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肿瘤坏死因子α可激活NF-κB信号通路抑制牙周膜干细胞成骨分化 预览
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作者 张赟 常群安 +1 位作者 李生梅 张源 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期3993-3997,共5页
背景:既往研究大多侧重于炎症因子激活NF-κB信号通路对骨细胞的影响,关于微炎症环境对人牙周膜干细胞成骨分化及NF-κB信号通路的影响研究较少。目的:探讨肿瘤坏死因子α对人牙周膜干细胞骨向分化及NF-κB信号通路的影响。方法:通过酶... 背景:既往研究大多侧重于炎症因子激活NF-κB信号通路对骨细胞的影响,关于微炎症环境对人牙周膜干细胞成骨分化及NF-κB信号通路的影响研究较少。目的:探讨肿瘤坏死因子α对人牙周膜干细胞骨向分化及NF-κB信号通路的影响。方法:通过酶消化结合组织块法体外培养人牙周膜干细胞,免疫组织化学染色鉴定人牙周膜干细胞来源。该研究获得青海大学附属医院伦理委员会批准,患者均签署知情同意书。将人牙周膜干细胞分为2组,对照组用单纯成骨诱导液培养,肿瘤坏死因子α组用单纯成骨诱导液+10μg/L肿瘤坏死因子α培养。在成骨诱导不同时间点,进行茜素红染色定量分析、碱性磷酸酶活性检测,实时定量RT-PCR检测Osterix、Runx2基因表达水平,Western Blot检测NF-κB信号通路关键蛋白表达水平。结果与结论:①免疫组织化学染色结果显示人牙周膜干细胞抗波形丝蛋白染色表达阳性,抗角蛋白表达阴性;②茜素红染色后肿瘤坏死因子α组形成的矿化结节比对照组数量少、范围小、染色浅;③肿瘤坏死因子α组碱性磷酸酶活性明显低于对照组(P <0.05);④肿瘤坏死因子α组Osterix、Runx2基因表达水平均显著低于对照组(P <0.05);⑤肿瘤坏死因子α组p-IκBα蛋白表达量显著高于对照组(P <0.05),p65、IκBα蛋白表达量显著低于对照组(P<0.05);⑥结果表明,肿瘤坏死因子α能够通过激活NF-κB信号通路抑制人牙周膜干细胞成骨分化。 展开更多
关键词 人牙周膜干细胞 肿瘤坏死因子Α 成骨分化 NF-ΚB信号通路 碱性磷酸酶活性 成骨基因
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熊果酸干预骨髓间充质干细胞增殖与成骨分化 预览
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作者 刘耀辉 黄振明 +2 位作者 何精选 黄玲华 李建平 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第17期2665-2671,共7页
背景:熊果酸可通过Wnt信号通路抑制破骨细胞增殖分化,对胶原诱导性关节炎模型大鼠有抗炎和骨保护作用,但是熊果酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、分化以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白表达的影响尚不明确。目的:探讨熊果酸对骨... 背景:熊果酸可通过Wnt信号通路抑制破骨细胞增殖分化,对胶原诱导性关节炎模型大鼠有抗炎和骨保护作用,但是熊果酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖、分化以及Wnt/β-catenin信号通路相关基因和蛋白表达的影响尚不明确。目的:探讨熊果酸对骨髓间充质干细胞增殖、分化及Wnt信号通路的影响。方法:采用全骨髓贴壁法体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,不同浓度(1.0,2.5,5.0,10.0,20.0μmol/L)熊果酸作用骨髓间充质干细胞,以不含熊果酸的培养基为对照组,MTT法检测熊果酸对骨髓间充质干细胞增殖的影响。用含不同浓度(1.0,2.5,5.0μmol/L)熊果酸的成骨诱导液培养骨髓间充质干细胞,以不含熊果酸的成骨诱导液为对照组,在诱导后第7天和第14天采用ELISA法检测碱性磷酸酶活性和骨钙素水平,在诱导第14天采用RT-PCR检测成骨基因ALP、COL-I、OCN、OPN、RUNX2 mRNA表达水平,采用RT-PCR和Western blot法检测Wnt信号通路相关Wnt-3α、GSK-3β、β-catenin mRNA和蛋白表达。结果与结论:①不同浓度熊果酸均可促进骨髓间充质干细胞增殖,浓度为5.0μmol/L时增殖率最高;②骨髓间充质干细胞成骨诱导第7天和第14天时碱性磷酸酶活性和骨钙素水平均比对照组增高,差异有显著性意义(P<0.05),且诱导相同时间,随熊果酸浓度增加碱性磷酸酶活性增强,骨钙素水平升高(P<0.05);③诱导14d,熊果酸可促进骨髓间充质干细胞分化后成骨基因ALP、COL-I、OCN、OPN、RUNX2m RNA表达以及Wnt信号通路相关Wnt-3α、GSK-3β、β-cateninm RNA和蛋白表达,随熊果酸浓度增加其表达水平升高(P <0.05);④结果表明,熊果酸通过Wnt/β-catenin信号通路促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞定向分化。 展开更多
关键词 熊果酸 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 成骨分化 碱性磷酸酶 骨钙素 成骨基因 WNT信号通路
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不同培养方法对小鼠脂肪干细胞成骨分化的影响 预览
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作者 郝宇卉 李美宁 +2 位作者 张凯丽 杨丽红 刘志贞 《中国现代医学杂志》 CAS 2019年第3期8-14,共7页
目的比较组织块贴壁法及胶原酶消化法所得脂肪干细胞的成骨分化能力。方法分别采用组织块贴壁法及胶原酶消化法原代培养小鼠脂肪干细胞,观察细胞形态及细胞增殖情况,并进行细胞鉴定,比较两者成骨分化能力。结果两种方法所得脂肪干细胞... 目的比较组织块贴壁法及胶原酶消化法所得脂肪干细胞的成骨分化能力。方法分别采用组织块贴壁法及胶原酶消化法原代培养小鼠脂肪干细胞,观察细胞形态及细胞增殖情况,并进行细胞鉴定,比较两者成骨分化能力。结果两种方法所得脂肪干细胞在形态学上无差异,培养至第3代,细胞生长状态良好,生物学特性稳定,CD44、Sca-1表达率 >90%,CD31表达率<10%,具有较好的成脂、成骨分化能力;组织块贴壁法培养所得脂肪干细胞增殖率高于胶原酶消化法(P<0.05);组织块贴壁法培养所得脂肪干细胞矿化结节、ALP活性及钙离子浓度高于胶原酶消化法(P<0.05)。结论组织块贴壁法相对胶原酶消化法在脂肪干细胞培养及成骨诱导分化过程中更具优势。 展开更多
关键词 脂肪干细胞/干细胞 组织块贴壁法/细胞培养技术 胶原酶消化法/细胞培养技术 成脂分化 成骨分化 小鼠
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骨髓间充质干细胞成脂成骨平衡调控研究进展
4
作者 占秀文 杨磊 +2 位作者 郑美蓉 汪鑫平 许晓源 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期400-404,共5页
骨质疏松症(OP)是一种全身性的骨代谢疾病,主要表现为骨量减少、骨质脆性增加、骨骼微结构退化。随着对骨质疏松症发病机制的深入研究,骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化失衡(成骨分化减少,成脂分化增多)是引发骨质疏松症的关键。我们总结了B... 骨质疏松症(OP)是一种全身性的骨代谢疾病,主要表现为骨量减少、骨质脆性增加、骨骼微结构退化。随着对骨质疏松症发病机制的深入研究,骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化失衡(成骨分化减少,成脂分化增多)是引发骨质疏松症的关键。我们总结了BMSCs成脂成骨分化相关的信号通路,充分理解这些信号通路,有利于更好的阐明骨质疏松症的发病机制,为临床医生有效地治疗骨质疏松症提供帮助。 展开更多
关键词 平衡调控 骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂分化 信号通路
姜黄素通过Wnt信号通路调节人牙髓干细胞的成牙本质分化 预览
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作者 陈冬梅 徐丽丽 周建伟 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期4018-4024,共7页
背景:研究证实,姜黄素不仅可促进成体干细胞成骨分化还可通过激活Wnt信号通路促进神经干细胞的增殖与分化。但姜黄素能否通过激活Wnt信号通路促进人牙髓干细胞成牙本质分化尚未见报道。目的:探讨姜黄素对人牙髓干细胞增殖和成牙本质分... 背景:研究证实,姜黄素不仅可促进成体干细胞成骨分化还可通过激活Wnt信号通路促进神经干细胞的增殖与分化。但姜黄素能否通过激活Wnt信号通路促进人牙髓干细胞成牙本质分化尚未见报道。目的:探讨姜黄素对人牙髓干细胞增殖和成牙本质分化的影响及其可能机制。方法:将人牙髓干细胞(购于上海妍生实业有限公司)分为6组:正常对照组不进行干预,低、中、高浓度姜黄素组用50,250,500 nmol/L姜黄素干预,IWR-1组用1μmol/L Wnt信号通路抑制剂IWR-1干预,IWR-1+姜黄素组用1μmol/L IWR-1和500 nmol/L姜黄素干预。各组进行矿化诱导7 d和14 d后,实时定量PCR检测Wnt5a、碱性磷酸酶、牙本质涎磷蛋白的m RNA表达;Western blot检测Wnt5a、β-catenin、骨唾液酸蛋白、牙本质涎磷蛋白、骨钙蛋白、牙本质基质蛋白1水平;比色法检测细胞碱性磷酸酶活性;CCK-8法检测细胞增殖活性。结果与结论:①姜黄素能够提高牙髓干细胞增殖活性和碱性磷酸酶活性,且呈时间和剂量依赖性;②姜黄素能够提高牙髓干细胞中牙本质涎磷蛋白、碱性磷酸酶的m RNA表达以及牙本质涎磷蛋白、牙本质基质蛋白1、骨唾液酸蛋白和骨钙蛋白水平,且呈时间和剂量依赖性;③姜黄素能够提高牙髓干细胞中Wnt5a和β-catenin蛋白的表达,且呈时间和剂量依赖性;④IWR-1+姜黄素组人牙髓干细胞中Wnt5a m RNA表达以及Wnt5a、牙本质涎磷蛋白、牙本质基质蛋白1、骨唾液酸蛋白及骨钙蛋白水平和增殖活性高于正常对照组和IWR-1组(P <0.05);⑤以上结果表明,姜黄素通过激活Wnt信号通路促进人牙髓干细胞的增殖和成牙本质分化。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 姜黄素 WNT信号通路 成牙本质分化 成骨分化 牙齿再生 细胞增殖
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维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的特征 预览
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作者 龙燕鸣 谢梦生 +2 位作者 薛文利 黄加洁 李晓捷 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第17期2637-2643,共7页
背景:应用维甲酸直接体外干预骨髓间充质干细胞的研究较多,而维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的相关研究尚未见报道。目的:建立维甲酸诱导的大鼠骨质疏松模型,观察模型大鼠骨髓间充质干细胞的体外特征。方法:将SD大鼠随机分... 背景:应用维甲酸直接体外干预骨髓间充质干细胞的研究较多,而维甲酸诱导骨质疏松模型大鼠骨髓间充质干细胞的相关研究尚未见报道。目的:建立维甲酸诱导的大鼠骨质疏松模型,观察模型大鼠骨髓间充质干细胞的体外特征。方法:将SD大鼠随机分为2组,实验组用维甲酸70mg/(kg·d)连续灌胃2周快速建立骨质疏松模型,对照组灌胃等体积生理盐水。采用全骨髓贴壁法体外培养两组大鼠骨髓间充质干细胞,观察两组细胞体外特征,包括细胞形态、生长曲线、成骨诱导后体外矿化能力和碱性磷酸酶分泌能力、成脂诱导后向脂肪细胞分化能力。结果与结论:①两组骨髓间充质干细胞各时期形态基本一致,第9天时实验组增殖能力强于对照组;②实验组碱性磷酸酶活力弱于对照组(P <0.05),茜素红染色、碱性磷酸酶染色亦支持碱性磷酸酶活力检测结果;③实验组脂滴数量和油红O吸光度值高于对照组(P <0.05);④结果表明,维甲酸灌胃法成功构建大鼠骨质疏松模型,其骨髓间充质干细胞成骨能力降低,成脂能力增强。 展开更多
关键词 维甲酸 骨质疏松模型 骨髓间充质干细胞 成骨分化 成脂分化 大鼠 广西自然科学基金
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海藻酸钠-壳聚糖微囊包埋细胞成骨分化能力的研究 预览
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作者 孟丹 袁亚飞 +2 位作者 江晓霞 王常勇 江青松 《口腔颌面修复学杂志》 2019年第3期161-165,共5页
目的:研究海藻酸钠-壳聚糖微胶囊(alginate-chiotsan-alginate,ACA)包埋小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后细胞的成骨分化能力。方法:C57小鼠采用全骨髓法进行骨髓间充质干细胞的原代提取。配制1. 5%... 目的:研究海藻酸钠-壳聚糖微胶囊(alginate-chiotsan-alginate,ACA)包埋小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后细胞的成骨分化能力。方法:C57小鼠采用全骨髓法进行骨髓间充质干细胞的原代提取。配制1. 5%海藻酸钠溶液(sigma,A0682)、0. 05%海藻酸钠溶液、1. 1%氯化钙溶液(沪试)、0. 6%壳聚糖溶液(solarbio,C8320,pH 6. 3)和55mmol/L柠檬酸钠溶液(沪试,pH 5. 6),用高压静电微囊法制取包埋小鼠骨髓间充质干细胞的海藻酸钠-壳聚糖微胶囊。海藻酸钠-壳聚糖微囊包埋的小鼠BMSCs通过茜素红(solarbio,G8550)染色及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)(sigma)活性检测细胞成骨向分化能力。结果:获得均匀一致、直径约300μm的包埋小鼠BMSCs的海藻酸钠-壳聚糖微胶囊。茜素红染色及ALP检测发现小鼠BMSCs可在细胞体外贴壁培养及ACA中均有良好的成骨分化能力。结论:小鼠BMSCs在体外贴壁培养和ACA微胶囊中均可进行成骨分化,为细胞微胶囊应用于各生物医学领域提供理论依据。 展开更多
关键词 海藻酸钠 壳聚糖 微胶囊 骨髓间充质干细胞 成骨分化
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骨形成蛋白-2与转化生长因子-β3对牙髓干细胞成骨向分化的对比研究
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作者 李鹏 张晓莉 +2 位作者 艾力麦尔丹·艾尼瓦尔 木合塔尔·霍加 刁兆峰 《中华实用诊断与治疗杂志》 2019年第1期7-10,共4页
目的探讨转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的影响。方法健康新西兰幼兔4只,取牙髓组织采用酶解组... 目的探讨转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3,TGF-β3)、骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成骨向分化的影响。方法健康新西兰幼兔4只,取牙髓组织采用酶解组织块法分离培养获得DPSCs,镜下观察细胞形态及生长状况。将培养的第3代DPSCs分为BMP-2组和TGF-β3组,分别加入浓度为80μg/L的BMP-2、TGF-β3的完全培养液,采用免疫组织化学法于诱导第3、7天检测Ⅰ型胶原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)表达,于第7、14天检测骨钙素(osteocalcin,OC)表达;诱导第7、14天,对BMP-2组、TGF-β3组行碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色后,倒置显微镜下观察ALP活性染色结果。结果兔DPSCs分离、培养48h,组织块周围有细胞游出、贴壁生长,培养的第3代兔DPSCs大多为长梭形,也可为多角形,呈巢式或集落生长;TGF-β3组诱导第3天COL-1表达的累计吸光度(integrated optiacal density,IOD)值(159 676.79±63 959.56)高于BMP-2组(44 047.33±15 853.65)(P<0.05),诱导第7天COL-1表达的IOD值(245 378.26±60 084.60)与BMP-2组(223 294.43±80 266.72)比较差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β3组诱导第7天OC表达的IOD值(109 568.82±14 079.88)高于BMP-2组(55 168.57±1 694.93)(P<0.05),诱导第14天OC表达的IOD值(411 544.95±82 803.24)与BMP-2组(360 103.54±20 835.36)比较差异无统计学意义(P>0.05);BMP-2组、TGF-β3组诱导第7天出现少量淡蓝色ALP阳性区,诱导第14天蓝色ALP阳性区增大且蓝染颜色加重,镜下观察2组无明显差异。结论与BMP-2比较,TGF-β3对早期兔DPSCs向成骨细胞分化有较明显的促进作用。 展开更多
关键词 牙髓干细胞 转化生长因子-Β3 骨形成蛋白-2 成骨向分化
混合血小板裂解液对人骨髓间充质干细胞原代培养、增殖和成骨分化的影响 预览
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作者 徐杨 林飞跃 尹晓明 《中国当代医药》 2019年第18期13-18,共6页
目的研究混合血小板裂解液(pHPL)对体外培养的人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)原代培养、增殖和成骨分化的影响。方法使用临床过期的多份浓缩血小板混合,多次冻融激活后制备pHPL,分别使用胎牛血清(FBS)和pHPL加基础培养液原代培养hBMMSCs,... 目的研究混合血小板裂解液(pHPL)对体外培养的人骨髓间充质干细胞(hBMMSCs)原代培养、增殖和成骨分化的影响。方法使用临床过期的多份浓缩血小板混合,多次冻融激活后制备pHPL,分别使用胎牛血清(FBS)和pHPL加基础培养液原代培养hBMMSCs,比较两组中的细胞形态、表面标志物、细胞骨架、细胞周期和增殖率,并在加入经典成骨诱导液后检测两组中碱性磷酸酶含量、成骨相关基因含量和矿化结节形成,比较其成骨分化能力。结果FBS和pHPL培养组均能较好地支持hBMMSCs的原代培养,两组中细胞形态、表面标志物、细胞骨架、细胞周期均无明显差异,但pHPL组在5、7d时的细胞增殖率明显高于FBS组(P<0.05);在成骨诱导后,pHPL组中碱性磷酸酶含量、成骨相关基因含量也明显高于FBS组(P<0.05),两组中细胞均可以形成成熟的矿化结节。结论pHPL能够很好支持hBMMSCs的原代培养、增殖和成骨分化,且较FBS能更好地促进其增殖和成骨分化。 展开更多
关键词 人血小板裂解液 骨髓间充质干细胞 原代培养 增殖 成骨分化
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RhoA/ROCK信号通路介导的细胞形变在人间充质干细胞成骨分化中的调控作用
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作者 杨必敬 徐宏光 +4 位作者 肖良 张晓玲 汪靖 徐子昂 葛鑫 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期212-217,共6页
目的探究RhoA/ROCK信号通路介导的细胞形变是否在人间充质干细胞(hMSCs)成骨分化过程中发挥调控作用。方法取原代hMSCs培养至P3代加入成骨诱导液诱导14d后,采用免疫荧光检测RhoA和ROCK-1蛋白的表达变化。另取P3代hMSCs细胞分为诱导组、... 目的探究RhoA/ROCK信号通路介导的细胞形变是否在人间充质干细胞(hMSCs)成骨分化过程中发挥调控作用。方法取原代hMSCs培养至P3代加入成骨诱导液诱导14d后,采用免疫荧光检测RhoA和ROCK-1蛋白的表达变化。另取P3代hMSCs细胞分为诱导组、空白加药组及加药组,诱导组采取单纯成骨诱导培养,空白加药组加入成骨诱导液及溶剂二甲基亚砜(DMSO)进行诱导培养,加药组加入成骨诱导液和溶于DMSO的Y-27632(RhoA/ROCK信号通路抑制剂)进行诱导培养。利用CCK-8检测细胞的增殖,荧光显微镜观察各组细胞骨架的变化,实时聚合酶链反应(RT-PCR)及碱性磷酸酶(ALP)染色检测各组细胞成骨基因ALP、骨钙素(OCN)、侏儒相关转录因子2(RUNX-2)的表达变化。两组间数据比较采用t检验。结果hMSCs成骨诱导前后RhoA、ROCK-1蛋白表达呈现差异性变化,成骨诱导14dRhoA和ROCK-1蛋白表达显著高于诱导前(22.7±2.1比14.7±0.6和24.3±1.5比20.3±0.6,t=-6.414、-4.243,均P<0.05)。与诱导组相比,加药组第1、5、9、14天干细胞增殖活性无显著变化(F=0.427、1.000、0.298、1.314,均P>0.05)。加药组细胞骨架呈明显梭形改变,细胞铺展面积变小;从第14天的3组ALP染色显示加药组的染色明显比诱导组浅。RT-PCR结果显示诱导组和空白加药组细胞随诱导时间延长其成骨表型基因表达水平呈上升趋势,加药组细胞成骨表型基因ALP、OCN、RUNX-2的表达水平随诱导时间延长逐渐下调,加药组ALP表达在第14天时显著低于其他2组(F=25.891,P=0.001);加药组OCN表达在第11天和14天时显著低于其余2组(F=5.773、25.382,均P<0.05);加药组RUNX-2表达在第11天和14天时显著低于其余两组(F=34.972、10.808,均P<0.05)。结论RhoA/ROCK信号通路可能通过介导细胞骨架形变在hMSCs成骨分化过程中起促进作用。 展开更多
关键词 RhoA/ROCK信号通路 人间充质干细胞 细胞骨架 成骨分化
双酚A对骨分化及骨密度的影响及相关机制 预览
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作者 李奕丰 郭晓英 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1027-1029,1039共4页
双酚A(BPA)是一种内分泌干扰物,能破坏机体内分泌系统,引发代谢异常。由于BPA在生活环境中存在的广泛性及其对健康的损害,一直被广泛关注。既往研究多集中在BPA诱发肥胖、生殖障碍、致癌等方面的机制研究。BPA是人体雌激素的类似物,而... 双酚A(BPA)是一种内分泌干扰物,能破坏机体内分泌系统,引发代谢异常。由于BPA在生活环境中存在的广泛性及其对健康的损害,一直被广泛关注。既往研究多集中在BPA诱发肥胖、生殖障碍、致癌等方面的机制研究。BPA是人体雌激素的类似物,而骨组织对雌激素敏感,故BPA对骨组织具有重要调控作用,国内外渐有相关研究,本文就BPA对骨分化及骨密度的影响及其作用的分子机制等研究进展作以综述。 展开更多
关键词 双酚A 骨分化 骨密度 骨质疏松
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BMP7基因沉默抑制钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化
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作者 程瑜 施琼 +3 位作者 安利钦 范梦恬 皇改改 翁亚光 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期63-71,共9页
目的:探究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因沉默对钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD... 目的:探究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因沉默对钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的干预及治疗提供理论依据。方法:非CAVD瓣膜组织(non-CAVD组)取自手术治疗的主动脉夹层患者,CAVD瓣膜组织(CAVD组)取自因钙化性主动脉瓣狭窄而进行主动脉瓣膜置换术的患者,采用免疫组化和Western blot法检测non-CAVD组和CAVD组中BMP7、Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白质表达水平。选取健康家猪处死后即刻于无菌条件下取主动脉瓣叶,采用胶原酶连续消化法分离主动脉瓣膜间质细胞,观察其形态特征,并用免疫荧光染色行表型鉴定。采用脂质体转染法将BMP7-siRNA转染猪主动脉瓣膜间质细胞,采用qPCR和Western blot法验证BMP7表达的变化;利用钙盐培养基诱导细胞成骨分化,建立体外主动脉瓣膜间质细胞钙化模型后,采用ALP染色和茜素红S染色实验分别检测细胞早期及晚期成骨分化能力;采用qPCR和Western blot法分别检测细胞成骨相关基因及蛋白质Runx2、OCN和OPN的表达情况。并用Western blot法检测BMP7下游信号通路中Smad1/5/8的磷酸化水平。结果:BMP7和Runx2蛋白在CAVD组中表达明显高于non-CAVD组。成功分离出原代猪主动脉瓣膜间质细胞,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(vimentin)染色阳性,血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)染色阴性。转染BMP7-siRNA后猪主动脉瓣膜间质细胞中BMP7的mRNA和蛋白质水平均明显下调,早期及晚期成骨分化能力均明显降低。沉默BMP7基因的表达,可下调Runx2、OCN和OPN的基因及蛋白质表达,且磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白水平明显降低。结论:BMP7基因沉默抑制钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞的成骨分化能力,BMP7/Smads信号通路可能在该过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 钙化性主动脉瓣膜病 瓣膜间质细胞 骨形态发生蛋白7 成骨分化 RNA干扰
骨髓间充质干细胞外泌体在骨质疏松中的研究进展 预览
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作者 孙珂焕 朱晓峰 +3 位作者 杨丽 王攀攀 李小云 张荣华 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期393-398,415共7页
骨质疏松症(osteoporosis,OP)的发病与骨代谢平衡的破坏有关,骨吸收作用增强,骨形成作用不足,骨稳态发生改变,均会引起骨质疏松。成骨不足与骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMSC)分化方向密切相关。BMSC... 骨质疏松症(osteoporosis,OP)的发病与骨代谢平衡的破坏有关,骨吸收作用增强,骨形成作用不足,骨稳态发生改变,均会引起骨质疏松。成骨不足与骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cell,BMSC)分化方向密切相关。BMSC向成骨分化方向减少、成脂分化增多是骨质疏松症发病的重要机制,因此,寻找决定BMSC分化方向的关键因子为OP的研究和治疗提供了新思路。外泌体是由细胞分泌到胞外的膜性囊泡,富含不同种类的核酸、蛋白质、脂质和信号分子等多种生物学活性物质,参与调节和完成细胞间的信息交流与传递,影响胞内信号转导发挥生物学功能。研究表明, BMSC来源的外泌体可有效改善骨质疏松症状,促进BMSC增殖、成骨分化及骨再生。本文对BMSC来源的外泌体应用于OP的研究进展进行综述,旨在为今后的研究提供参考和思路。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 外泌体 骨质疏松 成骨分化
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机械力诱导牙周膜细胞成骨向分化中内质网应激的作用机制研究 预览
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作者 任庆源 何武林 +1 位作者 王庆 林海燕 《广东医学》 CAS 2019年第11期1530-1534,共5页
目的探讨内质网应激( endoplasmic reticulum stress,ERS)介导的 PERK - eIF2α- ATF4 通路在流体剪切力诱导的人牙周膜细胞( human periodontal ligament cells,HPDLCs)成骨分化中的作用机制。方法在分别施用 0、2、4 和 6 h 后,使用... 目的探讨内质网应激( endoplasmic reticulum stress,ERS)介导的 PERK - eIF2α- ATF4 通路在流体剪切力诱导的人牙周膜细胞( human periodontal ligament cells,HPDLCs)成骨分化中的作用机制。方法在分别施用 0、2、4 和 6 h 后,使用蠕动泵对体外培养的 HPDLCs 进行 12 达因/cm^2 流体剪切应力( fluid shear stress,FSS)。进行碱性磷酸酶染色以检测成骨分化,并使用实时定量 PCR检测蛋白激酶受体样内质网激酶( PERK)、eIF2α和转录激活因子- 4( ATF - 4)的表达。结果经 FSS 处理后,HPDLCs 的 ALP 染色为蓝紫色,与对照组有显着差异。流体剪切应力处理后人牙周膜细胞中 PERK 和 ATF4 的表达水平显著高于对照组。PERK,ATF4 基因表达量均较对照组显著增高,在 4 h 时达到峰值,6 h 有所降低( P < 0. 05),eIF2α基因表达量均较对照组显著降低,且在 4 h 时达到最低值,6 h 有所回升( P < 0. 05)。结论机械力刺激可激活ERS,导致 PERK - eIF2α- ATF4 信号通路表达增强,从而诱导人牙周膜细胞成骨向分化。 展开更多
关键词 人牙周膜细胞 PERK-eIF2α-ATF4通路 内质网应激 成骨分化
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氯化锂促进骨髓间充质干细胞增殖分化的作用途径 预览
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作者 付殷 孙贵才 +1 位作者 涂远青 凌小鹏 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第25期3956-3960,共5页
背景:寻找促进骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞分化的方法,可以为治疗骨质疏松类疾病提供治疗思路。目的:探讨氯化锂调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的机制。方法:实验采用全骨髓细胞接种法和贴壁纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞,分... 背景:寻找促进骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞分化的方法,可以为治疗骨质疏松类疾病提供治疗思路。目的:探讨氯化锂调控大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的机制。方法:实验采用全骨髓细胞接种法和贴壁纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞,分别给予0,2,5 nmol/L氯化锂进行干预;采用CCK-8法检测大鼠骨髓间充质干细胞的增殖情况,茜素红染色法检测钙化结节形成情况,PNPP法测定碱性磷酸酶活性,Western blot法检测大鼠骨髓间充质干细胞中GSK3β,p-GSK3β,β-catenin蛋白含量变化。结果与结论:①2,5 nmol/L氯化锂均能促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖,5 nmol/L氯化锂促增殖能力最强;②2,5 nmol/L氯化锂组矿化结节与碱性磷酸酶活性均比0 nmol/L氯化锂组明显,且5 nmol/L氯化锂促成骨分化更为显著;③2,5 nmol/L氯化锂能够显著增加p-GSK3β、β-catenin蛋白表达,而各组GSK3β蛋白表达差异无显著性意义;④结果表明,氯化锂能够促进大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及向成骨细胞分化,其可能机制是通过调控Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达实现的。 展开更多
关键词 氯化锂 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 成骨分化 钙化结节 碱性磷酸酶活性 WNT/Β-CATENIN信号通路 国家自然科学基金
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唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的作用研究 预览
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作者 李颉颃 苏志飞 +2 位作者 白璇 袁鹤 李继遥 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期242-247,共6页
目的研究唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的作用。方法取大鼠BMSCs体外原代培养,使用含不同浓度(1、5、10、20 μmol·L^-1)唑来膦酸的成骨诱导培养基干预细胞作为实验组,不含唑来膦酸的培养基干预细胞作为对... 目的研究唑来膦酸对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及成骨分化的作用。方法取大鼠BMSCs体外原代培养,使用含不同浓度(1、5、10、20 μmol·L^-1)唑来膦酸的成骨诱导培养基干预细胞作为实验组,不含唑来膦酸的培养基干预细胞作为对照组。CCK-8检测各组细胞增殖活性;茜素红和碱性磷酸酶染色检测各组细胞成骨分化能力;实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组细胞碱性磷酸酶(ALP)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、Ⅰ型胶原酶(COL-Ⅰ)、Runt相关转录因子2(Runx-2)、锌指结构转录因子(Osx)、骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达量。结果 1 μmol·L^-1唑来膦酸对BMSCs的增殖、成骨分化无影响,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。浓度大于1 μmol·L^-1唑来膦酸抑制BMSCs的增殖和成骨分化,且抑制作用呈浓度依赖性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。当唑来膦酸浓度为5 μmol·L^-1时,ALP、BMP-2、COL-Ⅰ等成骨相关基因的表达量高于对照组(P<0.05),而当唑来膦酸浓度大于5 μmol·L^-1时,成骨相关基因的表达量低于对照组(P<0.05)。结论低浓度唑来膦酸对BMSCs增殖和成骨分化无影响,5 μmol·L^-1唑来膦酸抑制BMSCs增殖但促进其成骨分化,高浓度唑来膦酸抑制BMSCs的增殖和成骨分化。 展开更多
关键词 双膦酸盐 骨髓间充质干细胞 增殖 成骨分化
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蛋白酶体抑制剂硼替佐米对MC3T3-E1细胞成骨分化和增殖的影响 预览
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作者 曹亚 樊荣 +6 位作者 王妍梦 王爱英 雷莉 胡晓岩 陈萍 简强 胡劲松 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期554-558,623共6页
目的观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对于小鼠MC3T3-E1细胞系成骨分化、增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度梯度的硼替佐米作用于培养的MC3T3-E1细胞,利用茜素红染色检测成骨分化,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期和... 目的观察蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib)对于小鼠MC3T3-E1细胞系成骨分化、增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度梯度的硼替佐米作用于培养的MC3T3-E1细胞,利用茜素红染色检测成骨分化,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术分析细胞周期和凋亡,Westernblot分析细胞周期相关蛋白变化。结果①硼替佐米剂量依赖性地抑制MC3T3-E1细胞的增殖活力[IC50=(7.37±0.34)nmol/L];②低浓度硼替佐米能够诱导MC3T3-E1细胞发生成骨分化;③高浓度硼替佐米对于MC3T3-E1细胞表现出明显的毒性,诱导细胞凋亡发生;④低浓度硼替佐米所诱导的MC3T3-E1成骨分化进程中,伴随有明显的G0/G1期细胞周期阻滞。Westernblot检测发现,G0/G1期细胞周期阻滞与细胞周期素依赖性激酶CDK2和CDK4表达水平降低,以及细胞周期蛋白内质网应激活化引起的细胞周期抑制蛋白p21Cip1和p27Kip1的表达上调有关。结论低剂量蛋白酶体抑制剂硼替佐米能够诱导成骨前体细胞MC3T3-E1发生成骨分化,并引起G0/G1期细胞周期阻滞介导的增殖抑制。 展开更多
关键词 蛋白酶体抑制剂 BORTEZOMIB MC3T3-E1 成骨分化 细胞增殖
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重组人骨形态发生蛋白2促进髁状突囊内骨折山羊骨髓间充质干细胞的成骨分化 预览
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作者 胡娟 姚志涛 +2 位作者 王珊 胡阿特·哈德尔 买买提吐逊·吐尔地 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第29期4610-4616,共7页
背景:国内外学者均认为髁状突囊内骨折后形成颞下颌关节强直的原因主要是大量成骨的过程。评估不同类型髁状突囊内骨折后骨髓间充质干细胞的成骨潜能,为创伤性颞下颌关节强直提供细胞生物学及分子学证据。目的:探讨重组人骨形态发生蛋白... 背景:国内外学者均认为髁状突囊内骨折后形成颞下颌关节强直的原因主要是大量成骨的过程。评估不同类型髁状突囊内骨折后骨髓间充质干细胞的成骨潜能,为创伤性颞下颌关节强直提供细胞生物学及分子学证据。目的:探讨重组人骨形态发生蛋白2对不同类型髁状突囊内骨折山羊骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:16只健康山羊双侧关节随机分为4组,8只山羊为左侧A型髁突囊内骨折组(A组)+右侧B型髁突囊内骨折组(B组),另外8只为左侧C型髁突囊内骨折组(C组)+右侧对照组(D组),分别在术后1,2,3,6个月各时间点A、B组处死2只,C、D组处死2只,即每个时间点共处死4只,分离、提取第3代骨髓间充质干细胞,根据是否进行重组人骨形态发生蛋白2诱导分为诱导组和非诱导组,按照试剂盒说明检测培养7,10 d时的碱性磷酸酶活性及骨钙素含量,诱导培养1周后进行碱性磷酸酶染色。结果与结论:与非诱导组比较,4组骨髓间充质干细胞使用重组人骨形态发生蛋白2诱导后,碱性磷酸酶活性及骨钙素含量明显升高(P<0.05);B组诱导后碱性磷酸酶活性及骨钙素含量较A、C、D组明显升高(P<0.05)。结果表明,体外分离培养的山羊骨髓间充质干细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导作用下表现出明显的成骨活性,且B型髁突囊内骨折后的骨髓间充质干细胞成骨活性明显高于A型、C型髁突囊内骨折。 展开更多
关键词 髁状突囊内骨折 骨髓间充质干细胞 重组人骨形态发生蛋白2 碱性磷酸酶活性 骨钙素 成骨分化 创伤性颞下颌关节强直 新疆维吾尔自治区自然科学基金
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骨髓间充质干细胞来源的外泌体对骨再生机制研究 预览
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作者 何伟 陈荣春 +1 位作者 曾芳俊 曾文丛 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期477-483,共7页
目的本研究旨在检测骨髓间充质干细胞外泌体(BMSC-Exos)的特征,并通过体内体外实验探讨其对成骨分化的影响及对骨再生的机制。方法①原代培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs),并对其表面抗原和多系分化潜能进行鉴定;②收集BMSC的P4~P6代细胞... 目的本研究旨在检测骨髓间充质干细胞外泌体(BMSC-Exos)的特征,并通过体内体外实验探讨其对成骨分化的影响及对骨再生的机制。方法①原代培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs),并对其表面抗原和多系分化潜能进行鉴定;②收集BMSC的P4~P6代细胞培养的培养上清液,应用试剂盒提取BMSC-Exos;③透射电镜观察BMSC-Exos的形态结构,免疫电泳检测BMSC-Exos的表面抗原;④茜素红、ALP染色验证BMSC-Exos在体外成骨分化中的作用;⑤通过大鼠颅骨缺损动物模型验证BMSC-Exos在体内骨再生的作用;⑥通过免疫电泳和qRT-PCR检测加入BMSC-Exos后的成骨细胞中相关蛋白和基因的表达情况。结果①分离培养的BMSCs形态呈多角形或长梭形,表面抗原CD90、CD29、CD44为阳性,符合间充质干细胞的特征;②BMSC-Exos呈双面凹的圆形或椭圆形,直径约40~120 nm(81.7±19.9),表面抗原与BMSC一致;③经茜素红染色和ALP染色后,染色强度与Exo浓度呈正相关;④通过对大鼠颅骨缺损模型拍摄X片、组织学分析,外泌体可促进大鼠颅骨缺损的修复和新生骨的形成;⑤免疫电泳显示经外泌体处理后,BMSC中的OCN、Runx2、β-catenin蛋白含量增加,qRT-PCR结果显示Runx2、β-catenin的基因表达上调。结论 BMSC-Exos有促进骨再生的能力,并与上调Wnt/β-catenin通路有关。 展开更多
关键词 外泌体 骨髓间充质干细胞 成骨分化 骨再生
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川陈皮素对MC3T3-E1细胞成骨分化影响的实验研究 预览
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作者 李强 兰庭超 +1 位作者 卢芸 陈静 《中华老年口腔医学杂志》 2019年第1期9-12,共4页
目的:检测川陈皮素对MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的作用及机制。方法:采用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)活性检测及实时定量PCR方法评价川陈皮素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化及相关基因表达的影响。结果:川陈皮素能促进MC3T3-E1的细胞增殖... 目的:检测川陈皮素对MC3T3-E1细胞增殖及成骨分化的作用及机制。方法:采用CCK-8法、碱性磷酸酶(ALP)活性检测及实时定量PCR方法评价川陈皮素对MC3T3-E1细胞增殖、成骨分化及相关基因表达的影响。结果:川陈皮素能促进MC3T3-E1的细胞增殖,刺激细胞ALP活性升高,上调BMP-2、COL-I、OCN、Runx 2的基因表达,BMP-2信号阻断剂(Noggin)能抑制成骨分化基因表达。结论:川陈皮素可促进MC3T3-E1成骨分化及成骨基因表达,BMP-2信号通路可能参与了该过程。 展开更多
关键词 川陈皮素 成骨细胞 成骨分化
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