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乙型脑炎病毒疫苗株包膜蛋白K138E回复突变对其神经毒力的影响
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作者 袁磊 唐丽萍 +4 位作者 黄荣 冯亚岚 杨会强 杨健 李玉华 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第7期790-795,共6页
目的探索乙型脑炎疫苗株包膜蛋白(E蛋白)138位氨基酸向野毒株回复突变对其神经毒力与神经侵袭力的影响。 方法采用重叠延伸PCR技术扩增含有K138E突变位点的DNA片段,构建乙脑疫苗株E蛋白K138E位氨基酸突变的病毒感染性克隆,体外转录病毒R... 目的探索乙型脑炎疫苗株包膜蛋白(E蛋白)138位氨基酸向野毒株回复突变对其神经毒力与神经侵袭力的影响。 方法采用重叠延伸PCR技术扩增含有K138E突变位点的DNA片段,构建乙脑疫苗株E蛋白K138E位氨基酸突变的病毒感染性克隆,体外转录病毒RNA,电转染BHK21细胞拯救病毒,绘制病毒生长曲线,采用蚀斑试验与测序鉴定突变病毒,通过动物试验评价突变病毒与疫苗株对昆明小鼠的神经毒力和神经侵袭力。 结果酶切和测序表明K138E突变病毒感染性克隆构建成功,并通过电转染BHK21细胞包装得到K138E突变病毒。蚀斑试验显示突变病毒的蚀斑稍大于疫苗株,两株病毒的生长曲线与神经侵袭力无明显不同,但突变病毒神经毒力显著升高。 结论乙脑疫苗株E138位氨基酸回复突变后神经毒力增强,E138位氨基酸是调控疫苗株神经毒力的重要位点。 展开更多
关键词 乙型脑炎 回复突变 神经毒力 感染性克隆
圣音竹及其回复突变体笋期的碳氮代谢特征分析
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作者 岳晋军 王涛 +5 位作者 彭镇华 李潞滨 顾小平 袁金玲 吴晓丽 刘正娥 《南京林业大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期60-66,共7页
【目的】碳氮代谢是竹子节间伸长的重要生理活动,研究节间短缩的圣音竹及节长正常的回复突变体两者在碳氮代谢上的差异,从而揭示影响竹材利用率的主要性状——节间长度在代谢层面的调控机制。【方法】以圣音竹及其回复突变体节间快速伸... 【目的】碳氮代谢是竹子节间伸长的重要生理活动,研究节间短缩的圣音竹及节长正常的回复突变体两者在碳氮代谢上的差异,从而揭示影响竹材利用率的主要性状——节间长度在代谢层面的调控机制。【方法】以圣音竹及其回复突变体节间快速伸长时期的竹笋为材料,对其笋体和笋箨不同部位的有关碳氮代谢主要物质及相关酶活性进行了测定。【结果】在笋体部位,圣音竹的蔗糖和果糖含量,以及酸性蔗糖转化酶活性显著低于其回复突变体,中性蔗糖转化酶活性则显著高于后者,而葡萄糖含量在两者间差别不大;圣音竹的蛋白质含量、谷氨酸脱氢酶活性显著低于其回复突变体,铵态氮含量显著大于后者,硝态氮含量在两者间相差不大。在笋箨部位,多数指标差异不显著。【结论】从碳氮代谢的角度看,圣音竹笋体中蔗糖浓度降低和氮代谢异常可能是导致其节间短缩的原因之一。 展开更多
关键词 圣音竹 秆型变异 生理指标 碳氮代谢 回复突变体
玉米Mu转座子及其在反向遗传研究中的应用 预览
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作者 崔庆新 李玉玲 +1 位作者 杨美丽 冯兴跃 《农业科技通讯》 2010年第1期 35-38,共4页
Mutator(Mu)是迄今为止发现活性最强的转座子。虽然对其作用机制尚不十分清楚,但已成功用于遗传研究.Mu转座子插入法也已成为克隆玉米基因的主要方法之一。目前t373玉米基因组测序已基本完成,并且在MaizeGDB数据库可以随时查询相... Mutator(Mu)是迄今为止发现活性最强的转座子。虽然对其作用机制尚不十分清楚,但已成功用于遗传研究.Mu转座子插入法也已成为克隆玉米基因的主要方法之一。目前t373玉米基因组测序已基本完成,并且在MaizeGDB数据库可以随时查询相关信息,利用反向遗传学方法研究基因的功能更为方便。本文简要介绍了Mu转座子的发现、类型、基本特征,重点介绍了Mu转座子在反向遗传研究中的应用。 展开更多
关键词 玉米 Mu转座子 反向遗传学 突变体
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人端粒酶逆转录酶与p53蛋白在甲状腺癌组织中的表达、相关性及临床意义 预览 被引量:2
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作者 常青 陈春悠 胡耀杰 《实用临床医药杂志》 CAS 2011年第11期 15-18,共4页
目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)与突变型p53蛋白在甲状腺癌和甲状腺良性组织中的表达、相关性及临床意义。方法采用原位杂交法检测hTERTmRNA的表达,采用免疫组织化学法检测突变型p53蛋白的表达。结果①hTERTmRNA和突变型p53蛋... 目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA)与突变型p53蛋白在甲状腺癌和甲状腺良性组织中的表达、相关性及临床意义。方法采用原位杂交法检测hTERTmRNA的表达,采用免疫组织化学法检测突变型p53蛋白的表达。结果①hTERTmRNA和突变型p53蛋白在甲状腺癌中高表达(P〈0.05)。②hTERTmRNA与p53蛋白阳性率与甲状腺癌的临床病理分型,有无淋巴结转移,肿瘤TNM分期有关(P〈0.05),与患者年龄,性别无关。③hTERTmRNA与p53蛋白在甲状腺癌组织中的表达呈显著正相关,具有统计学意义(P〈0.05)。结论①hTERTmRNA和突变型p53蛋白的高表达在甲状腺癌的发生发展过程中起到重要作用。②p53蛋白调控hTERTmRNA的表达,p53蛋白在甲状腺癌中表达的增高可激活hTERTm-RNA,从而导致甲状腺癌的发生。③hTERTmRNA和p53蛋白在甲状腺癌中表达的变化可用于评估其生物学行为和判断预后,对临床上甲状腺癌的靶向治疗起到重要的指导作用。 展开更多
关键词 人端粒酶逆转录酶(hTERTmRNA) 突变型p53蛋白(mtp53) 甲状腺癌(TC) 原位杂交法(ISH) 免疫组织化学法(IHC)
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利用mRNA差异显示技术研究香菇发育相关基因 被引量:6
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作者 蔡为明 李南羿 +2 位作者 谢鸣 高中山 金群为 《菌物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期289-294,共6页
以香菇子实体不分化突变株和对照菌株L98411为材料,利用mRNA差异显示技术研究二者的基因表达差异,共分离到21条差异片段,其中12个分别与泛素、ATP合成酶、锌指蛋白、GTP结合蛋白、延伸因子g1线粒体前体、过氧化物酶、硫酯酶、类TrpB酶、... 以香菇子实体不分化突变株和对照菌株L98411为材料,利用mRNA差异显示技术研究二者的基因表达差异,共分离到21条差异片段,其中12个分别与泛素、ATP合成酶、锌指蛋白、GTP结合蛋白、延伸因子g1线粒体前体、过氧化物酶、硫酯酶、类TrpB酶、2,4-二烯酰辅酶A还原酶、糖苷水解酶、热激蛋白、疏水蛋白等已知基因有较高的同源性,这表明香菇子实体分化发育是一个复杂的过程,涉及到胞内转运、转录调控、细胞分化、蛋白合成、各种代谢途径中的酶、抗逆反应等诸多途径的协同调控。 展开更多
关键词 差异显示反转录PCR 突变体 子实体发育 基因表达
甲状腺癌中端粒酶逆转录酶及其调控因子的表达及相关性 预览
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作者 焦龙华 马小娟 徐正顺 《临床和实验医学杂志》 2008年第8期 50-51,共2页
目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA与其有关调控因子C—myc、突变型p53在甲状腺癌中的表达及相互关系。方法采用原位杂交检测85例甲状腺癌中hTERTmRNA的表达,采用免疫组织化学法检测C—myc、突变型p53的表达。结果①hTERTmRNA、C... 目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA与其有关调控因子C—myc、突变型p53在甲状腺癌中的表达及相互关系。方法采用原位杂交检测85例甲状腺癌中hTERTmRNA的表达,采用免疫组织化学法检测C—myc、突变型p53的表达。结果①hTERTmRNA、C—myc的阳性表达与甲状腺癌的临床病理特征无关(P〉0.05);突变型p53的表达与甲状腺癌的分化类型、有无淋巴结转移及临床分期有关(P〈0.05),与患者年龄、性别无关(P〉0.05);②hTERTmRNA与C—myc、突变型p53之间的相关性有统计学意义(P〈0.05);C—myc与突变型p53之间的相关性无统计学意义(P〉0.05)。结论C—myc与突变型p53在甲状腺癌中的表达增加激活了hTERTmRNA,从而导致甲状腺癌的发生。 展开更多
关键词 甲状腺癌 端粒酶逆转录酶 C—myc 突变型P53
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食管癌Mp53和mdr-1,mrp表达的相关性研究 预览 被引量:4
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作者 王延明 郑建强 +4 位作者 白京霞 高同方 郑兴学 李永忠 王爱民 《临床军医杂志》 CAS 2003年第1期 1-3,共3页
目的探讨食管癌组织中突变型p53蛋白(Mp53)与多药耐药基因(mdr-1)和多药耐药相关蛋白基因(mrp)的表达关系.方法分别应用S-P免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对54例食管癌组织的Mp53蛋白和mdr-1,mrp基因表达进行检测.结果... 目的探讨食管癌组织中突变型p53蛋白(Mp53)与多药耐药基因(mdr-1)和多药耐药相关蛋白基因(mrp)的表达关系.方法分别应用S-P免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,对54例食管癌组织的Mp53蛋白和mdr-1,mrp基因表达进行检测.结果食管标本的Mp53和mdr-1,mrp的阳性率均高于癌旁组织( P<0.01);癌组织Mp53阳性的mdr-1,mrp的阳性率高于Mp53阴性者( P<0.05);Mp53和mdr-1,mrp表达与食管肿瘤长度、分化程度和淋巴结转移无明显关系( P>0.05). 随访发现, Mp53, mdr -1和(或) mrp阳性患者的1, 2, 3 年生存率 (73.5%, 39.1%,7.7%)低于Mp53和mdr-1,mrp阴性者(82.4%, 58.3%,37.5%).结论食管癌组织中Mp53蛋白表达阳性可能对肿瘤细胞的MDR起调控作用;Mp53和mdr-1,mrp的共表达还可能反映食管癌化疗效果差、易复发转移的生物学行为. 展开更多
关键词 食管肿瘤 免疫组织化学 逆转录-聚合酶链反应 突变型P53蛋白 多药耐药基因 多药耐药相关蛋白基因
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用差异显示反转录PCR银染技术研究植物基因表达的差异 预览 被引量:5
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作者 毛爱军 王台 宋艳茹 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第5期 736-739,共4页
通过调整差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等试剂的用量,优化了适用于银染检测的DDRT-PCR方法.PCR扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后,银染能检测到多而清晰的条带.泳道中的条带数最少... 通过调整差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)中总RNA、锚定引物、随机引物、cDNA和dNTP等试剂的用量,优化了适用于银染检测的DDRT-PCR方法.PCR扩增产物经6%变性聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳分离后,银染能检测到多而清晰的条带.泳道中的条带数最少为40个,最多达80个,平均为60个,条带大小分布在100~900 bp范围,灵敏度为5 pg/mm2.此方法操作简便快速,灵敏度高,重复性好.采用这个改良的方法,分析了拟南芥野生型和ast突变型基因表达的差异.从16 000个cDNA扩增产物条带中筛选出28个差异条带.二次PCR扩增后,进一步筛选出13个差异条带,其中7个是野生型特异表达的,6个是突变型特异表达的,为进一步认识ast突变表型的产生机制奠定了基础. 展开更多
关键词 差异显示反转录PCR 银染 拟南芥 ast突变型 植物 基因表达
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