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沉默NUPR1基因对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及机制研究
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作者 李星欣 曾沉思 +2 位作者 杨泽松 黎安茂 陈建斌 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期146-151,共6页
目的:探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及可能机制。方法:以正常人骨髓单个核细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1和自... 目的:探讨沉默核蛋白1(nuclear protein 1,NUPR1)对人多发性骨髓瘤U266细胞自噬的影响及可能机制。方法:以正常人骨髓单个核细胞为对照,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1和自噬相关基因(ATG5和Beclin1)mRNA水平。构建含有靶向抑制NUPR1基因表达的小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)序列的NUPR1-shRNA慢病毒载体,并将其转染人多发性骨髓瘤U266细胞。实验分为未转染组、阴性对照转染组和转染组,qRT-PCR、Western Blot检测NUPR1干扰效果、3组细胞自噬相关指标(ATG5、Beclin1、P62、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)及相关通路蛋白(p-AKT/T-AKT、p-mTOR/T-mTOR)的表达;单丹磺酰戊二酸(monodansylcadaverine,MDC)染色后,荧光显微镜下观察自噬囊泡的聚集。结果:人多发性骨髓瘤U266细胞较正常人骨髓单个核细胞及转染组细胞NUPR1(F=7.747,P=0.004)、Beclin1(F=5.548,P=0.013)和ATG5(F=4.031,P=0.034)mRNA水平明显增高。转染组NUPR1(F=9.798,P=0.013)、ATG5(F=7.017,P=0.027)、Beclin1(F=7.213,P=0.025)和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ(F=7.040,P=0.027)蛋白表达较未转染组和阴性对照转染组明显降低,而P62(F=52.622,P=0.000)、p-AKT/T-AKT(F=6.584,P=0.031)和p-mTOR/T-mTOR(F=7.950,P=0.021)蛋白表达明显增高;转染组细胞胞质内自噬囊泡聚集明显减少(F=12.172,P=0.008)。结论:人多发性骨髓瘤U266细胞NUPR1高表达,自噬水平较正常人骨髓单个核细胞高。沉默NUPR1可下调U266细胞自噬水平。NUPR1基因可能通过AKT/mTOR通路调节U266细胞自噬。 展开更多
关键词 核蛋白1 多发性骨髓瘤 自噬 AKT/mTOR信号通路
PCA通过NF-κB和AP-1信号通路影响HUVECs表达TF 预览
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作者 靳文 张根葆 +1 位作者 高恬媛 桑金凤 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期904-908,共5页
目的:探讨核因子κB(NF-κB)和活化蛋白1(AP-1)信号通路在尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂(PCA)抑制脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达中的作用。方法:MTT法检测HUVECs活力,免疫组化法检测肿瘤坏死因子... 目的:探讨核因子κB(NF-κB)和活化蛋白1(AP-1)信号通路在尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂(PCA)抑制脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达中的作用。方法:MTT法检测HUVECs活力,免疫组化法检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白在细胞中的分布,Western blot法检测细胞内NF-κB p65、TF、c-Fos和c-Jun蛋白的表达,qPCR法测定TF mRNA在HUVECs的表达,ELISA法检测细胞培养上清中TF的含量。结果:与对照组比较,LPS组的细胞活力明显下降(P〈0.01),胞质内出现明显的黄染颗粒,胞质染色加深,TRAF6平均吸光度值升高(P〈0.01),NF-κB p65、c-Jun和c-Fos的蛋白表达均明显增加(P〈0.01),TF mRNA和蛋白表达亦明显增加(P〈0.01);PCA+LPS组的细胞活力较LPS组升高(P〈0.05),细胞形态正常,胞质黄染颗粒不明显,TRAF6平均吸光度明显小于LPS组(P〈0.01),NF-κB p65、c-Fos和c-Jun 3种蛋白表达则明显降低(P〈0.01),TF mRNA及蛋白亦表达减少(P〈0.01)。结论:PCA可明显减轻LPS引起的HUVECs损伤,其机制可能是通过降低TRAF6、NF-κB及AP-1核因子的活化进而减少组织因子的释放来实现的。 展开更多
关键词 尖吻腹蛇毒蛋白C激活剂 人脐静脉血管内皮细胞 组织因子 核因子κB 活化蛋白1
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Efficacy of recombinant human osteoprotegerin combined with tinidazole in the treatment of periodontitis mice and its correlation with serum RANKL and MCP-1 levels
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作者 Yi Chen An-Chun Mo +1 位作者 Yong-Lin Xie Yan-Ling Shao 《海南医科大学学报(英文版)》 2018年第22期1-4,共4页
Objective: To investigate the effect of recombinant human osteoprotegerin combined with tinidazole on mice with periodontitis and the effect on serum RANKL and MCP-1 levels. Methods: 80 SPF-cleaned mice were randomly ... Objective: To investigate the effect of recombinant human osteoprotegerin combined with tinidazole on mice with periodontitis and the effect on serum RANKL and MCP-1 levels. Methods: 80 SPF-cleaned mice were randomly divided into 4 groups, 20 each, model group, tinidazole group and recombinant human osteoprotegerin group were modeled by Kimura et al., and tinidazole group received tinidazole. After intragastric administration, the recombinant human osteoprotegerin group was injected with recombinant human osteoprotegerin in the periodontal pocket according to the tinidazole group. The periodontal changes of the four groups of mice were observed and recorded, and the gingival rating was performed. Epithelial tissue morphology was observed by hematoxylin-eosin (HE) staining. Serum levels of IL-4, IL-6, RANKL and MCP-1 were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Results:After the intervention, the model group developed severe inflammatory reactions, including redness, hemorrhage, and deep periodontal pockets. The teeth were significantly loosened. The mice in the tinidazole group and the recombinant human osteoprotegerin group recovered substantially, and the gingival rating of the recombinant human osteoprotegerin group was better than that. The tinidazole group and the model group (P<0.05). The results of HE staining showed that the model group had edema, vasodilation and a large amount of inflammatory infiltration. The epithelial structure of the mice in the tinidazole group and the recombinant human osteoprotegerin group was intact and arranged closely and orderly. After intervention, the IL-4 in the tinidazole group and the recombinant human osteoprotegerin group was significantly higher than the model group and IL-6 was significantly lower than the model group (P<0.05), and the recombinant human osteoprotegerin group IL-4 was significantly higher after the intervention. IL-6 was significantly lower in the tinidazole group than in the tinidazole group (P<0.05). After the intervention, the tinidazole gro 展开更多
关键词 PERIODONTITIS TINIDAZOLE RECOMBINANT HUMAN OSTEOPROTEGERIN Receptor Activator of Nuclear Factor-κB Ligand MONOCYTE chemotactic protein-1
非肌层浸润性膀胱癌患者血清和尿液BLCA-1含量的变化和意义 预览
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作者 邱玙 李红阳 +1 位作者 王志勇 郭利 《承德医学院学报》 2016年第6期459-461,共3页
目的:探讨非肌层浸润性膀胱癌患者血清和尿液膀胱癌特异性核基质蛋白-1(bladder cancer specific antigen-1,BLCA-1)含量的变化和意义。方法:选取22例非肌层浸润性膀胱癌患者作为实验组,23例前列腺增生患者作为前列腺增生组,21... 目的:探讨非肌层浸润性膀胱癌患者血清和尿液膀胱癌特异性核基质蛋白-1(bladder cancer specific antigen-1,BLCA-1)含量的变化和意义。方法:选取22例非肌层浸润性膀胱癌患者作为实验组,23例前列腺增生患者作为前列腺增生组,21例健康体检者作为正常组。采用ELISA法检测所有受试者血清和尿液样本中BLCA—1的含量,并计算敏感度和特异度。结果:实验组患者尿液BLCA—1的含量明显高于前列腺增生组和正常组(P〈O.05);尿液BLCA-1诊断非肌层浸润性膀胱癌的敏感度为59%(13/22),特异度为93%(41/44)。实验组和前列腺增生组患者血清BLCA-1含量明显高于正常组(P〈0.05);血清BLCA-1诊断非肌层浸润性膀胱癌的敏感度为86%(19/22),特异度为56%(24/43)。结论:BLCA-1作为非肌层浸润性膀胱癌的新型检测指标,具有较高的敏感度和特异度,值得深入研究。 展开更多
关键词 非肌层浸润性膀胱癌 BLCA-1 核基质蛋白 敏感度 特异度
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靶向敲低核蛋白1抑制HepG2肝癌细胞的增殖及迁移 被引量:3
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作者 黄红艳 张彦斌 +4 位作者 王小利 周心娜 李莎 王嫚娜 任军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期782-786,共5页
目的观察应激相关核蛋白1(Nuprl)在不同肝癌细胞系中的表达,通过靶向敲低HepG2肝癌细胞Nupr1,观察其对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法通过实时定量PCR检测BEL-7402、QSG-7703、SMMC-7721、HepG2肝癌细胞中Nupr1的表达。采用RNA干... 目的观察应激相关核蛋白1(Nuprl)在不同肝癌细胞系中的表达,通过靶向敲低HepG2肝癌细胞Nupr1,观察其对肝癌细胞增殖及迁移的影响。方法通过实时定量PCR检测BEL-7402、QSG-7703、SMMC-7721、HepG2肝癌细胞中Nupr1的表达。采用RNA干扰技术敲低HepG2细胞中Nuprl的表达,通过ITI?法及集落形成实验比较细胞的增殖能力的变化,用流式细胞术进行细胞周期分析,利用Transwell TM实验观察Nupr1对细胞迁移能力的影响。结果HepG2人肝癌细胞中Nuprl的表达显著高于其他肝癌细胞系。靶向Nuprl的2个短发夹RNA(shRNA)均能有效敲低HepG2肝癌细胞中Nupr1的表达,抑制效率分别为72.25%和84.25%。Nupr1表达降低能够抑制细胞增殖,导致细胞周期发生G1期阻滞。Nupr1敲低显著降低细胞的迁移能力及集落形成能力。Westernblot结果显示Nupr-1表达降低能够上调细胞周期负性调控因子p21和p27的表达水平。结论靶向敲低Nupr1抑制HepG2肝癌细胞的增殖及迁移。 展开更多
关键词 肝癌 核蛋白1 增殖 迁移 细胞周期
甲型流感病毒NS1、NS2和NS3蛋白的研究进展 预览 被引量:10
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作者 谭伟 谢芝勋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1911-1916,共6页
甲型流感病毒基因组含有8个基因节段,其中血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、NP核蛋白(NP)及碱性聚合酶2(PB2)基因只能分别编码1个病毒蛋白质。而M基质蛋白(M)、碱性聚合酶1(PB1)、酸性聚合酶(PA)及NS非结构蛋白(NS)的基因均可编码2种以上的... 甲型流感病毒基因组含有8个基因节段,其中血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、NP核蛋白(NP)及碱性聚合酶2(PB2)基因只能分别编码1个病毒蛋白质。而M基质蛋白(M)、碱性聚合酶1(PB1)、酸性聚合酶(PA)及NS非结构蛋白(NS)的基因均可编码2种以上的蛋白质,使得甲型流感病毒基因组编码的蛋白质种类多达17种。研究发现M基因编码M1、M2和M42 3种蛋白质;PB1基因编码PB1、PB1-F2和PB1-N40 3种蛋白质;PA基因编码PA、PA-X、PA-N155及PA-N182 4种蛋白质;NS基因则编码NS1、NS2和NS3 3种蛋白质。NS3蛋白于2012年首次报道,它是由NS3mRNA编码的1种新的流感病毒蛋白质。作者将对流感病毒NS基因编码的NS1、NS2和NS3 3种蛋白质的研究进展作简要的介绍。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 mRNA选择性剪接 NS1蛋白 细胞核外转运蛋白 NS3蛋白
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CacyBP/SIP nuclear translocation induced by gastrin promotes gastric cancer cell proliferation 预览 被引量:1
7
作者 Hui-Hong Zhai Juan Meng +3 位作者 Jing-Bo Wang Zhen-Xiong Liu Yuan-Fei Li Shan-Shan Feng 《世界胃肠病学杂志:英文版(电子版)》 SCIE CAS 2014年第29期10062-10070,共9页
AIM:To investigate the role of nuclear translocation of calcyclin binding protein,also called Siah-1 interacting protein(CacyBP/SIP),in gastric carcinogenesis.METHODS:The expression of CacyBP/SIP protein in gastric ca... AIM:To investigate the role of nuclear translocation of calcyclin binding protein,also called Siah-1 interacting protein(CacyBP/SIP),in gastric carcinogenesis.METHODS:The expression of CacyBP/SIP protein in gastric cancer cell lines was detected by Western blot.Immunofluorescence experiments were performed on gastric cancer cell lines that had been either unstimulated or stimulated with gastrin.To confirm the immunofluorescence findings,the relative abundance of CacyBP/SIP in nuclear and cytoplasmic compartments was assessed by Western blot.The effect of nuclear translocation of CacyBP/SIP on cell proliferation was examined using MTT assay.The colony formation assay was used to measure clonogenic cell survival.The effect of CacyBP/SIP nuclear translocation on cell cycle progression was investigated.Two CacyBP/SIPspecific siRNA vectors were designed and constructed to inhibit CacyBP/SIP expression in order to reduce the nuclear translocation of CacyBP/SIP,and the expression of CacyBP/SIP in stably transfected cells was determined by Western blot.The effect of inhibiting CacyBP/SIP nuclear translocation on cell proliferation was then assessed.RESULTS:CacyBP/SIP protein was present in most of gastric cancer cell lines.In unstimulated cells,CacyBP/SIP was distributed throughout the cytoplasm;while in stimulated cells,CacyBP/SIP was found mainly in the perinuclear region.CacyBP/SIP nuclear translocation generated a growth-stimulatory effect on cells.The number of colonies in the CacyBP/SIP nuclear translocation group was significantly higher than that in the control group.The percentage of stimulated cells in G1phase was significantly lower than that of control cells(69.70%±0.46%and 65.80%±0.60%,control cells and gastrin-treated SGC7901 cells,P=0.008;72.99%±0.46%and 69.36%±0.51%,control cells and gastrin-treated MKN45 cells,P=0.022).CacyBP/SIPsi1effectively down-regulated the expression of CacyBP/SIP,and cells stably transfected by CacyBP/SIPsi1 were then chosen for further cellular assays.In CacyBP/SIPsi1 stably 展开更多
关键词 Calcyclin BINDING protein/Siah-1 INTERACTING prote
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hnRNP A1的增强型绿色荧光标记及细胞应激定位分析 预览
8
作者 高星杰 宋娟 +6 位作者 葛林 付雪 孙晓明 张纬 何津岩 姚智 杨洁 《天津医药》 CAS 北大核心 2014年第6期522-525,I0001共5页
目的:构建包含有核不均一核糖核蛋白(hnRNP)A1蛋白编码区序列的真核表达质粒pEGFP-C1-hnRNP A1,并对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的hnRNP A1蛋白进行细胞应激共定位分析。方法提取HeLa细胞总RNA,以针对hnRNPA1-3′非翻译区的特... 目的:构建包含有核不均一核糖核蛋白(hnRNP)A1蛋白编码区序列的真核表达质粒pEGFP-C1-hnRNP A1,并对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的hnRNP A1蛋白进行细胞应激共定位分析。方法提取HeLa细胞总RNA,以针对hnRNPA1-3′非翻译区的特异性片段为反转录引物,反转录出包含hnRNP A1编码区序列的cDNA,并以其为模板,降落PCR法扩增出带EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点的目的基因,利用双酶切法分别酶切目的基因片段和线性pEGFP-C1,在T4-DNA连接酶的催化下将两者连接构建成pEGFP-C1-hnRNP A1重组质粒,然后将重组质粒转染入HeLa细胞内,以激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP-hnRNP A1的荧光表达情况,Western印迹法检测EGFP与hnRNP A1的融合表达情况,最后进行细胞原位杂交及细胞免疫荧光检测在氧化应激状态下EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA(应激颗粒的标记成分)及DPC1a(加工体的标记蛋白)的应激共定位。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误,激光共聚焦荧光显微镜观察和Western印迹结果检测到绿色荧光融合蛋白的表达;EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA呈现共定位,但与DPC1a无共定位关系。结论重组pEGFP-C1-hnRNP A1质粒成功构建并表达,应激状态下EGFP标记的hnRNP A1参与应激颗粒的构成。 展开更多
关键词 核糖核蛋白类 核不均一 绿色荧光蛋白质类 膜融合蛋白质类 HNRNP A1蛋白 PEGFP-C1 融合蛋白 应激颗粒
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CB2受体激动剂JWH133对百草枯中毒致急性肺损伤大鼠的保护作用 预览 被引量:1
9
作者 刘振宁 韩军 +1 位作者 郑强 赵敏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2179-2184,共6页
目的:研究大麻素CB2受体激动剂JWH133对百草枯中毒致急性肺损伤大鼠的保护作用。方法:72只SD雄性大鼠随机平均分成4组。百草枯中毒组:按照20 mg/kg剂量腹腔注射;低剂量JWH133预处理组:在给予百草枯腹腔注射前1 h腹腔注射5 mg/kg JWH... 目的:研究大麻素CB2受体激动剂JWH133对百草枯中毒致急性肺损伤大鼠的保护作用。方法:72只SD雄性大鼠随机平均分成4组。百草枯中毒组:按照20 mg/kg剂量腹腔注射;低剂量JWH133预处理组:在给予百草枯腹腔注射前1 h腹腔注射5 mg/kg JWH133;高剂量JWH133预处理组:在给予百草枯腹腔注射前1 h腹腔注射20 mg/kg JWH133;正常对照组:1 m L生理盐水腹腔注射。在注射百草枯后8 h、1 d和3 d时,收集动脉血、肺泡灌洗液和肺组织标本。采用血气分析仪测定动脉血氧分压(Pa O2),采用ELISA方法检测支气管肺泡灌洗液中IL-1β和TNF-α含量,行组织切片HE染色进行肺损伤评分,利用Western blotting方法检测肺组织中NF-κB和AP-1蛋白表达水平。结果:与正常对照组相比,百草枯中毒组大鼠的动脉血Pa O2明显下降,肺组织结构破坏,肺泡间质水肿,肺损伤指数增加,支气管肺泡灌洗液中炎性细胞因子IL-1β和TNF-α含量明显增加。JWH133预处理,尤其是高剂量JWH133可以减轻肺组织损伤程度,降低支气管肺泡灌洗液中IL-1β和TNF-α含量,减少肺组织中NF-κB和AP-1蛋白的表达。结论:应用CB2受体激动剂JWH133可以抑制百草枯中毒大鼠肺组织中NF-κB和AP-1蛋白的表达,减少炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的分泌,减轻百草枯中毒导致的急性肺损伤。 展开更多
关键词 百草枯 急性肺损伤 大麻素CB2受体 核因子ΚB 激活蛋白1
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Nuclear factorκB represses the expression of latent membrane protein 1 in Epstein-Barr virus transformed cells 预览
10
作者 Mingxia Cao Qianli Wang +1 位作者 Amy Lingel Luwen Zhang 《世界病毒学杂志》 2014年第4期22-29,共8页
AIM:To investigate the role of nuclear factorκB(NF-κB)in the regulation of Epstein-Barr virus(EBV)latent membrane protein 1(LMP1)in EBV transformed cells.METHODS:LMP1 expression was examined in EBV transformed human... AIM:To investigate the role of nuclear factorκB(NF-κB)in the regulation of Epstein-Barr virus(EBV)latent membrane protein 1(LMP1)in EBV transformed cells.METHODS:LMP1 expression was examined in EBV transformed human B lymphocytes with modulation of NF-κB activity.RESULTS:EBV infection is associated with several human cancers.EBV LMP1 is required for efficient transformation of adult primary B cells in vitro,and is expressed in several pathogenic stages of EBVassociated cancers.Regulation of EBV LMP1 involves both viral and cellular factors.LMP1 activates NF-κB signaling pathway that is a part of the EBV transformation program.However,the relation between NF-κB and LMP1 expression is not well established yet.In this report,we found that blocking the NF-κB activity by Inhibitor ofκB stimulated LMP1 expression,while the overexpression of NF-κB repressed LMP1 expression in EBV-transformed IB4 cells.In addition,LMP1 repressed its own promoter activities in reporter assays,and the repression was associated with the activation of NF-κB.Moreover,NF-κB alone is sufficient to repress LMP1 promoter activities.CONCLUSION:Our data suggest LMP1 may repress its own expression through NF-κB in EBV transformed cells and shed a light on LMP1 regulation during EBV transformation. 展开更多
关键词 Nuclear factorκB EPSTEIN-BARR virus LATENT MEMBRANE protein 1 LATENCY Transformation
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核因子I-B高表达对肝L02细胞中蛋白磷酸酶2A-B55δ靶向调控研究
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作者 麦剑荣 林育纯 +6 位作者 陈慧峰 陈宇曦 夏斌 廖昆 张玉静 高艳芳 林忠宁 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2013年第3期181-185,共5页
目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),... 目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建pEGFP-NFIB重组质粒后,分别给予250、500、1 000 ng转染永生化人正常肝L02细胞建立NFIB高表达细胞模型(相应设为250、500和1 000 ng剂量组),对照组为250 ng pEGFP-N1转染的L02细胞,荧光定量聚合酶链反应检测NFIB mRNA,激光共聚焦和免疫印迹法(WB)检测核因子-1(NF-1)蛋白水平。电泳迁移率实验分析与NF-1相结合的DNA序列的特异性,荧光素酶报告基因检测PP2A-B55δ亚基基因(PPP2R2D)启动子区的转录活力,RT-PCR和WB检测细胞内PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平。结果双向测序证实pEGFP-NFIB重组表达质粒构建成功。与对照组比较,各剂量组L02细胞中NFIB mRNA相对水平增高(P〈0.01),增强型绿色荧光蛋白、NFI-B蛋白表达水平均升高(P〈0.05)。NF-1可与PPP2R2D基因启动子区(2R2Dp)-462G〉A不同多态性序列结合,NFIB高表达使L02细胞中2R2Dp-462G启动子活力下降(P〈0.05),PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平均升高(P〈0.05)。结论成功构建人NFIB真核表达重组质粒,应用于人肝细胞中证实NF-1靶向PPP2R2D的功能学调控作用。 展开更多
关键词 核因子-1 蛋白磷酸酶2A B55δ亚基 肝L02细胞
Lipopolysaccharide-induced dysregulation of connexin 43 via nuclear factor KB/JNK-dependent signaling
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作者 LAVAL Andy Alain WU Xiang-hong +1 位作者 LUO Gang HUANG Wen 《岭南心血管病杂志:英文版》 2013年第1期16-21,28共7页
关键词 连接蛋白 信号通路 脂多糖 JNK 核因子KB 诱导 WESTERN印迹法 核转录因子
NLS-RARα与ISCA1相互作用在哺乳动物细胞中的验证 预览 被引量:1
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作者 王东生 王春光 +5 位作者 王翀 曹炬 张国元 王勇 钟梁 刘北忠 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第6期489-492,共4页
目的:利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术验证铁硫簇组装蛋白1(ISCA1)与带核定位信号的维甲酸受体α(NLS—RARα)蛋白间的相互作用.方法:构建含融合蛋白的真核表达载体pCMV—HA—NLS—RARα和pCMV—Myc—ISCA1,酶切及测序鉴定正确... 目的:利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术验证铁硫簇组装蛋白1(ISCA1)与带核定位信号的维甲酸受体α(NLS—RARα)蛋白间的相互作用.方法:构建含融合蛋白的真核表达载体pCMV—HA—NLS—RARα和pCMV—Myc—ISCA1,酶切及测序鉴定正确后,转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术进一步证实二者之间的相互作用.结果:真核表达载体成功构建并经测序鉴定,转染293细胞,抗HA多克隆抗体沉淀HA—NLS—RARer相互作用蛋白复合物后,用抗MycmAb进行蛋白印记检测,可以检测到Myc-ISCA1蛋白的表达.结论:分别成功构建了含HA—NLS—RARer与Myc—ISCA1融合蛋白的真核表达载体,并利用免疫共沉淀和蛋白质印记技术在体外证实了NLS—RARα与ISCA1之间存在相互作用. 展开更多
关键词 核定位信号 受体 维甲酸 ISCA1 蛋白质相互作用 免疫共沉淀
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解毒通络保肾法抑制糖尿病肾病炎症发病机制的研究 预览 被引量:12
14
作者 朴春丽 杨叔禹 仝小林 《实用中西医结合临床》 2009年第3期 1-5,共5页
目的:研究中药解毒通络保肾胶囊对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法:将实验动物分为正常对照组、DM组、解毒通络保肾胶囊中药实验组和苯那普利阳性时照组。检测各组第12周的血糖、尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率(U... 目的:研究中药解毒通络保肾胶囊对糖尿病(DM)大鼠肾脏病变的保护作用及其机制。方法:将实验动物分为正常对照组、DM组、解毒通络保肾胶囊中药实验组和苯那普利阳性时照组。检测各组第12周的血糖、尿素氮、血肌酐、尿白蛋白排泄率(UAER)、血脂、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量和肾脏肥大指标的变化,应用RT-PCR检测MCP-1 mRNA,免疫组化检测肾内纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白、PCNA蛋白、NF-κBp65蛋白、MCP-1蛋白、ED-1蛋白表达水平。结果:中药实验组较DM组血糖水平显著降低(P〈0.01).UAER明显减少(P〈0.05),尿素氮和血肌酐水平下降,肾脏肥大指标改善(P〈0.01);明显降低AngⅡ含量.PCNA、FN和ColⅣ蛋白表达显著低于DM组(P〈0.01)。RT—PCR结果表明,DM大鼠肾皮质MCP-1 mRNA表达升高,中药实验组MCP-1 mRNA低于DM组(P〈0.05)。结论:解毒通络保肾胶囊对DM肾脏病变有保护作用,其机制可能是通过减少肾组织中AngⅡ含量,下调DM大鼠NF-κB,减少MCP-1表达,从而抑制肾内炎症的反应。 展开更多
关键词 糖尿病 解毒通络保肾胶囊 肾内炎症 血管紧张素Ⅱ 核因子KB 单核细胞趋化蛋白-1
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羟乙基淀粉130/0.4对内毒素诱导的大鼠血浆炎症因子表达和单个核细胞核转录因子活性的影响 预览 被引量:1
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作者 周斌 龙云 +1 位作者 封小美 金毅 《徐州医学院学报》 CAS 2008年第1期 3-7,共5页
目的观察羟乙基淀粉130/0.4(HES 130/0.4)对内毒素腹腔注射大鼠炎症因子表达的影响,并通过其对单个核细胞核因子-κB(NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)活性的影响探讨相关分子机制。方法36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组(n=... 目的观察羟乙基淀粉130/0.4(HES 130/0.4)对内毒素腹腔注射大鼠炎症因子表达的影响,并通过其对单个核细胞核因子-κB(NF-κB)和激活蛋白-1(AP-1)活性的影响探讨相关分子机制。方法36只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为6组(n=6),对照组静脉输注生理盐水30ml/kg,LPS组腹腔注射脂多糖(LPS)5m异/kg后静脉输注生理盐水30ml/kg,LPS+HES组按照HES 130/0.4的剂量不同分为3个亚组,分别腹腔注射LPS5mg/kg,接着分别静脉输注HES130/0.47.5、15、30ml/kg,HES组静脉输注HES130/0.430ml/kg。在腹腔注射LPS3h后以ELISA法检测血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素-γ(IFN-γ)浓度,用凝胶电迁移法检测NF-κB和AP-1的水平。结果腹腔注射LPS后大鼠血浆TNF-γ、IL-10和IFN-γ的浓度较对照组明显升高,且NF—κB和AP-1的活性明显增加(P〈0.05);HES130/0.4静脉输注可降低血浆TNF-α和IFN-γ的浓度以及NF—κB和AP-1的活性(P〈0.05),而增加IL-10的浓度(P〈0.05),其中15ml/kg剂量组对TNF-α、IFN-γ和NF—κB的作用最强(P〈0.01),而7.5ml/kg剂量组对IL-10和AP-1的作用最强(P〈0.01)。结论HES130/0.4可降低内毒素注射后促炎因子的表达,增强抗炎因子的表达,可能与其抑制转录因子NF—κB和AP-1的活性有关。 展开更多
关键词 羟乙基淀粉 内毒素血症 干扰素 白细胞介素-10 核因子-κB 激活蛋白-1
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Effect of Sirpα1 on the expression of nuclear factor-kappa B in hepatocellular carcinoma 预览
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《国际肝胆胰疾病杂志:英文版》 SCIE CAS 2007年第3期276-283,共8页
BACKGROUND:Signal regulatory protein alpha1(Sirpα1) is a member of Sirps families containing four immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs(ITIMs) domains in the cytoplasm of and an activated substrate of rece... BACKGROUND:Signal regulatory protein alpha1(Sirpα1) is a member of Sirps families containing four immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motifs(ITIMs) domains in the cytoplasm of and an activated substrate of receptor tyrosine kinase(RTK),that negatively regulates the RTK-dependent cell proliferating signal transduction pathway.Previously we found that Sirpα1 was closely associated with the occurrence and development of hepatocellular carcinoma(HCC)as well as liver regeneration.Since it is unclear about the regulatory mechanisms,we established the cell line transfected Sirpα1 gene and preliminarily clarified the mechanisms by which Sirpα1 negatively regulates the carcinogenesis and development of HCC. METHODS:Liver cancer Sk-Hep1 cell was respectively transfected with plasmids of pLXSN,pLXSN-Sirpα1 and pLXSN-Sirpα1Δ4Y 2 ,screened with the drug of G418(1200 μg/ml),and various transfected Sk-Hep1 cell lines were obtained.The protein expressions of P65,P50,IκBα,cyclin D1 and Fas in various Sk-Hep1 cell lines were determined by Western blotting,and P65 and P50 were localized by the immunofluorescence technique. RESULTS:Sirpα1 could significantly upregulate the protein expression of IκBα(vs.other cell lines,P【0.05) in the Sk-Hep1 cell,and downregulate the protein expressions of P65,P50 and cyclin D1(vs.other cell lines, P【0.05)in the Sk-Hep1 cell.P65 protein expression was mainly localized in the cytoplasm in the pLXSN Sk-Hep1 cell,and in the nucleus of the Sk-Hep1 cell with mutantSirpα1Δ4Y 2 ,but in nucleus of the Sk-Hep1 cell with wild Sirpα1.P50 protein expression was localized in the cytoplasm and nucleus of the pLXSN Sk-Hep1 cell,but in the nucleus of the Sk-Hep1 cell with wild Sirpα1 and mutant Sirpα1Δ4Y 2 plasmid. CONCLUSIONS:Sirpα1 might negatively regulate and control the abnormal proliferation of liver cancer cells by influencing the protein content and localization of nuclear factor-kappa B,then influence the expression of cyclins such as cyclin D1 in the signal transduction pat 展开更多
关键词 signal REGULATORY protein alpha1 carcinoma hepatocellular NUCLEAR TRANSCRIPTION factor
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Nuclear translocation of EGF receptor regulated by Epstein-Barr virus encoded latent membrane protein 1
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作者 TAO Yongguang SONG Xin TAN Yunnian LIN Xiaofeng ZHAO Yan ZENG Liang TANG Min LI Wei WU Qiao CAO Ya 《中国科学:生命科学英文版》 SCIE CAS 2004年第3期258-267,共10页
Epstein-Barr virus (EBV) encoded latent membrane protein 1 (LMP1) is considered to be the major oncogenic protein of EBV encoded proteins, and also it has always been the core of the oncogenic mechanism of EBV. Tradit... Epstein-Barr virus (EBV) encoded latent membrane protein 1 (LMP1) is considered to be the major oncogenic protein of EBV encoded proteins, and also it has always been the core of the oncogenic mechanism of EBV. Traditional receptor theory demonstrates that cell surface receptors exert biological functions on the membrane, which neither enter into the nucleus nor directly affect the transcription of the target genes. But, advanced studies on nuclear translocation of the epidermal growth factor receptor (EGFR) family have greatly developed our knowledge of the biological function of cell surface receptors. In this study, we used Tet-on LMP1 HNE2 cell line as a cell model, which is a dual-stable LMP1 integrated NPC cell line and the expression of LMP1 in which could be regulated by Tet system. We found that LMP1 could regulate the nuclear translocation of EGFR in a dose-dependent manner from both quantitative and qualitative levels through the Western blot analysis and the immunofluorescent analysis with a laser scanning confocal microscope. We further demonstrated that the nuclear localization sequence of EGFR played some roles in the location of the protein within the nucleus under LMP1 regulation, and the nuclear accumulation of EGFR regulated by LMP1 was in a ligand-independent manner. These findings provide a novel view that the regulation of LMP1 on the nuclear translocation of EGFR is critical for the process of nasopharyngeal carcinoma. 展开更多
关键词 Epstein-Bar virus LATENT MEMBRANE protein 1 EPIDERMAL growth factor receptor NUCLEAR translocation.
体外人巨细胞病毒感染与核转录因子AP-1活化及原癌基因c-jun表达的研究 预览
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作者 程敏 闻良珍 +1 位作者 凌霞珍 赵捷 《华中科技大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期 335-338,共4页
目的研究人胚肺成纤维(HEL)细胞感染人巨细胞病毒(HCMV)后,转录激活蛋白-1(AP-1)活化和原癌基因c-jun mRNA表达的时序性变化,探讨其在HCMV感染中的作用.方法采用原位杂交法检测c-jun mRNA的表达,凝胶电泳迁移率改变试验(EMSA)检测AP-1活... 目的研究人胚肺成纤维(HEL)细胞感染人巨细胞病毒(HCMV)后,转录激活蛋白-1(AP-1)活化和原癌基因c-jun mRNA表达的时序性变化,探讨其在HCMV感染中的作用.方法采用原位杂交法检测c-jun mRNA的表达,凝胶电泳迁移率改变试验(EMSA)检测AP-1活性.结果 HEL细胞感染HCMV后15 min,c-jun mRNA即有阳性表达,30~60 min达高峰(P<0.01),以后逐渐下降,正常对照组HEL细胞无c-jun mRNA表达.HCMV感染后AP-1亦迅速被活化,至2 h达高峰(P<0.01),其后有所下降,维持于一定水平.结论 HEL细胞感染HCMV后,c-jun mRNA表达迅速增加,AP-1活化.提示HCMV可能通过刺激原癌基因过度表达而参与细胞的信号传导,以干扰细胞增殖和分化的调控;AP-1活化为早期病毒基因有效表达所必需,并可启动一系列前炎性细胞因子的基因转录与蛋白合成. 展开更多
关键词 AP-1 原癌基因C-JUN HCMV感染 mRNA表达 人巨细胞病毒感染 体外 核转录因子 HEL细胞 转录激活蛋白 凝胶电泳
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蓝氏贾第虫无义mRNA的降解
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作者 吕佳 柴杨丽 +1 位作者 周宝春 柴宝峰 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期212-221,共10页
无义介导的mRNA降解途径(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)作为细胞内的一种重要的mRNA质量监控机制,可以降解含有提前终止密码子(premature termination codon,PTC)的异常转录本,从而避免截短蛋白质对细胞的毒害,但其详细的分子机制... 无义介导的mRNA降解途径(nonsense-mediated mRNA decay,NMD)作为细胞内的一种重要的mRNA质量监控机制,可以降解含有提前终止密码子(premature termination codon,PTC)的异常转录本,从而避免截短蛋白质对细胞的毒害,但其详细的分子机制有待进一步阐释。蓝氏贾第虫(Giardia lamblia)作为一种寄生性单细胞原生动物,进化地位特殊,对其NMD途径的研究有利于阐明基因表达调控的分子和进化机制。本研究通过酵母双杂交及体外pull-down实验分析了贾第虫NMD途径因子上游移码蛋白1 (Giardia lamblia up-frameshift 1,Gl UPF1)、贾第虫RNA结合蛋白(Giardia lamblia HRP1,Gl HRP1)、贾第虫核糖核酸外切酶(Giardia lamblia Ski7p,Gl Ski7p、Giardia lamblia XRN1,Gl XRN1)之间的相互作用关系。结果表明,Gl UPF1全长与Gl HRP1、Gl XRN1(1~500aa)、Gl Ski7p间均可发生相互作用。而且Gl UPF1的CH结构域和C端结构域分别与Gl HRP1、Gl XRN1(1~500 aa)、Gl Ski7p相互作用。说明Gl UPF1在贾第虫NMD途径中作为招募平台,在无义mRNA识别和降解过程中发挥重要作用。为此,结合本实验室之前的研究结果,我们提出原生动物贾第虫的NMD途径:在提前终止密码子处SURF(SMG1-UPF1-eRF1-eRF3)复合物形成后,Gl UPF1被磷脂酰肌醇3-激酶(suppressor with morphogenetic effect on genitalia 1,SMG1)磷酸化修饰,NMD途径激活,随后Gl UPF1与HRP1相互作用,将转录本标记为NMD底物;Gl UPF1进而招募下游贾第虫5’-3’核糖核酸降解酶Gl XRN1、贾第虫3’-5’核糖核酸降解因子Gl Ski7p,最终降解靶标mRNA。 展开更多
关键词 蓝氏贾第虫 无义介导的mRNA降解途径 贾第虫不均一核小核糖核蛋白 贾第虫上游移码蛋白1 贾第虫5’-3’核糖核酸外切酶 贾第虫3’-5’超级杀手蛋白质
尿液RBP和ALB在早期糖尿病肾病中的诊断价值及其与外周血MCP-1表达的关系 预览
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作者 蒙军平 张涵 +1 位作者 赵洁 孙脊峰 《疑难病杂志》 CAS 2019年第1期48-51,56共5页
目的分析尿液视黄醇结合蛋白(RBP)、白蛋白(ALB)在早期糖尿病肾病(DN)中的诊断价值及与外周血核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的关系。方法选择2015年9月—2017年12月空军军医大学唐都医院肾脏内科收治的2型糖尿病(DM)患者86例作为研究对象... 目的分析尿液视黄醇结合蛋白(RBP)、白蛋白(ALB)在早期糖尿病肾病(DN)中的诊断价值及与外周血核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的关系。方法选择2015年9月—2017年12月空军军医大学唐都医院肾脏内科收治的2型糖尿病(DM)患者86例作为研究对象,按照患者24h尿蛋白排泄率的不同分为单纯DM组(46)和早期DN组(40例),另取同期来院检查的健康人42例作为健康对照组,比较3组受试者尿液RBP、ALB水平以及RBP、ALB和RBP+ALB联合诊断阳性率。观察各组外周血MCP-1表达情况,并分析尿液RBP、ALB与血MCP-1的相关性。结果早期DN组、单纯DM组与健康对照组患者的尿液RBP、ALB水平以及外周血MCP-1均逐渐降低,差异均有统计学意义(F/P=40234.35/<0.001、1975.16/<0.01、162.46/<0.01)。Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期DN患者的尿液RBP、ALB水平以及外周血MCP-1呈现逐渐升高的趋势(F/P=9177.06/<0.001、564.27/<0.001、39.59/<0.01)。RBP+ALB联合诊断的阳性率为88.37%,明显高于RBP和ALB单独诊断的阳性率67.44%,差异具有统计学意义(χ^2/P=10.944/0.001)。糖尿病肾病患者的尿液RBP和ALB与外周血MCP-1表达均呈正相关(r/P=0.457/0.000、0.483/0.032)。尿RBP、ALB及RBP+ALB联合诊断早期DN的ROC曲线下面积分别为0.720、0.743、0.982,同时RBP+ALB联合诊断的敏感度以及特异度明显较高。结论尿液RBP+ALB联合诊断早期糖尿病肾病的ROC曲线下面积较大,临床诊断价值较高,并与外周血MCP-1表达呈正相关,可以较为灵敏地反映患者的肾功能损伤。 展开更多
关键词 视黄醇结合蛋白 白蛋白 糖尿病肾病 核细胞趋化蛋白-1
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