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Size-dependent gene delivery of amine-modified silica nanoparticles
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作者 Meihua Yu Yuting Niu +7 位作者 Jun Zhang Hongwei Zhang Yannan Yang Elena Taran Siddharth Jambhrunkar Wenyi Gu Peter Thorn Chengzhong Yu 《纳米研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期291-305,共15页
基于硅石的 nanoparticles 为基因交货应用正在答应搬运人。到进基因 transfection 效率上的粒子尺寸的效果的获得卓见,修改胺的 monodisperse 圣 ? ber 范围(有 125, 230, 330, 440,和 570 nm 的直径的 NH <sub>2</sub&g... 基于硅石的 nanoparticles 为基因交货应用正在答应搬运人。到进基因 transfection 效率上的粒子尺寸的效果的获得卓见,修改胺的 monodisperse 圣 ? ber 范围(有 125, 230, 330, 440,和 570 nm 的直径的 NH <sub>2</sub>-SS) 被综合。在里面为交付编码绿色的 plasmid DNA 的 NH <sub>2</sub>-SS 的 vitro transfection 效率荧光灯蛋白质(GFP )(pcDNA3-EGFP,作为 pcDNA 缩短了, 6.1 kbp ) 在 HEK293T 房间被学习。有 330 nm 的一条直径的 NH <sub>2</sub>-SS (NH <sub>2</sub>-SS330) 与另外的尺寸与 NH <sub>2</sub>-SS 粒子相比显示出最高的 GFP transfection 水平。transfection 效率作为在有约束力的能力和 NH <sub>2</sub>-SS330 的细胞的举起性能之间的妥协被发现, pcDNA 结合。NH <sub>2</sub>-SS330 也与 8.9 kbp 的一种更大的尺寸为 plasmid DNA (pDNA ) 表明了最高的 transfection 效率。到我们的知识,这研究是第一在基于硅石的基因交货系统为基因 transfection 效率表明粒子尺寸的意义。我们的调查结果对为基因治疗的合成向量的合理设计关键。 展开更多
关键词 基因传递 硅纳米颗粒 二氧化硅 大尺寸 改性 PCDNA3 质粒DNA 转染效率
铁蛋白轻链真核表达载体的构建 被引量:3
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作者 张洁 张永泽 +2 位作者 柳彩芝 段相林 樊玉梅 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期4-7,共4页
目的:为进一步研究铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)的表达对细胞内信号转导途径的影响提供平台。方法:利用PCR扩增技术得到小鼠552bp的FTL基因编码序列,并在基因的C端引入Flag标签,将此序列插入到真核表达载体pcDNA3多克... 目的:为进一步研究铁蛋白轻链(ferritin light chain,FTL)的表达对细胞内信号转导途径的影响提供平台。方法:利用PCR扩增技术得到小鼠552bp的FTL基因编码序列,并在基因的C端引入Flag标签,将此序列插入到真核表达载体pcDNA3多克隆位点区域中限制性内切酶HindⅢ和Bam H I之间,得到带有Flag标签的FTL基因的真核表达载体pcDNA3-FTL—Flag。分别经酶切和测序鉴定。用脂质体lipofectaraine^TM2000将构建成功的pcDNA3-FTL—Flag及其对照空载体pcDNA3分别转染到RAW264.7细胞中,提取蛋白后利用Western blot方法检测细胞中带有Flag标签的FTL蛋白表达。结果:重组质粒酶切鉴定得到预期片段,测序结果显示所构建的小鼠FTL基因的cDNA序列正确,并在细胞内检测到分子量约为21kDa的蛋白的强烈表达信号。结论:实验成功构建小鼠FTL基因的真核表达载体pcDNA3-FTL—Flag。 展开更多
关键词 铁蛋白轻链 RAW264 7 PCDNA3 分子克隆 免疫印迹
真核表达质粒pcDNA3.1-CSRP2-HA的构建及鉴定 被引量:1
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作者 先俊 邱娴 +2 位作者 张安兵 李理 黄文杰 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第21期4014-4017,共4页
目的:构建并鉴定真核表达质粒PcDNA3.1-CSRP2-HA。方法:据GeneBank 中人CSRP2 CDS序列设计并合成引物,提取A549 细胞总RNA,并将其逆转录成cDNA作为模板,进行PCR 扩增,获得CSRP2 目的基因后,再与PcDNA3.1-HA载体进行连接重组,构建P... 目的:构建并鉴定真核表达质粒PcDNA3.1-CSRP2-HA。方法:据GeneBank 中人CSRP2 CDS序列设计并合成引物,提取A549 细胞总RNA,并将其逆转录成cDNA作为模板,进行PCR 扩增,获得CSRP2 目的基因后,再与PcDNA3.1-HA载体进行连接重组,构建PcDNA3.1-CSRP2-HA 真核表达质粒,经限制性内切酶消化、PCR 及DNA 序列测序分析等方法鉴定后, 瞬时转染入A549细胞,Western blot 法检验CRP2 蛋白表达。结果:成功构建PcDNA3.1-CSRP2-HA 真核表达质粒,Western-blot 结果显示PcDNA3.1-CSRP2-HA 能够在A549 细胞中表达。结论:PcDNA3.1-CSRP2-HA真核表达质粒构建并鉴定成功,为后续研究CRP2在炎症诱发氧化损伤机制中的转录调控作用奠定了基础。 展开更多
关键词 CSRP2 PCDNA3 1 真核表达质粒
microRNA过表达载体构建技术的实验研究 预览
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作者 姜彬 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2014年第1期41-44,48共5页
目的:构建microRNA的表达载体,再转染生物体细胞观察该microRNA的转录或表达情况,以获知它的作用机理及对生物体的影响。方法:以microRNA-21(简化为miR-21)为例说明构建表达载体的方法。根据microRNA的成熟序列以及附近约200多碱... 目的:构建microRNA的表达载体,再转染生物体细胞观察该microRNA的转录或表达情况,以获知它的作用机理及对生物体的影响。方法:以microRNA-21(简化为miR-21)为例说明构建表达载体的方法。根据microRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共约470个碱基序列,设计PCR引物,PCR扩增,PCR产物和pcDNA3.1(+)质粒双酶切后,用T4连接酶进行连接反应,并转化入感受态细胞,筛选后对重组质粒进行双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定及测序分析,并将其转染 Hela细胞,经 RT-PCR实验检测其表达情况。结果:pcDNA3.1(+)/miR-21过表达载体转染细胞后使得miR-21在细胞中过表达。结论:成功构建了miR-21的真核表达载体,为进一步研究miR-21功能及作用机制奠定实验基础。 展开更多
关键词 微小RNA MIR-21 PCDNA3 1(+)
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猪和牛大麻素受体1和牛大麻素受体2真核表达载体的构建及在HEK293T细胞中的表达
5
作者 孙艳君 石琳 +2 位作者 蔺帅 周东庆 王志强 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2014年第15期71-75,共5页
构建含有myc标签和Kozak序列的猪大麻素受体1(pCNR1)、牛大麻素受体1(cCNR1)、牛大麻素受体2(cCNR2)真核表达载体。并在HEK293T细胞中进行表达。采用PCR方法,以猪、牛基因组DNA为模板分别扩增pCNR1、cCNRJ和cCNR2基因的编码区序... 构建含有myc标签和Kozak序列的猪大麻素受体1(pCNR1)、牛大麻素受体1(cCNR1)、牛大麻素受体2(cCNR2)真核表达载体。并在HEK293T细胞中进行表达。采用PCR方法,以猪、牛基因组DNA为模板分别扩增pCNR1、cCNRJ和cCNR2基因的编码区序列,用限制性内切酶Hindm和XbaI双酶切目的基因和真核表达载体pcDNA3.1(+),并将双酶切的目的基因定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经酶切和测序鉴定,测序鉴定正确的质粒加入Kozak序列和myc标签后,用脂质体法转染HEK293T细胞,用Westernblot检测pCNR1、cCNRJ和cCNR2的表达。结果表明:成功构建了pcDNA3.1(-4-)-myc/pCNR1、pcDNA3.1(+)-myc/cCNR1和pcDNA3.1(+)-myc/cCNR2的真核表达载体.通过Westernblot可检测到目的蛋白。结论表明pcDNA3.1(4-)-myc/pCNR1、pcI)NA3.1(+)-myc/cCNR1和pcDNA3.1(+)-myc/cCNR2真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达,为了解猪和牛的大麻素受体的药理学特性及其功能研究奠定实验基础。 展开更多
关键词 大麻素受体1 大麻素受体2 真核表达 PCDNA3 1(+) HEK293T
小鼠IL-4真核表达载体的构建及表达
6
作者 熊婧 林英豪 +3 位作者 毕丽红 王继德 刘思德 白杨 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2014年第2期216-218,共3页
目的构建小鼠白介素-4(murine interleukin-4,mIL-4)的真核表达载体,并研究其在293T细胞中的表达。方法RT-PCR扩增小鼠IL-4基因后,克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,利用电泳和测序鉴定重组质粒的大小、序列。脂质体转染法将重组质粒... 目的构建小鼠白介素-4(murine interleukin-4,mIL-4)的真核表达载体,并研究其在293T细胞中的表达。方法RT-PCR扩增小鼠IL-4基因后,克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,利用电泳和测序鉴定重组质粒的大小、序列。脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.0-mIL-4转入293T细胞中,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测其表达。结果经酶切和测序鉴定重组质粒pcDNA3.0-mIL-4构建成功,并在293T细胞中成功表达。结论pcDNA3.0-mIL-4可在真核细胞中成功表达,为进一步研究其在炎症性肠病(IBD)动物模型中的生物学功能提供了条件。 展开更多
关键词 白介素-4 peDNA3 0 真核表达 脂质体 293T细胞
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The Impact Heme Oxygenase -1 on the Regulating Factors of Hepatoma Cells' Cell Cycle 预览
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作者 Han GAO Tao ZHOU Shuyan LI Chunjing ZHANG Hongyue CHEN 《国际技术管理》 2014年第9期60-62,共3页
关键词 血红素加氧酶-1 人肝癌细胞 细胞周期 调控因子 HepG2细胞 半定量RT-PCR 肿瘤抑制基因 PCDNA3
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E-cadherin-transfected Neural Stem Cells Transplantation for Spinal Cord Injury in Rats 预览
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作者 张晨 凃峰 +1 位作者 张积银 沈霖 《华中科技大学学报:医学英德文版》 SCIE CAS 2014年第4期554-558,共5页
The effects of E-cadherin-transfected neural stem cells(NSCs) transplantation for spinal cord injury(SCI) in rats were investigated. Sixty SD rats were randomly divided into model control group, NSCs group, empty plas... The effects of E-cadherin-transfected neural stem cells(NSCs) transplantation for spinal cord injury(SCI) in rats were investigated. Sixty SD rats were randomly divided into model control group, NSCs group, empty plasmid group and E-cadherin overexpression group(n=15 each). The animal SCI model was established by using the modified Allen’s method. NSCs were cultured. Rats in NSCs group were subjected to NSCs transplantation. E-cadherin gene eucaryotic expression vector and pcDNA3.1-E-cadherin were respectively transfected into cultured NSCs, serving as empty plasmid group and E-cadherin overexpression group respectively. At 7th day after transplantation, neurological function of all rats was assessed by Tarlov score. After rats were sacrificed in each group, the number of BrdU and Nestin positive cells was counted by immunohistochemistry. Immumofluorescence method was used to detect the expression of neurofilament protein(NF) and glial fibrillary acidic protein(GFAP). As compared with model control group, the Tarlov score and the number of of BrdU and Nestin positive cells, and the expression of NF and GFAP in NSCs group, empty plasmid group, and E-cadherin overexpression group were increased significantly(P<0.05), and those in the E-cadherin overexpression group were increased more significantly than the other transplantation groups(P<0.05). It was suggested that E-cadherin could be conductive to nerve regeneration and repair probably by promoting the proliferation and differentiation of NSCs. 展开更多
关键词 神经干细胞移植 SD大鼠 移植治疗 脊髓损伤 转染 胶质纤维酸性蛋白 损伤模型 PCDNA3
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Effect of Smac and Taxol on non-small-cell lung cancer
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作者 Chuanliang Peng Yingtao Hao Yunpeng Zhao Qifeng Sun Xiaogang Zhao Bo Cong 《生物化学与生物物理学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2014年第5期387-393,共7页
一系列在结构上唯一的秒 caspases (Smacs ) 的导出线粒体的使活跃之物那行为直接作为 inhibitorof apoptosis 蛋白质(国际机场) 的对手被发现了。他们在 mitochondrial apoptosis 小径 andpromote 起关键作用导致化疗的 apoptosis。在... 一系列在结构上唯一的秒 caspases (Smacs ) 的导出线粒体的使活跃之物那行为直接作为 inhibitorof apoptosis 蛋白质(国际机场) 的对手被发现了。他们在 mitochondrial apoptosis 小径 andpromote 起关键作用导致化疗的 apoptosis。在这研究,我们构造了真核细胞的表示向量 pcDNA3.1/Smac 和 transfectedit 进 A549 人的肺癌症房间。然后,我们分析了房间侵略、克隆的能力,以及房间 apoptosis inducedby Taxol。结果证明过去表示的 Smac 显著地禁止了 A549 房间侵略、克隆的能力和 promotedapoptosis 追随者 Taxol 治疗。这发现为肺癌症的生物治疗提供一条潜在的途径。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 C蛋白 紫杉醇 Sma 半胱氨酸蛋白酶 细胞凋亡 PCDNA3 真核表达载体
小鼠白介素-10真核表达载体的构建及表达 预览
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作者 林英豪 叶长虹 +6 位作者 熊婧 毕丽红 黎丽旋 刘洋洋 张春忙 何继满 张亚历 《现代消化及介入诊疗》 2013年第3期141-144,共4页
目的构建小鼠白介素-10(murine interleukin-10,mIL-10)的真核表达载体,并研究其在293T细胞中的表达。方法 RT-PCR扩增小鼠脾脏IL-10基因后,克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,酶切和测序鉴定重组质粒的大小、序列。采用脂质体转染法将重... 目的构建小鼠白介素-10(murine interleukin-10,mIL-10)的真核表达载体,并研究其在293T细胞中的表达。方法 RT-PCR扩增小鼠脾脏IL-10基因后,克隆到真核表达载体pcDNA3.0上,酶切和测序鉴定重组质粒的大小、序列。采用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.0-mIL-10瞬时转染293T细胞,用Westernblot法检测IL-10表达。结果重组质粒pcDNA3.0-mIL-10构建成功,而且转染了293T细胞中提取的蛋白可检测到活性蛋白。结论经酶切和测序鉴定重组质粒pcDNA3.0-mIL-10构建成功,并在293T细胞中成功表达活性蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 白介素-10 PCDNA3 0 293T细胞
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pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl及pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒真核表达载体的构建
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作者 李瑗春 茹懿 +2 位作者 王秦豪 李霞 白庆咸 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第8期1408-1411,1455共5页
目的:将Bcr-Abl及Bcr-Abl T3151突变克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,为研究靶向降解受体型酪氨酸激酶BCR-Abl,抑制肿瘤细胞生长提供研究基础。方法:pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl质粒构建:分别设计引物,通过分段PCR将BCR-ABL克隆入pcDNA3.... 目的:将Bcr-Abl及Bcr-Abl T3151突变克隆入pcDNA3.1(-)真核表达载体,为研究靶向降解受体型酪氨酸激酶BCR-Abl,抑制肿瘤细胞生长提供研究基础。方法:pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl质粒构建:分别设计引物,通过分段PCR将BCR-ABL克隆入pcDNA3.1(-)。首先通过PCR扩增出Bcr-a片段,将其克隆入pcDNA3.1(-)的NheI/XhoI之间;接着将PCR扩增出的Abl-c片段克隆入KpnI/HindIII之间,最后XhoI/KpnI双酶切pGD210,将酶切下片段插入pcDNA3.1(-)的相应位点即可。酶切鉴定及测序正确后,转染293T细胞,Western blot验证质粒的表达。pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151的突变质粒:首先设计引物,第一步以pcDNA3.1(-)-BCR/ABL为模板,以Abl-c-u和ba-M1为引物扩增出A-1:560 bp。第二步,相同模板,以ba-M2和ba-M-down为引物扩增出A-2:870 bp。第三步,以扩增出的A-1和A-2为模板,以Abl-c-u和ba-M-down为引物,扩增出1434 bp的片段A-1+2,以Bcl和Kpn I分别酶切pcDNA3.1(-)-BCR/ABL以及A-1+2,将突变后的A-1+2置换入pcDNA3.1(-)-BCR/ABL。结果:PCR结果显示3.1(-)-Bcr-Abl及3.1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒条带大小符合,重组质粒经酶切鉴定和测序结果正确,转染后可见融合蛋白的表达。结论:成功构建pcDNA3.1(-)-Bcr-Abl及pcDNA 3.1(-)-Bcr-Abl T3151的真核表达载体,并且转染293T细胞后证实其能够正确表达,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 PCDNA3 1(-)-Bcr-Abl PCDNA3 1(-)-Bcr-Abl T3151突变质粒 重组质粒 CML 分段PCR
乙肝表面抗原和弓形虫棒状体分泌抗原多功能真核表达载体的构建与鉴定 预览 被引量:1
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作者 魏庆宽 肖婷 +12 位作者 李瑾 马丽萍 王林 王英婷 闫运琴 高建丽 朱嵩 仲维霞 尹昆 付斌 张佃波 闫歌 黄炳成 《中国临床新医学》 2013年第3期191-195,共5页
目的探讨通过体外扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因,构建真核表达载体pcDNA3-HBsAg-ROP2的可行性。方法根据乙肝S基因序列及pcDNA3-p30-ROP2酶切位点等情况设计、合成引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增HBsAg基因片段;应用回收、纯化... 目的探讨通过体外扩增乙肝表面抗原(HBsAg)基因,构建真核表达载体pcDNA3-HBsAg-ROP2的可行性。方法根据乙肝S基因序列及pcDNA3-p30-ROP2酶切位点等情况设计、合成引物,应用聚合酶链反应(PCR)技术,扩增HBsAg基因片段;应用回收、纯化、酶切、连接等技术,将HBsAg基因替换pcD-NA3-p30-ROP2中的p30基因,并进行酶切、PCR扩增及测序鉴定。结果 PCR扩增出约0.7 kb的目的基因HBsAg,成功构建pcDNA3-HBsAg-ROP2重组载体。PCR、酶切结果与理论相符,重组体包含了HBsAg和ROP2基因的完整序列。结论利用体外扩增乙肝表面抗原,可成功构建乙肝和弓形虫多功能重组载体pcDNA3-HBsAg-ROP2。 展开更多
关键词 乙肝表面抗原(HBsAg) 弓形虫 棒状体分泌抗原2(ROP2) 真核表达载体pcDNA3 基因重组
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Darier病ATP2A2基因A68E突变的定点诱变及其突变载体构建
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作者 史丙俊 江阳 +3 位作者 薛梅 刁庆春 胡刚 冯捷 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2013年第1期29-32,共4页
目的利用大引物PCR技术对发现的中国人Darier病ATP2A2基因A68E突变进行体外定点诱变,并构建携带有突变基因的真核表达载体。方法首先设计三条引物(包括两条外侧正向和反向引物以及内部突变引物),通过2轮PCR扩增,扩增出含有所需突... 目的利用大引物PCR技术对发现的中国人Darier病ATP2A2基因A68E突变进行体外定点诱变,并构建携带有突变基因的真核表达载体。方法首先设计三条引物(包括两条外侧正向和反向引物以及内部突变引物),通过2轮PCR扩增,扩增出含有所需突变位点的片段(ATP2A2-A68E),然后将突变片段克隆入pGEM—T载体中,通过双酶切后进行连接,将目的片段重组至真核表达载体pcDNA3.1中。结果用大引物PCR法成功构建A胞A2基因A68E突变片段,测序结果显示了ATP2A2基因上203位碱基C已变为A,此突变导致ATP2A2基因第68位密码子由丙氨酸变为谷氨酸。结论pcDNA3.1-ATP2A2-A68E突变体的成功构建,为进一步进行该突变体的结构与功能的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 大引物PCR ATP2A2 毛囊角化病 定点诱变 PCDNA3 1
人p21活化激酶6基因真核表达质粒的构建及其亚细胞定位 预览
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作者 刘彤 李丹妮 +1 位作者 李洋 李丰 《东南大学学报:医学版》 CAS 2013年第3期297-300,共4页
目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)真核细胞表达质粒,并研究其在人胚肾真核细胞HEK293中的亚细胞定位。方法:PCR扩增人PAK6基因,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1HisC中,构建含人PAK6基因的真核表达质粒pcDNA3.1HisC-PAK6。利用酶切鉴定... 目的:构建人p21活化激酶6(PAK6)真核细胞表达质粒,并研究其在人胚肾真核细胞HEK293中的亚细胞定位。方法:PCR扩增人PAK6基因,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1HisC中,构建含人PAK6基因的真核表达质粒pcDNA3.1HisC-PAK6。利用酶切鉴定,DNA测序,免疫印迹及免疫荧光方法鉴定PAK6真核表达质粒及PAK6蛋白的亚细胞定位。结果:经酶切鉴定、DNA测序、免疫印迹方法确认PAK6基因成功导入真核表达载体pcDNA3.1HisC。瞬时转染HEK293细胞,PAK6蛋白表达在细胞浆中。结论:PAK6真核表达质粒构建成功,PAK6定位于细胞浆中。 展开更多
关键词 PAK6 真核细胞 PCDNA3 1HisC 亚细胞定位
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干细胞相关基因Sox2在膀胱癌的表达及对膀胱癌细胞体外增殖影响
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作者 卫冰冰 徐卓群 +5 位作者 阮钧 杨树东 陈友干 诸明 周游 金柯 《南京医科大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期346-351,共6页
目的:初步研究干细胞相关基因Sox2在膀胱癌的表达及其对膀胱癌细胞体外增殖能力的影响。方法:利用免疫组织化学和免疫荧光法检测Sox2在膀胱癌组织及膀胱癌细胞株T24的表达;将构建成功的pcDNA3.1-SOX2-EGFP质粒转染膀胱癌细胞,采用半定... 目的:初步研究干细胞相关基因Sox2在膀胱癌的表达及其对膀胱癌细胞体外增殖能力的影响。方法:利用免疫组织化学和免疫荧光法检测Sox2在膀胱癌组织及膀胱癌细胞株T24的表达;将构建成功的pcDNA3.1-SOX2-EGFP质粒转染膀胱癌细胞,采用半定量RT-PCR和Western blot检测Sox2的表达,进一步通过MTT实验初步探讨Sox2对膀胱癌细胞T24体外增殖能力的影响。结果:膀胱癌Sox2高表达率为68.6%;构建的pcDNA3.1-SOX2-EGFP转染膀胱癌细胞T24后能够成功表达;MTT实验显示,Sox2可促进膀胱癌细胞株T24体外增殖(P〈0.05)。结论:Sox2在膀胱癌组织及细胞均可检测到表达,并能促进膀胱癌细胞株T24的体外增殖。 展开更多
关键词 膀胱癌 SOX2 PCDNA3 1-SOX2-EGFP T24细胞
pcDNA3.1/NF-κB(p65)表达载体的构建及蛋白表达
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作者 金龙 吴晓兰 +1 位作者 周昕欣 马腾 《解剖科学进展》 CAS 2013年第6期497-499,共3页
目的克隆NF-κB(p65)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/NF-κB(p65),并进行体外表达研究。方法提取B16总RNA,RT—PCR扩增出NF-κB(p65)基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染到B16细胞中,Real—timePCR和W... 目的克隆NF-κB(p65)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/NF-κB(p65),并进行体外表达研究。方法提取B16总RNA,RT—PCR扩增出NF-κB(p65)基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染到B16细胞中,Real—timePCR和Western—blot检测NF-κB(p65)的抗原性和表达量。结果获得高质量的B16总RNA,RT—PCR扩增出1.65kb的cDNA片段,成功构建TpcDNA3.1/NF-κB(p65)载体,Blast序列分析与GenBank中NM_009045.4完全一致。NF-κB(p65)重组蛋白具有抗原性,其基因和蛋白表达高于B16细胞组和空质粒pcDNA3.1组。结论成功构建pcDNA3.1/NF-κB(p65)表达载体和表达出具有NF-κB(p65)抗原性的重组蛋白。 展开更多
关键词 NF-κB(p65)基因 PCDNA3 1载体 B16细胞
HepG2细胞电转染条件的优化 预览 被引量:2
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作者 张禾璇 何燕 +3 位作者 张婷 王婵娟 单可人 官志忠 《山东医药》 CAS 2013年第42期1-4,8共5页
目的优化HepG2细胞电转染条件,进一步提高HepG2细胞的转染效率。方法采用电穿孔方法将pcDNA3.1-EGFP导入HepG2细胞中,在500μL电转染体系中,在不同电场强度、细胞数目、脉冲频率、脉冲时间、电转质粒数目、电转缓冲液、培养基血清... 目的优化HepG2细胞电转染条件,进一步提高HepG2细胞的转染效率。方法采用电穿孔方法将pcDNA3.1-EGFP导入HepG2细胞中,在500μL电转染体系中,在不同电场强度、细胞数目、脉冲频率、脉冲时间、电转质粒数目、电转缓冲液、培养基血清浓度条件下,分别将pcDNA3.1-EGFP质粒电转染HepG2细胞,检测不同条件下细胞存活率和转染率。结果电转前4℃孵育电转体系混合液10min,方波电转条件在1个电脉冲、电压270V、细胞数为2×10^6个、质粒20μg、脉冲时间20ms、电转缓冲液为优化缓冲液、电转后置于37℃、含15%FBS的DMEM高糖培养基中培养48h,可获得高转染率(60.68±1.87)%。结论优化电穿孔法的电转染条件能够有效提高HepG2细胞的电转染效率。本研究为外源基因电转染HepG2细胞提供了可靠的试验参数。 展开更多
关键词 电转染 HEPG2细胞 转染效率 PCDNA3 1-EGFP
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pcDNA3.1(+)-SAA真核表达载体构建、转染及其对人鼻咽癌细胞CNE-2增殖的影响 预览 被引量:1
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作者 江青山 肖桃源 +1 位作者 邓文蓉 沈宝茗 《山东医药》 CAS 2013年第47期8-10,共3页
目的构建peDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响。方法以CNE-2细胞的eDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与peDNA3.1(+)连接;重组质粒经酶... 目的构建peDNA3.1(+)-血清淀粉样蛋白A(SAA)真核表达载体,观察其在人鼻咽癌细胞CNE-2中的表达及对CNE-2增殖的影响。方法以CNE-2细胞的eDNA为模板,通过PCR扩增得到SAA片段,经酶切、纯化后与peDNA3.1(+)连接;重组质粒经酶切分析及测序鉴定后,用脂质体转染法转染人鼻咽癌细胞CNE-2,用Westernblot法检测转染前后该细胞中SAA蛋白的表达,并用MTr法检测转染重组质粒后的细胞增殖情况。结果peDNA3.1(+)-SAA经酶切、测序鉴定完全正确,真核表达载体构建成功;转染peDNA3.1(+)-SAA真核表达载体后CNE-2细胞中SAA蛋白表达水平明显高增高;转染pcDNA3.1(十)-SAA后CNE-2细胞增殖速度加快。结论成功构建peDNA3.1(+)-SAA真核表达载体,其能稳定表达于人鼻咽癌细胞CNE-2并促进细胞增殖;此为进一步研究SAA的生物学功能及鼻咽癌的新型治疗方法奠定了基础。 展开更多
关键词 PCDNA3 1(+)-血清淀粉样蛋白A CNE-2细胞 转染 增殖
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Construction ofa HERG mutant L539fs/47-558W pEGFP vector and the expression of the fusion protein in HEK293 cells
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《中国人民解放军军医大学学报:英文版》 CAS 2013年第4期193-205,共13页
关键词 HEK293细胞 融合蛋白表达 突变体蛋白 真核表达载体 琼脂糖凝胶电泳 激光共聚焦成像 OFA PCDNA3
Construction of PR domain eukaryotic expression vector and its inhibitory effect on esophageal cancer cells 预览 被引量:3
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作者 Yuan Chen Peng Zhang +2 位作者 Yuanguo Wang Shangwen Dong Yimei Liu 《中国癌症研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2013年第5期493-499,共7页
Objective:PR domain is responsible for the tumor suppressing activity of RIZ1.The study aimed to construct human PR domain eukaryotic expression vectors,transfect human esophageal cancer cells(TE13),and evaluate the a... Objective:PR domain is responsible for the tumor suppressing activity of RIZ1.The study aimed to construct human PR domain eukaryotic expression vectors,transfect human esophageal cancer cells(TE13),and evaluate the anticancer activity of PR domain on human esophageal cancer TE13 cells.Methods:First,mRNA was extracted from human esophageal cancer tissue by RT-PCR,then reversetranscribed to cDNA.After amplifying from the DNA template,PR domain was linked to T vector.Second,after extraction,PR domain was cut using enzyme and linked to pcDNA3.1(+).Then,the plasmid was transfered to Trans1-T1 phage resistant competent cells,following by extracting the ultrapure plasmid,and transfecting into TE13 cells.In the end,the protein expression of pcDNA3.1(+)/PR domain in TE13 was detected by Western blot,and the apoptosis of TE13 by technique of flow cytometry.Results:More than 5,000 bp purposed band of pcDNA3.1(+)/PR domain plasmid was found by agarose gel electrophoresis.After transfection,the PR domain(molecular weight of about 28 Da)was found only in 3,4 and 5 groups by Western blot.Flow cytometry assay showed apoptosis in experimental group was significantly more than that in the control group(P<0.05).Conclusions:The PR domain eukaryotic expression vector was constructed successfully.The protein of the PR domain could be expressed in esophageal cancer TE13 cells firmly after transfection,and a single PR domain could promote apoptosis of TE13 cells. 展开更多
关键词 真核表达载体 食管癌细胞 公关 抑制作用 PCDNA3 琼脂糖凝胶电泳 流式细胞仪 细胞转染
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