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两种高危型HPV假病毒的构建及其在血清中和抗体测定中的应用 预览
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作者 李雄雄 董占柱 +2 位作者 吴元元 安静 马超 《微生物学免疫学进展》 2019年第5期1-9,共9页
目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1... 目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1+载体中,通过多质粒共转染293FT细胞制备假病毒。对转染试剂、多质粒共转染比例、转染时间和细胞裂解时间进行摸索优化,通过测定假病毒的滴度,确定假病毒制备的最佳条件。收获的假病毒用30%的碘克沙醇作为介质进行超速离心纯化,纯化后的假病毒用于电镜观察。利用假病毒中和试验对制备的原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清以及HPV16和HPV18病毒样颗粒(virus-like particles, VLP)免疫血清进行中和活性评价。结果 成功构建了假病毒,并确定了假病毒制备的最佳条件:pL1∶pL2∶pEGFP等3种质粒共转染比例为1∶0.1∶0.5,总量为4μg;转染时间为72 h,细胞裂解时间为24 h时获得的假病毒滴度最高。透射电镜观察结果显示,HPV16和HPV18假病毒颗粒基本呈规则圆形,形态上与天然病毒颗粒相似。中和试验结果显示,当用原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清中和HPV16假病毒时,并不能抑制假病毒的感染活性;但HPV16和18 VLP免疫血清能明显的抑制HPV16和HPV18假病毒的感染活性。结论 成功构建并制备了2种高危型HPV假病毒,并可用于中和试验评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。 展开更多
关键词 高危型人乳头瘤病毒 假病毒 中和试验 感染活性
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含禽流感病毒血凝素蛋白VSV假病毒制备
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作者 赖天莹 李永刚 单颖 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1036-1037,共2页
目的构建含有H6N2型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的疱疹口炎病毒(VSV)。方法以H6N2亚型禽流感病毒互补脱氧核糖核酸(cDNA)为模板,扩增HA基因,并与pcDNA3.1+载体连接;使用VSVΔG*-G病毒感染制备VSVΔG*-HA假病毒,并对其血凝活性进行测定。... 目的构建含有H6N2型禽流感病毒血凝素蛋白(HA)的疱疹口炎病毒(VSV)。方法以H6N2亚型禽流感病毒互补脱氧核糖核酸(cDNA)为模板,扩增HA基因,并与pcDNA3.1+载体连接;使用VSVΔG*-G病毒感染制备VSVΔG*-HA假病毒,并对其血凝活性进行测定。结果成功构建重组表达载体pcDNA3.1HA;HA蛋白表达于293T细胞;荧光显微镜证实VSVΔG*-HA假病毒包装成功;活性试验显示VSVΔG*-HA假病毒具有与禽流感病毒相似的血凝活性。结论含有H6N2型禽流感病毒HA蛋白的VSV假病毒安全、可靠,为进一步对禽流感病毒受体等研究及筛选抗流感病毒的药物提供了技术支持和思路。 展开更多
关键词 H6N2型禽流感病毒 重组基因 包膜蛋白 假病毒 血凝实验
SARS和MERS中和抗体假病毒检测方法的建立
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作者 马建 贺鹏飞 +5 位作者 赵晨燕 陈瑞峰 刘强 王佑春 黄维金 杨晓明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期189-195,共7页
严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)均属冠状病毒科(Coronaviridae),能够引起人类严重疾病,特别是SARS-CoV可以导致严重急性呼吸综合征,而且容易造成暴发式流行,引起社会恐慌。本研究利用含有SARS... 严重急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)均属冠状病毒科(Coronaviridae),能够引起人类严重疾病,特别是SARS-CoV可以导致严重急性呼吸综合征,而且容易造成暴发式流行,引起社会恐慌。本研究利用含有SARS-CoV和MERS-CoV棘突蛋白(Spike protein, S)基因的表达质粒pcD-NA3.1-SS、pcDNA3.1-MS,成功构建了高滴度假病毒,在此基础上通过对病毒接种量进行优化,建立了稳定可靠的假病毒中和抗体检测方法,并通过检测SARS恢复期病人血清以及免疫后小鼠血清对方法的特异性、稳定性以及重复性进行分析,充分证明了该方法是有效的血清中和抗体的检测手段。本研究成功构建了不依赖于BSL-3级生物安全条件的SARS和MERS假病毒,不仅可应用于血清中和抗体检测,还为后续单克隆抗体及抗病毒药物筛选和评价、疫苗研发及病毒感染机制研究等奠定了基础。 展开更多
关键词 严重急性呼吸综合征(SARS) 中东呼吸综合征(MERS) 假病毒 中和抗体
用于MERS-CoV核酸检测的假病毒阳性对照品制备及鉴定
4
作者 周冬根 李云鹏 +3 位作者 罗洁 李军花 余军平 危宏平 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第4期233-238,共6页
目的制备安全、稳定的含有中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)靶基因片段的假病毒颗粒阳性对照品。方法人工合成含up E、ORF1b以及N基因片段的MERS-CoV核苷酸序列,连入慢病毒表达载体,将重组慢病毒表达载体与包装质粒同时转染HEK293T-17... 目的制备安全、稳定的含有中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)靶基因片段的假病毒颗粒阳性对照品。方法人工合成含up E、ORF1b以及N基因片段的MERS-CoV核苷酸序列,连入慢病毒表达载体,将重组慢病毒表达载体与包装质粒同时转染HEK293T-17细胞,利用透射电镜观察重组假病毒颗粒形态,用荧光定量RT-PCR方法检测假病毒包装情况,并进行稳定性、均一性以及线性试验。结果测序分析显示,3个基因片段正确克隆至载体pCMVMCS-GFP-PURO,经大肠杆菌表达可形成直径约为100 nm的均一、球形重组假病毒颗粒。不同浓度样品在不同温度条件下存放数日仍保持稳定,不同浓度样品、不同组别的Ct值的变异系数均小于0.1%。结论成功构建了含有upE、ORF1b以及N基因片段的MERS-CoV假病毒颗粒,可作为阳性对照品实现对核酸提取与检测过程全程监控。 展开更多
关键词 中东呼吸综合征冠状病毒 假病毒 病毒样颗粒 阳性对照
沙粒病毒进入抑制剂体外药效学评价模型的建立
5
作者 张晓雨 唐克 +2 位作者 郭家梅 陈勍 郭颖 《药学学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期735-742,共8页
沙粒病毒是一类有囊膜的RNA病毒。以哺乳动物为宿主的沙粒病毒(mammarenavirus)中,有9种可致人疾病,其中8种可致人出血热。拉沙病毒(Lassa virus,LASV)感染人所致拉沙出血热(Lassa hemorrhagic fever)流行范围广,有引发疾病大流... 沙粒病毒是一类有囊膜的RNA病毒。以哺乳动物为宿主的沙粒病毒(mammarenavirus)中,有9种可致人疾病,其中8种可致人出血热。拉沙病毒(Lassa virus,LASV)感染人所致拉沙出血热(Lassa hemorrhagic fever)流行范围广,有引发疾病大流行的可能,因此拉沙病毒被列为第一类病原微生物。目前针对沙粒病毒的疫苗和药物极为有限。本研究应用重组病毒技术,以HIV-1为核心,共构建了以9种沙粒病毒外壳蛋白包裹的重组病毒(arenavirus-GP/HIV-luc),在考察了它们对17株人、猴、鼠及蝙蝠的不同组织来源细胞进入水平的基础上,建立了沙粒病毒进入抑制剂药理活性评价模型,并用工具药验证。本研究建立的重组沙粒病毒进入抑制剂体外药效学评价模型特异性好,安全性高,可在生物安全二级(BSL-2)实验室进行实验,可为抗沙粒病毒药物和疫苗的活性评价提供技术平台,促进针对沙粒病毒出血热的药物及疫苗的研发。 展开更多
关键词 沙粒病毒 病毒性出血热 假病毒 进入抑制剂
具有广谱中和活性的HIV感染者血浆病毒膜蛋白基因及中和特征分析 被引量:1
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作者 张岱 邹森 +5 位作者 郝金娟 侯佳利 胡园园 任莉 邵一鸣 洪坤学 《中国热带医学》 CAS 2018年第5期418-422,共5页
目的分析一例具有广谱中和活性的慢性HIV感染者病毒膜蛋白(Env)基因序列特征及中和特征。方法使用单拷贝基因组扩增(SGA)方法从患者两个随访时间点血浆样本扩增env基因,测序后进行序列比对和进化树构建,分析env基因特征;将env基因... 目的分析一例具有广谱中和活性的慢性HIV感染者病毒膜蛋白(Env)基因序列特征及中和特征。方法使用单拷贝基因组扩增(SGA)方法从患者两个随访时间点血浆样本扩增env基因,测序后进行序列比对和进化树构建,分析env基因特征;将env基因克隆至pcDNATM3.1载体上,env质粒和骨架质粒pSG3△env共转染293T细胞制备假病毒,使用假病毒分别和两个时间点的自体血浆及6种不同的广谱中和抗体进行中和试验,分析Env蛋白的中和特征。结果从两个时间点血浆样本中共获得50个全长env基因,进化分析显示两个时间点序列各自聚集成簇,第1个时间点膜蛋白序列有较短的V1区和较少的V1区糖基化位点数目,第2个时间点膜蛋白序列有更高的基因多样性。自体血浆不能中和同时期的假病毒,但能中和前期的假病毒;两个时间点的假病毒对PGT121、PGT135、2G12和10E8抗体均高度敏感,但对VRC01及12A21抗体呈现中和抗性。结论该具有广谱中和活性的慢性HIV感染者病毒膜蛋白基因持续进化;感染者体内存在CD4bs类中和抗体的免疫压力。 展开更多
关键词 HIV-1 膜蛋白 中和抗体 假病毒 逃逸
广西HIV-1 B亚型假病毒的构建 预览
7
作者 黄春湲 王洪 +8 位作者 梁浩 叶力 梁冰玉 蒋俊俊 陈荣凤 宁传艺 廖艳研 余军 黄颉刚 《实用医学杂志》 北大核心 2018年第12期1942-1946,共5页
目的针对广西HIV-1 B亚型毒株构建一种优化的假病毒耐药检测模型,为表型耐药检测提供成本较低、简便易行的研究工具。方法从质粒pSV-EGFP中扩增出EGFP基因,采用双酶切法将EGFP基因克隆至骨架质粒pNL4-3.Luc.E-R-,以此构建假病毒重组骨... 目的针对广西HIV-1 B亚型毒株构建一种优化的假病毒耐药检测模型,为表型耐药检测提供成本较低、简便易行的研究工具。方法从质粒pSV-EGFP中扩增出EGFP基因,采用双酶切法将EGFP基因克隆至骨架质粒pNL4-3.Luc.E-R-,以此构建假病毒重组骨架质粒;采用RT-PCR方法从HIV-1 B亚型慢性感染者RNA中获得包膜蛋白基因,采用双酶切法将env基因克隆至真核表达质粒pc DNATM3.1(+),以此构建重组包膜质粒;单转染重组包膜质粒至293t细胞验证表达;共转染重组质粒至293t细胞获得假病毒;采用与TZM-b1细胞共培养法,通过荧光表达检测验证假病毒感染性。结果两种质粒以质量比2:1(pc DNA3.1-env:p NL4-3.EGFP.E-R-)共转染至293t细胞,48 h后收集细胞上清获得假病毒。将假病毒加入到TZM-bl细胞共培养48 h后,可以观察到荧光表达。结论带有EGFP基因重组假病毒的系统构建成功。 展开更多
关键词 HIV-1 假病毒 耐药检测
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Tim-1抗体在防治埃博拉及马尔堡病毒感染中的作用研究
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作者 张艳玲 李淑莲 +8 位作者 李葛 窦帅杰 刘艺琼 张嘉诚 李国贤 侯春梅 冯健男 沈倍奋 韩根成 《军事医学》 CSCD 北大核心 2018年第12期935-940,共6页
目的利用假病毒方法评价T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子1 (Tim-1)抗体在防治埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)感染中的可能作用。方法通过转染EBOV及MARV糖蛋白质粒,制备埃博拉及马尔堡假病毒,以HEK-293T细胞为靶细胞,利用假病... 目的利用假病毒方法评价T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子1 (Tim-1)抗体在防治埃博拉病毒(EBOV)和马尔堡病毒(MARV)感染中的可能作用。方法通过转染EBOV及MARV糖蛋白质粒,制备埃博拉及马尔堡假病毒,以HEK-293T细胞为靶细胞,利用假病毒评价抗人Tim-1(h Tim-1)抗体对EBOV及MARV的防治作用。结果成功制备了能感染HEK-293T细胞的埃博拉、马尔堡假病毒,发现Tim-1在HEK-293T细胞上的表达水平影响假病毒感染效率。同时,成功表达了抗h Tim-1抗体,ELISA及FACS实验证实了其结合特异性,发现制备的Tim-1抗体能中和埃博拉、马尔堡假病毒的感染,并显示出与埃博拉及马尔堡假病毒抗体的协同作用。结论制备的Tim-1抗体显示了良好的中和活性,为埃博拉、马尔堡假病毒感染的防治提供了新的手段,认为假病毒是可行的抗体功能评价方法。 展开更多
关键词 人T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子1 马尔堡病毒 埃博拉病毒 假病毒属 293L细胞 HEK-293T细胞
汉坦病毒76-118株假病毒的构建及其在中和试验中的应用
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作者 李燕 邱野 +4 位作者 孙宏亮 郝建丽 安继新 姜崴 李玉华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第7期701-707,共7页
目的构建含有汉坦病毒76-118株包膜蛋白的假病毒,并初步探讨双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever wiht renal syndrome,HFRS)灭活疫苗效价检测的新方法。方法提取汉坦病毒76-118株病毒RNA,PCR扩增获得M基因,将其插入真核表达质粒,... 目的构建含有汉坦病毒76-118株包膜蛋白的假病毒,并初步探讨双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever wiht renal syndrome,HFRS)灭活疫苗效价检测的新方法。方法提取汉坦病毒76-118株病毒RNA,PCR扩增获得M基因,将其插入真核表达质粒,获得重组表达质粒Pc DNA3.1-M。将质粒Pc DNA3.1-M与HIV假病毒构建体系DMEM 1、Lenti-HG和HG transgene reagent瞬时共转染Vero-E6细胞,48 h后,收集假病毒上清,对其滴度、单轮感染性、蛋白量及中和活性进行检测,并应用于双价HFRS灭活疫苗抗血清的检测。结果质粒Pc DNA3.1-M经酶切及测序鉴定证明构建正确。假病毒对Vero-E6细胞的感染性滴度为8×10^7 TU/mL,能被76-118株抗血清中和,从而失去感染性,其中和活性与野生型病毒一致。基于假病毒的效价检测方法对效价合格血清进行再检测时结果均达到了预期要求。结论构建了含有汉坦病毒76-118株包膜蛋白的假病毒,构建的假病毒可以应用于中和试验,并与野生病毒的检测结果具有高度相关性,为下一步检测双价HFRS灭活疫苗的效价提供了可能。 展开更多
关键词 汉坦病毒 假病毒 质粒 效价 中和试验
手足口病假病毒中和抗体检测平台的建立和初步应用
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作者 吴星 董方玉 +2 位作者 苏瑶 陈盼 梁争论 《中国病毒病杂志》 CAS 2018年第6期439-444,共6页
手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是婴幼儿常见的传染病,可并发重症及死亡.疫苗为防控HFMD的最有效措施.中和抗体是疫苗质控和评价的重要指标.为对疫苗研发提供工具,本课题组构建了HFMD主要病原肠道病毒A组71型(enterovirus ... 手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)是婴幼儿常见的传染病,可并发重症及死亡.疫苗为防控HFMD的最有效措施.中和抗体是疫苗质控和评价的重要指标.为对疫苗研发提供工具,本课题组构建了HFMD主要病原肠道病毒A组71型(enterovirus A71,EV-A71)、柯萨奇病毒A组6型(cox-sackievirus A6,CV-A6)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)、柯萨奇病毒B组3型(coxsackievirus B3,CV-B3)和柯萨奇病毒B组5型(coxsackievirus B5,CV-B5)的假病毒,在此基础之上建立了肠道病毒假病毒中和抗体检测平台.本文简要概述了该平台的建立和初步应用结果. 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒 EV-A71 柯萨奇病毒 假病毒 中和抗体
假病毒在中和抗体检测中的应用研究进展
11
作者 刘少华 李秀玲 《国际生物制品学杂志》 CAS 2017年第2期95-99,共5页
目前成功的病毒性疫苗大多通过诱导广谱有效的中和抗体来保护机体免受感染,因此检测血清中和抗体水平对疫苗的免疫效果评价具有重要意义。中和抗体检测的传统方法包括微量细胞病变效应抑制法、蚀斑减少试验等,均需进行活病毒操作。近... 目前成功的病毒性疫苗大多通过诱导广谱有效的中和抗体来保护机体免受感染,因此检测血清中和抗体水平对疫苗的免疫效果评价具有重要意义。中和抗体检测的传统方法包括微量细胞病变效应抑制法、蚀斑减少试验等,均需进行活病毒操作。近年来,随着逆转录病毒载体和重组病毒表达技术的发展,假病毒得到越来越多的研究,并被广泛应用在新型疫苗研发、中和抗原表位鉴定、细胞嗜性研究、抗病毒药物筛选、中和抗体检测、基因治疗等方面。此文主要对假病毒在中和抗体检测中的应用进行综述,并总结相关领域的研究进展。 展开更多
关键词 假病毒 抗体 中和 流感病毒A型 人乳头瘤病毒
携带圣路易斯脑炎病毒特异基因片段的重组假病毒颗粒的构建与鉴定 被引量:1
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作者 张娜娜 邓永强 +3 位作者 年庆功 康晓平 杨银辉 秦成峰 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期194-198,共5页
目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表... 目的制备含有圣路易斯脑炎病毒(SLEV)pr M基因片段的假病毒颗粒,旨在提供安全、可靠、稳定的核酸阳性质控品。方法根据armored RNA技术原理,构建携带含有SLEV prM基因片段的重组质粒pSE380-MS2-SLEV,转化大肠杆菌后利用IPTG进行诱导表达,三氯甲烷法纯化后利用透射电镜观察重组假病毒颗粒形态。通过DNaseⅠ和RNase A双酶消化实验评价重组假病毒颗粒的核酸酶耐受性,并结合温度敏感性实验分析假病毒颗粒中核酸片段的稳定性。利用荧光定量RT-PCR法对该假病毒颗粒进行验证。结果 PCR扩增和测序分析显示,pr M基因片段正确克隆至载体p SE380-MS2。经大肠杆菌表达可形成直径约为25 nm的均一、球形重组假病毒颗粒。核酸酶消化和温度敏感性实验表明假病毒样颗粒包装的病毒核酸能耐受核酶的降解,37℃条件下存放20 d仍保持稳定。荧光定量RT-PCR检测该假病毒颗粒检测限可达1.8×103拷贝/ml,且与同属的其他病毒无交叉反应。结论成功构建了含有SLEV prM基因片段的假病毒颗粒,具有良好的核酸酶耐受性和稳定性,可作为核酸阳性质控品对核酸提取与检测过程进行全程监控。 展开更多
关键词 圣路易斯脑炎病毒 假病毒 阳性质控品
六株不同地区分离的H7N9流感病毒假病毒制备与生物学特性研究
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作者 黄保英 李善琴 +5 位作者 齐香荣 任皎 宋敬东 谭文杰 田厚文 阮力 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期281-286,共6页
目的 选择不同地区分离的H7N9亚型流感病毒代表株,制备各代表株的假病毒,为H7N9疫苗对不同地区毒株的免疫保护效果评价奠定基础.方法 通过对29株H7N9流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)的氨基酸序列分析,获得6株不同地区H7N9亚型流感... 目的 选择不同地区分离的H7N9亚型流感病毒代表株,制备各代表株的假病毒,为H7N9疫苗对不同地区毒株的免疫保护效果评价奠定基础.方法 通过对29株H7N9流感病毒血凝素(Hemagglutinin,HA)的氨基酸序列分析,获得6株不同地区H7N9亚型流感病毒代表株病毒;采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,以HA与神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)作为包膜质粒,包装获得6株带有荧光素酶报告基因的假病毒;通过电镜负染、Western blot检测、感染MDCK后的荧光素酶读值和血凝试验等了解6株假病毒的生物学特性,通过血清交叉中和试验了解其在中和抗体检测中的应用情况.结果 筛选获得6株不同地区分离的H7N9流感病毒代表株并制备了相应的假病毒颗粒,电镜下可观察到典型的流感病毒形态,Western blot可检测到HA、NA和P24的表达;滴度测定结果显示6株假病毒对MDCK细胞的感染力为104- 105TCID50/50μl,血凝活性可达64- 512;SH1上海株H7N9 HA疫苗免疫血清针对6株流感假病毒100TCID50剂量的中和效力不同,提示6株假病毒可用于疫苗的交叉免疫效果评价.结论 成功获得6株H7N9不同地区代表株流感假病毒,为疫苗的免疫效果评价奠定了基础. 展开更多
关键词 H7N9流感病毒 假病毒 血凝素 抗原特性 中和试验
HIV-1假病毒包装及感染条件优化 预览
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作者 陈丹瑛 李蕊 +3 位作者 张玥 宋川 韩俊燕 张媛媛 《检验医学与临床》 CAS 2017年第15期2172-2174,共3页
目的对人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)假病毒包装及感染条件进行优化,获得高重复性、高稳定性和高滴度的假病毒包装方法和较高的感染效率。方法采用pSG3△env质粒与pcDNA3.1-SF162rev/env质粒共转染293T细胞包装病毒,对HIV假病毒骨架质粒... 目的对人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)假病毒包装及感染条件进行优化,获得高重复性、高稳定性和高滴度的假病毒包装方法和较高的感染效率。方法采用pSG3△env质粒与pcDNA3.1-SF162rev/env质粒共转染293T细胞包装病毒,对HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例、转染试剂与质粒比例、假病毒收获时间对HIV假病毒包装滴度的影响进行实验,同时对感染过程中假病毒接种剂量与二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-Dextran)使用浓度进行了优化。结果在包装过程中当HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例为4∶1、转染试剂与质粒比例为3∶1,转染后培养48hHIV-1假病毒的滴度最高;在假病毒感染过程中,15μg/mL的DEAE-Dextran可有效增加假病毒的感染效率且不会对细胞造成较大毒性。结论通过对包装和感染过程中关键条件的优化,可以有效提高HIV-1假病毒的包装和感染效率,增加实验技术稳定性,为新型抗艾滋病药物筛选和艾滋病疫苗评价等研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒 假病毒 包装方法 二乙氨乙基葡聚糖
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哈尔滨市儿童肠道病毒71型中和抗体水平调查研究
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作者 范荣军 曹家铭 +3 位作者 崔国权 赵志磊 姜春来 梁英 《中国卫生检验杂志》 CAS 2017年第14期2095-2097,共3页
目的了解哈尔滨市0岁~14岁不同人群儿童肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中和抗体(neutralizing antibody,NA)水平,为防控EV71引起的手足口病流行提供科学依据,为手足口病疫苗效果评价提供基础数据。方法选取哈尔滨市4家医院作为... 目的了解哈尔滨市0岁~14岁不同人群儿童肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)中和抗体(neutralizing antibody,NA)水平,为防控EV71引起的手足口病流行提供科学依据,为手足口病疫苗效果评价提供基础数据。方法选取哈尔滨市4家医院作为样品采集点,采集临床排除手足口病者的样本413份,应用假病毒系统检测样本EV71中和抗体滴度,样本率的比较用χ~2检验。结果 413份样本EV71中和抗体阳性率为37.05%;不同性别、时间EV71阳性率差异均无统计学意义(P〉0.05);不同年龄组儿童EV71阳性率不同,差异有统计学意义(χ~2=19.63,P〈0.05)。其中≤6个月组EV71中和抗体阳性率最高,为68.00%;7个月~12个月组EV71中和抗体阳性率最低,为20.83%。结论中和抗体较低的人群及时间点为手足口病防治的重点。 展开更多
关键词 哈尔滨市 肠道病毒EV71型 中和抗体 水平 假病毒 调查研究
中东呼吸综合征冠状病毒重组疫苗研究进展 被引量:1
16
作者 胡慧祯 沈宇清 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期495-500,共6页
中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome corona virus,MERS-CoV)自发现以来就引起了人们的广泛关注,研制针对该病毒的有效疫苗成为近期的研究热点。本文主要介绍该病毒重组疫苗方面的研究新进展,包括动物模型的选... 中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome corona virus,MERS-CoV)自发现以来就引起了人们的广泛关注,研制针对该病毒的有效疫苗成为近期的研究热点。本文主要介绍该病毒重组疫苗方面的研究新进展,包括动物模型的选择以及重组亚单位疫苗、重组活载体疫苗、假病毒疫苗的构建与优化。在对该病毒重组疫苗的研究新进展做出相关总结的基础上,对进一步验证疫苗安全性和有效性等的发展方向提出展望。 展开更多
关键词 MERS-CoV 转基因动物模型 重组亚单位疫苗 重组活载体疫苗 假病毒
HPV16假病毒制作方法优化
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作者 程艳香 杨潇 陈干涛 《中国优生与遗传杂志》 2016年第6期19-21,46,F0003共5页
目的为了优化HPV16假病毒制作方法。方法本实验用L1/L2结构蛋白质粒和p CMV-Gluc质粒,从融合试剂,结构质粒与报告质粒比例,细胞接种密度和收获时间等4个方面优化了HPV16假病毒的制作过程,ELISA验证不同抗体水平下假病毒检出效果。结果... 目的为了优化HPV16假病毒制作方法。方法本实验用L1/L2结构蛋白质粒和p CMV-Gluc质粒,从融合试剂,结构质粒与报告质粒比例,细胞接种密度和收获时间等4个方面优化了HPV16假病毒的制作过程,ELISA验证不同抗体水平下假病毒检出效果。结果最优条件分别为E498b,结构质粒与报告质粒2:1,293FT细胞接种密度50%,收获时间48h或72h能够达到最佳包装效率。优化后的假病毒TCID50能够达到10^5.55,血清ELISA滴度分别为1:2000;1:8000;1:16000,中和实验ID50分别为90,270和810,具有很好的区分度。结论证明该优化方法现实可行,为HPV假病毒生产和中和抗体检测提供了一定的参考意义,为后续病毒试验提供了依据。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒(HPV16) 假病毒 优化
柯萨奇病毒A组16型中和抗体假病毒荧光定量检测方法的建立及初步应用 被引量:1
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作者 郝晓甜 陈盼 +5 位作者 毛群颖 邵杰 林惠娟 罗震 吴星 梁争论 《中国病毒病杂志》 CAS 2016年第1期6-11,共6页
目的建立一种简单、快速、高通量的检测柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)中和抗体假病毒荧光定量检测方法 (pseudovirus luciferase assay,PVLA)。方法首先构建CV-A16核衣壳蛋白表达子及插入萤火虫荧光素酶报告基因的肠道病毒71型(EV-A7... 目的建立一种简单、快速、高通量的检测柯萨奇病毒A组16型(CV-A16)中和抗体假病毒荧光定量检测方法 (pseudovirus luciferase assay,PVLA)。方法首先构建CV-A16核衣壳蛋白表达子及插入萤火虫荧光素酶报告基因的肠道病毒71型(EV-A71)复制子,再顺次转染293T细胞,互补包装得到CVA16假病毒。通过条件优化并使用CV-A16国家中和抗体标准品,建立CV-A16中和抗体定量检测方法(PVLA)。用该方法检测15份CV-A16病毒免疫小鼠血清,并与传统CPE法的检测结果进行统计学分析,比较两种方法检测结果的一致性。结果得到CV-A16假病毒,建立了CV-A16假病毒中和抗体检测方法,该方法检测CV-A16中和抗体滴度的结果与传统CPE法的检测结果高度一致(相关系数r2为0.91)。结论CV-A16假病毒中和抗体检测方法可作为CPE法的替代方法,用于CV-A16中和抗体的快速检测。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A16型 假病毒 中和抗体 荧光定量
多亚型手足口病假病毒中和抗体检测平台的应用研究
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作者 范荣军 刘春天 +3 位作者 梁英 许永青 姜春来 崔国权 《中国卫生检验杂志》 CAS 2016年第24期3527-3529,共3页
目的应用多亚型手足口病假病毒中和抗体检测平台检测不同肠道病毒感染患者的血清中和抗体水平,为确定应用新的基于假病毒技术来诊断人体是否感染EV71或CVA16提供基础数据。方法 98份样本应用包装的EV71的B1、B2、C1、C2、C2-like、C4b和... 目的应用多亚型手足口病假病毒中和抗体检测平台检测不同肠道病毒感染患者的血清中和抗体水平,为确定应用新的基于假病毒技术来诊断人体是否感染EV71或CVA16提供基础数据。方法 98份样本应用包装的EV71的B1、B2、C1、C2、C2-like、C4b和CVA16的B1a 7种假病毒感染RD细胞,根据细胞中报告luciferase基因表达量确定血清中和抗体水平的强弱。结果单EV71阳性样本倾向于与EV71的B1、C1、C2-like、C4b亚型假病毒进行中和,单CVA16阳性样本倾向于与CVA16-B1a假病毒进行中和,而对于EV71的B2、C2亚型假病毒也具有一定的中和活性;EV71与CVA16均为阳性样本,对于EV71和CVA16所有亚型的假病毒都表现出了很强的中和活性;单EV71和单CVA16阳性样本中和抗体随病程变化情况显示,在第7 d~9 d达到峰值。结论通过EV71和CVA16假病毒建立了基于假病毒的中和抗体检测技术,该技术可应用于手足口病病毒的临床诊断,适用于高通量检测。 展开更多
关键词 手足口病 多亚型 假病毒 中和抗体 检测平台 应用
H7N9流感假病毒制备条件的优化及其在中和抗体检测中的初步应用 预览 被引量:2
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作者 李善琴 黄保英 +7 位作者 齐香荣 任皎 赵莉 宋敬东 王文玲 谭文杰 阮力 田厚文 《生物技术通讯》 CAS 2016年第3期348-353,共6页
目的:优化A/Anhui/1/2013 (H7N9)流感假病毒的制备条件.方法:采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,通过对质粒组合方式、骨架质粒与包膜质粒配比、质粒复合物与转染试剂配比、换液时间点、维持液血清浓度、假病毒收获时间点等条件... 目的:优化A/Anhui/1/2013 (H7N9)流感假病毒的制备条件.方法:采用基于慢病毒载体的假病毒包装系统,通过对质粒组合方式、骨架质粒与包膜质粒配比、质粒复合物与转染试剂配比、换液时间点、维持液血清浓度、假病毒收获时间点等条件的探索,优化H7N9假病毒的包装条件;通过对4种假病毒纯化方案的比较,确定纯化方法;对纯化的假病毒进行Western印迹鉴定和电镜形态观察,了解其生物学特征;通过中和试验了解其在中和抗体检测中的应用情况.结果:假病毒包装条件优化结果表明,以血凝素(HA)与神经氨酸酶(NA)作为膜质粒,采用骨架质粒与膜质粒质量比3:1、质粒复合物与转染试剂质量体积比1:2混合,转染293FT细胞后10 h换含2%胎牛血清的维持液,培养48 h后收获上清,可高效获得流感假病毒AHop-H7N9pp;不同纯化方式获得的假病毒对感染H7N9的雪貂血清的中和抗体检测结果表明,假病毒纯化方法对中和抗体检测灵敏度的影响没有显著性差异;生物学特征分析显示,纯化的假病毒在电镜下具有典型的流感病毒形态,Western印迹能检测到HA和P24蛋白;多种流感疫苗小鼠血清中和试验结果表明该假病毒具有高度特异性,可用于H7N9中和抗体检测.结论:获得了包装有A/Anhui/1/2013 (H7N9)HA与NA的假病毒,并确定了高效制备H7N9假病毒的各条件参数,为基于H7N9流感假病毒的中和抗体检测平台的建立奠定了基础. 展开更多
关键词 慢病毒载体包装系统 H7N9流感病毒 假病毒 中和试验
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