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分泌型表达EDA-EmIMP1的重组枯草芽胞杆菌的构建及其免疫原性研究
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作者 陈志 丁可欣 +3 位作者 林霞琳 李元凯 黄志坚 殷光文 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期199-205,共7页
枯草芽胞杆菌有着异源蛋白表达系统,纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高相关蛋白的抗原性的佐剂,为了增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,笔者对枯草芽胞杆菌分泌表达载体作为EDA分子佐剂重组亚单位疫苗的递呈载体的... 枯草芽胞杆菌有着异源蛋白表达系统,纤维连接蛋白外域A(EDA)是一种能够提高相关蛋白的抗原性的佐剂,为了增强巨型艾美耳球虫的免疫相关蛋白1(IMP1)的抗原性,笔者对枯草芽胞杆菌分泌表达载体作为EDA分子佐剂重组亚单位疫苗的递呈载体的功能进行了研究,构建质粒pHT43-EDA-EmIMP1和pHT43-EmIMP1,将获得的重组质粒转化到枯草芽胞杆菌感受态中。将该重组菌对鸡饲喂,进行免疫学试验并做免疫效果评价。结果显示,该重组枯草芽胞杆菌可以成功表达目的蛋白,蛋白大小为70 ku。ELISA检测EDA组的效价最高,其滴度在3 200左右;三免EDA组的IFN-γ浓度显著高于其他组(P<0.05);三免EDA组和EmIMP1组的IL-12/70浓度显著高于PBS组(P<0.05);CD4^+T细胞群的检测显示,EDA组的CD4^+T细胞群比例显著高于枯草芽胞杆菌组和PBS组(P<0.05);EDA组、枯草芽胞杆菌组和EmIMP1组的卵囊排出量都显著低于攻虫组(P<0.05);病变计分可以看出,EDA组对肠道保护效果显著优于除空白组外的其他组(P<0.05)。以上各项免疫学指标表明,枯草芽胞杆菌分泌型表达载体作为EmIMP1的抗原递呈载体可以有效提高免疫原性,其中EDA佐剂组的免疫效果最好。 展开更多
关键词 枯草芽胞杆菌 分泌型蛋白 EDA佐剂 EmIMP1 巨型艾美耳球虫
基于全基因组序列的核桃细菌性黑斑病菌分泌蛋白的预测及特征分析
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作者 祝友朋 刘宏莉 韩长志 《南京林业大学学报:自然科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期17-22,共6页
【目的】充分了解核桃黑斑病菌的侵染机制。【方法】以全基因组序列已经公布的7个核桃细菌性黑斑病菌菌株CFBP2528、CFBP7179、CFBP8253、DW3F3、J303、NCPPB1447、Xaj417等所具有的蛋白序列为预测数据,基于分泌蛋白所具有的主要特征,利... 【目的】充分了解核桃黑斑病菌的侵染机制。【方法】以全基因组序列已经公布的7个核桃细菌性黑斑病菌菌株CFBP2528、CFBP7179、CFBP8253、DW3F3、J303、NCPPB1447、Xaj417等所具有的蛋白序列为预测数据,基于分泌蛋白所具有的主要特征,利用SignalP v4.1、ProtCompB v9.0、TMHMM v2.0、big-PI Fungal predictor、TargetP v1.1、LipoP v1.0等在线分析程序对分泌蛋白进行预测,同时分析其氨基酸组成及分布、信号肽长度、信号肽切割位点等特征。【结果】核桃细菌性黑斑病菌的分泌蛋白平均为74个,其氨基酸长度多集中于101~400氨基酸,所占比例为63.65%。信号肽氨基酸残基中以A最多,所占比例为22.04%;其次是L,所占比例为19.27%。信号肽长度以19~29个氨基酸的最多,所占比例为79.62%,信号肽切割位点属于A-X-A类型。【结论】核桃细菌性黑斑病菌中分泌蛋白的有效预测,可为深入解析核桃细菌性黑斑病菌中分泌蛋白在侵染过程中所发挥的功能提供理论依据。 展开更多
关键词 核桃细菌性黑斑病菌 全基因组 分泌蛋白 生物信息学分析
重组人乙酰胆碱酯酶基因在毕赤酵母中分泌表达及其对农药的敏感性评估 预览
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作者 杨芳芳 李佳慧 +3 位作者 张赛南 王珍 廖志银 王首锋 《浙江大学学报:农业与生命科学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期317-324,共8页
乙酰胆碱酯酶是用酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的关键用酶,本研究利用毕赤酵母表达系统分泌表达人乙酰胆碱酯酶,并评估其对8种农药的敏感性,为工业化大规模生产高敏感性酶源奠定基础。根据GenBank上已发表的人乙酰胆碱酯酶... 乙酰胆碱酯酶是用酶抑制法检测有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的关键用酶,本研究利用毕赤酵母表达系统分泌表达人乙酰胆碱酯酶,并评估其对8种农药的敏感性,为工业化大规模生产高敏感性酶源奠定基础。根据GenBank上已发表的人乙酰胆碱酯酶(human acetylcholinesterase,hAChE)基因核酸序列设计引物,从pReceiver-M02-hAChE-ORF质粒中扩增出hAChE的开放阅读框(open reading frame,ORF)片段,接着利用SnaBⅠ和AvrⅡ双酶切将其克隆至载体pPIC9K中,构建pPIC9K-hAChE表达载体,然后将SalⅠ线性化的pPIC9K-hAChE电转化至毕赤酵母GS115中,在含4.00mg/mLG418抗性平板上筛选获得阳性克隆,最后经0.5%甲醇诱导分泌表达144h,发现其发酵上清液的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱在65kDa处有一条明显的蛋白条带,大小与预期的hAChE蛋白一致。利用Q-Sepharose FF柱层析法对其总蛋白进行纯化,获得了较纯的人乙酰胆碱酯酶。用Bradford法测得发酵上清液中hAChE蛋白质量浓度为1.330mg/mL,占总蛋白的5.58%,纯化后比酶活达到1080nmol(/ min mL)。通过初步计算比对重组工程菌发酵上清液对8种常见农药的半抑制浓度,得出敌百虫>敌敌畏>克百威>马拉硫磷>乐果>甲胺磷>甲萘威>毒死蜱,即人乙酰胆碱酯酶对毒死蜱最敏感。 展开更多
关键词 人乙酰胆碱酯酶 毕赤酵母 分泌表达 蛋白纯化 酶活测定 农药敏感性
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核桃细菌性黑斑病菌分泌蛋白质的理化性质及特征分析 预览
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作者 祝友朋 韩长志 熊智 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期295-301,共7页
核桃细菌性黑斑病严重影响着核桃的产量和品质,是核桃生产过程中危害较为严重的病害之一。植物病原真菌、细菌以及卵菌的分泌蛋白质在其致病过程中发挥着重要的作用。本研究以核桃细菌性黑斑病菌CFBP2528、CFBP7179、CFBP8253、DW3F3、J... 核桃细菌性黑斑病严重影响着核桃的产量和品质,是核桃生产过程中危害较为严重的病害之一。植物病原真菌、细菌以及卵菌的分泌蛋白质在其致病过程中发挥着重要的作用。本研究以核桃细菌性黑斑病菌CFBP2528、CFBP7179、CFBP8253、DW3F3、J303、NCPPB1447、Xaj4177个菌株分泌蛋白质氨基酸序列为基础数据,利用蛋白质数据库、PHD、Protscale、TargetP1.1Server、SMART等网站在线预测分析其理化性质、二级结构、疏水性、转运肽及保守结构域等性质,明确核桃细菌性黑斑病菌的分泌蛋白质所具有的特征。结果表明,在所分析的7个菌株520个分泌蛋白质中,分泌蛋白质的理论等电点集中在6.01~7.00,蛋白质数量所占比例为26.92%;不稳定性系数集中在20.01~40.00,其蛋白质数量所占比例为63.65%;亲水值小于0的蛋白质数量所占比例为76.51%,亲水性最强的氨基酸残基中数量最多的是D,所占比例为13.64%,疏水性最强的氨基酸残基中数量最多的是L,所占比例为29.58%;分泌蛋白质均含有无规则卷曲、α螺旋、β折叠、TM(跨膜螺旋)二级结构,其所占比例分别为27.56%、27.17%、26.45%、1.03%;转运肽集中在分泌通路,其所占比例为95.38%;每个菌株平均有16个分泌蛋白质具有保守结构域,所占比例为21.35%。上述研究结果为深入解析核桃细菌性黑斑病菌分泌蛋白质的功能冗余性和多样性奠定了基础。 展开更多
关键词 核桃细菌性黑斑病菌 分泌蛋白 理化性质 生物信息学分析
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佐剂性关节炎大鼠滑膜及血清中MANF的表达及其与炎症的相关性 预览
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作者 马钰泱 狄泽敏 +3 位作者 曹晴 沈玉君 沈玉先 冯利杰 《中国药理学通报》 CSCD 北大核心 2018年第4期537-543,共7页
目的观察中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)在佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜和血清中的表达情况,分析MANF表达与关节炎症是否具有相关性。方法S... 目的观察中脑星形胶质细胞源性神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)在佐剂性关节炎(adjuvant arthritis,AA)大鼠膝关节滑膜和血清中的表达情况,分析MANF表达与关节炎症是否具有相关性。方法SD大鼠足趾皮内注射弗氏完全佐剂(Freund complete adjuvant,FCA)制备AA模型;足容积法测量继发侧足肿胀度,关节炎指数(arthritis index,AI)评价AA严重程度,HE染色观察膝关节病理学变化;分别采用Western blot和RT-PCR法检测致炎后不同时期继发侧膝关节滑膜组织中MANF和内质网应激标志蛋白BiP、CHOP的蛋白和mRNA水平;ELISA法检测致炎后不同时期血清中MANF、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)水平,并进行相关性分析。结果AA大鼠模型建立成功,致炎d 2滑膜组织中BiP表达明显升高,到d 28稍有下降;MANF表达在致炎d 2略有升高并保持稳定,d 14表达明显上调,随后逐渐下降;而CHOP则保持低水平缓慢上升的趋势;致炎d 14血清中MANF水平明显增高,随后逐渐下降,d 28仍高于正常水平;CRP与MANF变化趋势基本一致;在AA大鼠继发性反应期,MANF水平与关节炎症状、血清IL-1β和TNF-α水平呈负相关.结论关节炎症能诱导MANF表达和分泌,且MANF水平与关节炎症进展和程度密切相关。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 内质网应激 未折叠蛋白反应 MANF 分泌性蛋白 炎症因子
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柑桔黄龙病菌亚洲种菌毛形成蛋白基因序列分析、原核表达及抗血清制备 预览
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作者 余乃通 李宾宾 +2 位作者 黎维丽 杨毅 刘志昕 《广东农业科学》 CAS 2018年第11期74-80,共7页
柑桔黄龙病菌菌毛形成蛋白(pilus formation protein, 408)是一种丰度较高的分泌蛋白。以感染柑桔黄龙病(HLB) 的海南琼海市绿橙叶片为材料提取总DNA,利用408 基因的特异引物进行PCR 扩增,获得该基因的目的片段。序列分析结果表明海南... 柑桔黄龙病菌菌毛形成蛋白(pilus formation protein, 408)是一种丰度较高的分泌蛋白。以感染柑桔黄龙病(HLB) 的海南琼海市绿橙叶片为材料提取总DNA,利用408 基因的特异引物进行PCR 扩增,获得该基因的目的片段。序列分析结果表明海南琼海黄龙病菌408 基因与柑桔黄龙病菌亚洲种psy62 株系(GenBank 登录号:CP001677.5)408 基因序列一致。功能预测结果表明其含有一个与菌毛形成相关的N端结构域,以及C 端含有两个高度保守的基序(Motif 1 和Motif 2)。通过EcoR Ⅴ和Xho Ⅰ双酶切构建重组载体pET32a-408 并将其转化BL21(DE3)大肠杆菌。重组菌经终浓度为1 mmoL/L IPTG 诱导,目的蛋白主要以包涵体形式表达。目的蛋白经Ni2+-NTA 层析柱纯化,并以此为抗原,腹腔免疫小白鼠,获得效价在1∶500~1∶10000 的多克隆抗血清;Western blot 进一步分析表明,408 蛋白多克隆抗血清特异性强。研究结果为柑桔黄龙病菌408 蛋白功能研究和柑桔黄龙病菌的蛋白检测产品开发提供重要科学依据。 展开更多
关键词 柑桔黄龙病 柑桔黄龙病菌 菌毛形成蛋白 分泌蛋白 抗血清制备
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3种不同的HPV型别宫颈癌细胞株分泌蛋白非标记定量技术分析 预览
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作者 郝轶 袁建林 +2 位作者 肖悦 李卉 郭霞 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2018年第5期354-358,364共6页
目的:分析3种不同HPV型别的宫颈癌细胞株Siha、Caski和C33的分泌蛋白表达及种类,寻找其共性分泌蛋白标志物,为临床早期发现及针对性干预提供依据。方法:采用非标记(label-free)定量技术分析3种不同宫颈癌SiHa、Caski和C33细胞株... 目的:分析3种不同HPV型别的宫颈癌细胞株Siha、Caski和C33的分泌蛋白表达及种类,寻找其共性分泌蛋白标志物,为临床早期发现及针对性干预提供依据。方法:采用非标记(label-free)定量技术分析3种不同宫颈癌SiHa、Caski和C33细胞株的分泌蛋白,运用LC-MS/MS和Maxquant的非标记技术,筛选出宫颈癌分泌蛋白的种类及分类。结果:共鉴定肽段数21609个,蛋白数2895个。其中3种宫颈癌细胞株共性蛋白共729种,占29.2%;特异性蛋白Siha细胞株含128种,Caski细胞株含143种,C33细胞株含859种。对于结果中7729种共性蛋白进行分析,有以下4类较为集中的类型:热休克蛋白类(HSPs)共14种;异质性核糖核蛋白类(HNRP)共8种;层黏连蛋白类(LN)共4种;阿尔多酮还原酶1类(AKR1)共2种。其中,溶酶体信号通路所占比例最大(39种)。结论:SiHa、Caski和C33细胞株的分泌蛋白中共有729种共性蛋白,其中4类集中的蛋白类型均先后在研究中证实对宫颈癌的进程和发展有影响,并且可能与溶酶体信号通路有关。可为筛选高危型HPV感染的宫颈癌患者的血清标志物提供依据。 展开更多
关键词 宫颈癌 宫颈癌细胞株 分泌蛋白 非标记定量技术分析
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全基因组预测哈茨木霉T6776的分泌蛋白 预览 被引量:1
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作者 许僖 伍建榕 +1 位作者 韩长志 马焕成 《贵州农业科学》 CAS 2018年第2期5-8,共4页
为探明哈茨木霉T6776的分泌蛋白及其作用于植物病原菌的功能,在前期研究的基础上,采用SignalP、ProtComp和TMHMM等生物在线预测程序,对该菌11 498条蛋白序列进行N-端信号肽、亚细胞定位和跨膜结构等预测。结果表明:哈茨木霉T6776含分... 为探明哈茨木霉T6776的分泌蛋白及其作用于植物病原菌的功能,在前期研究的基础上,采用SignalP、ProtComp和TMHMM等生物在线预测程序,对该菌11 498条蛋白序列进行N-端信号肽、亚细胞定位和跨膜结构等预测。结果表明:哈茨木霉T6776含分泌蛋白503个,分泌蛋白的信号肽长度、氨基酸长度均与植物病原菌不同;哈茨木霉T6776分泌蛋白信号肽切割位点属A-X-A型,为SPI型信号肽识别位点。 展开更多
关键词 哈茨木霉 分泌蛋白 信号肽 氨基酸
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Serum CA125, HE4 and ROMA index in elderly patients with ovarian cancer
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作者 Yan-Jun Wang Xiu-Juan Du 《海南医科大学学报(英文版)》 2018年第2期75-78,共4页
Objective:To study the value of serum tumor markers, carbohydrate antigen 125 (CA125), human epididymis secretory protein 4 (HE4) and ovarian cancer risk factor (ROMA) index in elderly patients with ovarian cancer, so... Objective:To study the value of serum tumor markers, carbohydrate antigen 125 (CA125), human epididymis secretory protein 4 (HE4) and ovarian cancer risk factor (ROMA) index in elderly patients with ovarian cancer, so as to provide a choice for clinical diagnosis.Methods:A total of 110 cases of ovarian cancer treated in our hospital in December 2017-December 2015 were selected as malignant group. In addition, 120 cases of benign ovarian tumors in the same period were selected as the benign group, and 92 healthy women who came to the hospital for health examination were selected as the control group. Serum HE4, CA125 levels and positive rates were detected by microparticle enzyme immunochemiluminescence assay, and ROMA index values were combined to assess the risk of ovarian cancer.Results:Malignant group serum CA125, HE4 level and ROMA index were significantly higher than those in the benign group and the control group, the level of CA125 in positive group was higher than control group, but the difference in level of HE4 and ROMA index between benign group and control group was not statistically significant. The positive rates of serum CA125, HE4 and ROMA index in malignant group were 76.4%, 92.7%, 96.4%, which were significantly higher than those in benign group (28.3%, 18.3%, 15%). The negative predictive value, positive predictive value, specificity and sensitivity of CA125 were all lower than those of HE4. The negative predictive value, positive predictive value, specificity and sensitivity of the combined ROMA index were higher than those of single diagnosis.Conclusions: Serum CA125, HE4 and ROMA index in elderly patients with ovarian cancer are significantly higher than those in elderly patients with benign ovarian tumors and healthy women. The combined diagnosis is the highest, with Gao Min's high sensitivity and specificity, which can be popularized in clinical practice. 展开更多
关键词 Elderly OVARIAN CANCER CARBOHYDRATE antigen 125 Epididymal SECRETORY protein 4 Malignant risk model of OVARIAN CANCER
5种沙眼衣原体分泌蛋白对小鼠巨噬细胞和树突状细胞吞噬功能的影响
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作者 侯淑萍 许荣 +3 位作者 朱丛中 李晓婷 单士军 王惠平 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期401-406,共6页
目的探索5种沙眼衣原体分泌蛋白在体外对小鼠巨噬细胞和树突状细胞吞噬功能的影响。方法原核表达蛋白GST-CT311、GST-GIgA、GST-cHtrA、GST-OmcBc和GST-Pgp3中,同时表达了衣原体膜蛋白GST-IncA作为对照,经谷胱甘肽巯基转移酶(GST)... 目的探索5种沙眼衣原体分泌蛋白在体外对小鼠巨噬细胞和树突状细胞吞噬功能的影响。方法原核表达蛋白GST-CT311、GST-GIgA、GST-cHtrA、GST-OmcBc和GST-Pgp3中,同时表达了衣原体膜蛋白GST-IncA作为对照,经谷胱甘肽巯基转移酶(GST)磁珠纯化、PreScission蛋白酶切除GST标签后得到蛋白CT311、GIgA、cHtrA、OmcBc、Pgp3以及IncA。取C3H/HeJ小鼠骨髓细胞制备巨噬细胞和树突状细胞,分别用100μg/ml和500μg/ml的蛋白质预处理巨噬细胞和树突状细胞,4h后加入荧光珠,1h后固定细胞,直接免疫荧光法计数每100个细胞吞噬荧光珠的平均数量(吞噬量)及每100个细胞中吞噬的细胞百分比(吞噬率)。结果高、低浓度蛋白质组对巨噬细胞及树突状细胞的吞噬率均无明显影响;与无处理组相比,LPS以及低浓度(100μg/ml)的各蛋白组对巨噬细胞和树突状细胞的吞噬量无明显影响;高浓度组(500μg/ml)的Pgp3、cHtrA及CT311预处理的巨噬细胞和树突状细胞吞噬量明显升高,GIgA、OmcBc以及IncA对巨噬细胞和树突状细胞的吞噬量无明显影响。结论在体外,沙眼衣原体分泌蛋白Pgp3、cHtrA及CT311可以促进巨噬细胞和树突状细胞的吞噬功能,这可能有助于沙眼衣原体在宿主体内的播散感染。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 分泌蛋白 巨噬细胞 树突状细胞 吞噬功能
结核分枝杆菌分泌蛋白调控巨噬细胞自噬诱导持续性感染 预览
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作者 张彩勤 杨丽 +1 位作者 张廷芬 师长宏 《科学技术与工程》 北大核心 2018年第32期124-128,共5页
巨噬细胞的自噬作用能够保护宿主抵抗结核分枝杆菌的感染;而持续性感染的MTB(Mycobacterium tuberculosis)可以从自噬体中逃逸或抑制自噬的发生,从而在宿主体内长期存活。尽管相关机制不明确,但胞内存活的MTB分泌蛋白在持续性感染时发... 巨噬细胞的自噬作用能够保护宿主抵抗结核分枝杆菌的感染;而持续性感染的MTB(Mycobacterium tuberculosis)可以从自噬体中逃逸或抑制自噬的发生,从而在宿主体内长期存活。尽管相关机制不明确,但胞内存活的MTB分泌蛋白在持续性感染时发挥了重要作用。它可以通过抑制巨噬细胞自噬维持蛋白质稳定性和在胞内长期存活,导致LTBI(latent TB infection)的发生。综述了MTB的四种分泌蛋白(Eis、PknG、SapM和Hsp16.3)在持续性感染中调节巨噬细胞自噬的作用,可能为发现LTBI新的生物标志物和药物新靶点提供有效思路。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 分泌蛋白 巨噬细胞自噬 持续性感染
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Proteomic analysis of insulin secretory granules in INS-1 cells by protein correlation profiling
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作者 Min Li Wen Du +3 位作者 Maoge Zhou Li Zheng Eli Song Junjie Hou 《生物物理学报:英文版》 CSCD 2018年第6期329-338,共10页
Insulin secretory granules (ISGs),a group of distinguishing organelles in pancreatic β cells,are responsible for the storage and secretion of insulin to maintain blood glucose homeostasis.The molecular mechanisms of ... Insulin secretory granules (ISGs),a group of distinguishing organelles in pancreatic β cells,are responsible for the storage and secretion of insulin to maintain blood glucose homeostasis.The molecular mechanisms of ISG biogenesis,maturation,transportation,and exocytosis are still largely unknown because the proteins involved in these distinct steps have not been fully identified.Subcellular fractionation by density gradient centrifugation has been successfully employed to analyze the proteomes of numerous organelles.However,use of this method to elucidate the ISG proteome is limited by co-fractionated contaminants because 1SGs are very dynamic and have abundant exchanges or contacts with other organelles,such as the Golgi apparatus,lysosomes,and endosomes.In this study, we developed a new strategy for identifying ISG proteins by protein correlation profiling (PCP)-based proteomics,which included ISG purification by OptiPrep density gradient centrifugation,label-free quantitative proteome,and identification of ISG proteins by correlating fractionation profiles between candidates and known ISG markers.Using this approach,we were able to identify 81 ISG proteins. Among them,TM9SF3,a nine-transmembrane protein,was considered a high confidence ISG candidate protein highlighted in the PCP network.Further biochemical and immunofluorescence assays indicated that TMgSF3localized in ISGs,suggesting that it is a potential new ISG marker. 展开更多
关键词 INSULIN SECRETORY GRANULES (ISGs) PROTEOME LABEL-FREE proteomics Protein correlation PROFILING
苏云金芽胞杆菌分泌蛋白的鉴定及分析 预览 被引量:1
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作者 王智文 陈海波 +1 位作者 宋福平 郭淑元 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2017年第4期169-176,共8页
研究苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在生长发育过程中分泌蛋白的类型和含量,尤其是胞外蛋白酶,对于充分了解该菌的杀虫机理、扩大该菌的应用具有重要意义。通过制备BtHD73过渡期(transition phase)的分泌蛋白质样品,进... 研究苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)在生长发育过程中分泌蛋白的类型和含量,尤其是胞外蛋白酶,对于充分了解该菌的杀虫机理、扩大该菌的应用具有重要意义。通过制备BtHD73过渡期(transition phase)的分泌蛋白质样品,进行质谱检测并分析其分泌蛋白的种类、含量、功能和信号肽等。结果表明,BtHD73在过渡期初期有54种胞外蛋白质,其中酶类最多,占所有分泌蛋白的66.30%,且主要为蛋白水解酶;毒力蛋白次之,占所有分泌蛋白的14.53%。在54种分泌蛋白中,发现27种含有经典Sec型信号肽(Secretory signal peptide,Sec-type SP),信号肽的长度在24-40个氨基酸之间。因此,BtHD73产生分泌蛋白的能力较强,在过渡期可分泌大量酶类,尤其是蛋白水解酶。同时还建立了该菌株的信号肽库,包括27种具有引导外源蛋白分泌潜力的信号肽。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 分泌表达 分泌蛋白质 胞外蛋白酶 信号肽
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DDR2结构域与人IgG Fc融合载体的构建、表达与蛋白纯化
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作者 张番 苏金 +3 位作者 王婷婷 李惠晨 边寰 卜歆 《现代生物医学进展》 CAS 2017年第34期6653-6656,共4页
目的:构建DDR2与人IgG Fc融合的分泌型真核表达载体,验证其表达,纯化具有生物活性的分泌型蛋白。方法:分析DDR2蛋白质结构功能域,设计载体构建策略;扩增DDR2胞外结构域片段,将其克隆至PsecTag2B载体(带有人IgG Fc标签)中,在2... 目的:构建DDR2与人IgG Fc融合的分泌型真核表达载体,验证其表达,纯化具有生物活性的分泌型蛋白。方法:分析DDR2蛋白质结构功能域,设计载体构建策略;扩增DDR2胞外结构域片段,将其克隆至PsecTag2B载体(带有人IgG Fc标签)中,在293T细胞验证其表达;用ProteinG纯化柱纯化蛋白。结果:DDR2胞外结构域DS/Fc融合载体测序正确,转染293T细胞中后可成功分泌到细胞上清中,进一步用亲和层析法纯化得到高浓度蛋白。结论:重组载体特异性分泌DDR2胞外区蛋白,引入的Link序列是稳定分泌蛋白构象的基础,融合了人IgG Fc序列,可以作为DDR2配体拮抗剂靶向抑制DDR2与其天然配体的相互作用,对临床研究有重要作用。 展开更多
关键词 人IGG FC 分子克隆 分泌型蛋白
香蕉枯萎病菌热带4号小种基因组规模分泌蛋白的预测与分析 预览 被引量:5
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作者 聂燕芳 黄嘉瑶 +4 位作者 周玲菀 涂晓欢 陈慧妍 王振中 李云锋 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期共7页
为了明确香蕉枯萎病菌热带4号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense tropical race 4,Foc TR4)与香蕉互作的分子机理,本研究利用SignalP、WoLF PSORT、TargetP、TMHMM和big-PI Predictor等软件,对Foc TR4全基因组22 487条蛋白质氨基酸... 为了明确香蕉枯萎病菌热带4号小种(Fusarium oxysporum f.sp.cubense tropical race 4,Foc TR4)与香蕉互作的分子机理,本研究利用SignalP、WoLF PSORT、TargetP、TMHMM和big-PI Predictor等软件,对Foc TR4全基因组22 487条蛋白质氨基酸序列进行了经典分泌蛋白的预测分析.结果表明,Foc TR4全基因组编码蛋白质中有1 054个经典分泌蛋白,占编码蛋白质总数的4.7%.蛋白质特征分析结果表明,其氨基酸序列长度集中在 100~500个氨基酸,信号肽长度集中在 17~22个氨基酸,信号肽切割位点以SPaseⅠ型为主.功能预测分析结果表明,有463个经典分泌蛋白获得了注释,主要涉及糖代谢、水解酶活性等.碳水化合物酶类(CAZymes)的分析结果表明,有281个分泌蛋白为CAZymes,其中以GH家族最多.此外,利用SecretomeP软件对Foc TR4非经典分泌蛋白进行了分析,发现有9 216个蛋白质氨基酸序列,占编码蛋白质总数的41.0%. 展开更多
关键词 尖孢镰刀菌古巴专化型4号小种 香蕉枯萎病 分泌蛋白 碳水化合物酶类
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支原体分泌蛋白研究进展 预览
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作者 胡古月 赵刚 +1 位作者 陈颖钰 郭爱珍 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1572-1578,共7页
支原体是人和动物的重要病原体,因缺乏特效药物和疫苗用于治疗和预防,常造成很大损失。支原体致病与免疫机制不清是阻碍防治手段研发的重要原因。分泌蛋白直接参与病原体与宿主的交流,是病原体发挥致病和免疫作用的重要组分,可望作... 支原体是人和动物的重要病原体,因缺乏特效药物和疫苗用于治疗和预防,常造成很大损失。支原体致病与免疫机制不清是阻碍防治手段研发的重要原因。分泌蛋白直接参与病原体与宿主的交流,是病原体发挥致病和免疫作用的重要组分,可望作为药物和疫苗的潜在靶标。原体分泌蛋白很少,其在致病与免疫中的作用有待研究。研究方法,以期为支原体分泌蛋白相关研究提供参考。然而支原体分泌蛋白研究尚处于初级阶段,已鉴定的支笔者介绍了已发现的支原体分泌蛋白、 展开更多
关键词 支原体 分泌蛋白 靶标 疫苗 致病性 免疫
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Therapeutic effect of soluble worm protein acting as immune regulatory on colitis
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作者 Agustina Tri Endharti Aswin Djoko Baskoro Eviana Norahmawati 《亚太热带生物医学杂志:英文版》 CAS 2017年第1期70-77,
Objective: To investigate the anti-inflammatory effect of the protein derived from the soluble factor of Heligmosomoides polygyrus(H. polygyrus) excretory-secretory in a colitis model.Methods: Colitis was induced by p... Objective: To investigate the anti-inflammatory effect of the protein derived from the soluble factor of Heligmosomoides polygyrus(H. polygyrus) excretory-secretory in a colitis model.Methods: Colitis was induced by providing drinking water containing 3% dextran sodium sulfate(DSS) for a week. DSS was administrated in a cycle protocol, each cycle consisted of 7 days of 3% DSS in the drinking water and followed by 7 days of regular water. This study consisted of five treatment groups, including Groups A(control)received untreated water, B(DSS only, without excretory-secretory), and C–E injected(i.p.) with excretory-secretory protein(H. polygyrus excretory-secretory total, excretorysecretory 28 k Da and excretory-secretory 55 k Da, respectively). Mice received injection every week. The injection of excretory-secretory was started from the 6th weeks and continued until 11 weeks. At the end of 11 weeks of the experiment, mice were sacrificed,colon tissue was removed and then subjected to sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis, flow cytometry, real-time PCR and histology examination.Results: Mice received H. polygyrus excretory-secretory 55 k Da reduced mono-nuclear cell infiltrations. H. polygyrus excretory-secretory 55 k Da induced the down-regulation of m RNA interferong expression. There were significant differences in the expression of m RNA interferon in the colon of mice after the administration of the excretory-secretory55 k Da protein fraction compared with other groups(P < 0.001), whereas m RNA transforming growth factorb expression up regulated in the colon of mice after the administration of the excretory-secretory 55 k Da protein fraction compared with total excretory-secretory group(P < 0.05). The treatment of colitis in mice with excretorysecretory 55 k Da protein fractions modulated interleukin-10(IL-10) expression,whereas excretory-secretory total and excretory-secretory 28 k Da protein fractions insufficient promoted IL-10 expression. Excretory-secretory 55 k Da proteins fraction 展开更多
CA19-9、s-ULBP2、Dkk1联合诊断胰腺癌的价值 预览 被引量:1
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作者 崔大鹏 张迎春 +5 位作者 连晶晶 刘博 刘斐 韩磊 王玉佳 高树全 《实用医学杂志》 北大核心 2017年第24期4086-4089,共4页
目的 研究CA19-9、s-ULBP2、Dkk1联合诊断胰腺癌的价值及相关性。方法 选择2016年1月至2017年5月住院胰腺癌患者56例,同期健康体检健康者45例和良性胰腺病患者33例作为研究对象,比较3组血清CA19-9、Dkk1与s-ULBP2表达及与临床病理参数... 目的 研究CA19-9、s-ULBP2、Dkk1联合诊断胰腺癌的价值及相关性。方法 选择2016年1月至2017年5月住院胰腺癌患者56例,同期健康体检健康者45例和良性胰腺病患者33例作为研究对象,比较3组血清CA19-9、Dkk1与s-ULBP2表达及与临床病理参数的关系。分析CA19-9、s-ULBP2、Dkk1及联合检测诊断胰腺癌的诊断效能。结果 胰腺癌患者血清CA19-9、s-ULBP2及Dkk1含量明显高于良性胰腺病组及健康对照组(P〈0.05)。CA19-9、s-ULBP2与TNM分期、组织分化程度有关,且CA19-9与肿瘤部位也有关。联合检测诊断值高于任意指标单独检测。结论 CA19-9、s-ULBP2、Dkk1与胰腺癌关系密切,三者联合检测可提高胰腺癌诊断准确率。 展开更多
关键词 胰腺癌 糖类抗原199 分泌蛋白 ULBP
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高敏感度酶联免疫吸附测定法检测分泌蛋白MPB64对于活动性肺结核诊断的价值
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作者 赵冰 侯萍 +4 位作者 黄静 贺文从 欧喜超 刘东鑫 赵雁林 《中国防痨杂志》 CAS 2017年第12期1303-1308,共6页
目的评价以结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法(high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay,HI-ELISA)用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本,分别进... 目的评价以结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法(high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay,HI-ELISA)用于检测痰液中MTB的价值。方法选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本,分别进行BACTEC MGIT960液体培养(简称“MGIT960培养”)、MTB/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测系统(Gene Xpert MTB/RIF,简称“Xpert检测”)和HI-ELISA检测,通过与MGIT 960培养比较来评价HI-ELISA的诊断效能。结果本研究97份痰标本中,MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为36.08%(35/97)、32.99%(32/97);与MGIT 960培养比较,HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为88.57%(31/35)、98.39%(61/62)、94.85%(92/97)。在Xpert检测阳性的66份痰标本中,MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为51.51%(34/66)、48.48%(32/66);与MGIT 960培养相比,HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为91.18%(31/34)、96.88%(31/32)、93.93%(62/66)。Xpert检测MTB为阴性的31份痰标本中,仅有1份标本的MGIT960培养阳性而HI-ELISA未能检测到MTB,其他30份标本检测结果全部相符,符合率为96.77%(30/31)。结论HI-ELISA可以特异性检测MTB活菌,对活动性肺结核的诊断及治疗评价有很高的应用价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 分泌蛋白 MPB64 酶联免疫吸附测定 敏感性与特异性 诊断
全蛋白组水平预测旋毛虫分泌蛋白及其功能分析
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作者 费宏 秦玉兰 +4 位作者 吴玲燕 徐立新 宋小凯 李祥瑞 严若峰 《畜牧与兽医》 北大核心 2017年第4期79-84,共6页
从蛋白组水平预测并分析旋毛虫分泌蛋白的特征。利用软件预测旋毛虫蛋白组范围分泌蛋白,并统计和分析其序列特征,最后利用数据库信息注释分析分泌蛋白功能。结果:预测得到414个经典途径分泌蛋白和245个非经典途径分泌蛋白,占蛋白组2.40... 从蛋白组水平预测并分析旋毛虫分泌蛋白的特征。利用软件预测旋毛虫蛋白组范围分泌蛋白,并统计和分析其序列特征,最后利用数据库信息注释分析分泌蛋白功能。结果:预测得到414个经典途径分泌蛋白和245个非经典途径分泌蛋白,占蛋白组2.40%。MEME统计经典分泌蛋白信号肽中存在可能的3个基序。氨基酸组成分析表明,旋毛虫分泌蛋白及其信号肽主要由疏水性氨基酸组成,而信号肽剪切位点主要由亲水性氨基酸组成,信号肽剪切位点-3和-1两个位点氨基酸保守性高,可能是相关酶识别关键点。在对分泌蛋白的功能进行注释分析中发现,与核酸酶活性和蛋白酶活性相关的蛋白比例较高。研究结果为旋毛虫致病机制的深入研究提供理论基础。 展开更多
关键词 旋毛虫 蛋白组 预测 分泌蛋白 功能注释
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