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豆豉纤溶酶的纯化及其性质研究 预览 被引量:69
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作者 阎家麒 童岩 《药物生物技术》 CAS CSCD 2000年第3期 149-152,共4页
由发酵大豆(豆豉)分离纯化一种活性强的纤溶酶,采用硫酸铵盐析,Sephadex G-10和Sephacryl S-200色谱纯化的纤溶酶,在SDS-PAGE上呈一条蛋白带,Mr31000,等电点8.6±0.2,纯... 由发酵大豆(豆豉)分离纯化一种活性强的纤溶酶,采用硫酸铵盐析,Sephadex G-10和Sephacryl S-200色谱纯化的纤溶酶,在SDS-PAGE上呈一条蛋白带,Mr31000,等电点8.6±0.2,纯化倍数44倍,纯酶化活31020UK/mg,活性回收率68%。由于该酶具有较强的催经纤维蛋白原溶解的作用,因而有望成为一种新型抗血栓药物或预防血栓病的保健食品。 展开更多
关键词 豆鼓纤溶酶 纯化 分离 抗血栓药 纳豆激酶
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响应面法优化纳豆激酶液体发酵 被引量:54
2
作者 胡升 梅乐和 姚善泾 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期 13-17,共5页
用响应面法对Bacillus subtilis液体发酵生产纳豆激酶的培养条件进行了优化.首先用Plackett-Burman方法对相关影响因素的效应进行评价并筛选出了有显著正效应的胰蛋白胨和有显著负效应的种龄、发酵温度和Na2HPO4浓度等4个因素,其他因素... 用响应面法对Bacillus subtilis液体发酵生产纳豆激酶的培养条件进行了优化.首先用Plackett-Burman方法对相关影响因素的效应进行评价并筛选出了有显著正效应的胰蛋白胨和有显著负效应的种龄、发酵温度和Na2HPO4浓度等4个因素,其他因素对纳豆激酶产量无显著影响.第2步用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域.最后由中心组合实验及响应面分析确定了主要影响因素的最佳条件.在优化培养条件下,液体发酵液中纳豆激酶浓度从1 005.73 IU/mL提高到1 314.48 IU/mL. 展开更多
关键词 响应面法 优化 纳豆激酶 液体发酵 培养条件 P1ackett-Burman方法
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纳豆激酶液体发酵条件的优化 被引量:55
3
作者 谢秋玲 郭勇 《华南理工大学学报:自然科学版》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第5期 127-131,共5页
纳豆激酶是从日本传统食品内豆中提取出来的一种具有溶血栓功能的酶。笔者从市售纳豆中分离出一株能产纳豆激酶的菌株,并对之进行液体培养,发现在pH7.0,接种量为2%,种龄24h,装液量10mL/100mL,碳源为木糖,浓... 纳豆激酶是从日本传统食品内豆中提取出来的一种具有溶血栓功能的酶。笔者从市售纳豆中分离出一株能产纳豆激酶的菌株,并对之进行液体培养,发现在pH7.0,接种量为2%,种龄24h,装液量10mL/100mL,碳源为木糖,浓度为2%,氮源为大豆蛋白胨,浓度为3%的条件下,接种后第四天为产酶高峰期,最高产酶量可达到787.1尿激酶单位/mL发酵液。 展开更多
关键词 纳豆激酶 液体发酵 药理 激酶
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纳豆激酶基因的克隆及其在枯草杆菌中的表达 被引量:27
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作者 刘北域 宋后燕 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期 338-340,共3页
为研究纳豆激酶(nattokinase,NK)的生物化学性质,以纳豆芽胞杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增包含启动子及3'端非翻译区的纳豆激酶全长基因序列。经鉴定后构建大肠杆菌-枯草杆菌穿梭表达质粒pBLNK,转化蛋白缺陷型枯草杆菌,筛选表... 为研究纳豆激酶(nattokinase,NK)的生物化学性质,以纳豆芽胞杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增包含启动子及3'端非翻译区的纳豆激酶全长基因序列。经鉴定后构建大肠杆菌-枯草杆菌穿梭表达质粒pBLNK,转化蛋白缺陷型枯草杆菌,筛选表达菌株。表达株培养15h后收集培养上清液,SDS-PAGE分析证实表达产物后,用超滤浓缩、分子筛、离子交换等步骤分离纯化重组NK,每升发酵液得纯度达95%的重组NK约100mg,比活性达12000u/mg。 展开更多
关键词 纳豆激酶基因 克隆 枯草杆菌 表达 纯化
豆豉中纳豆杆菌的筛选和纳豆激酶的初步分离 预览 被引量:33
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作者 杨艳燕 李顺意 +2 位作者 高尚 闫达中 陈勇 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2001年第6期 436-438,442,共4页
利用改良的培养基-纤维蛋白平板法,从我国传统食品豆豉中筛选出具有高纤溶活性的纳豆杆菌菌株;菌株液体发酵法制得粗酶液,采用沉淀法及柱层析等方法从发酵液中初步分离纳豆激酶;并应用体外溶栓实验考察分析了纳豆激酶的纤溶活性,为开发... 利用改良的培养基-纤维蛋白平板法,从我国传统食品豆豉中筛选出具有高纤溶活性的纳豆杆菌菌株;菌株液体发酵法制得粗酶液,采用沉淀法及柱层析等方法从发酵液中初步分离纳豆激酶;并应用体外溶栓实验考察分析了纳豆激酶的纤溶活性,为开发新型溶栓药物及保健食品提供了实验参考依据. 展开更多
关键词 纳豆杆菌 纳豆激酶 纤溶活性 豆鼓 纤维蛋白平板法
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纳豆激酶的发酵工艺研究 预览 被引量:31
6
作者 王正刚 丁贵平 蔡正森 《氨基酸和生物资源》 CAS 2001年第2期 17-21,共5页
以实验室选育的纳豆菌-6号(Bacillus natto6)为出发菌株,研究其固液两种发酵条件对纳豆激酶溶栓活力的影响,研究表明,纳豆菌适于固体发酵,37℃下24h,其活力可达1600IU/g以上。
关键词 纳豆激酶 纳豆菌 发酵工艺 溶栓药物
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纳豆激酶的研究进展 被引量:31
7
作者 陈志文 徐尔尼 《食品科技》 CAS 北大核心 2002年第2期66-68,共3页
纳豆激酶有很强的溶血栓能力,跟传统的一些溶栓剂相比,具有安全性好、成本低、口服有效等优点,极有可能开发为新一代的溶栓剂。介绍了纳豆激酶的分离纯化技术、生化特性,并对纳豆激酶的活性测定方法、影响纳豆激酶稳定性的因素及提... 纳豆激酶有很强的溶血栓能力,跟传统的一些溶栓剂相比,具有安全性好、成本低、口服有效等优点,极有可能开发为新一代的溶栓剂。介绍了纳豆激酶的分离纯化技术、生化特性,并对纳豆激酶的活性测定方法、影响纳豆激酶稳定性的因素及提高纳豆激酶酶产量的几种途径等最新研究成果进行了综述。 展开更多
关键词 纳豆激酶 活性测定 稳定性因素 高产量
纳豆、纳豆激酶与人体保健 预览 被引量:38
8
作者 江晓 董明盛 《中国酿造》 CAS 北大核心 2001年第4期 1-3,共3页
论述了纳豆与人体保健关系,特别是其中的功能因子--纳豆激酶特点及溶栓功能,指出利用微生物生产溶栓酶将是未来发展方向。
关键词 纳豆 纳豆激酶 溶栓功能 保健功能 保健食品
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一种食源性纤溶酶(纳豆激酶)酶学性质的研究 预览 被引量:26
9
作者 江晓 董明盛 《中国酿造》 CAS 北大核心 2002年第1期 23-25,共3页
纳豆激酶是一种新型食源性纤溶酶,具有易于提取,无任何毒副作用,溶栓效果好,体内作用时间长特点。实验以新鲜制备纳豆为原料,经生理盐水浸提,硫酸铵分级盐析,SephadexG-100层析获得纯纳豆激酶活性蛋白。实验表明。实验表明,该... 纳豆激酶是一种新型食源性纤溶酶,具有易于提取,无任何毒副作用,溶栓效果好,体内作用时间长特点。实验以新鲜制备纳豆为原料,经生理盐水浸提,硫酸铵分级盐析,SephadexG-100层析获得纯纳豆激酶活性蛋白。实验表明。实验表明,该酶分子量为28000Da等电点为9,在60℃以下,PH5-12均较稳定,其最适反应PH为8,最适反应温度为45℃,Mg^+和Co^2+离子对酶活有激活作用,而Cu^2+,Zn^2+和Al^3+等离子对该酶有明显的抑制作用。纳豆激酶酶学性质的研究对开发纳豆激酶成为新型溶栓制剂具有重要的实践意义。 展开更多
关键词 纳豆激酶 纤溶活性 酶学性质 食品
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枯草杆菌DC—2纳豆激酶基因的克隆及其融合蛋白在E.coli中的表达 预览 被引量:18
10
作者 彭勇 黄庆 张义正 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期 559-563,共5页
纳豆激酶是一种纤维蛋白溶解酶,有望开发成为新型的溶栓药物.从中国豆豉中分离的具有较强纤溶活性的枯草杆菌DC-2中提取总DNA,根据纳豆激酶(NK)基因序列设计引物,用PCR法扩增NK基因.序列分析表明,NK基因成熟肽编码区含有825 bp,编码275... 纳豆激酶是一种纤维蛋白溶解酶,有望开发成为新型的溶栓药物.从中国豆豉中分离的具有较强纤溶活性的枯草杆菌DC-2中提取总DNA,根据纳豆激酶(NK)基因序列设计引物,用PCR法扩增NK基因.序列分析表明,NK基因成熟肽编码区含有825 bp,编码275个氨基酸残基,与文献报道的序列分别有93.4%和94.5%同源性.将NK基因插入载体pGEX-4T1构建表达质粒pGEX-NK,转化大肠杆菌JM109后,经1 mmol/L IPTG诱导4 h,发现大量NK融合蛋白表达,并形成包涵体.SDS-PAGE分析表明,NK融合蛋白作为包涵体的分子量为53 kD.凝胶自动扫描结果显示,NK融合蛋白约占菌体可溶性蛋白的26%. 展开更多
关键词 枯草杆菌DC-2 纳豆激酶基因 融合蛋白 基因克隆 基因表达 大肠杆菌
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纳豆菌液体发酵生产纳豆激酶的研究 预览 被引量:28
11
作者 鲍时翔 田艳 +2 位作者 黄惠琴 凌华 吕家森 《药物生物技术》 CAS CSCD 2002年第6期 322-325,共4页
以纳豆菌Bacillus natto strain B-2023为出发菌株,对其液体发酵生产纳豆激酶进行了研究.实验考察了氮源、碳源、离子组成、表面活性剂、发酵温度和初始pH值对纳豆菌产酶的影响.在优化发酵条件基础上,发酵72h后通过纤维平板测活,其产酶... 以纳豆菌Bacillus natto strain B-2023为出发菌株,对其液体发酵生产纳豆激酶进行了研究.实验考察了氮源、碳源、离子组成、表面活性剂、发酵温度和初始pH值对纳豆菌产酶的影响.在优化发酵条件基础上,发酵72h后通过纤维平板测活,其产酶量相当于786尿激酶IU/ml. 展开更多
关键词 纳豆菌 液体发酵 生产 纳豆激酶
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纳豆激酶稳定性的研究 被引量:28
12
作者 董明盛 江晓 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期 13-15,共3页
纳豆激酶是一种新型溶栓酶,具有溶栓效率高,药效时间长以及无毒副作用等优点,实验研究了pH,温度,金属离子以及某些有机物质对该酶稳定性的影响,实验表明,该酶在45℃以下和pH7-9范围内酶活相对稳定,Mg^2+和Co^2+离子对酶活有激活... 纳豆激酶是一种新型溶栓酶,具有溶栓效率高,药效时间长以及无毒副作用等优点,实验研究了pH,温度,金属离子以及某些有机物质对该酶稳定性的影响,实验表明,该酶在45℃以下和pH7-9范围内酶活相对稳定,Mg^2+和Co^2+离子对酶活有激活作用,而Cu^2+,Zn^2+和Al^3+等离子对该酶有明显的抑制作用,牛血清蛋白,蛋白胨,明胶,甘油,丙二醇和海藻酸钠等能显著提高酶的耐热性,其中以明胶的作用最为明显,这些发现对液体酶的生产有重要的指导作用。 展开更多
关键词 纳豆激酶 纤溶活性 稳定性 纳豆枯草杆菌 大豆发酵食品
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纳豆激酶的分离纯化及生化研究 预览 被引量:23
13
作者 丁贵平 蔡正森 王正刚 《氨基酸和生物资源》 CAS 2001年第3期 13-16,共4页
用固体发酵工艺制得的纳豆中含有大量溶栓活性成分——纳豆激酶.经过生理盐水浸提,(NH4)2SO4分级沉淀.Sephdex柱层析等步骤,可以得一层析纯的纳豆激酶.冷冻干燥品经SDS-PAGE电泳显示有二组分存在.
关键词 纳豆激酶 纳豆 分离纯化 生化性能 发酵工艺
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纳豆激酶粗制液对家兔溶血栓作用及其机制研究 预览 被引量:26
14
作者 段智变 江汉湖 +3 位作者 张书霞 江晓 董名盛 赵晓燕 《营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期 46-51,共6页
目的: 观察纳豆激酶粗酶液体外、体内溶解血栓的作用.方法: 20% FeCl3制造兔颈动脉血栓模型;18只日本大耳兔,随机分为3组,即十二指肠肠腔注射纳豆激酶(Nattokinase,NK)高、低剂量实验组(分别4500 U/kg、2500 U/kg)、生理盐水模型对照组... 目的: 观察纳豆激酶粗酶液体外、体内溶解血栓的作用.方法: 20% FeCl3制造兔颈动脉血栓模型;18只日本大耳兔,随机分为3组,即十二指肠肠腔注射纳豆激酶(Nattokinase,NK)高、低剂量实验组(分别4500 U/kg、2500 U/kg)、生理盐水模型对照组.结果: 体外试验表明,纳豆菌株B.N.12液体发酵粗酶液作用血凝块10 h、22 h后,溶解率分别为78.23%、98.16%,对照组分别为21.43%、23.91%(P<0.05,P<0.01);动物试验表明,与对照组相比,NK高剂量组注射1.0 h、1.5 h后,凝血时间(coagulation time ,CT) (P<0.05)、凝血酶原时间(prothrombin time, PT) (P<0.05)、凝血酶时间(thrombin time, TT) (P<0.01)和活化的部分凝血活酶时间(activiated partial thrombopastin time ,APTT) (P<0.05)均显著延长,注射2 h后优球蛋白溶解时间(euglobulinlysis time, ELT)和纤维蛋白原(fibrinogen, FIG)含量显著降低(P<0.01、P<0.05),纤维蛋白降解产物(fibrinogen degradation products, FDP)含量明显增高(P<0.05),血浆D-二聚体(D-dimer)呈阳性,病理组织切片表明肺静脉、肾小球毛细血管中无明显血栓,只有少量红细胞聚积;低剂量组CT、PT和APTT各指标及FIG含量无显著变化,但ELT明显缩短(P<0.05),FDP含量、TT值显著增高(P<0.05),且血浆D-dimer呈阳性.结论: 纳豆激酶在体内和体外均具有明显的溶栓效果,提高纤溶活性、增强抗凝作用是其溶栓机制之一;纳豆激酶低剂量临床应用可能更具安全性. 展开更多
关键词 纳豆激酶 溶栓 纤溶 抗凝
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日本纳豆与中国豆豉营养功能成分的研究进展 预览 被引量:31
15
作者 宋永生 张炳文 《中国调味品》 CAS 北大核心 2004年第12期 6-9,26,共5页
许多研究表明,日本纳豆含有独特的纳豆激酶,具有溶血栓、降血压、防治糖尿病等功能;中国豆豉的加工处理可以使游离氨基酸、维生素B1、维生素B2、可溶性糖的含量增加,可以使糖苷型大豆异黄酮转化为活性更高的游离型大豆异黄酮等,进一步... 许多研究表明,日本纳豆含有独特的纳豆激酶,具有溶血栓、降血压、防治糖尿病等功能;中国豆豉的加工处理可以使游离氨基酸、维生素B1、维生素B2、可溶性糖的含量增加,可以使糖苷型大豆异黄酮转化为活性更高的游离型大豆异黄酮等,进一步提高了豆豉的营养与保健功能. 展开更多
关键词 豆鼓 纳豆 营养成分 功能成分
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纳豆激酶的纯化及活力测定 预览 被引量:18
16
作者 徐仲 赵晓东 《生物技术》 CAS CSCD 1997年第4期 16-18,共3页
利用SephadexG-100s柱凝胶层法从纳豆菌(BacillusNatto)提取液中分离纯化出具有体外活性的纳豆激酶,并通过纤维蛋白平板法测定其纤溶活力,发现其具有较强的促进纤维凝状态溶解的作用。
关键词 纳豆激酶 药物 纯化 活力测定
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一种潜在的溶血栓药物——纳豆激酶 预览 被引量:26
17
作者 谢秋玲 林剑 郭勇 《药物生物技术》 CAS CSCD 2001年第1期 51-53,共3页
纳豆中提取出纳豆激酶(Nattokinase,简称NK)具有溶栓作用还兼具促进体内组织纤溶酶型激活剂(tPA)合成的功效。NK是一个分子量小的单链肽,可利用枯草杆菌进行液体发酵生产,因此有望成为新一代的口服溶血栓药物。
关键词 纳豆激酶 溶血栓药物 纤溶酶型激活剂 枯草杆菌 单链肽
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纳豆激酶液体发酵条件的优化 被引量:27
18
作者 熊晓辉 梁剑光 熊强 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期 62-66,共5页
以纳豆枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis natto,BSN)为实验菌株,对其液体发酵生产进行了研究.实验考察了发酵条件(温度、接种量、起始pH、装液量)和培养基成分(碳源、氮源、金属离子等)对纳豆激酶产量的影响;在优化发酵条件和培养基的... 以纳豆枯草芽孢杆菌(Bacillus subtillis natto,BSN)为实验菌株,对其液体发酵生产进行了研究.实验考察了发酵条件(温度、接种量、起始pH、装液量)和培养基成分(碳源、氮源、金属离子等)对纳豆激酶产量的影响;在优化发酵条件和培养基的基础上,进行了5L发酵罐放大实验,产酶量为2250IU/mL. 展开更多
关键词 纳豆枯草芽孢杆菌 液体发酵 纳豆激酶 工艺优化 产量 培养基 溶血栓药
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纳豆激酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 预览 被引量:13
19
作者 黄志立 罗立新 《广东药学院学报》 CAS 2000年第4期 265-267,276,共4页
利用PCR方法以分泌纳豆激酶的纳豆杆菌染色体DNA为模板扩增纳豆激酶基因,将该基因克隆到质粒载体PUC19上,筛选重组子,通过限制性内切酶和PCR技术分析初步确定该重组子所携外源基因为纳豆激酶基因。利用基因重组技术构... 利用PCR方法以分泌纳豆激酶的纳豆杆菌染色体DNA为模板扩增纳豆激酶基因,将该基因克隆到质粒载体PUC19上,筛选重组子,通过限制性内切酶和PCR技术分析初步确定该重组子所携外源基因为纳豆激酶基因。利用基因重组技术构建了纳豆激酶基因的表达载体,并在大肠杆菌中进行了表达,凝块溶解时间法(CLT)测出表达产物具有溶解血栓性。在确定了最佳培养时间与诱导时间后,SDSPAGE分析结果表明基因表达产物为分泌 展开更多
关键词 纳豆激酶基因 基因克隆 基因表达 大肠杆菌
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纳豆激酶的研究进展 被引量:20
20
作者 陈启和 何国庆 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2001年第12期 55-58,共4页
纳豆激酶是由纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)分泌的一种具有强烈纤溶作用的丝氨酸蛋白酶.文章中对纳豆菌产生的纳豆激酶的分离纯化、基因结构、蛋白质结构、生物学功能及其在医疗上的溶纤特性进行了综述.
关键词 纳豆芽孢杆菌 纳豆激酶 基因结构 功能 分离纯化
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