用
MicroRNA-203对人下咽癌细胞转移能力的影响及其机制研究 预览 被引量:1
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作者 高丽 卞卡 《局解手术学杂志》 2015年第3期241-244,共4页
目的:研究MicroRNA-203对人下咽癌细胞迁移能力的影响及作用机理。方法利用生物信息学方法预测Mi-croRNA-203的下游调控靶分子,利用荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR、与Westenr blot等方法对其中与调节细胞迁移有关的靶分子MEKK1进行验... 目的:研究MicroRNA-203对人下咽癌细胞迁移能力的影响及作用机理。方法利用生物信息学方法预测Mi-croRNA-203的下游调控靶分子,利用荧光素酶报告基因实验、qRT-PCR、与Westenr blot等方法对其中与调节细胞迁移有关的靶分子MEKK1进行验证,证实下咽癌细胞中MEKK1的表达是否受MicroRNA-203的影响。通过细胞迁移实验研究MicroRNA-203对下咽癌细胞迁移能力的影响,进一步阐明可能影响下咽癌转移能力的因素。结果在过表达MicroRNA-203的下咽癌细胞中,Westenr blot检测靶基因蛋白表达量分析、qRT-PCR检测靶基因mRNA表达量和双荧光素酶报告基因实验结果均提示MicroRNA-203下调靶基因MEKK1的表达。细胞迁移实验证明过表达MicroRNA-203可显著抑制下咽癌细胞的迁移能力。结论 MEKK1是MicroR-NA-203的直接下游作用靶点,MicroRNA-203有可能通过负向调控MEKK1抑制下咽癌细胞的转移能力。 展开更多
关键词 MicroRNA-203 MEKK1 下咽癌 转移
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蜂毒素对人肝癌细胞生长的抑制作用及其机制探讨 预览
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作者 杨莹莹 赵斌 +2 位作者 孟晓明 黄成 李俊 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2015年第7期982-987,共6页
目的 研究蜂毒素对人肝癌细胞(Hep G2、SMMC-7721)生长的抑制作用及其机制。方法 采用MTT法检测蜂毒素对Hep G2和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,实时定量PCR检测细胞中microRNA-203(mir-203)以及PIK3CA mRNA的表达变化,Western blot... 目的 研究蜂毒素对人肝癌细胞(Hep G2、SMMC-7721)生长的抑制作用及其机制。方法 采用MTT法检测蜂毒素对Hep G2和SMMC-7721细胞增殖的抑制作用,实时定量PCR检测细胞中microRNA-203(mir-203)以及PIK3CA mRNA的表达变化,Western blot法检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(P-AKT)的表达变化,瞬时转染人mir-203 mimics过表达mir-203后应用实时定量PCR和Western blot检测mir-203对PI3K/AKT信号通路的作用。结果 与正常组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈浓度依赖性;实时定量PCR结果显示蜂毒素(1、2、4mg/L)可以明显升高mir-203的表达,PIK3CA mRNA的表达无明显改变;Western blot法结果显示蜂毒素(1、2、4 mg/L)可以降低PI3K以及P-AKT蛋白的表达。在Hep G2和SMMC-7721细胞中过表达mir-203后,与正常组及转染阴性对照组比较,PIK3CA mRNA的表达无明显改变但PI3K以及P-AKT的蛋白表达降低。结论 蜂毒素能抑制Hep G2和SMMC-7721细胞的增殖,其机制可能是通过上调mir-203的表达,进而在转录后水平靶向抑制PI3K的表达,抑制PI3K/AKT信号通路的活化。 展开更多
关键词 蜂毒素 人肝癌细胞 增殖抑制 表观遗传学 microRNA-203 PI3K/AKT信号通路
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MicroRNA-203及其与胶质瘤的关系研究进展 预览 被引量:1
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作者 张仕涛 郭世文 梁晨 《临床神经外科杂志》 CAS 2015年第4期308-310,共3页
神经胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,且其发病率随年龄增大有增高的趋势[1-2],也几乎是死亡率最高的脑内肿瘤。microRNA-203(miRNA-203)是新近发现的与胶质瘤密切相关的一类表达于真核生物的非编码蛋白质的短链RNA,近年来的研究发现m... 神经胶质瘤是最常见的颅内原发性肿瘤,且其发病率随年龄增大有增高的趋势[1-2],也几乎是死亡率最高的脑内肿瘤。microRNA-203(miRNA-203)是新近发现的与胶质瘤密切相关的一类表达于真核生物的非编码蛋白质的短链RNA,近年来的研究发现miRNA-203在胶质瘤中的异常表达与胶质瘤发病的关系密切。 展开更多
关键词 胶质瘤细胞 MicroRNA-203 颅内原发性肿瘤 神经胶质瘤 microRNA 编码蛋白质 负向调节 真核生物 荧光素酶 开放读码框架
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miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的研究 被引量:2
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作者 宋志芳 刘德伍 +4 位作者 彭燕 李津 章志伟 宁璞 刘移峰 《中国修复重建外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期343-350,共8页
目的 探讨miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的可能性及机制。方法 取包皮环切术获得的人正常包皮组织5例,采用0.25%胰蛋白酶-EDTA联合消化法分离表皮和真皮,应用Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化人表皮干细胞,倒置相差显微镜下观察... 目的 探讨miRNA-203转染诱导人表皮干细胞向汗腺细胞分化的可能性及机制。方法 取包皮环切术获得的人正常包皮组织5例,采用0.25%胰蛋白酶-EDTA联合消化法分离表皮和真皮,应用Ⅳ型胶原差速贴壁法纯化人表皮干细胞,倒置相差显微镜下观察细胞生长状况,行β1整合素(integrinβ1,ITGB1)、角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)、CK1、CK10、CK18、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)免疫细胞化学染色鉴定。通过脂质体转染将miRNA-203模拟物导入人表皮干细胞(实验组),转染对照miRNA模拟物作为对照组。免疫细胞化学染色法对转染后细胞行ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA单克隆抗体检测鉴定;实时荧光定量RT-PCR检测转染前及转染后72 h的细胞中miRNA-203、P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA mRNA相对表达量;Western blot法检测P63、ITGB1、CK19、CK1、CK10、CK18、CEA蛋白相对表达量;并对miRNA-203的mRNA表达与P63的mRNA和蛋白表达分别行Pearson相关分析。结果 转染前人表皮干细胞CK19、ITGB1阳性表达,转染后CK1、CK10、CK18、CEA阳性表达。实验组转染后细胞miRNA-203 mRNA相对表达量显著高于转染前(P〈0.05)。实验组转染后细胞CK1、CK10、CK18、CEA mRNA及蛋白的相对表达量均高于转染前及对照组,而P63、CK19、ITGB1 mRNA及蛋白的相对表达量均低于转染前和对照组,比较差异均有统计学意义(P〈0.05)。上述指标对照组与转染前比较差异均无统计学意义(P〉0.05)。转染前后miRNA-203的mRNA表达量与P63的mRNA和蛋白相对表达量均成负相关,转染前相关系数分别为—0.91(t=3.862,P=0.042)及—0.96(t=5.971,P=0.009);转染后相关系数分别为—0.92(t=4.283,P=0.031)及—0.95(t=5.842,P=0.011)。结论 miRNA-203能诱导人表皮干细胞分化为汗腺细胞,其作用可能是通过靶向抑制P63来实现的。 展开更多
关键词 表皮干细胞 汗腺细胞 分化 miRNA-203 P63
微小RNA-203在胶质母细胞瘤干细胞中的表达及其对细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 邓一帆 祝刚 +2 位作者 黄小山 李百升 秦忠宗 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期2085-2087,共3页
目的 培养胶质母细胞瘤干细胞,检测微小RNA-203(miR-203)在胶质母细胞瘤干细胞中的表达,并观察其对肿瘤干细胞增殖的影响.方法 对胶质母细胞瘤组织行体外原代培养,以CD133为标志物,免疫磁珠法分选胶质母细胞瘤干细胞;免疫荧光染色检... 目的 培养胶质母细胞瘤干细胞,检测微小RNA-203(miR-203)在胶质母细胞瘤干细胞中的表达,并观察其对肿瘤干细胞增殖的影响.方法 对胶质母细胞瘤组织行体外原代培养,以CD133为标志物,免疫磁珠法分选胶质母细胞瘤干细胞;免疫荧光染色检测分选所得细胞的CD133、巢蛋白(nestin)、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、微管相关蛋白2(MAP2)的表达,从而鉴定肿瘤干细胞.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测分选后CD133+细胞、CD133-细胞miR-203的表达;将miR-203模拟体和无意义寡核苷酸链(NC)分别转染胶质母细胞瘤干细胞作为miR-203、NC组,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染后24、48、72、96、120 h细胞生存率;流式细胞仪细胞检测转染后3d细胞凋亡率.结果 培养的胶质母细胞瘤干细胞成球样生长,表达干细胞标志物CD133、Nestin,分化后细胞表达星形胶质细胞的标志物GFAP、神经元的标志物MAP2;分选后CD133+细胞中miR-203的表达低于CD133-细胞;转染miR-203后24、48、72、96、120 h组的细胞生存率均降低,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测显示miR-203组的细胞凋亡率为(9.74±2.81)%,高于NC组的(3.95±0.91)%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 上调miR-203可能成为针对胶质母细胞瘤干细胞的基因治疗策略. 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 胶质母细胞瘤干细胞 微小RNA-203 细胞增殖
微小RNA-203在骨肉瘤中的表达及其生物学意义 被引量:4
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作者 李振伟 吴学建 +1 位作者 肖鹏 朱旭 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期1566-1568,共3页
目的 观察微小RNA (miRNA)-203在骨肉瘤中表达及其作用.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测35例骨肉瘤患者癌及癌旁组织miRNA-203表达水平,同时检测骨肉瘤细胞株(MG-63、HOS、U2OS)与正常成骨细胞株hFOB1.19的miRNA-203表... 目的 观察微小RNA (miRNA)-203在骨肉瘤中表达及其作用.方法 采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测35例骨肉瘤患者癌及癌旁组织miRNA-203表达水平,同时检测骨肉瘤细胞株(MG-63、HOS、U2OS)与正常成骨细胞株hFOB1.19的miRNA-203表达.通过噻唑蓝比色法(MTT)与Transwell实验观察miRNA-203对MG-63增殖、侵袭的影响.结果 相对于癌旁组织与hFOB1.19细胞,miRNA-203在骨肉瘤癌组织与骨肉瘤细胞株表达显著下调(P<0.01).在MG-63细胞株过表达miRNA-203可显著抑制细胞增殖(P<0.01),48、72 h的抑制率分别为21.32%、30.20%,miRNA-203组侵袭细胞数[(50±8)个]显著低于空载体组的(131±5)个(P<0.05).结论 miRNA-203在骨肉瘤中表达明显降低. 展开更多
关键词 骨肉瘤 微小RNA-203 增殖 侵袭
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