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Over-expressing root-specific β-amyrin synthase gene increases glycyrrhizic acid content in hairy roots of glycyrrhiza uralensis
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作者 Yan-chao Yin Xiao-dong Zhang +5 位作者 Zhi-qiang Gao Ting Hu Lin Yang Zhi-xin Zhang Wen-dong Li Ying Liu 《中草药:英文版》 CAS 2019年第2期192-199,共8页
Objsective: Glycyrrhizia uralensis, one of the most widely-used traditional Chinese medicines, is mainly cropped in China. However, many cultivars are less in glycyrrhizic acid than Chinese Pharmacopoeia requires. In ... Objsective: Glycyrrhizia uralensis, one of the most widely-used traditional Chinese medicines, is mainly cropped in China. However, many cultivars are less in glycyrrhizic acid than Chinese Pharmacopoeia requires. In this paper, we improved glycyrrhizic acid by regulating β-amyrin synthase gene(GuBAS).Methods: Tobacco root-specific promoter TobRB7 and Gu BAS c DNA were obtained and combined with linearized pCAMBIA1305.1 to construct root-specific plant expression vector which was later transformed into Agrobacterium rhizogenes ACCC10060 by electrotransformation. The cotyledons and hypocotyls of G.uralensis were infected by the recombinant A. rhizogenes ACCC10060 to induce hairy roots. The GA content was quantified by HPLC.Results: The PCR and sequencing results both showed that three transgenic hairy root lines were obtained. The copy number of Gu BAS in these transgenic hairy roots was intended by q RT-PCR to be 3, 7,and 4. GA was detected by HPLC, and the results showed that GA was present in the three transgenic hairy roots, while absent in wild hairy roots.Conclusion: Over-expressing Gu BAS root-specifically in hairy roots of G. uralensis enhanced GA accumulation. 展开更多
关键词 β-amyrin SYNTHASE GLYCYRRHIZA uralensis Fisch. HAIRY ROOTS root-specific OVER-EXPRESSION
芝麻硬脂酸脱饱和酶基因SiSAD的克隆及功能验证 预览
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作者 周瑢 刘盼 +4 位作者 黎冬华 张艳欣 王林海 张秀荣 魏鑫 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1678-1685,共8页
[目的]对芝麻△9 硬脂酰-ACP 脱饱和酶基因 SiSAD (△9 stearoyl acyl-carrier-protein desaturase)进行克隆与表达分析,并转入拟南芥,探究其在油酸合成过程中的作用,为芝麻油酸含量的遗传改良提供分子基础。[方法]提取中芝 13 叶片的总... [目的]对芝麻△9 硬脂酰-ACP 脱饱和酶基因 SiSAD (△9 stearoyl acyl-carrier-protein desaturase)进行克隆与表达分析,并转入拟南芥,探究其在油酸合成过程中的作用,为芝麻油酸含量的遗传改良提供分子基础。[方法]提取中芝 13 叶片的总 RNA,反转录为 cDNA。根据芝麻基因组数据库中的 SiSAD序列信息(序列号为 SIN_1008977)设计引物,以 cDNA 为模板,通过 RT-PCR 克隆获得 SiSAD编码区序列,并与参考基因组序列进行比较。利用 InterPro 进行保守结构域分析,获得 SiSAD 蛋白的保守结构域。利用 BLAST 对 SiSAD 蛋白进行同源对比,获得 SiSAD 的同源蛋白质。采用邻接法构建系统进化树,获得芝麻 SAD 蛋白与橄榄、牵牛花、蓖麻、莴苣、葡萄、柑橘、拟南芥等植物 SAD 蛋白的亲缘关系。通过荧光定量 PCR 检测 SiSAD在 2 个芝麻品种中芝 33 和中丰芝一号的根、茎、叶、蕾和种子中的相对表达量,分析 SiSAD的表达特异性。将 SiSAD连接过表达载体,通过农杆菌介导法转化野生型拟南芥(Col-0),筛选阳性后代,对 T3 代转基因和野生型的拟南芥种子中硬脂酸和油酸相对含量进行测定,分析 SiSAD的功能。[结果]成功获得 SiSAD的编码区序列,与参考基因组序列一致,全长为 1 152 bp,编码 383 个氨基酸,SiSAD 蛋白的分子量为 43 kD,等电点为 6.18。发现SiSAD 蛋白含有一个保守结构域,属于脂肪酸去饱和酶家族成员,与其他植物的 SAD 蛋白质序列的同源性较高,暗示 SiSAD在不同物种中的功能可能比较保守。系统进化分析显示,芝麻 SAD 蛋白与牵牛花和橄榄的 SAD 蛋白处于同一分支,进化关系较近,与蓖麻、拟南芥、柑橘的 SAD 蛋白亲缘关系较远。荧光定量 PCR 结果表明,SiSAD在芝麻种子中的表达量远远高于其他组织,有显著的组织特异性。成功构建了 SiSAD的过表达载体,通过农杆菌介导法转化拟南芥,结果表明 SiSAD成功导入拟南芥中,� 展开更多
关键词 芝麻 SiSAD 过表达 油酸 功能验证
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Cdh1和Num1过表达菌株的构建 预览
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作者 李巧巧 庞文颖 +1 位作者 海力 唐仙英 《安徽农业科学》 CAS 2019年第10期1-4,9共5页
[目的]研究Cdh1和Num1之间是否存在相互作用,构建用于Cdh1和Num1免疫共沉淀试验的过表达菌株。[方法]首先在酵母菌株YWL630中用GAL1和3HA对CDH1进行标记,构建GAL1-3HA-CDH1NUM1-GFP菌株,再利用酵母四分体解离的方法使菌株YWL63和YWL490... [目的]研究Cdh1和Num1之间是否存在相互作用,构建用于Cdh1和Num1免疫共沉淀试验的过表达菌株。[方法]首先在酵母菌株YWL630中用GAL1和3HA对CDH1进行标记,构建GAL1-3HA-CDH1NUM1-GFP菌株,再利用酵母四分体解离的方法使菌株YWL63和YWL490分别与该菌株杂交并进行四分体解离,从而得到所需菌株。[结果]成功构建不同基因型和配型的重组酵母菌株,其中YT52成功过表达了约340kD的Num1,YT53成功过表达了340kD的Num1和75kD的Cdh1,YT57成功过表达了75kD的Cdh1。[结论]经过同源重组的方法成功标记CDH1并诱导蛋白过表达,通过酵母四分体解离的方法构建用于Cdh1和Num1互作试验的过表达菌株,为揭示APC/C是否介导Num1的降解及机制奠定基础。 展开更多
关键词 过表达 酵母四分体解离 CDH1 Num1
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葡萄转录因子VpSBP12的克隆及功能分析
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作者 侯鸿敏 王亚萍 林延翔 《北方园艺》 CAS 北大核心 2019年第3期35-43,共9页
以华东葡萄‘白河-35-1’为试材,依据葡萄全基因组数据库(http://www.genoscope.cns.fr),利用同源序列比对结果设计引物,克隆获得VpSBP12基因的DNA和cDNA序列,并分析其序列特征和表达特性,以期阐明其在葡萄抗盐胁迫中的作用,为葡萄抗逆... 以华东葡萄‘白河-35-1’为试材,依据葡萄全基因组数据库(http://www.genoscope.cns.fr),利用同源序列比对结果设计引物,克隆获得VpSBP12基因的DNA和cDNA序列,并分析其序列特征和表达特性,以期阐明其在葡萄抗盐胁迫中的作用,为葡萄抗逆育种提供参考依据。结果表明:VpSBP12基因DNA全长2 907bp,其中含有3个外显子和2个内含子;该基因的完整开放阅读框序列全长1 137bp,编码379个氨基酸,其中包括一个含有双向核定位信号的高度保守SBP结构域。经过亚细胞定位和转录活性分析表明,该基因可以定位到核里,且具有转录激活活性。构建过量表达载体将VpSBP12转化拟南芥后发现,转基因株系在盐胁迫培养基上的萌发率及根长显著高于野生对照。表明VpSBP12基因在拟南芥中的过量表达提高了植株的抗盐胁迫的能力。 展开更多
关键词 SBP基因 盐胁迫 基因克隆 过量表达
过表达GhMYB4基因对棉花茎秆木质素合成的影响 预览
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作者 夏成林 于月华 +2 位作者 左林 陈全家 倪志勇 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1267-1273,共7页
旨在探究过表达陆地棉(Gossypium hirsutum)GhMYB4基因对棉花茎秆木质素合成的影响.利用Wiesner组织化学染色的方法对棉花茎秆进行染色,并用Klason法对棉花茎秆的局部位置进行木质素总量测定.对距离下胚轴0~1cm、2~7cm、10~12cm处不同... 旨在探究过表达陆地棉(Gossypium hirsutum)GhMYB4基因对棉花茎秆木质素合成的影响.利用Wiesner组织化学染色的方法对棉花茎秆进行染色,并用Klason法对棉花茎秆的局部位置进行木质素总量测定.对距离下胚轴0~1cm、2~7cm、10~12cm处不同茎秆部位的次生壁木质素进行化学组织染色,定量分析染色组织结构发现,大部分的转基因株系相比对照受体株系在初生木质部和初生韧皮部的染色范围、细胞层数和染色程度上均有一定的显著性增加.通过对29个过表达转基因株系和对照受体株系在棉花茎秆距离下胚轴2~7cm处木质素总量的定量分析发现,有23个过表达转基因株系相比于对照受体株系的木质素总量有显著性的增加和1个株系出现显著性降低的现象.这些结果表明GhMYB4基因参与调控棉花茎秆的木质素生物合成. 展开更多
关键词 陆地棉 木质素 过表达 切片
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柑橘溃疡病相关基因CsPGIP的克隆与表达 预览
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作者 胡安华 祁静静 +9 位作者 张庆雯 陈善春 邹修平 许兰珍 彭爱红 雷天刚 姚利晓 龙琴 何永睿 李强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期639-650,共12页
【目的】克隆CsPGIP并分析其表达特性,转化柑橘得到超表达转基因株系,并进行柑橘溃疡病抗性评价,为柑橘溃疡病分子育种提供理论依据。【方法】从晚锦橙和四季橘中克隆柑橘CsPGIP,使用MEGA6进行多序列比对并构建系统发育树;采用在线软件B... 【目的】克隆CsPGIP并分析其表达特性,转化柑橘得到超表达转基因株系,并进行柑橘溃疡病抗性评价,为柑橘溃疡病分子育种提供理论依据。【方法】从晚锦橙和四季橘中克隆柑橘CsPGIP,使用MEGA6进行多序列比对并构建系统发育树;采用在线软件BaCelLo和SignalP 4.0进行亚细胞定位和信号肽预测并用GFP瞬时表达确定CsPGIP在细胞内的定位;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)比较接种溃疡病菌前后高感品种和高抗品种中柑橘CsPGIP的表达特性,分析溃疡病菌侵染与CsPGIP表达的相关性;农杆菌介导遗传转化晚锦橙,采用GUS染色初筛、PCR鉴定和qRT-PCR相结合的方法鉴定超表达转基因株系;观察转基因和野生型株系表型变化,分析其株高、叶片表型;离体针刺法对超表达转基因株系和野生型株系进行柑橘溃疡病抗性评价,统计病斑面积和病情指数,分析CsPGIP表达对柑橘抗、感溃疡病的影响。【结果】晚锦橙和四季橘CsPGIP均编码328个氨基酸,与已报道的柑橘中的PGIP同源性高达99.39%,都包含2个PGIP基因典型的LRR结构域(LRR1和LRR2);构建系统进化树发现甜橙中的CsPGIP与葡萄中的PGIP(GSVIVT01033370001)遗传距离最近,相似度达到62.97%,推测CsPGIP与葡萄中的PGIP具有类似的抗病效果。亚细胞定位和信号肽预测结果表明CsPGIP属于分泌蛋白,GFP洋葱瞬时表达证明柑橘CsPGIP定位在细胞膜和细胞壁,与预测结果一致。高感品种晚锦橙和高抗品种四季橘接种溃疡病菌后CsPGIP的表达特性不同,在高感品种中表达显著下调,而高抗品种中表达显著上调且维持在较高水平,推测CsPGIP与柑橘溃疡病的抗性相关。构建CsPGIP超表达载体并转化晚锦橙,通过PCR鉴定和qRT-PCR确定其中9个(OE1、OE3、OE4、OE5、OE6、OE9、OE10、OE12和OE14)为CsPGIP超表达阳性株系。通过对转基因株系的表型观察发现OE3、OE14株系表型与野生型株系相比差异明显,植株表 展开更多
关键词 柑橘溃疡病 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 CsPGIP 超表达 溃疡病抗性
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奶牛BTN1A1基因超表达促进乳腺上皮细胞脂滴合成
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作者 张梦璐 樊晓娜 +5 位作者 邢智洋 王月影 王江 褚贝贝 韩立强 杨国宇 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期856-863,共8页
嗜乳脂蛋白(butyrophilin subfamily 1 member A1, BTN1A1)作为一种脂滴蛋白,与乳脂肪球的形成和分泌有关。为研究奶牛(Bos taurus) BTN1A1基因超表达对乳腺上皮细胞脂滴合成的影响,本研究PCR扩增了奶牛BTN1A1基因的CDS,构建Lenti-BTN1A... 嗜乳脂蛋白(butyrophilin subfamily 1 member A1, BTN1A1)作为一种脂滴蛋白,与乳脂肪球的形成和分泌有关。为研究奶牛(Bos taurus) BTN1A1基因超表达对乳腺上皮细胞脂滴合成的影响,本研究PCR扩增了奶牛BTN1A1基因的CDS,构建Lenti-BTN1A1慢病毒重组载体,用包装好的病毒感染奶牛乳腺上皮细胞,通过嘌呤霉素筛选获得超表达BTN1A1的乳腺上皮细胞株,提取细胞DNA,对超表达细胞株进行基因型鉴定,采用qRT-PCR和Western blot分析细胞株中BTN1A1基因和蛋白的表达;用尼罗红对细胞脂滴进行荧光标记,分析BTN1A1超表达对细胞脂滴的影响,构建BTN1A1-pEGFP-N1载体,观察BTN1A1蛋白与脂滴的共定位。结果显示,克隆的BTN1A1基因CDS区序列大约1 580 bp,成功构建重组的BTN1A1慢病毒载体,用5 μg/mL嘌呤霉素筛选得到BTN1A1超表达细胞株,基因型鉴定表明细胞株基因组中成功插入BTN1A1基因;与对照组细胞相比,超表达细胞株的BTN1A1基因mRNA表达增加489倍(P<0.001),蛋白表达也明显增强;检测脂滴的荧光值发现,随着细胞培养时间的延长,BTN1A1超表达显著增加了细胞脂滴含量(P<0.01),共定位发现BTN1A1蛋白主要分布于细胞脂滴上。结果表明,超表达BTN1A1促进乳腺上皮细胞的脂滴合成。本研究为阐明奶牛乳腺上皮细胞的脂滴合成机制提供了基础数据。 展开更多
关键词 嗜乳脂蛋白 乳腺上皮细胞 超表达 脂滴
沉默ERRα对过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体转染的MG63细胞影响研究
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作者 刘少津 乔荣勤 +2 位作者 万雷 黄宏兴 魏合伟 《按摩与康复医学》 2019年第9期36-39,共4页
目的:探讨雌激素相关受体α(ERRα)对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)过表达腺病毒载体转染的MG63细胞和相关蛋白Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的影响作用。方法:将培养好的MG63细胞经过表达DKK1、Sost转染后... 目的:探讨雌激素相关受体α(ERRα)对Wnt信号通路抑制因子Dickkopf(DKK)1、骨硬化蛋白Sclerostin(Sost)过表达腺病毒载体转染的MG63细胞和相关蛋白Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的影响作用。方法:将培养好的MG63细胞经过表达DKK1、Sost转染后分为空白对照组、过表达DKK1组、过表达Sost组、过表达(DKK1+Sost)组,根据组别不同用包装好的沉默ERRα干预过表达DKK1、Sost重组腺病毒载体转染后的MG63细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖、考马斯亮蓝蛋白定量法测定ALP活性、流式分析法测定钙离子浓度,Western blot检测MG63细胞中Lrp5、CTGF、FGF2、OPN蛋白的表达量。结果:①与空白对照组比较,过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组、沉默ERRα干预空载腺病毒组的高细胞活性、ALP活性和Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的表达量均降低,钙离子浓度均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。②与过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组比较,沉默ERRα干预过表达DKK1、Sost、DKK1+Sost组的细胞活性、ALP活性和Lrp5、CTGF、FGF2、OPN的表达量均降低,钙离子浓度均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:沉默ERRα可降低过表达DKK1、Sost重组腺病毒转染后的MG63细胞增殖和ALP活性,升高钙离子浓度,对Lrp5、CTGF、FGF2、OPN蛋白表达有一定影响作用,尤其对DKK1、Sost同时过表达时的作用最为明显。 展开更多
关键词 雌激素受体相关受体α(ERRα) DKK1 SOST 腺病毒 MG63细胞 过表达 转染
过表达lncRNA HOTAIR 基因的风湿关节炎成纤维样滑膜细胞稳定株构建与筛选 预览
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作者 丁明辉 郑炜 +4 位作者 王玉天 胡胜华 刘小平 侯秀娟 朱跃兰 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第3期235-240,共6页
目的HOTAIR基因与类风湿关节炎(RA)血管翳的形成紧密相关。文中旨在建立并筛选过表达lncRNAHOTAIR的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)稳定株,为进一步研究lncRNAHOTAIR在RA发病中的作用奠定基础。方法采用PCR扩增lncRNAHOTAIR... 目的HOTAIR基因与类风湿关节炎(RA)血管翳的形成紧密相关。文中旨在建立并筛选过表达lncRNAHOTAIR的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)稳定株,为进一步研究lncRNAHOTAIR在RA发病中的作用奠定基础。方法采用PCR扩增lncRNAHOTAIR目的基因,连接到BamHI-HF-HF和XhoI酶切后的PMT406载体上,构建好的质粒经测序鉴定后,转染293T细胞包装慢病毒,分别用重组质粒及空载体慢病毒感染HFLS-RA,构建和筛选稳转株;采用Trizol法分别提取空白细胞、阴性转染细胞和过表达细胞的总RNA后,反转录得到cDNA进行qPCR扩增,根据检测结果进行相对表达量的计算。结果过表达细胞的lncRNAHOTAIR相对表达量(30.329±3.860)较空白细胞和阴性转染细胞(1.001±0.048、0.892±0.247)明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);空白细胞和阴性转染细胞差异无统计学意义(P>0.05)。说明过表达lncRNAHOTAIR的HFLS-RA细胞稳定株构建成功。结论成功构建了过表达lncRNAHOTAIR的HFLS-RA细胞稳定株,为进一步探究lncRNAHOTAIR在RA发生发展中的作用提供了实验材料。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 长链非编码HOTAIR 过表达 慢病毒
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异源表达板栗坚果淀粉合成酶基因对水稻籽粒淀粉合成的影响 预览
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作者 王玉龙 张卿 +4 位作者 赵永廉 刘建玲 秦岭 曹庆芹 邢宇 《北京农学院学报》 2019年第3期15-20,共6页
【目的】验证板栗淀粉合成酶基因的功能。【方法】将中国板栗淀粉合成酶相关基因SSS、SBE和PUL在水稻‘日本晴(Oryzasativa,Nipponbare)’中过量表达,设置转空载体水稻株系作为阴性对照,通过比较转基因植株籽粒的直链淀粉、支链淀粉、... 【目的】验证板栗淀粉合成酶基因的功能。【方法】将中国板栗淀粉合成酶相关基因SSS、SBE和PUL在水稻‘日本晴(Oryzasativa,Nipponbare)’中过量表达,设置转空载体水稻株系作为阴性对照,通过比较转基因植株籽粒的直链淀粉、支链淀粉、总淀粉和抗性淀粉含量与转空载体对照株系的差异,从而验证板栗淀粉合成酶基因的相关功能。【结果】CmSSSⅡ在水稻中的异源表达使水稻籽粒直链淀粉含量显著上升,而CmSBEⅠ使直链淀粉含量显著降低;CmSSSⅡ和CmSBEⅠ在水稻中的异源表达使水稻籽粒中支链淀粉含量、总淀粉含量、抗性淀粉含量显著上升;CmSSSⅢ和CmSBEⅡ转基因水稻株系未鉴定到转基因阳性植株;CmSSSⅣ和CmPUL转基因水稻株系淀粉含量没有显著变化。【结论】板栗SSSⅡ和SBEⅠ基因功能在直链淀粉、支链淀粉、总淀粉和抗性淀粉的积累中表现的功能有差异。 展开更多
关键词 板栗 淀粉合成酶 水稻 过表达 基因功能验证
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过表达低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞增殖、炎症反应及血管生成的影响 预览
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作者 蔡晖 石华宗 杨豫湘 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2019年第1期32-35,共4页
目的检测过表达低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cell,HREC)增殖、炎症反应及血管生成的影响。方法将体外培养HREC转染人工合成的pEGF... 目的检测过表达低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1 alpha,HIF-1α)对体外培养人视网膜血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cell,HREC)增殖、炎症反应及血管生成的影响。方法将体外培养HREC转染人工合成的pEGFP-HIF-1α重组载体,并采用荧光定量PCR检测转染前后HREC中HIF-1α的表达变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附实验(ELISA)和Western blot分别检测过表达HIF-1α对HREC增殖、炎症反应及血管生成的影响。结果体外转染pEGFP-HIF-1α可显著增加HREC中HIF-1αmRNA和蛋白表达。过表达HIF-1α可显著促进HREC增殖,HREC转染pEGFP-HIF-1α后24 h、48 h及72 h A值分别为:0.34±0.04、0.57±0.04、0.83±0.05,而HREC转染pEGFP-C1后24 h、48 h及72 h A值分别为:0.26±0.03、0.44±0.04、0.61±0.04,两者相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。过表达HIF-1α可显著增加HREC中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-1β及IL-6的蛋白表达水平,TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为(2.63±0.57)ng·L^-1、(1.94±0.41)ng·L^-1、(5.32±0.83)ng·L^-1,而转染pEGFP-C1后HREC中TNF-α、IL-1β及IL-6蛋白表达分别为(1.20±0.34)ng·L^-1、(0.66±0.27)ng·L^-1、(1.89±0.60)ng·L^-1,两者相比差异均有统计学意义(均为P<0.05)。过表达HIF-1α可显著增加HREC中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达,转染pEGFP-HIF-1α后细胞VEGF蛋白的表达为6.72±0.96,而转染pEGFP-C1后细胞VEGF蛋白的表达为2.31±0.47,两者相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达HIF-1α可促进体外培养HREC增殖、炎症反应及血管的生成。 展开更多
关键词 低氧诱导因子-1Α 过表达 人视网膜血管内皮细胞 增殖 炎症反应 血管内皮生长因子
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苹果MdSBP4基因非生物胁迫功能分析 预览
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作者 王亚萍 郭江山 +3 位作者 沙婷 张玉刚 祝军 侯鸿敏 《青岛农业大学学报:自然科学版》 2019年第1期7-13,共7页
以苹果砧木‘青砧一号’总RNA反转录合成cDNA第一链为模板,克隆得到MdSBP4基因的cDNA序列。序列分析结果表明MdSBP4基因的完整开放阅读框序列全长1473bp,编码491个氨基酸,具有明显的SBP结构域,包含2个锌指结构Zn-1、Zn-2和双向核定位信... 以苹果砧木‘青砧一号’总RNA反转录合成cDNA第一链为模板,克隆得到MdSBP4基因的cDNA序列。序列分析结果表明MdSBP4基因的完整开放阅读框序列全长1473bp,编码491个氨基酸,具有明显的SBP结构域,包含2个锌指结构Zn-1、Zn-2和双向核定位信号区NLS。实时荧光定量分析结果表明,MdSBP4基因在苹果响应非生物逆境胁迫中具有一定功能。构建过量表达载体pCAMBIA2300-35S-MdSBP4,将MdSBP4转化拟南芥后发现,转基因株系在干旱和盐胁迫培养基上的萌发率高于野生对照,推测MdSBP4基因在拟南芥中的过量表达提高了转基因种子的耐胁迫能力。 展开更多
关键词 苹果 SBP 胁迫 基因克隆 过量表达
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核桃JrGA2ox基因的克隆、亚细胞定位及功能验证 预览
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作者 张佳琦 胡恒康 +8 位作者 徐川梅 胡渊渊 黄有军 夏国华 黄坚钦 常英英 叶磊 娄和强 张启香 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第2期50-60,共11页
【目的】GA2-oxidase(GA2ox)是赤霉素合成过程中起负调控作用的一种关键酶,能够催化有活性的赤霉素为无活性的赤霉素,从而对植物生长起到一定的抑制作用。本研究主要对核桃中赤霉素氧化酶基因JrGA2ox进行克隆及功能验证,有利于进一步探... 【目的】GA2-oxidase(GA2ox)是赤霉素合成过程中起负调控作用的一种关键酶,能够催化有活性的赤霉素为无活性的赤霉素,从而对植物生长起到一定的抑制作用。本研究主要对核桃中赤霉素氧化酶基因JrGA2ox进行克隆及功能验证,有利于进一步探究核桃JrGA2ox基因在植物生长和发育过程中,尤其是在植物株高调控中的作用,从而助力于挖掘与利用核桃中更多的优质基因,培育出更多优良的核桃品种。【方法】采用PCR扩增技术,克隆获得核桃JrGA2ox基因的全长编码序列,进一步通过In-Fusion克隆技术构建具有强启动子的35S∷JrGA2ox∷GFP过表达载体;利用BLAST网络在线工具得到其他植物中的JrGA2ox同源氨基酸序列,并对其进行氨基酸同源序列比对和系统进化分析;其后,通过亚细胞定位揭示其发挥功能的场所,进一步利用农杆菌介导法将构建好的过表达载体转化到核桃体细胞胚中,获得JrGA2ox超表达的阳性转化植株,深入分析JrGA2ox基因的生物学特性。【结果】通过基因克隆,得到1条JrGA2ox开放阅读框,其全长为1 056 bp,共编码351个氨基酸,分子量为39.25 kDa。通过比对发现,该基因编码的蛋白序列含有保守2OG-FeII-Oxy蛋白结构域,具有GA2-氧化酶蛋白家族共同的结构特点,表明JrGA2ox属于GA2-氧化酶基因家族。氨基酸进化树比对分析结果显示,核桃JrGA2ox与毛白杨PtGA2ox聚为一个分支。且JrGA2ox蛋白与木本植物川桑MnGA2ox1、西洋梨PcGA2ox、桃PpGA2ox1及苹果MdGA2ox1蛋白序列同源性较高。烟草叶片表皮细胞亚细胞定位分析表明,JrGA2ox是定位于细胞核与细胞膜中的蛋白。对核桃体细胞胚进行基因遗传转化后经荧光检测及PCR验证表明,35S∷JrGA2ox∷GFP过表达载体被成功转入核桃体细胞胚中。阳性再生植株株高与对照苗相比具显著性差异,其平均株高为对照植株的1/2;且其株高与JrGA2ox基因表达量呈负相关。【结论 展开更多
关键词 核桃 GA2ox基因 过表达 亚细胞定位 同源转化
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沙门氏茵鞭毛主调控基因flhDC过表达致死大肠杆菌的初探 预览
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作者 王明晓 余子豪 +3 位作者 刘金泽 李统战 张远星 余旭平 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期1100-1104,共5页
为探究沙门氏茵鞭毛主调控基因flhDC过表达对大肠杆菌宿主菌的影响,本研究将鼠伤寒沙门氏菌flhDC基因克隆于具有超强调控能力的pNl5E6质粒中,通过观察重组大肠杆菌在对照和含IPTG诱导剂培养基中的生长情况,初步判定flhDC基因过表达对大... 为探究沙门氏茵鞭毛主调控基因flhDC过表达对大肠杆菌宿主菌的影响,本研究将鼠伤寒沙门氏菌flhDC基因克隆于具有超强调控能力的pNl5E6质粒中,通过观察重组大肠杆菌在对照和含IPTG诱导剂培养基中的生长情况,初步判定flhDC基因过表达对大肠杆菌的影响。结果显示过表达flhDC双基因致死大肠杆菌宿主茵,而过表达flhD或flhC单个基因不致死宿主茵,同一细胞中同时过表达flhD和flhC两个基因致死宿主茵;为探究沙门氏茵flhDC基因在大肠杆菌中的调控功能,本实验将flhDC基因克隆于具有严谨调控能力的pBAD33质粒中,通过测定含不同浓度阿拉伯糖半固体培养基上重组大肠杆菌菌落的直径,评估沙门氏茵flbDC在大肠杆菌宿主菌中调控鞭毛活性的能力。结果显示在一定范围内随着阿拉伯糖诱导剂浓度的提高,重组茵动力增大。表明沙门氏菌flbDC基因在低浓度表达时可以促进大肠杆菌宿主茵鞭毛活性。本实验为进一步研究flbDC基因过表达致死宿主菌的机理奠定了基础。 展开更多
关键词 flhDC基因 过表达 大肠杆菌宿主茵 pNl5E6表达栽体
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IL-17RA基因过表达慢病毒载体的构建及鉴定 预览
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作者 吴振华 何丹 王洪江 《新疆医学》 2018年第9期942-945,925共5页
目的构建白介素17受体A(IL-17RA)基因过表达慢病毒载体。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增制备IL-17RA cDNA;将IL-17RA c DNA连接于用Age1酶切消化获得的线性化GV358载体;对PCR法鉴定为阳性克隆的IL-17RAGV358载体进行测序;将IL-17RA-... 目的构建白介素17受体A(IL-17RA)基因过表达慢病毒载体。方法采用聚合酶链反应(PCR)扩增制备IL-17RA cDNA;将IL-17RA c DNA连接于用Age1酶切消化获得的线性化GV358载体;对PCR法鉴定为阳性克隆的IL-17RAGV358载体进行测序;将IL-17RA-GV 358载体用pHelper 1.0和pHelper 2.0共转染到293T细胞获得IL-17RA慢病毒包装,运用荧光法行滴度检测;用IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,运用RT-PCR、Western blot检测IL-17RA mRNA及蛋白的表达。结果 IL-17RA-GV358重组慢病毒转染293T细胞后可观察到荧光,结果显示在稳定转染的细胞中IL-17RA mRNA及蛋白的表达水平较未转染细胞显著增高。结论成功构建IL-17RA-GV358慢病毒载体,为IL-17RA基因的后期研究提供了实验基础。 展开更多
关键词 白介素-17受体A 慢病毒 载体构建 过表达
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pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠构建及高表达系的筛选
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作者 周建丽 赖娅娜 +1 位作者 李树珍 曾文滔 《南京医科大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第3期283-287,共5页
目的:构建过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠,筛选高表达稳定遗传系,建立PP2A Cα基因相关功能研究模型动物。方法:将Flag蛋白标签序列与鼠源PP2A Cαc DNA转录本设计成融合基因,插入CAG启动子下游,构建过表达载体pCAG-3... 目的:构建过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠,筛选高表达稳定遗传系,建立PP2A Cα基因相关功能研究模型动物。方法:将Flag蛋白标签序列与鼠源PP2A Cαc DNA转录本设计成融合基因,插入CAG启动子下游,构建过表达载体pCAG-3×flag-PP2A Cα。通过原核显微注射技术,将线性化pCAG-3×flag-PP2A Cα质粒注射入受精卵雄原核,构建pCAG-3×flag-PP2A Cα过表达模型小鼠,PCR筛选阳性过表达小鼠。提取阳性过表达小鼠组织总蛋白,在蛋白质水平分析转基因小鼠3×flag-PP2A Cα的表达。结果:PCR鉴定及测序结果证实,pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因载体及过表达pCAG-3×flag-PP2A Cα转基因小鼠模型构建成功。Western blot筛选转基因高表达系小鼠。结论:筛选得到pCAG-3×flag-PP2A Cα高表达稳定遗传系小鼠。 展开更多
关键词 pCAG-3×flag-PP2A 转基因小鼠 过表达
过表达GINS2基因对NB4细胞增殖的影响 预览
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作者 高艳军 邢志伟 +3 位作者 杜月菊 徐美丽 李刚 王世博 《中国实验诊断学》 2018年第11期1935-1938,共4页
目的利用腺病毒载体Ad-GINS2感染NB4细胞,观察其对NB4细胞增殖的影响。方法通过AdGINS2感染NB4细胞,利用荧光显微镜观察NB4细胞的感染情况,利用PCR和Western blotting技术检测GINS2基因的转录和翻译水平;MTT方法检测NB4细胞增殖情况。结... 目的利用腺病毒载体Ad-GINS2感染NB4细胞,观察其对NB4细胞增殖的影响。方法通过AdGINS2感染NB4细胞,利用荧光显微镜观察NB4细胞的感染情况,利用PCR和Western blotting技术检测GINS2基因的转录和翻译水平;MTT方法检测NB4细胞增殖情况。结果 PCR检测结果显示,与空载组和未处理组相比,GINS2的表达水平明显增加(P〈0.05);Western blotting技术检测结果显示,与空载组和未处理组相比,GINS2的表达水平明显增加(P〈0.05);MTT结果显示,与未处理组和空载组相比,重组腺病毒Ad-GINS2能明显促进NB4细胞的增殖(P〈0.05)。结论 Ad-GINS2成功感染NB4细胞并且促进NB4细胞增殖,为明确该基因在髓细胞白血病中的作用奠定了一定基础。 展开更多
关键词 Ad-GINS2 NB4细胞 过表达 增殖
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草莓蔗糖转运基因FaSUT5对“申阳”草莓果实糖分积累的影响 预览
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作者 吕文远 张玲 +2 位作者 王延秀 高清华 段可 《江西农业学报》 CAS 2018年第8期16-20,共5页
为了研究草莓蔗糖转运基因FaSUT5对"申阳"草莓果实糖分积累的影响,提取草莓果实总RNA并反转录为c DNA,并根据GDR数据库中已登录的栽培草莓FaSUT5的全长序列设计引物,对注射了过表达载体35s:SUT5和空载体农杆菌菌株的草莓果实进行了... 为了研究草莓蔗糖转运基因FaSUT5对"申阳"草莓果实糖分积累的影响,提取草莓果实总RNA并反转录为c DNA,并根据GDR数据库中已登录的栽培草莓FaSUT5的全长序列设计引物,对注射了过表达载体35s:SUT5和空载体农杆菌菌株的草莓果实进行了定量分析。研究结果表明:与注射空载体相比,注射了过表达载体的草莓果实中FaSUT5基因的表达量明显提高,蔗糖含量明显提高,而柠檬酸和苹果酸的含量显著下降。 展开更多
关键词 草莓 果实 过表达 蔗糖转运蛋白(SUT) 糖分 有机酸
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NPTX2基因在肿瘤中的研究进展
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作者 唐建兰 唐艳 《医学分子生物学杂志》 CAS 2018年第3期171-175,共5页
肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病,其发生发展是一个多因素参与的复杂过程,涉及多种基因突变及表观遗传学上的改变。近年来,有研究发现NPTX2基因表达于睾丸、胰腺、心、肝、骨骼肌、垂体后叶和神经系统等,并以睾丸中表达最高,其... 肿瘤是一类严重威胁人类健康的疾病,其发生发展是一个多因素参与的复杂过程,涉及多种基因突变及表观遗传学上的改变。近年来,有研究发现NPTX2基因表达于睾丸、胰腺、心、肝、骨骼肌、垂体后叶和神经系统等,并以睾丸中表达最高,其广泛定位及异常表达与肿瘤有着千丝万缕的关系。NPTX2基因在许多肿瘤中都存在着过表达或高甲基化的现象,是潜在的肿瘤相关的诊断、预测生物标记物及治疗靶点。NPTX2基因与肾细胞癌、神经母细胞瘤、胰腺癌、结直肠癌、胶质母细胞瘤等疾病有着密切的关系。 展开更多
关键词 NPTX2基因 NPTX2蛋白 肿瘤 过表达 高甲基化
水稻线粒体基因orf290功能的初步研究 预览
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作者 杨梦醒 姜慧 +3 位作者 田泽 刘学群 谭艳平 王春台 《华中农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1-6,共6页
从红莲型不育系粤泰A(YTA)线粒体基因组中克隆并鉴定了一个6.7 kb的CMS相关片段HL-sp1,序列预测发现了2个orf,其中一个编码290个氨基酸,暂命名为orf290。构建带有线粒体信号肽的超表达载体35S∶∶Rf1b5’∶∶orf290,通过农杆菌介导转化... 从红莲型不育系粤泰A(YTA)线粒体基因组中克隆并鉴定了一个6.7 kb的CMS相关片段HL-sp1,序列预测发现了2个orf,其中一个编码290个氨基酸,暂命名为orf290。构建带有线粒体信号肽的超表达载体35S∶∶Rf1b5’∶∶orf290,通过农杆菌介导转化受体保持系粤泰B(YTB),以水稻的单拷贝基因蔗糖磷酸合成酶基因(SPS)作为内参基因,以潮霉素抗性基因(hpt)作为目的检测基因,基于实时荧光定量PCR鉴定转基因T 0代植株中外源基因的拷贝数,并对阳性植株进行花粉镜检和结实率统计。结果显示获得了2株单拷贝转35 S∶∶Rf1b5′∶∶orf290植株,并且都有orf290的表达。单拷贝超表达orf290植株的平均花粉可育度30.8%,平均套袋结实率41.6%。这些结果初步证实,线粒体基因orf290可能与水稻细胞质雄性不育相关。 展开更多
关键词 水稻 细胞质雄性不育 线粒体 orf290 超表达
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