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茶树CsPAL3基因的亚细胞定位及遗传转化 预览
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作者 唐秀华 孙威江 +3 位作者 龚萍萍 陈志丹 曹士先 谢凤 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期391-396,共6页
苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)由多基因家族编码,是花青素等多酚物质合成途径的起始酶,对其合成具有调控作用。以紫化茶树武夷奇种C18为材料,采用Gateway技术体系分别构建了茶树的CsPAL3过表达载体pGWB502:CsPAL3和p... 苯丙氨酸解氨酶(phenylalanine ammonia-lyase,PAL)由多基因家族编码,是花青素等多酚物质合成途径的起始酶,对其合成具有调控作用。以紫化茶树武夷奇种C18为材料,采用Gateway技术体系分别构建了茶树的CsPAL3过表达载体pGWB502:CsPAL3和pGWB505:CsPAL3:GFP,并成功将其转入根癌农杆菌GV3101。注射烟草瞬时表达激光共聚焦扫描显微镜可观察到GFP绿色荧光,结果表明CsPAL3主要集中在细胞核和细胞膜中。通过侵染拟南芥,筛选纯合子,获得稳定表达的转CsPAL3基因拟南芥。实时荧光定量PCR(qPCR)检测发现,CsPAL3在转CsPAL3基因拟南芥中的根部表达量显著高于叶片,且CsPAL3基因受光照调控。该结果为进一步研究茶树CsPAL3基因功能以及促进茶树花青素合成与积累的分子调控机理提供科学依据。 展开更多
关键词 茶树 CsPAL3基因 亚细胞定位 光照 表达量
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百合热激转录因子基因LlHsfC1的鉴定、表达与亚细胞定位 预览
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作者 曹兴 易瑾 +5 位作者 隋娟娟 吴泽 何俊娜 于守超 赵燕 义鸣放 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2019年第1期75-81,共7页
为了深入研究百合热激反应的分子机制,以麝香百合杂种系品种‘白天堂'为试验材料,鉴定了百合C类Hsf基因LlHsfC1,其开放阅读框为780 bp,编码259个氨基酸,推定蛋白质分子质量为30.1 ku,理论等电点为9.61.LlHsfC1蛋白含有热激转录因子... 为了深入研究百合热激反应的分子机制,以麝香百合杂种系品种‘白天堂'为试验材料,鉴定了百合C类Hsf基因LlHsfC1,其开放阅读框为780 bp,编码259个氨基酸,推定蛋白质分子质量为30.1 ku,理论等电点为9.61.LlHsfC1蛋白含有热激转录因子的特征结构域,但与百合A类Hsf相比,LlHsfC1缺少转录激活模序和核输出信号.亚细胞定位分析表明LlHsfC1在细胞核中表达.37℃胁迫处理显著促进了LlHsfC1的表达;LlHsfC1的表达受热胁迫与Ca^2+处理协同诱导.此外,构建了植物过表达载体pCAMBIA1301-LlHsfC1,为进一步研究LlHsfC1基因的功能提供了基础. 展开更多
关键词 百合 热胁迫 热激转录因子 亚细胞定位 基因表达
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桃转录因子PpWRKY11的克隆及表达分析
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作者 王庆杰 张泽杰 +6 位作者 高彦刚 陈修德 肖伟 付喜玲 李玲 李冬梅 高东升 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期503-510,共8页
WRKY转录因子能够响应生物及非生物胁迫。本研究基于前期实验室桃花芽休眠解除前后表达量明显下调的Prupe.1G071400基因进行研究,通过定量PCR表明此结果与前期实验结果相符合,证明该基因可能与桃花芽休眠解除密切相关。从桃‘中油四号... WRKY转录因子能够响应生物及非生物胁迫。本研究基于前期实验室桃花芽休眠解除前后表达量明显下调的Prupe.1G071400基因进行研究,通过定量PCR表明此结果与前期实验结果相符合,证明该基因可能与桃花芽休眠解除密切相关。从桃‘中油四号’叶片克隆了Prupe.1G071400基因,通过生物信息学分析,命名此基因为PpWRKY11;PpWRKY11蛋白编码282个氨基酸,包含特有WRKY结构域。进化树分析发现PpWRKY11与蔷薇科苹果和梨等亲缘关系最为相近;亚细胞定位显示PpWRKY11定位于细胞核中;酵母双杂显示PpWRKY11蛋白没有自主激活活性,进一步对PpWRKY11进行筛库,筛选出互作的蛋白;构建PGEX-PpWRKY11原核表达载体,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)诱导出符合大小的蛋白,发现PpWRKY11蛋白主要在沉淀中。 展开更多
关键词 PpWRKY11 芽休眠 基因克隆 亚细胞定位 基因表达
Transcriptional dysregulation in neurodegenerative diseases:who tipped the balance of Yin Yang 1 in the brain? 预览
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作者 Zhefan Stephen Chen Ho Yin Edwin Chan 《中国神经再生研究:英文版》 SCIE CAS CSCD 2019年第7期1148-1151,共4页
Yin Yang 1(YY1)is a multi-functional transcription factor that regulates gene expression in a range of cell types,including neurons.It controls neuronal differentiation,as well as neuronal specification and migration ... Yin Yang 1(YY1)is a multi-functional transcription factor that regulates gene expression in a range of cell types,including neurons.It controls neuronal differentiation,as well as neuronal specification and migration during the development of the mammalian nervous system.Besides,YY1 also mediates the transcription of genes that are required for neuronal survival.An impairment of the transcriptional function of YY1 causes neuronal death.This review summarizes recent research findings that unveil the dysfunction of YY1 in multiple neurodegenerative disorders.The expression of disease proteins perturbs the function of YY1 via distinct molecular mechanisms,including recruitment to protein aggregates,protein degradation and aberrant nuclear/cytoplasmic shuttling.Understanding the pathogenic roles of YY1 will further broaden our knowledge of the disease mechanisms in distinct neurodegenerative disorders. 展开更多
关键词 Alzheimer’s disease amyotrophic lateral SCLEROSIS neurodegeneration PROTEIN aggregates recruitment PROTEIN degradation SUBCELLULAR localization TRANSCRIPTIONAL regulation YIN Yang 1
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柑橘R2R3-MYB类转录因子CitMYB20的克隆与表达分析
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作者 范海芳 彭蕴 +8 位作者 张庆雯 何永睿 邹修平 李强 彭爱红 许兰珍 雷天刚 陈善春 姚利晓 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期3199-3207,共9页
为解析柑橘R2R3-MYB转录因子家族成员CitMYB20基因的分子生物学特征及受柑橘黄龙病病菌和溃疡病病菌的诱导表达情况。本研究同源克隆了不同柑橘品种中CitMYB20基因的开放阅读框序列,利用生物信息学方法预测其生物学功能并分析比较该基... 为解析柑橘R2R3-MYB转录因子家族成员CitMYB20基因的分子生物学特征及受柑橘黄龙病病菌和溃疡病病菌的诱导表达情况。本研究同源克隆了不同柑橘品种中CitMYB20基因的开放阅读框序列,利用生物信息学方法预测其生物学功能并分析比较该基因在不同品种间的序列差异。在洋葱表皮细胞中瞬时表达观察CitMYB20的亚细胞定位。利用qRT-PCR技术分析黄龙病病菌胁迫和溃疡病病菌胁迫时CitMYB20的表达量变化。研究结果显示柑橘CitMYB20基因在晚锦橙、酸柚、纽荷尔脐橙和四季橘中的相似度达到99.01%,高度保守。晚锦橙中该基因含有3个外显子和2个内含子,其开放阅读框为804 bp,编码267个氨基酸残基。CitMYB20蛋白的N端高度保守,具有两个R结构域,属于典型的R2R3类型的MYB转录因子家族的成员。洋葱表皮细胞亚细胞定位分析结果表明该基因定位于细胞核中。CitMYB20基因受黄龙病病菌胁迫时,在黄龙病敏感品种晚锦橙和耐性品种酸柚中均显著上调表达,其中在耐病品种酸柚中上调表达24倍,在感病品种晚锦橙中上调表达34倍;而在溃疡病病菌胁迫时,CitMYB20基因仅在溃疡病抗性品种四季橘中显著差异表达,感病后上调表达3倍。推测该基因对黄龙病和溃疡病的应答差异可能是因为不同的调控机制造成的,构建CitMYB20基因过表达载体拟对不同病原的应答情况进行深入研究。 展开更多
关键词 柑橘 R2R3-MYB转录因子 亚细胞定位 黄龙病 溃疡病
花生MAPK13基因的克隆及表达分析研究 预览
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作者 梁丹 张朝昕 +8 位作者 王冕 吴正锋 陈娜 潘丽娟 王通 陈明娜 杨珍 禹山林 迟晓元 《花生学报》 北大核心 2019年第2期10-18,共9页
为了挖掘花生抗果腐病相关基因,本研究以花生品种花育20号为试验材料,从花生果腐病转录组文库中筛选出促丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)基因编码区序列设计引物,通过RACE-PCR克隆得到AhMAPK 13基因°结果表明AhMAPK 13基因序列全长18... 为了挖掘花生抗果腐病相关基因,本研究以花生品种花育20号为试验材料,从花生果腐病转录组文库中筛选出促丝裂原活化蛋白激酶13(MAPK13)基因编码区序列设计引物,通过RACE-PCR克隆得到AhMAPK 13基因°结果表明AhMAPK 13基因序列全长1818 bp,含有/非编码区593 bp,5非编码区122 bp,开放阅读框全长1104 bp,编码1条含有368个氨基酸的蛋白序列。预测其分子量为42. 5kDa,含有MAPK家族典型的11个结构域,属于MAPK基因家族B组成员。亚细胞定位显示AhMAPK13定位于细胞质和细胞核中° RT-qPCR分析发现AhMAPK 13基因在茎中表达量高于其他组织,说明该基因具有组织表达特异性;AhMAPK 13基因受干旱、低温、NaCl(ABA诱导时表达量上升,说明该基因可能广泛参与植物非生物胁迫响应过程;AhMAPK 13基因受JA、GA、ET、SA诱导时表达量上调,说明该基因可能参与到这些激素介导的抗逆信号转导途径。本研究结果为花生抗果腐病育种研究提供了新的基因资源。 展开更多
关键词 花生 促丝裂原蛋白活化激酶基因13 基因克隆 表达分析 亚细胞定位
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花生脂肪酸延长酶基因AhFAE1及其启动子的克隆与功能分析 预览
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作者 石磊 黄冰艳 +7 位作者 齐飞艳 苗利娟 刘华 张忠信 高伟 董文召 汤丰收 张新友 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期176-185,共10页
为探讨花生脂肪酸中低芥酸含量的原因,从花生中克隆了脂肪酸延长酶FAE1及其启动子序列,并进行了功能分析。结果表明,AhFAE1全长cDNA为2 202bp,含有441bp的5′非翻译区及201bp的3′非翻译区,编码蛋白含519aa,分子量58.17Da,理论等电点9.1... 为探讨花生脂肪酸中低芥酸含量的原因,从花生中克隆了脂肪酸延长酶FAE1及其启动子序列,并进行了功能分析。结果表明,AhFAE1全长cDNA为2 202bp,含有441bp的5′非翻译区及201bp的3′非翻译区,编码蛋白含519aa,分子量58.17Da,理论等电点9.15,AhFAE1与麻疯树(Jatropha curcas ALB76796.1)、黄麻(Corchorus capsularis OMO87584.1)、拟南芥AtKCS4亲缘关系较近。亚细胞定位结果显示AhFAE1定位于内质网。qRT-PCR结果显示,AhFAE1在各个组织中均有表达,在种子中随着种子的发育成"钟"型变化,花后60d表达量最高。构建了植物表达载体,通过农杆菌介导法转化拟南芥研究启动子功能,利用GUS组织化学染色研究其表达特征,在任何组织中未发现GUS活性。推测AhFAE1可能参与了花生长链脂肪酸的合成,但是该基因启动子转录活性弱可能是造成花生中低芥酸含量的主要原因。 展开更多
关键词 花生 AhFAE1基因 克隆表达 亚细胞定位
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不结球白菜开花相关基因BcGI的克隆、亚细胞定位及基因沉默功能验证 预览
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作者 王惠玉 任海波 +3 位作者 李林 刘同坤 程奕秋 侯喜林 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期648-656,共9页
[目的]本文旨在揭示不结球白菜 GIGANTEA(GI)基因的功能,验证其与CONSTANS(CO)、FLOWERING LOCUS T(FT)基因之间的调控关系以及其在植物抽薹开花中的作用。[方法]以不结球白菜品种‘苏州青’为材料,提取RNA并反转录成cDNA,同源克隆 BcGI... [目的]本文旨在揭示不结球白菜 GIGANTEA(GI)基因的功能,验证其与CONSTANS(CO)、FLOWERING LOCUS T(FT)基因之间的调控关系以及其在植物抽薹开花中的作用。[方法]以不结球白菜品种‘苏州青’为材料,提取RNA并反转录成cDNA,同源克隆 BcGI 基因,Gateway构建表达载体pEarleyGate101- BcGI -YFP,利用农杆菌介导法将表达载体注射入本氏烟草中,激光共聚焦显微镜观察其亚细胞定位。Gateway构建沉默载体 BcGI -RNAi,利用农杆菌介导法将沉默载体导入拟南芥中,观察野生型和转基因植株抽薹期的表型变化。采用RT-qPCR技术,检测 GI、CO、FT 基因在转基因和野生型拟南芥植株抽薹期的基因表达量。[结果]通过同源克隆,得到 BcGI 基因,其含有1个3 516 bp的开放阅读框(ORF),编码1 171个氨基酸。亚细胞定位结果显示,BcGI定位于细胞核中。RT-qPCR结果表明, BcGI 基因在沉默转基因植株中的相对表达量比野生型植株低;同时当 GI基因表达受到抑制时,CO、FT 基因在沉默转基因植株中的相对表达量也比野生型明显降低,沉默转基因植株与野生型相比表现为开花延迟且抽薹期莲座叶数明显增多。[结论] BcGI定位于细胞核,参与正向调控下游 CO、FT 基因的表达,进而影响不结球白菜光周期开花途径。 展开更多
关键词 不结球白菜 BcGI基因 亚细胞定位 开花途径 基因沉默
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梨钾通道基因PbAKT1的克隆及其表达分析
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作者 杨晗 李岩 +6 位作者 申长卫 金雨濛 石晓倩 谢昶琰 梅新兰 徐阳春 董彩霞 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1341-1350,共10页
AKT1 (Arabidopsis potassium transport 1)是重要的钾通道蛋白基因,参与植物钾吸收和转运过程。为了探究梨(Pyrus betulifolia) PbAKT1基因对钾的响应及表达模式,本研究采用不同浓度K+处理杜梨幼苗,对PbAKT1基因进行克隆并对其所编码... AKT1 (Arabidopsis potassium transport 1)是重要的钾通道蛋白基因,参与植物钾吸收和转运过程。为了探究梨(Pyrus betulifolia) PbAKT1基因对钾的响应及表达模式,本研究采用不同浓度K+处理杜梨幼苗,对PbAKT1基因进行克隆并对其所编码的蛋白进行组织特异性分析。结果表明,克隆获得的PbAKT1基因(GenBank No. MN150549) cDNA全长2 646 bp,编码881个氨基酸,有Shaker家族典型的S1~S6的跨膜结构和1个loop环;氨基酸序列的同源关系分析表明,梨PbAKT1基因与苹果(Malus domestica) MdAKT1基因的亲缘关系最近;亚细胞定位发现,该基因主要定位于细胞膜上,为亲水性稳定蛋白;PbAKT1基因在梨苗根、茎、叶片中都有表达,不存在组织特异性;缺钾条件下,该基因有明显响应。综上所述,梨PbAKT1的表达受到缺钾胁迫的诱导,可能参与梨树K+吸收和转运过程。本研究结果为进一步揭示梨树耐低钾分子机制提供基础了资料。 展开更多
关键词 钾通道蛋白 基因表达 PbAKT1 亚细胞定位
Expression, purification, and subcellular localization of phospholipase C in Dunaliella salina 预览
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作者 CONG Yuting WANG Yuan +3 位作者 YUE Jinrong XING Zhenyu GAO Xiangnan CHAI Xiaojie 《海洋湖沼学报(英文)》 SCIE CAS CSCD 2019年第4期1363-1371,共9页
Plants possess effective mechanisms to respond quickly to the external environment. Rapid activation of phosphatidylinositol-specific phospholipase C (PLC) enzymes occurs after a stimulus. The PLC in Dunaliella salina... Plants possess effective mechanisms to respond quickly to the external environment. Rapid activation of phosphatidylinositol-specific phospholipase C (PLC) enzymes occurs after a stimulus. The PLC in Dunaliella salina plays important roles in growth and stress responses. However, the molecular basis of PLC action in D. salina remains little understood. To gain insight into the potential biological functions of this enzyme, we cloned a phospholipase C gene from D. salina in a previous study, named DsPLC (GenBank No. KF573428). Here, we present the prokaryotic expression, purification, and characterization of the DsPLC gene. The entire coding region of DsPLC was inserted into an expression vector pET32a, and the DsPLC gene was successfully expressed in Escherichia coli. The DsPLC protein was purified and identified using a polyclonal antibody and western blotting. Expressing DsPLC fused with a green fluorescent protein (GFP) in onion showed that DsPLC-GFP was localized to the intracellular membrane. Quantitative real-time PCR analysis revealed that the relative expression of the DsPLC gene was induced significantly by 3.0-mol/L NaCl at 4 h. Our results support the importance of PLC enzymes in plant defense signaling. This study provides a basis for further functional studies of the DsPLC gene and for additional analysis of the potential roles of PLC enzymes in response to abiotic stress. 展开更多
关键词 DUNALIELLA SALINA DsPLC gene PROKARYOTIC EXPRESSION SUBCELLULAR localization salt stress
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滑液支原体醛缩酶的亚细胞定位及免疫原性
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作者 王宇 祁晶晶 +4 位作者 刘婷 温政 闫遵祥 高崧 于圣青 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期780-789,共10页
【背景】滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染能够引起鸡和火鸡的气囊炎、关节渗出性的滑液囊膜及腱鞘滑膜炎等。有研究表明,许多支原体中与代谢相关的酶类不仅分布在细胞质,也分布于细胞膜表面,通过结合宿主细胞的胞外基质蛋白,协... 【背景】滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染能够引起鸡和火鸡的气囊炎、关节渗出性的滑液囊膜及腱鞘滑膜炎等。有研究表明,许多支原体中与代谢相关的酶类不仅分布在细胞质,也分布于细胞膜表面,通过结合宿主细胞的胞外基质蛋白,协助病原菌黏附入侵宿主细胞。已有报道牛支原体(Mycoplasma bovis)和鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum)的醛缩酶(Fructose-bisphosphate aldolase,FBA)分布在膜蛋白和胞浆蛋白中,而MS的FBA蛋白还未见相关研究。【目的】对MSFBA蛋白进行生物信息学分析、原核表达、免疫原性分析及亚细胞定位检测,为进一步探索MS代谢相关酶类的生物学功能奠定基础。【方法】通过分析软件PSORTb、SignalP 4.1 Server和TMHMM Server在线预测MSFBA的亚细胞定位、信号肽及跨膜区,并用BLASTn和MEGA 5.0进行同源比对及进化树分析;通过Overlap PCR点突变扩增MS的fba全基因序列,连接表达载体pET-28a(+)并进行原核表达及纯化,获得纯化后的重组MSFBA(rMSFBA)蛋白;用MS阳性血清进行Westernblot鉴定rMSFBA的免疫原性;用纯化的rMSFBA蛋白制备兔多克隆抗体,与MS全菌蛋白、膜蛋白及胞浆蛋白进行Western blot分析,同时对MS全菌进行悬浮免疫荧光分析,检测MSFBA的膜定位情况。【结果】生物信息分析预测MSFBA分布在细胞质中,无信号肽,无跨膜区,在MS种内相似性高达99%,与其他种属FBA相似性在61%-78%之间,进化树显示其与牛鼻支原体(Mycoplasma bovirhinis)、仓鼠支原体(Mycoplasm acricetuli)等的FBA蛋白进化关系较近,与精氨酸支原体(Mycoplasma arginini)、人型支原体(Mycoplasma hominis)等的FBA蛋白进化关系较远;表达rMSFBA蛋白并纯化,经测定其相对分子质量大小约为33kD;rMSFBA能与MS阳性鸡血清特异性结合,证实其具有较好的免疫原性;Western blot显示抗rMSFBA的兔血清能与MS全菌蛋白和胞浆蛋白反应,而与膜蛋白不反应,说明MSFBA蛋白� 展开更多
关键词 滑液支原体 醛缩酶 原核表达 亚细胞定位 免疫原性
牛支原体临洮分离株NOX-1的克隆表达、酶学活性及其亚细胞定位研究 预览
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作者 李丹 张志雄 +1 位作者 邢小勇 包世俊 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期57-64,共8页
为研究牛支原体(M. bovis)临洮分离株(LT strain)NOX-1基因特征表达产物的酶活性,及其在细胞中的具体存在部位,参照GenBank中M. bovis NOX-1HuBei株NOX-1基因序列(GenBank登录号:NC015725.1)设计引物,应用PCR扩增M.bovis临洮株的NOX-1基... 为研究牛支原体(M. bovis)临洮分离株(LT strain)NOX-1基因特征表达产物的酶活性,及其在细胞中的具体存在部位,参照GenBank中M. bovis NOX-1HuBei株NOX-1基因序列(GenBank登录号:NC015725.1)设计引物,应用PCR扩增M.bovis临洮株的NOX-1基因,在完成测序后构建NOX-1基因原核表达载体pET-NOX-1,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达。表达产物纯化后进行酶活测定并免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,继而应用Western blot及间接ELISA对NOX-1在M. bovis内的分布进行初步定位。结果显示,M. bovis临洮株NOX-1基因全长1365 bp,重组质粒经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,重组蛋白His-NOX-1的分子量约为50 kDa;重组蛋白酶促反应最适酶促温度为30℃、pH为7.5,双倒数法求得重组蛋白Km和Vmax分别为256.41μmol/L、34.25μmol/(L·min);Western blot及间接ELISA结果表明His-NOX-1在M. bovis细胞膜上和细胞浆中均有分布且胞浆含量较高。本研究结果为进一步研究M. bovisNOX-1的生物学功能奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 牛支原体 NOX-1基因 亚细胞定位 免疫原性
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陆地棉HRD转录因子基因原核表达与亚细胞定位分析 预览
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作者 陈琴 曲延英 +3 位作者 倪志勇 韩玉慧 程浩然 陈全家 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期121-128,共8页
【目的】AP2/ERF家族基因在植物生长和逆境胁迫中起重要作用,GhHRD转录因子基因是该家族的一员。本试验首次克隆了GhHRD基因,为研究其功能提供理论依据。【方法】选用相对耐旱的新陆中36作为试验材料,通过反转录聚合酶链式反应的方法获... 【目的】AP2/ERF家族基因在植物生长和逆境胁迫中起重要作用,GhHRD转录因子基因是该家族的一员。本试验首次克隆了GhHRD基因,为研究其功能提供理论依据。【方法】选用相对耐旱的新陆中36作为试验材料,通过反转录聚合酶链式反应的方法获得GhHRD基因,并通过生物信息学、原核表达、亚细胞定位和酵母杂交分析预测其结构和功能。【结果】GhHRD基因开放阅读框为555 bp,编码184个氨基酸,相对分子质量为19.539×103 Da,等电点为5,具有典型的AP2/ERF保守结构域。原核表达分析发现,pET-28a(+)-GhHRD可以被诱导表达,且在37℃、IPTG浓度1 mmol·L-1条件下高效表达。与GFP融合的重组蛋白GhHRD-GFP定位在细胞核,且具有明显的转录自激活特征。【结论】推测GhHRD可能参与了棉花逆境胁迫应答反应,为进一步探索该转录因子的DNA结合位点和转录调控网络奠定了基础。 展开更多
关键词 HRD转录因子 原核表达 亚细胞定位 酵母杂交
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小麦热激转录因子基因TaHsfA2f生物学特性及耐热性调控作用
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作者 张园园 赵慧 +3 位作者 张玉杰 段硕楠 李国良 郭秀林 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期825-835,共11页
植物热激转录因子(heat shock transcription factor, Hsf)在植物体响应热胁迫和其他逆境胁迫信号转导通路中发挥重要的调节作用,数量因作物不同差异较大。小麦(Triticum aestivum) Hsf家族成员数量多,包括多个亚家族,生物学特性和功能... 植物热激转录因子(heat shock transcription factor, Hsf)在植物体响应热胁迫和其他逆境胁迫信号转导通路中发挥重要的调节作用,数量因作物不同差异较大。小麦(Triticum aestivum) Hsf家族成员数量多,包括多个亚家族,生物学特性和功能复杂多样。本研究从小麦中同源克隆了A2亚族成员TaHsfA2f(GenBank No.MK045331)的完整开放阅读框序列,序列长1 062 bp,编码353个氨基酸,蛋白质序列含DNA结合结构域(DNA-binding domain, DBD)、核定位信号序列(nuclear localization signal, NLS)(MRKELEDAMSNKRRRR)、核输出信号序列(nuclear export signal, NES)(LKRDKGLLM)和激活域(aromatic, large hydrophobic and acidic amino residues, AHA)(DDFWEDLLHE)。通过转化烟草(Nicotiana tabacum)表皮细胞发现,正常条件下TaHsfA2f蛋白质定位在细胞核。同源分析表明,TaHsfA2f与多种作物的HsfA2e蛋白相似性较高。组织特异性表达分析表明,TaHsfA2f在小麦中组成型表达。显著性分析表明,成熟根中高表达,幼茎和幼叶中较低表达(P<0.05)。叶片中TaHsfA2f的表达分别受热胁迫、水杨酸和过氧化氢处理上调(P<0.05),于处理60 min和120 min时达峰值。TaHsfA2f可不同程度提高转基因拟南芥(Arabidopsis thaliana)植株的基础耐热性和获得耐热性,在热胁迫条件下上调一系列热相关蛋白基因的表达。本研究为进一步解析小麦A2亚族基因特性与调控功能提供理论依据。 展开更多
关键词 小麦TaHsfA2f 生物学特性 亚细胞定位 耐热性调控
苹果MdWRKY35基因克隆与表达分析
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作者 苏梦雨 慈志娟 +4 位作者 王楠 房鸿成 姜生辉 岳璇璇 陈学森 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期319-328,共10页
WRKY转录因子是植物中发现的一种新型转录调控因子,在响应非生物胁迫、调控生长发育等方面具有重要作用。然而, WRKY基因如何调控开花及通过调控植物发育从而提高抗逆等方面的研究鲜有报道。本研究以新疆红肉苹果(Malus neidzwetzkyana... WRKY转录因子是植物中发现的一种新型转录调控因子,在响应非生物胁迫、调控生长发育等方面具有重要作用。然而, WRKY基因如何调控开花及通过调控植物发育从而提高抗逆等方面的研究鲜有报道。本研究以新疆红肉苹果(Malus neidzwetzkyana)杂种二代群体(M. niedzwetzkyana/M. pumila ‘Fuji’/M. pumila ‘Gala’)的幼嫩叶片为试材,克隆得到一个新的WRKY转录因子,命名为MdWRKY35,测序发现其包含804 bp的完整开放阅读框(ORF),编码267个氨基酸,预测其编码蛋白质分子质量为30.83 kDa,理论等电点为4.81,定位于苹果基因组的第11号染色体上,由3个外显子和2个内含子构成。MdWRKY35与白梨(Pyrus×bretschneideri)的同源性高达93.28%,具有WRKY转录因子家族典型的保守结构域,属于第II组WRKY蛋白家族。组织特异性分析表明MdWRKY35在根中表达最高,在茎尖及叶片的表达次之。多种逆境胁迫因子如高盐、干旱、低温以及脱落酸(ABA)等诱导后,‘嘎啦’苹果(M. pumila ‘Gala’)组培苗中的MdWRKY35呈上调表达;MdWRKY35蛋白可能定位于细胞核中;荧光素酶(LUC)活性检测试验表明, MdWRKY35可能促进MdFT的表达。研究MdWRKY35在抗逆调节及成花进程中的功能可以为进一步完善红肉苹果育种的理论与技术体系提供参考。 展开更多
关键词 苹果 MdWRKY35 基因克隆 表达模式 亚细胞定位
一个木薯Aux/IAA转录因子的克隆及调节活性氧功能分析
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作者 樊书宏 施海涛 刘国银 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期362-369,共8页
木薯是一种重要的粮食作物并且能够作为原料用于生产绿色能源。探究木薯中具有重要调节作用的相关基因,对于木薯产量的稳定具有重要的意义。Aux/IAAs在植物生长发育和胁迫时能够发挥重要的调节作用,但关于其在木薯中的作用的研究还不清... 木薯是一种重要的粮食作物并且能够作为原料用于生产绿色能源。探究木薯中具有重要调节作用的相关基因,对于木薯产量的稳定具有重要的意义。Aux/IAAs在植物生长发育和胁迫时能够发挥重要的调节作用,但关于其在木薯中的作用的研究还不清楚。本研究以木薯品种华南124 (South China 124, SC124)为材料,对一个MeIAA进行了克隆,研究发现MeIAA在根、茎、叶均有表达。其中表达量最高的部位为叶片,同时H2O2处理可以诱导MeIAA表达,且MeIAA蛋白定位于核。此外,该转录因子能够促进活性氧积累和增加丙二醛的含量。本研究为进一步研究Aux/IAA转录因子在植物功能及其活性氧积累的关系提供了理论依据。 展开更多
关键词 木薯 AUX/IAA 亚细胞定位 活性氧
日本结缕草ZjERF2基因的克隆、转录激活活性、亚细胞定位和表达分析 预览
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作者 张蕊 姜红岩 +4 位作者 滕珂 檀鹏辉 汪呈 刘凌云 常智慧 《草业科学》 CAS CSCD 2019年第5期1255-1265,共11页
采用RACE的方法,克隆了日本结缕草(Zoysia japonica)ZjERF2基因(GenBank登录号为MH479420)。其开放阅读框为825bp,编码274个氨基酸,含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征。遗传进化分析表明其与黍(Panicum hallii)ER... 采用RACE的方法,克隆了日本结缕草(Zoysia japonica)ZjERF2基因(GenBank登录号为MH479420)。其开放阅读框为825bp,编码274个氨基酸,含有一个高度保守的AP2结构域,具有典型的ERF转录因子特征。遗传进化分析表明其与黍(Panicum hallii)ERF亲缘关系最近。利用染色体步移的方法克隆ATG上游1549bp的启动子序列,PLACE预测其含有多个响应激素和胁迫处理的作用元件。构建了pGBKT7-ZjERF2载体,转化Y2HGold酵母感受态细胞,结果表明其具有较强的转录激活活性。为探析其亚细胞定位情况,成功构建35S..ZjERF2.YFP载体,本生烟草(Nicotiana tabacum)瞬时表达结果证明ZjERF2定位于细胞核。利用实时荧光定量的方法分析了ZjERF2的表达特征,结果表明ZjERF2基因在日本结缕草不同部位及不同发育时期表达量均有差异,在成熟叶片表达量最高。此外ZjERF2表达受ET、MeJA的诱导,但受ABA、PEG和NaCl的抑制。本研究表明ZjERF2是一个参与多种信号转导途径的转录因子。 展开更多
关键词 日本结缕草 ZjERF2转录因子 转录激活活性 亚细胞定位 表达分析
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紫花苜蓿半胱氨酸合酶基因MsSDCS-0植物GFP荧光表达载体构建与拟南芥转化 预览
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作者 赵菲佚 马家琦 +2 位作者 安建平 焦成瑾 马伟超 《天水师范学院学报》 2019年第2期7-11,共5页
半胱氨酸合成酶[Cysteine Synthase, CSase,也称为O-乙酰丝氨酸裂解酶,O-acetylserine(thiol)lyase,OAS-TL]在植物有机硫合成中起着关键的作用。本研究从已有中间克隆载体pBSCMsSDCS-0上获取已克隆的紫花苜蓿半胱氨酸合成酶基因MsSDCS-... 半胱氨酸合成酶[Cysteine Synthase, CSase,也称为O-乙酰丝氨酸裂解酶,O-acetylserine(thiol)lyase,OAS-TL]在植物有机硫合成中起着关键的作用。本研究从已有中间克隆载体pBSCMsSDCS-0上获取已克隆的紫花苜蓿半胱氨酸合成酶基因MsSDCS-0片段后,将其亚克隆于植物荧光表达载体pCAMBIA1205-GFPn上,成功构建了该基因成员的植物GFP表达载体pCAMBIA1205-GFPn-MsSDCS-0。pCAMBIA1205-GFPn-MsSDCS-0在野生型拟南芥(Col-0)原生质体瞬时表达确认MsSDCS-0定位于胞质中;此外,该载体对拟南芥Col-0转化表明:过表达该基因不会对植物的生长表型产生影响。本研究结果将为通过基因工程方式提高紫花苜蓿含硫氨基酸含量及该基因在植物体内功能后续研究提供基础。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 半胱氨酸合成酶 植物GFP表达载体 亚细胞定位 植物表型
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日本结缕草ZjERF1的克隆、转录激活活性、亚细胞定位及表达分析 预览
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作者 滕珂 张蕊 +3 位作者 檀鹏辉 岳跃森 范希峰 武菊英 《草业学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期56-65,共10页
ERF转录因子是植物体内最大的一类转录因子之一,在调控植物生长发育和响应环境胁迫等方面发挥着重要的作用。研究利用RACE技术,从日本结缕草中克隆到ZjERF1基因(GenBank登录号为MH294481),开放阅读框为630 bp,编码209个氨基酸残基,含有... ERF转录因子是植物体内最大的一类转录因子之一,在调控植物生长发育和响应环境胁迫等方面发挥着重要的作用。研究利用RACE技术,从日本结缕草中克隆到ZjERF1基因(GenBank登录号为MH294481),开放阅读框为630 bp,编码209个氨基酸残基,含有1个高度保守的AP2结构域,属于典型的ERF转录因子。利用染色体步移技术,成功获得ATG上游1581 bp的启动子序列,生物信息学分析表明其中含有多个响应MeJA等激素和非生物胁迫的作用元件。为分析其转录激活特性,构建了pGBKT7-ZjERF1载体,转化Y2HGold酵母感受态细胞,结果表明其具有较强的转录激活活性。为探析其亚细胞定位情况,成功构建35S::ZjERF1:YFP载体,本生烟草瞬时表达结果证明ZjERF1定位于细胞核。为进一步研究ZjERF1的表达特征,利用实时荧光定量的方法进行了验证,结果表明:ZjERF1在日本结缕草茎中表达量最高,并且与叶片的衰老程度呈正相关性;此外ZjERF1的表达可受200μmol·L^-1 ET、10μmol·L^-1 MeJA和300 mmol·L^-1 NaCl处理的诱导,但受到20%PEG4000的抑制。研究表明ZjERF1是一个可参与多种信号转导途径的优良转录因子,为进一步探索ZjERF1基因的功能及其调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 日本结缕草 ERF转录因子 转录激活 亚细胞定位 表达分析
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日本结缕草ZjNAC2基因的克隆、亚细胞定位及表达分析 预览
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作者 姜红岩 张蕊 +3 位作者 滕珂 檀鹏辉 刘凌云 尹淑霞 《草业科学》 CAS CSCD 2019年第6期1553-1562,共10页
NAC(NAM,ATAF1/2,CUC2)是植物所特有的最大的转录因子家族之一,在调控植物生长发育、响应非生物胁迫等方面发挥着重要作用。本研究利用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNAends,RACE)从日本结缕草(Zoysiajaponica)中克隆... NAC(NAM,ATAF1/2,CUC2)是植物所特有的最大的转录因子家族之一,在调控植物生长发育、响应非生物胁迫等方面发挥着重要作用。本研究利用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNAends,RACE)从日本结缕草(Zoysiajaponica)中克隆获得了ZjNAC2基因(GenBank登录号为MH580281),其编码区序列长1110bp,编码369个氨基酸。保守结构域分析显示,ZjNAC2编码蛋白在N端有一个典型的NAM结构域,表明ZjNAC2属于NAC转录因子家族。同时通过染色体步移的方法获得其启动子序列1574bp,通过作用元件分析发现该启动子上有ABA、非生物胁迫等多个不同的响应元件。亚细胞定位结果显示,ZjNAC2定位于细胞核。荧光定量分析表明,ZjNAC2在根中的表达量最高,并且在衰老叶片中表达量显著高于幼嫩叶片;此外ZjNAC2的表达受200μmol·L^-1ET、10μmol·L^-1MeJA、10μmol·L^-1ABA和20%PEG4000的抑制,但受300mmol·L^-1NaCl处理的诱导。本研究表明ZjNAC2转录因子可能参与多种信号转导途径,这为进一步深入研究ZjNAC2的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 日本结缕草 NAC转录因子 亚细胞定位 表达分析
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