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云南省西双版纳州狂犬病流行及狂犬病病毒遗传进化特征
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作者 杨红梅 冯云 +11 位作者 来明月 李保华 范建华 马龙 文红华 许云桥 刀应华 苏梅惠 刘华兴 章域震 杨卫红 张海林 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期113-120,共8页
目的阐明云南省西双版纳傣族自治州(西双版纳州)2008—2017年狂犬病流行病学特点和狂犬病病毒流行株遗传进化特征。方法收集狂犬病病例资料,采集狂犬和可疑犬脑组织以及狂犬病患者唾液、脑脊液和尸检脑组织标本,用反转录聚合酶链式反应... 目的阐明云南省西双版纳傣族自治州(西双版纳州)2008—2017年狂犬病流行病学特点和狂犬病病毒流行株遗传进化特征。方法收集狂犬病病例资料,采集狂犬和可疑犬脑组织以及狂犬病患者唾液、脑脊液和尸检脑组织标本,用反转录聚合酶链式反应扩增狂犬病病毒核蛋白和糖蛋白基因核苷酸序列,用相关生物学软件进行同源性和进化分析。结果2008—2017年西双版纳州所辖3个县的28个乡镇(办事处、农场)共发生狂犬病62例,其中景洪市、勐海县和勐腊县分别为37例、15例和10例。其中48例被家犬咬伤(77.42%),11例被流浪犬咬伤(17.74%)。这10年间每年都有病例发生,季节性发病不明显;年龄以30~59岁为主,最小1岁,最大91岁;男女性别比为1.70∶1,以农民为主。获得9株狂犬病病毒的核蛋白基因核苷酸序列(景洪7株、勐海1株和勐腊1株),进化和同源性分析表明,5株为China-Ⅰ进化群、3株为China-Ⅱ和1株为China-Ⅵ。还获得5株狂犬病病毒的糖蛋白基因序列(景洪3株、勐海1株和勐腊1株),均为China-Ⅰ进化群,与这5株的核蛋白基因分析结果一致。西双版纳China-Ⅰ和China-Ⅱ狂犬病病毒均与近几年相邻普洱市以及四川、贵州和广西相应进化群流行株具有较近的遗传进化关系;China-Ⅵ与滇西南的China-Ⅵ以及邻国缅甸、老挝和越南流行株具有较高同源性和亲缘性。结论西双版纳狂犬病主要流行于农村地区,家养犬为主要传染源。当地存在狂犬病病毒的China-Ⅰ、China-Ⅱ和China-Ⅵ进化群,以China-Ⅰ为主;China-Ⅰ和China-Ⅱ的传播来源为相邻地区,China-Ⅵ的传播来源为缅甸和老挝。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒 进化分析 同源性分析 流行病学
新疆维吾尔自治区动物狂犬病流行特征及其毒株遗传进化分析
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作者 王宇洋 艾日登才次克 +12 位作者 陈卫东 许炜迪 刘婷芳 冯华超 涂忠忠 涂长春 古丽娜尔 薛文 美热木古丽·巴依待拉提 苏晓慧 张静 王文 冯烨 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期479-485,共7页
新疆维吾尔自治区多年来一直没有狂犬病的报道,直到2013年经实验室确诊在塔城市发生野生动物咬伤导致的羊狂犬病疫情。为了解我国新疆维吾尔自治区动物狂犬病的流行情况,本研究从2014年起在新疆维吾尔自治区开展动物狂犬病流行病学监测... 新疆维吾尔自治区多年来一直没有狂犬病的报道,直到2013年经实验室确诊在塔城市发生野生动物咬伤导致的羊狂犬病疫情。为了解我国新疆维吾尔自治区动物狂犬病的流行情况,本研究从2014年起在新疆维吾尔自治区开展动物狂犬病流行病学监测,以探讨新疆维吾尔自治区动物狂犬病的流行特点及其与周边省份和接壤国家狂犬病流行之间的关系。截止2018年底,采用直接免疫荧光试验(DFA),主动监测365份犬及69份蝙蝠样品;发病动物检测牛、羊、骆驼等家畜及流浪犬和野生狐狸样品9份。对确诊的阳性样品进行狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)N基因全长扩增,并与周边省份和接壤国家的RABV毒株进行系统进化分析,结果表明新疆维吾尔自治区的RABV均为世界群草原型亚群,与我国内蒙古自治区、蒙古、哈萨克斯坦和俄罗斯的毒株同源性较高,为96.9%~99.7%。这表明野生动物狂犬病在上述地区已经形成传播圈。为有效控制新疆维吾尔自治区狂犬病疫情,应加强当地犬群的大规模免疫,同时应加强动物狂犬病监测力度。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒(RABV) 草原型 遗传进化分析
1例临床非典型狂犬病患儿的发现和病原特征分析
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作者 李幸乐 朱春华 +3 位作者 李东晓 刘灵芝 贺志权 黄学勇 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期148-151,共4页
目的调查分析1例狂犬病患儿的临床特征、疫情资料和病原学特征,为狂犬病防控提供数据支持。方法收集患儿临床资料,开展流行病学调查;采用逆转录-聚合酶链反应和荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测狂犬病病毒核酸。结果患儿发病全程无典型... 目的调查分析1例狂犬病患儿的临床特征、疫情资料和病原学特征,为狂犬病防控提供数据支持。方法收集患儿临床资料,开展流行病学调查;采用逆转录-聚合酶链反应和荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测狂犬病病毒核酸。结果患儿发病全程无典型狂犬病临床表现,家属否认患儿近期有动物致伤史。患儿临床以发热、呕吐、腹泻为早期症状,后期陷入昏迷直至死亡。患儿发病前1个月有鼻部外伤史,同期家中有1只犬病死。患儿唾液样本经荧光定量逆转录-聚合酶链反应检测狂犬病病毒核酸结果为阳性,经逆转录-聚合酶链反应检测获得狂犬病病毒糖蛋白、核蛋白基因预期扩增片段,糖蛋白基因序列比对分析显示致病病毒株与河南省狂犬病病毒流行株核苷酸同源性为96.5%~98.8%,氨基酸同源性为96.5%~99.2%。结论患儿经实验室诊断确诊为狂犬病病例,致病狂犬病病毒为河南省固有流行株。鼻部外伤史、病死犬可能与患儿感染存在某种关联。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病病毒 逆转录-聚合酶链反应 系统进化分析
表达狂犬病病毒G蛋白重组犬瘟热病毒Snyder Hill株的构建及鉴定 预览
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作者 李翠霞 王喜军 +3 位作者 赵丹丹 帅磊 步志高 葛金英 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期12-17,共6页
为构建一株表达狂犬病病毒(RV) G蛋白的重组犬瘟热病毒(CDV),本研究以本实验室分离的CDVSnyder Hill疫苗株为基础,在CDV P和M基因之间插入RV弱毒疫苗株ERA G蛋白基因,构建重组质粒p CI-CDV-RVG及表达CDV N、P和L蛋白的辅助质粒p CI-CDVN... 为构建一株表达狂犬病病毒(RV) G蛋白的重组犬瘟热病毒(CDV),本研究以本实验室分离的CDVSnyder Hill疫苗株为基础,在CDV P和M基因之间插入RV弱毒疫苗株ERA G蛋白基因,构建重组质粒p CI-CDV-RVG及表达CDV N、P和L蛋白的辅助质粒p CI-CDVN、p CI-CDVP和p CI-CDVL,将重组质粒和辅助质粒共转染BSR细胞,拯救获得了表达RV G蛋白的重组犬瘟热病毒(rCDV-RVG),将该重组病毒在Vero细胞中传代,通过RT-PCR、间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定。结果显示RV G基因能够在r CDV-RVG中稳定存在并正确表达。病毒生长动力学曲线显示,重组病毒在Vero细胞中的增殖效率与拯救的亲本病毒r CDV无显著差异(p>0.05)。本研究表明CDV Snyder Hill株作为载体表达外源基因的潜力,为研制高效、安全、廉价的CDV-RV二联活载体疫苗奠定基础。 展开更多
关键词 重组犬瘟热病毒 狂犬病病毒 G蛋白 鉴定
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表达牛流行热病毒G蛋白的重组狂犬病病毒的构建及鉴定
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作者 赵忠欣 孙培录 +7 位作者 盖微微 燕丽娜 傅倩芸 许彤 何洪彬 郑学星 郑文文 夏咸柱 《军事医学》 CAS 北大核心 2019年第2期116-121,共6页
目的以狂犬病病毒(RABV)弱毒株SAD株为载体,构建表达牛流行热病毒(BEFV)G蛋白的重组病毒SAD-BG。方法利用反向遗传技术将BEFV的G蛋白基因ORF插入到SAD株基因组的伪基因区,获得感染性克隆,与辅助质粒共转染BHK-21细胞,获得重组病毒SAD-B... 目的以狂犬病病毒(RABV)弱毒株SAD株为载体,构建表达牛流行热病毒(BEFV)G蛋白的重组病毒SAD-BG。方法利用反向遗传技术将BEFV的G蛋白基因ORF插入到SAD株基因组的伪基因区,获得感染性克隆,与辅助质粒共转染BHK-21细胞,获得重组病毒SAD-BG株。结果与结论通过RT-PCR、免疫荧光染色鉴定,表明BEFV G蛋白基因存在于重组病毒基因组,且能表达自身RABV G蛋白与外源BEFV G蛋白。通过BHK-21细胞和NA细胞鉴定重组病毒的生长特性,在NA细胞中重组病毒的滴度高于亲本SAD株,可达1.3×108FFU/ml。成功构建了表达BEFV G蛋白的重组病毒SAD-BG,为进一步研制预防狂犬病和牛流行热(BEF)的二联疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 牛流行热病毒 G蛋白 二联疫苗
Exosomes Released from Rabies Virus-Infected Cells May be Involved in the Infection Process
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作者 Jingyu Wang Fan Wu +8 位作者 Chuntian Liu Wenwen Dai Yawei Teng Weiheng Su Wei Kong Feng Gao Linjun Cai Ali Hou Chunlai Jiang 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2019年第1期59-65,共7页
Exosomes are cell-derived vesicles that are secreted by many eukaryotic cells. It has recently attracted attention as vehicles of intercellular communication. Virus-infected cells release exosomes, which contain viral... Exosomes are cell-derived vesicles that are secreted by many eukaryotic cells. It has recently attracted attention as vehicles of intercellular communication. Virus-infected cells release exosomes, which contain viral proteins, RNA, and pathogenic molecules. However, the role of exosomes in virus infection process remains unclear and needs to be further investigated.In this study, we aimed to evaluate the effects of exosomes on rabies virus infection. OptiPrepTM density gradient centrifugation was used to isolate exosomes from rabies virus-infected cell culture supernatants. A rabies virus G protein enzyme-linked immunosorbent assay and acetylcholinesterase activity assays were performed to verify the centrifugation fractions. Exosomes were then characterized using transmission electron microscopy and Western blotting. Our results showed that rabies virus infection increased the release of exosomes. Treatment with GW4869 and si-Rab27 a, two exosomal secretion inhibitors, inhibited exosome release. Furthermore, the inhibitors reduced the levels of extracellular and intracellular viral RNA. These data indicated that exosomes may participate in the viral infection process. Moreover, our results establish a basis for future research into the roles of exosomes in rabies virus infection and as potential targets for developing new antiviral strategies. 展开更多
关键词 EXOSOMES RABIES VIRUS ISOLATION VIRUS infection
AP2M1在狂犬病病毒侵入中的作用研究 预览
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作者 马骁 王翀 +7 位作者 王金良 王子龙 王鑫鑫 帅磊 王喜军 葛金英 温志远 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期6-11,共6页
本研究前期利用RNA干扰技术在人类全基因组水平上筛选到了与狂犬病病毒(RABV)生命周期有关的宿主基因AP2M1。为进一步研究AP2M1影响RABV感染的机制,本实验在人胚胎肾细胞(HEK-293)中沉默或过表达AP2M1,采用高内涵筛选、病毒滴度检测等... 本研究前期利用RNA干扰技术在人类全基因组水平上筛选到了与狂犬病病毒(RABV)生命周期有关的宿主基因AP2M1。为进一步研究AP2M1影响RABV感染的机制,本实验在人胚胎肾细胞(HEK-293)中沉默或过表达AP2M1,采用高内涵筛选、病毒滴度检测等方法分析AP2M1对RABV感染率的影响。结果显示:敲低AP2M1,RABV感染率显著下降;过表达AP2M1,RABV感染率上升。酸绕过实验显示AP2M1在RABV感染过程中发挥作用。激光共聚焦观察显示RABV G蛋白与AP2M1无共定位。免疫共沉淀实验显示AP2M1与RABV G蛋白无直接相互作用。本研究结果表明,AP2M1基因在RABV感染过程中发挥作用,但不是通过与RABV G蛋白的直接作用影响病毒的感染。本研究为阐明AP2M1在RABV生命周期中具体作用奠定了基础。 展开更多
关键词 AP2M1 狂犬病病毒 病毒侵入 G蛋白
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香豆素化合物体内外抗狂犬病病毒的效果
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作者 徐梦娴 李明凯 +3 位作者 涂忠忠 朱国强 涂长春 刘艳 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期250-259,共10页
狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)引起的一种以侵害中枢神经系统为特征的高度致死性人兽共患传染病,虽然人类尝试了多种方法用于治疗狂犬病,但到目前为止,狂犬病一旦出现临床症状,死亡率仍高达100%,因此,寻找有效的抗RABV药物... 狂犬病是由狂犬病病毒(rabies virus,RABV)引起的一种以侵害中枢神经系统为特征的高度致死性人兽共患传染病,虽然人类尝试了多种方法用于治疗狂犬病,但到目前为止,狂犬病一旦出现临床症状,死亡率仍高达100%,因此,寻找有效的抗RABV药物仍是亟待解决的问题。已有研究显示香豆素化合物(coumarin,CM)具有一定的抗病毒作用,但其对RABV的作用目前尚没有研究。首先以BHK-21细胞为模型,通过SRB、直接免疫荧光(DFA)和病毒滴度等方法,在体外筛选具有良好抗RABV作用的CM,进而从直接灭活、阻滞吸附、不同时间点对病毒抑制效果等方面探讨CM体外抗RABV的作用机制。随后构建RABV感染动物模型,观察筛选获得的CM是否可以挽救病毒感染小鼠。结果显示,CM-3(9种CM分别标记为CM-1~9)可以有效抑制RABV在宿主细胞内的复制,但不能直接灭活病毒,也不能阻滞RABV对宿主细胞的吸附;其在RABV感染48h内均可以显著抑制病毒复制,最高抑制率可达60.0%。另外,结果显示在RABV感染后3~12h内用药,CM-3的抑制效果更为显著,抑制率均为50.0%以上;随后,通过体内试验证实CM-3(50mg/kg)可将感染小鼠的存活率由0%提高至12.5%。综上,结果提示,CM-3可能通过感染后抑制病毒复制的方式发挥抗RABV的作用,而此类结构的CM有可能作为潜在的药物用于狂犬病的治疗。 展开更多
关键词 香豆素化合物 狂犬病病毒 体内外抗病毒作用
2011—2017年四川省狂犬病病毒N、G基因序列测定与分析
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作者 冯玉亮 李伟 +2 位作者 林世华 周兴余 张佳珂 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期280-286,共7页
目的了解四川省2011—2017年间狂犬病病毒(rabies virus,RABV)株的分子特征以及流行株与疫苗株在核酸、氨基酸和蛋白修饰水平上的差异.方法对采集于2011—2017年间的23份RABV抗原阳性犬脑组织标本,通过RT-PCR以特异性引物扩增病毒核蛋白... 目的了解四川省2011—2017年间狂犬病病毒(rabies virus,RABV)株的分子特征以及流行株与疫苗株在核酸、氨基酸和蛋白修饰水平上的差异.方法对采集于2011—2017年间的23份RABV抗原阳性犬脑组织标本,通过RT-PCR以特异性引物扩增病毒核蛋白(nucleoprotein,N)基因和糖蛋白(glycoprotein,G)基因并测序,通过生物信息学软件分别对N基因和G基因进行基因特征分析.结果对23株RABV(简称四川株)N、G基因测序获得的全序列遗传进化关系分析表明,四川株均为rabies virus种,可分为3个进化分支且具有明显的地域特征,部分四川株与我国东部和北方流行毒株共循环.四川株间N基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为97.4%~100%和99.6%~100%,与参考株N基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为72.1%~99.8%和81.6%~100%.四川株与疫苗株相比在抗原位点、细胞表位以及信号肽序列上有一定差异,但主要抗原性、组织嗜性和毒力没有改变.结论四川株间无明显差异,均为rabies virus种.四川株与疫苗株病毒糖蛋白的氨基酸序列存在不同程度的差异,但毒力未发生改变. 展开更多
关键词 狂犬病病毒 核蛋白 糖蛋白 进化分析 免疫原性
遵义地区犬狂犬病毒血清抗体流行病学调查与大学生对该病的认知情况分析 预览
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作者 代军 马晓春 +4 位作者 赵宇艳 秦廷洋 徐磊 王小兵 张仕斌 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期168-172,178共6页
目的调查遵义地区犬RV血清抗体流行病学情况和大学生对狂犬病的认知情况。方法采用RV生物素双抗原夹心ELISA试剂盒对遵义地区422份犬血清样品进行RV血清抗体检测,采用网络问卷对遵义地区大学生开展狂犬病认知情况调查。结果共采集422份... 目的调查遵义地区犬RV血清抗体流行病学情况和大学生对狂犬病的认知情况。方法采用RV生物素双抗原夹心ELISA试剂盒对遵义地区422份犬血清样品进行RV血清抗体检测,采用网络问卷对遵义地区大学生开展狂犬病认知情况调查。结果共采集422份犬血清样本,其中宠物犬297例,192例免疫过狂犬疫苗,65例未免疫,40例免疫信息不详,125例流浪犬狂犬疫苗免疫信息不详。422份犬血清样品RV抗体总阳性率为43.36%(183/422),其中,宠物犬、流浪犬、雄性犬、雌性犬的RV抗体阳性率分别为56.57%(168/297)、12%(15/125)、41.63%(102/245)、45.76%(81/177),犬性别与RV抗体阳性率差异无统计学意义(χ^2=0.714,P﹥0.05),宠物犬与流浪犬RV的抗体阳性差异存在统计学意义(χ^2=71.143,P<0.05)。问卷调查显示大学生群体对狂犬病具有较高的认知水平。结论遵义地区流浪犬RV抗体阳性率远低于宠物犬,应加强流浪犬管理,遵义地区大学生群体对狂犬病具有较高的认知水平,这对于本地区狂犬病的预防与控制具有积极意义。 展开更多
关键词 狂犬病毒 流行病学 ELISA 问卷调查
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一种人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的瞬时表达及性质分析 预览
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作者 宋宪铭 安晨 +3 位作者 张超 熊颖 张祺 陈继军 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期17-21,共5页
目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT... 目的瞬时表达人源重组抗狂犬病病毒单克隆抗体,并对抗体性质进行分析。方法PCR法扩增抗体轻、重链可变区并分别构建真核表达质粒;瞬时转染HEK293EBNA1细胞;抗体经亲和纯化后,CE-SDS法分析纯化后抗体单体比例,用快速荧光灶抑制试验(RFFIT)分析抗体体外抗狂犬病病毒中和活性,ELISA分析抗体与3aG、CTN、PV及CVS株的结合。结果提取瞬时表达质粒的A260/280nm比值在2.0~2.1之间纯化后抗体非还原CE-SDS单体纯度为74.4%;还原CE-SDS抗体轻、重链峰合计占比超过95%;抗体RFFIT体外中和活性为293.37IU/mL,比活达628.21IU/mg,抗体与3aG、CTN、PV及CVS株交叉反应均为阳性。结论该株抗体具有较高体外抗狂犬病病毒中和活性,与主要疫苗株均有较强结合。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 单克隆抗体 快速荧光灶抑制试验(RFFIT) 瞬时表达
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微管对狂犬病病毒胞内感染的影响 预览
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作者 高洁 赵铭昕 +5 位作者 刘恩华 赵维荣 段铭 关振宏 张茂林 郭艺迪 《湖北农业科学》 2019年第10期121-125,共5页
狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)依赖宿主细胞完成其感染周期,且在胞浆内复制。微管作为一种细胞骨架,是介导胞内物质运输的重要通道。为探究狂犬病病毒胞内感染是否依赖于细胞骨架——微管,利用小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a),接种实验室标... 狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)依赖宿主细胞完成其感染周期,且在胞浆内复制。微管作为一种细胞骨架,是介导胞内物质运输的重要通道。为探究狂犬病病毒胞内感染是否依赖于细胞骨架——微管,利用小鼠神经母细胞瘤细胞(N2a),接种实验室标准攻击毒株CVS-11,通过诺考达唑(Nocodazole)抑制剂破坏微管形成,采用实时荧光定量PCR方法、WesternBlot方法、免疫荧光方法检测微管对于RABV感染量的影响,并采用TCID50法测定微管对RABV病毒滴度的影响。结果表明,Nocodazole通过抑制微管的形成,使RABVN基因水平降低25%、N蛋白水平降低50%,免疫荧光检测到病毒感染率降低70%,上清液中病毒滴度由106.5TCID50/mL降低至104.5TCID50/mL,说明狂犬病病毒胞内感染依赖于细胞骨架-微管的参与。该结果为进一步研究狂犬病病毒胞内运输及其复制机制的研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 微管 诺考达唑 胞内感染
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狂犬病病毒实时荧光RT-RPA等温检测方法的建立 预览
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作者 谭理琦 郑晓聪 +2 位作者 王翠萍 李汶松 秦智锋 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期44-47,I0002,共5页
为了建立一种灵敏、特异、快捷的实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)检测狂犬病病毒的方法,依据狂犬病病毒不分节段单股负链中N基因相对保守的核苷酸序列,设计了4条引物及1条探针,筛选出一套可用于RPA引物与探针组合,建立了狂犬病病毒的荧光... 为了建立一种灵敏、特异、快捷的实时荧光重组酶聚合酶扩增(RPA)检测狂犬病病毒的方法,依据狂犬病病毒不分节段单股负链中N基因相对保守的核苷酸序列,设计了4条引物及1条探针,筛选出一套可用于RPA引物与探针组合,建立了狂犬病病毒的荧光RT-RPA检测方法,测试了该方法灵敏度和特异性,并进行了临床验证。结果显示,本研究建立的RPA方法在39℃恒温反应仅需20 min,能够特异的检测狂犬病病毒,最低检测限为1.83×101 Copies/μL,临床样品测试与标准方法结果一致。表明本研究建立的检测狂犬病病毒的荧光RT-RPA方法具有特异,灵敏,快速,简便的特点,适用于现场检测以及在基层实验室推广应用。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) 狂犬病病毒(RV) 检测方法
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人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的构建及验证 预览
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作者 房世娣 赵晓瑞 +3 位作者 陈继军 安晨 南建军 毛晓燕 《微生物学免疫学进展》 2019年第4期7-13,共7页
目的利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌体抗体库,构建单克隆抗体(单抗)轻、重链质粒,瞬时表达,纯化后验证具有高中和活性的单抗。方法以从ScFv噬菌体抗体库中筛选获得特异性抗体为模板,PCR扩增抗体轻、重链可变区序列,构建人源全分子抗体瞬... 目的利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌体抗体库,构建单克隆抗体(单抗)轻、重链质粒,瞬时表达,纯化后验证具有高中和活性的单抗。方法以从ScFv噬菌体抗体库中筛选获得特异性抗体为模板,PCR扩增抗体轻、重链可变区序列,构建人源全分子抗体瞬时转染质粒;轻、重链质粒混合后转染HEK293 EBNA1细胞,瞬时表达全分子抗体。采用Mabselect SuRe介质手动亲和纯化抗体,Nano Vue超微量分光光度计测定蛋白质的质量浓度,快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test, RFFIT)进行体外中和效价验证。结果成功构建22个轻链质粒,15个重链质粒。通过真核细胞瞬时表达后,经手动亲和纯化后,获得22株单抗。除1株抗体外,其余21株抗体的蛋白质量浓度均>300μg/mL;部分抗体纯度均在90%以上。中和活性结果显示,5株在1 500~1 800 IU/mg之间;8株在800~1 500 IU/mg之间;7株在500~800 IU/mg之间;其余2株在500 IU/mg以下。结论成功构建并验证获得20株中和活性>500 IU/mg的人源抗狂犬病病毒单抗,为单抗混合制剂的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 单克隆抗体 噬菌体抗体库 快速荧光灶抑制试验
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狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白密码子优化、原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 郭冰峰 张少宁 +3 位作者 安文琪 梁雪爽 张静静 马小伟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期147-151,共5页
目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,... 目的对狂犬病病毒CTN-1株基质蛋白(matrix protein,MP)密码子进行优化,原核表达重组蛋白,并制备多克隆抗体。方法通过GenBank查找狂犬病病毒CTN-1株M蛋白编码序列并体外合成,将目的序列插入原核表达载体pET-28b,构建重组质粒pET-28b-M,转入大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达M蛋白,经亲和层析和复性后,免疫豚鼠制备多克隆抗体,Western blot和间接ELISA检测多抗的免疫反应性以及效价。结果成功构建了pET-28b-M重组原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,经亲和层析及透析获得纯化的重组M蛋白,制备的多克隆抗体可与M蛋白发生特异性结合,效价达1∶21 870。结论成功优化表达了狂犬病病毒CTN-1株M蛋白,制备了高效价的多克隆抗体,为后续M蛋白生物学分析以及新型狂犬病疫苗的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 基质蛋白 密码子优化 原核表达 亲和层析 多克隆抗体
狂犬病病毒G蛋白在水稻中的表达及遗传稳定性鉴定
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作者 申雪静 张二芹 +8 位作者 许倩茹 刘林科 万博 刘运超 孙亚宁 赵东 牛香香 邓瑞广 张改平 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期204-211,共8页
狂犬病病毒(Rabies virus, RV) G蛋白是唯一能激发机体产生细胞免疫,并诱导产生中和抗体的结构蛋白,也是狂犬病病毒中唯一糖基化的结构蛋白,此外还介导细胞融合、受体结合以及参与病毒的致病等。本研究将优化的狂犬病G基因(GenBank登录... 狂犬病病毒(Rabies virus, RV) G蛋白是唯一能激发机体产生细胞免疫,并诱导产生中和抗体的结构蛋白,也是狂犬病病毒中唯一糖基化的结构蛋白,此外还介导细胞融合、受体结合以及参与病毒的致病等。本研究将优化的狂犬病G基因(GenBank登录号:ABI53869.1)序列插入到中间载体pMP3上,成功构建中间载体pMP3-G,然后将中间载体pMP3-G和植物载体pCAMBIA1300通过双酶切、连接,成功地构建了植物表达载体pCAMBIA1300-G。挑选空白未转基因水稻(Oryza sativa)种子TP309消毒,在愈伤诱导培养基上31℃光照3 d,使其长出愈伤组织,用已经转入狂犬病G基因的根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)EHA105去侵染愈伤组织,并与愈伤组织共培养3 d,将狂犬病G基因导入水稻愈伤组织中。愈伤组织再经过潮霉素抗性筛选、分化、出芽、生根,获得313株植株,取313株植株的叶片通过十六烷基三甲基溴化铵(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, CTAB)法提取叶片基因组DNA,对其进行PCR扩增,经核酸胶进行初步鉴定,有79株为阳性,经过炼苗、种植共获得50株阳性表达植株。分别随机挑选50株阳性植株的种子,切半,标记,将不含胚乳的一半研磨,用提取液提取蛋白后通过抗原检测试纸条和Western blot检测,结果表明,G蛋白在转基因水稻种子中成功表达,且具有良好的反应原性。从50株阳性表达植株中挑选出高表达、反应原性最好的4个株系,将这4个株系T1代中与检测阳性结果相对应的含有胚乳的另一半种子进行组织培养种植,在植株移栽大田前后,再次用CTAB法提取T1代植株叶片基因组DNA,并以水稻的内源基因水稻淀粉分支酶基因(rice starch branching enzyme,RBE4)为内参基因,通过相对荧光定量PCR(relative fluorescence quantitative PCR)方法筛选阳性植株中的纯合植株,通过绝对荧光定量PCR(absolute real-time PCR)计算纯合植株的拷贝数,结果显示,132株植株中35株为� 展开更多
关键词 狂犬病病毒 G基因 转基因水稻 荧光定量 纯合子 拷贝数
狂犬病病毒致病机制的最新研究进展 被引量:2
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作者 张旭 纪森林 +3 位作者 赵雯 朱梦岩 蔡煜琛 粟硕 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第3期295-304,共10页
狂犬病是一种古老的人兽共患传染病,临床上致死率几乎为100%,目前仍然无有效的治疗方法。近年来,关于狂犬病病毒的致病机制研究取得了众多进展,本文总结了近年来关于狂犬病病毒受体和结构蛋白对致病性影响的研究进展,归纳了狂犬病病毒... 狂犬病是一种古老的人兽共患传染病,临床上致死率几乎为100%,目前仍然无有效的治疗方法。近年来,关于狂犬病病毒的致病机制研究取得了众多进展,本文总结了近年来关于狂犬病病毒受体和结构蛋白对致病性影响的研究进展,归纳了狂犬病病毒与宿主免疫系统相互作用机制,为临床治疗指出了研究方向。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 致病机制 狂犬病病毒受体 研究进展
广东地区蝙蝠携带登革热病毒、寨卡病毒以及狂犬病病毒的流行病学调查 被引量:1
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作者 程明基 熊益权 +6 位作者 朱娜玲 陈雪姣 何文巧 文羽祺 莫云 陈燕霞 陈清 《中华疾病控制杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期522-525,共4页
目的 了解广东地区蝙蝠携带狂犬病病毒、寨卡病毒以及登革热病毒情况。方法 2014-2016年分别在广州市和湛江市部分地区采集蝙蝠,取其血清和脑组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time quantitative polymerase chain reac... 目的 了解广东地区蝙蝠携带狂犬病病毒、寨卡病毒以及登革热病毒情况。方法 2014-2016年分别在广州市和湛江市部分地区采集蝙蝠,取其血清和脑组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)、巢式聚合酶链反应(nested polymerase chain reaction,Nested PCR),酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞培养分离检测所采标本中的狂犬病病毒、登革热病毒和寨卡病毒的感染情况。结果 采集蝙蝠共174只,分属2科3个种:果蝠科的犬蝠属(Cynopterus sphinx)33只、蝙蝠科的普通伏翼属(Pipistrellusabramus)9只及高头蝠属(Scotophiluskuhlii)132只。分别取得血清、脑组织各174份。在犬蝠脑标本中检出登革热病毒阳性1份,阳性率0.06%(1/174),寨卡病毒、狂犬病病毒均未检出。结论 广东两个地区的3种蝙蝠作为寨卡病毒、登革热病毒和狂犬病病毒宿主的可能性较小。 展开更多
关键词 蝙蝠 狂犬病病毒 登革热病毒 寨卡病毒
人用狂犬病疫苗和被动免疫制剂研发进展 预览
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作者 赖永洁 李靖 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期563-569,573共8页
狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(Rabies virus)引起的一种人兽共患病。人一旦发病致死率几乎100%。目前预防狂犬病的人用疫苗为狂犬病毒灭活疫苗。随着基因工程技术的进步,新一代以狂犬病毒G蛋白(Glycoprotein)为免疫原的疫苗在开发... 狂犬病(Rabies)是由狂犬病毒(Rabies virus)引起的一种人兽共患病。人一旦发病致死率几乎100%。目前预防狂犬病的人用疫苗为狂犬病毒灭活疫苗。随着基因工程技术的进步,新一代以狂犬病毒G蛋白(Glycoprotein)为免疫原的疫苗在开发中,包括不同表达系统的G蛋白亚单位疫苗,G蛋白DNA疫苗,G蛋白病毒载体疫苗等。同时本文还探讨了未来可能取代狂犬病免疫球蛋白的被动免疫制剂(单克隆抗体)的研发进展。 展开更多
关键词 狂犬病 狂犬病毒 疫苗 G蛋白 单克隆抗体
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云南省双柏县一犬伤多人事件调查及狂犬病病毒进化分析 被引量:2
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作者 郭兴祥 杨卫红 +4 位作者 冯云 章域震 周芬 李映金 张海林 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2018年第3期237-241,共5页
目的阐明云南省双柏县一犬伤多人事件流行病学特点及狂犬病病毒(Rabies virus,RV)流行株分子进化特征。方法对一犬伤多人事件和犴犬病病例进行流行病学调杏,采集肇事犬及狂犬病死广病人脑组织标本,用RT—PCR扩增RV核蛋白基闲序列... 目的阐明云南省双柏县一犬伤多人事件流行病学特点及狂犬病病毒(Rabies virus,RV)流行株分子进化特征。方法对一犬伤多人事件和犴犬病病例进行流行病学调杏,采集肇事犬及狂犬病死广病人脑组织标本,用RT—PCR扩增RV核蛋白基闲序列,用相关生物信息学软件进行同源性和系统进化分析。结果2011—2017年双柏县共发生12起一犬伤多人事件,犬伤暴露35例。其中11起一犬伤多人事件的32例犬伤暴露人员均进行伤口处理和犴犬病疫苗全程接种,至今未发病;而仅有一起一犬伤3人事件(2014年5月)因漏报而未做规范处置,导致1人患犴犬病。经RT-PCR和序列测定,获得2012—2014年双柏县6株RV核蛋白基因序列(犬源5株和人源1株)。进化和同源性分析表明,双柏县流行株与相邻楚雄市和禄丰县、普洱市景东县、大理州祥云县和四川省RV China—I进化群流行株进化关系较近;双柏县流行株间及其与相邻楚雄市和禄丰县、大理州祥云县和四川省近期RVChina—I流行株核苷酸和氨基酸同源性均为99.6%~100%,但与2006-2007年楚雄州、昭通和曲靖市RVChina—I流行株核苷酸和氨基酸同源性分别为97.1%~99.3%和99.1%~99.6%。结论开展一犬伤多人事件监测和规范处置能有效防控人狂犬病,双柏县RV流行株均属China—I进化群并与相邻州、市、县和四川省流行株具有较近亲缘关系和较高同源性。 展开更多
关键词 狂犬病 暴露后预防处置 狂犬病病毒 核蛋白基因 进化分析
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