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中华根瘤菌NP1中反硝化基因启动子分析及荧光定量PCR验证 预览
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作者 张宇 王森 +1 位作者 陈度宇 许雷 《生物技术进展》 2019年第2期178-184,共7页
目前,在污水脱氮过程中N2O的释放量逐年上升,造成温室效应,引起酸雨并破坏臭氧层。为了研究在反硝化过程中N2O释放的机制,利用生物信息学软件在线预测了中华根瘤菌NP1反硝化过程中4个关键酶基因的启动子信息。经预测,反硝化过程所需的4... 目前,在污水脱氮过程中N2O的释放量逐年上升,造成温室效应,引起酸雨并破坏臭氧层。为了研究在反硝化过程中N2O释放的机制,利用生物信息学软件在线预测了中华根瘤菌NP1反硝化过程中4个关键酶基因的启动子信息。经预测,反硝化过程所需的4个关键酶基因的表达并非传统观念上认为的使用同一个启动子,而是4个不同的启动子。同时还发现,硝酸盐还原酶和亚硝酸盐还原酶的启动子转录活性较强,而一氧化氮还原酶和氧化亚氮还原酶的启动子则转录活性较弱。为进一步探究上述预测结果,我们利用荧光定量PCR检测中华根瘤菌NP1中以KNO3为唯一氮源培养时,反硝化4个关键酶基因转录水平上的差异,以及测量反硝化过程中产生的代谢产物含量。发现硝酸盐还原酶基因和亚硝酸盐还原酶基因的转录水平明显高于一氧化氮还原酶基因和氧化亚氮还原酶基因,在反硝化过程中确实有一定量的N2O气体积累,推测可能与不同启动子的强弱有关。因此,可通过改造操纵子等基因工程手段调节反硝化关键酶的表达,使N2O全部还原为N2后再释放到空气中,构建更加高效绿色的污水脱氮菌株,具有深远的社会意义。 展开更多
关键词 反硝化 N2O 荧光定量PCR 启动子 转录活性
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低氧诱导因子及其抑制剂研究进展 预览
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作者 闫东科 吕平 《生物技术进展》 2019年第4期332-340,共9页
低氧(hypoxia)是生物体内常见的生理和病理现象,也是常见的实体肿瘤微环境。人和其他哺乳动物体内存在一系列应对缺氧胁迫的调节机制,而低氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIFs)是这些调节机制中的关键调控因子,是一类参与细胞缺... 低氧(hypoxia)是生物体内常见的生理和病理现象,也是常见的实体肿瘤微环境。人和其他哺乳动物体内存在一系列应对缺氧胁迫的调节机制,而低氧诱导因子(hypoxia-inducible factors,HIFs)是这些调节机制中的关键调控因子,是一类参与细胞缺氧应答反应的转录因子家族。大量研究表明,HIFs与生物体的生长、发育、血管生成、红细胞生成、细胞代谢和自噬以及肿瘤的发生、发展、转移侵袭、放化疗抗性和癌症患者的不良预后等密切相关。因此,进一步加强HIFs及其抑制剂的相关研究对于肿瘤的认识与治疗具有重要意义。从HIFs的蛋白质结构、稳定性调控、转录激活调控及其靶向抑制剂的研究进展等方面进行综述,以期为靶向HIFs的肿瘤治疗提供新线索,为新型HIFs抑制剂的研究与开发提供参考。 展开更多
关键词 低氧诱导因子 稳定性调控 转录活性 靶向抑制剂 肿瘤治疗
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日本结缕草ZjERF1的克隆、转录激活活性、亚细胞定位及表达分析 预览
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作者 滕珂 张蕊 +3 位作者 檀鹏辉 岳跃森 范希峰 武菊英 《草业学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期56-65,共10页
ERF转录因子是植物体内最大的一类转录因子之一,在调控植物生长发育和响应环境胁迫等方面发挥着重要的作用。研究利用RACE技术,从日本结缕草中克隆到ZjERF1基因(GenBank登录号为MH294481),开放阅读框为630 bp,编码209个氨基酸残基,含有... ERF转录因子是植物体内最大的一类转录因子之一,在调控植物生长发育和响应环境胁迫等方面发挥着重要的作用。研究利用RACE技术,从日本结缕草中克隆到ZjERF1基因(GenBank登录号为MH294481),开放阅读框为630 bp,编码209个氨基酸残基,含有1个高度保守的AP2结构域,属于典型的ERF转录因子。利用染色体步移技术,成功获得ATG上游1581 bp的启动子序列,生物信息学分析表明其中含有多个响应MeJA等激素和非生物胁迫的作用元件。为分析其转录激活特性,构建了pGBKT7-ZjERF1载体,转化Y2HGold酵母感受态细胞,结果表明其具有较强的转录激活活性。为探析其亚细胞定位情况,成功构建35S::ZjERF1:YFP载体,本生烟草瞬时表达结果证明ZjERF1定位于细胞核。为进一步研究ZjERF1的表达特征,利用实时荧光定量的方法进行了验证,结果表明:ZjERF1在日本结缕草茎中表达量最高,并且与叶片的衰老程度呈正相关性;此外ZjERF1的表达可受200μmol·L^-1 ET、10μmol·L^-1 MeJA和300 mmol·L^-1 NaCl处理的诱导,但受到20%PEG4000的抑制。研究表明ZjERF1是一个可参与多种信号转导途径的优良转录因子,为进一步探索ZjERF1基因的功能及其调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 日本结缕草 ERF转录因子 转录激活 亚细胞定位 表达分析
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猪SEPW1基因的转录调控分析 预览
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作者 张凤 李鑫 陈明新 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第6期1730-1738,共9页
本研究旨在对猪SEPW1基因的潜在启动子区进行克隆及转录活性分析,获得其核心启动子区域,并进一步分析转录因子SP1对SEPW1基因转录活性的影响,为探索SEPW1基因在猪肉质性状方面的功能奠定基础。利用实时荧光定量PCR检测SEPW1基因在大白... 本研究旨在对猪SEPW1基因的潜在启动子区进行克隆及转录活性分析,获得其核心启动子区域,并进一步分析转录因子SP1对SEPW1基因转录活性的影响,为探索SEPW1基因在猪肉质性状方面的功能奠定基础。利用实时荧光定量PCR检测SEPW1基因在大白猪各组织中的表达量,构建空间表达谱;通过PCR技术克隆得到6个逐级缺失的SEPW1基因启动子片段,构建6个双荧光素酶报告载体,通过检测各载体的双荧光素酶活性获得SEPW1基因的核心启动子区域;对核心启动子区进行生物信息学分析,发现潜在的SP1转录因子结合位点;通过过表达、抑制表达、定点突变及凝胶迁移试验(EMSA)确认SP1转录因子结合位点的存在及其对SEPW1基因转录活性的影响。结果显示,SEPW1基因在所检测的4月龄大白猪12个组织中均有表达,其中在腓肠肌及心脏中的表达量较高。双荧光素酶活性显示,猪SEPW1基因5′侧翼区-443~-231 bp为其核心启动子区,且-378~-306 bp存在1个潜在的SP1结合位点。过表达和抑制表达SP1基因结果显示,转录因子SP1能够促进SEPW1基因的转录;定点突变及EMSA试验确认,转录因子SP1可直接与SEPW1基因启动子区的SP1结合位点(-348~-339 bp)相结合。综合以上结果表明,转录因子SP1可直接靶向SEPW1基因的启动子区并促进SEPW1基因的转录。 展开更多
关键词 SEPW1基因 SP1 启动子 转录活性
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苏云金芽胞杆菌cry8Ea启动子区orf1片段缺失增强启动子活性 预览
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作者 崔婷婷 杜立新 +3 位作者 彭琦 张杰 高继国 宋福平 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期30-36,共7页
本文分别构建了cry8E基因上游的启动子(Porf18E)和其上游缺失orf1基因的启动子(PΔorf18E)融合lacZ基因的表达载体,通过β-半乳糖苷酶活性的分析,发现PΔorf18E的转录活性高于Porf18E。分别用PΔorf18E和Porf18E指导cry1Ac基因的表达,... 本文分别构建了cry8E基因上游的启动子(Porf18E)和其上游缺失orf1基因的启动子(PΔorf18E)融合lacZ基因的表达载体,通过β-半乳糖苷酶活性的分析,发现PΔorf18E的转录活性高于Porf18E。分别用PΔorf18E和Porf18E指导cry1Ac基因的表达,通过光学显微镜观察,发现两个启动子指导表达的Cry1Ac蛋白均可形成双锥形晶体;通过总蛋白定量分析发现,缺失orf1基因的启动子(PΔorf18E)指导的Cry1Ac蛋白表达量高于Porf18E启动子指导的Cry1Ac蛋白表达量;生物活性测定表明:PΔorf18E指导的Cry1Ac晶体蛋白对小菜蛾Plutella xylostella 具有杀虫活性,高于Porf18E指导的Cry1Ac晶体蛋白对小菜蛾的杀虫活性。本文获得的强活性的启动子PΔorf18E是目前已报道的转录活性最高的cry基因启动子,该启动子为Cry蛋白的表达和遗传工程菌株构建提供了重要元件。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cry基因启动子 转录活性 Cry晶体蛋白 晶体蛋白表达
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月季RhMYB96转录激活及表达特性分析
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作者 丁爱琴 李绍翠 +3 位作者 刘庆超 王奎玲 刘庆华 姜新强 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期411-420,共10页
月季(Rosa hybrida)种质遗传品性受外界环境条件和基因调控的影响,转录调控在其中发挥重要作用。为了研究月季R2R3-MYB (v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog)类转录因子的生物学功能,利用转录组测序获得的序列信息,结合... 月季(Rosa hybrida)种质遗传品性受外界环境条件和基因调控的影响,转录调控在其中发挥重要作用。为了研究月季R2R3-MYB (v-myb avian myeloblastosis viral oncogene homolog)类转录因子的生物学功能,利用转录组测序获得的序列信息,结合c DNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术,从切花月季‘萨蔓莎’中分离得到1个新的MYB类型的转录因子基因,命名为RhMYB96(GenBank No. MF185658)。该基因ORF包含1 065 bp,编码354个氨基酸;蛋白质分子量为39.49 kD,等电点为6.89,分子式为C1693H2655N519O548S14。蛋白序列多重比对发现,RhMYB96在N端具有保守的R2-MYB和R3-MYB结构域,为典型的螺旋-转角-螺旋结构;构建RhMYB96与不同植物R2R3-MYB蛋白C端氨基酸序列的系统发育树,结果表明,Rh MYB96与拟南芥(Arabidopis thaliana) AtMYB96、AtMYB94和AtMYB30聚为一类,属于S1亚组R2R3-MYB类型转录因子。利用qRT-PCR技术分析RhMYB96的表达模式,结果显示,月季RhMYB96在花瓣中的表达量最高;12 h盐胁迫和脱落酸(abscisic acid, ABA)处理可诱导RhMYB96表达,盐胁迫下施加ABA也能诱导RhMYB96表达。构建包含RhMYB96全长等6个不同长度片段的酵母(Yeast)表达载体,利用酵母单杂交技术分析了RhMYB96的转录激活活性,结果显示,RhMYB96是转录激活子,N端没有自激活性,C端具有明显的自激活性。上述结果表明,转录激活子RhMYB96可能通过ABA依赖途径参与盐胁迫应答。本研究为月季RhMYB96转录调控机制研究提供了基础资料,也为月季的分子育种研究提供了理论参考。 展开更多
关键词 切花月季 RhMYB96 表达特性 转录活性
日本结缕草ZjNAC1的克隆、转录激活活性、亚细胞定位及表达分析 预览
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作者 滕珂 姜红岩 +4 位作者 张蕊 檀鹏辉 岳跃森 范希峰 武菊英 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期1-8,共8页
采用RACE技术从日本结缕草中克隆得到ZjNAC1转录因子(GenBank No. MH428376),其开放阅读框为945bp,编码314个氨基酸。ZjNAC1编码的蛋白在N端有1个典型的NAM保守结构域,属于NAC转录因子家族。通过染色体步移的方法,获得ZjNAC1基因ATG上游... 采用RACE技术从日本结缕草中克隆得到ZjNAC1转录因子(GenBank No. MH428376),其开放阅读框为945bp,编码314个氨基酸。ZjNAC1编码的蛋白在N端有1个典型的NAM保守结构域,属于NAC转录因子家族。通过染色体步移的方法,获得ZjNAC1基因ATG上游1635bp序列,分析发现其包含响应脱落酸(ABA)、茉莉酸甲酯(MeJA)及逆境胁迫的作用元件。构建pGBKT7-ZjNAC1载体,转化Y2HGold酵母感受态细胞,发现ZjNAC1具有转录激活活性。农杆菌介导的35S-ZjNAC1-YFP载体注射本生烟草叶片瞬时表达结果显示,ZjNAC1定位于细胞核。实时荧光定量结果表明,ZjNAC1在日本结缕草根中表达量最高;此外,ZjNAC1的表达受10μmol/L MeJA和20%PEG4000处理的诱导,但受200μmol/L乙烯(ET)、10μmol/L ABA和300mmol/L NaCl处理的抑制。 展开更多
关键词 日本结缕草 NAC转录因子 转录激活 亚细胞定位 表达分析
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梭梭HaNAC1基因的亚细胞定位、转录激活及表达分析
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作者 刘璇 巩檑 +4 位作者 陈虞超 甘晓燕 张丽 聂峰杰 宋玉霞 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1163-1168,共6页
HaNAC1为本课题组前期从梭梭幼苗中克隆得到的一个NAC家族(ATAF亚家族)转录因子编码基因,本研究将对该基因进行进一步的活性验证和功能分析。通过烟草叶片细胞中的绿色荧光蛋白瞬时表达系统对表达蛋白进行亚细胞定位,结果表明HaNAC1蛋... HaNAC1为本课题组前期从梭梭幼苗中克隆得到的一个NAC家族(ATAF亚家族)转录因子编码基因,本研究将对该基因进行进一步的活性验证和功能分析。通过烟草叶片细胞中的绿色荧光蛋白瞬时表达系统对表达蛋白进行亚细胞定位,结果表明HaNAC1蛋白位于细胞核中。构建AH109酵母pGBKT7-HaNAC1表达载体,证明该转录因子在酵母中具有转录激活活性。利用实时荧光定量PCR方法测定HaNAC1在盐、旱胁迫条件下的表达水平,结果显示该基因的表达量与盐胁迫的浓度呈现正相关,表明HaNAC1参与调节梭梭的盐胁迫响应。本研究探索了HaNAC1的定位和表达,为梭梭抗逆体系的功能基因挖掘及胁迫应答机理提供科学依据。 展开更多
关键词 梭梭 HaNAC1 转录活性 亚细胞定位 胁迫应答
一个毛竹LTR转座子PHRE9的全长鉴定与转录活性分析
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作者 郑浩 季航 +2 位作者 蒋政勤 徐芷馨 周明兵 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期645-655,共11页
反转录转座子作为毛竹(Phyllostachys edulis)基因组中重要组成部分,可以通过自身转座参与毛竹生长发育的调控,获得具有活性的毛竹转座子,对竹子突变育种有着重要意义。本研究鉴定了1条结构完整的毛竹LTR反转录转座子PHRE9 (Phyllostach... 反转录转座子作为毛竹(Phyllostachys edulis)基因组中重要组成部分,可以通过自身转座参与毛竹生长发育的调控,获得具有活性的毛竹转座子,对竹子突变育种有着重要意义。本研究鉴定了1条结构完整的毛竹LTR反转录转座子PHRE9 (Phyllostachys edulis retrotransposons 9),系统地分析了PHRE9结构特征和进化模式以及在逆境下的表达模式。通过对PHRE9转座子全长PCR扩增以及生物信息学分析,表明PHRE9全长为6 370 bp,属于Ty1-copia大类中的Tork分支。利用qRT-PCR技术检测了在DNA甲基化抑制剂、辐照、高盐、高温、低温等不同处理条件下,PHRE9的3个结构域的基因转录活性水平。结果表明在DNA甲基化抑制剂处理、辐照、高盐、高温(42℃)、低温(4℃)胁迫处理下PHRE9表达水平均有上调的现象,表现出转录激活特性。本研究为毛竹逆境适应机制研究以及竹子突变育种提供了基础资料。 展开更多
关键词 LTR反转录转座子 毛竹 顺式作用元件 胁迫 转录活性
甘蔗ScWRKY4基因的克隆与表达特性分析 预览
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作者 王玲 刘峰 +7 位作者 戴明剑 孙婷婷 苏炜华 王春风 张旭 毛花英 苏亚春 阙友雄 《作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1367-1379,共13页
WRKY是植物中特有的转录因子家族之一,在植物对生物和非生物逆境胁迫的应答反应中起重要调控作用。本研究基于课题组前期构建的甘蔗(Saccharum spp.)转录组数据库,从新台糖22(ROC22)中成功克隆到1个WRKY基因,命名为ScWRKY4(GenBank登录... WRKY是植物中特有的转录因子家族之一,在植物对生物和非生物逆境胁迫的应答反应中起重要调控作用。本研究基于课题组前期构建的甘蔗(Saccharum spp.)转录组数据库,从新台糖22(ROC22)中成功克隆到1个WRKY基因,命名为ScWRKY4(GenBank登录号为MG852087)。序列分析发现,ScWRKY4基因cDNA全长1265 bp,包含1个741 bp的完整开放读码框,编码246个氨基酸,该蛋白具有1个WRKYGQK保守结构域和C2H2锌指结构域,属于IIc类WRKY转录因子。生物信息学预测分析发现,ScWRKY4蛋白为碱性的不稳定亲水性蛋白,不存在信号肽和跨膜结构域,蛋白二级结构元件缺少β螺旋。在本氏烟(Nicotiana benthamiana)叶片瞬时表达中,ScWRKY4蛋白定位于细胞核。酵母杂交实验结果显示,ScWRKY4不具有转录激活活性。实时荧光定量PCR分析表明,ScWRKY4基因在甘蔗的根、叶、芽和皮中的表达量无明显差异,在蔗肉中的表达量最高,为对照蔗根的18.38倍;黑穗病菌侵染0~72 h,ScWRKY4在抗病品种崖城05-179中下调表达,在感病品种ROC22中表达较稳定;受到外源激素脱落酸、水杨酸和茉莉酸甲酯以及非生物胁迫因子氯化钠和聚乙二醇胁迫后,ScWRKY4基因均被诱导上调表达。上述研究结果表明,ScWRKY4基因可能不参与甘蔗对黑穗病的抗性反应或在该防御方面起负调控作用,但积极响应甘蔗对盐和干旱胁迫的应答。 展开更多
关键词 甘蔗 WRKY转录因子 生物信息学 亚细胞定位 转录激活活性 实时荧光定量PCR
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精子顶体相关基因SPACA7的转录活性研究 预览
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作者 张菁华 周永翠 唐爱发 《生殖医学杂志》 CAS 2018年第5期431-436,共6页
目的研究精子顶体相关基因SPACA7转录起始位点上游-2 000bp至下游+84bp范围内启动子活性。方法利用启动子截短实验获得人类SPACA7基因转录起始位点上游-2 000bp与下游+84bp序列的系列不同长度的启动子共16个,以人肾上皮细胞293T基因组... 目的研究精子顶体相关基因SPACA7转录起始位点上游-2 000bp至下游+84bp范围内启动子活性。方法利用启动子截短实验获得人类SPACA7基因转录起始位点上游-2 000bp与下游+84bp序列的系列不同长度的启动子共16个,以人肾上皮细胞293T基因组DNA为模板,进行PCR反应,将不同长度的启动子重组至荧光素酶表达载体pGL3-basic中并转染细胞,转染24h后收集细胞加入裂解液,收集细胞裂解液,利用多功能酶标仪测定荧光素酶活性。结果我们研究了SPACA7启动子-2 000bp至+84bp序列,构建了16个不同长度的promoter::Luciferase,荧光素酶活性检测结果发现各个启动子都具有一定的活性,其中-1 500bp至+84bp序列启动子活性最高。结论初步证明精子顶体相关基因SPACA7启动子在-1 500bp至+84bp区域具有较强转录活性。 展开更多
关键词 启动子 荧光素酶 转录活性 精子顶体
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RelA翻译后修饰对核因子κB活性的调控作用 预览
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作者 孙鸽 夏献民 《临床与病理杂志》 2018年第4期843-852,共10页
转录因子NF-κB是由5种蛋白质分子组成的同源或异源二聚体,在多种生物过程中发挥重要的调节作用,如免疫应答、细胞发育、细胞凋亡、肿瘤发生等。作为NF-κB的一种蛋白质亚基,RelA具有多种翻译后修饰作用,包括磷酸化、乙酰化、甲基... 转录因子NF-κB是由5种蛋白质分子组成的同源或异源二聚体,在多种生物过程中发挥重要的调节作用,如免疫应答、细胞发育、细胞凋亡、肿瘤发生等。作为NF-κB的一种蛋白质亚基,RelA具有多种翻译后修饰作用,包括磷酸化、乙酰化、甲基化和泛素化等,这些翻译后修饰在不同细胞中应答不同的胞外刺激,进而调节NF-κB的活性和功能,其作用形式不同,且同一修饰因环境差异能产生不同的影响;此外,不同修饰间还存在复杂的交互关系,有时相互拮抗,有时相互协同。NF-κB对人类健康具有重要作用,理解这些翻译后修饰不仅可加深对整个NF-κB通路调控的认识,还能帮助临床找到相关疾病的合适治疗靶点及诊断标志。 展开更多
关键词 RELA P65 翻译后修饰 核因子ΚB 转录调控
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猪MITF-M的转录调控分析 预览
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作者 张廷焕 柴捷 +1 位作者 陈磊 龙熙 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期2349-2358,共10页
旨在研究猪MITF-M(microphthalmia associated transcription factor M)转录调控区域活性以及验证重要转录因子。以猪DNA为模板,利用PCR扩增获得MITF-M转录调控区,基因克隆得到5′端缺失重组载体,运用双荧光素酶报告基因试验进行转录... 旨在研究猪MITF-M(microphthalmia associated transcription factor M)转录调控区域活性以及验证重要转录因子。以猪DNA为模板,利用PCR扩增获得MITF-M转录调控区,基因克隆得到5′端缺失重组载体,运用双荧光素酶报告基因试验进行转录活性分析,再通过干扰RNA试验验证重要转录因子。本试验成功克隆得到MITF-M 6 414bp的转录调控区域;构建了9个调控区5′端缺失重组载体;鉴定出MITF-M转录调控区内3个转录活性显著变化区域(P〈0.001),分别是位于-1 140~-1 397和-5 429~-6 036bp的正调控区域、-2 470~-3 753bp的负调控区域;发现了转录因子KLF4显著负向调控MITF-M的转录活性(P〈0.01)。结果提示,转录因子KLF4抑制MITF-M的转录活性,调控黑色素细胞色素的合成与沉积,从而影响猪毛色的表型。本试验为进一步研究猪MITF-M基因的表达机制奠定了基础,对深入研究猪毛色变化的表达调控机理具有重要意义。 展开更多
关键词 MITF-M 转录活性 KLF4
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Ag-NORs与人肝细胞活性的研究
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作者 陈冬梅 林良静 +4 位作者 李志刚 侯秋妹 刘芳 胡琦 杨粤军 《湖南师范大学学报:医学版》 2018年第5期4-6,共3页
目的 :通过正常肝细胞和肝癌细胞增殖活性的核仁组成区嗜银蛋白(Ag-NORs)测定,定性分析正常肝细胞和肝癌细胞细胞核的大小并统计Ag-NOR的数目。方法 :同一个实验室分别培养正常肝细胞和肝癌细胞,用胰酶分别洗脱贴壁生长的细胞,用核仁银... 目的 :通过正常肝细胞和肝癌细胞增殖活性的核仁组成区嗜银蛋白(Ag-NORs)测定,定性分析正常肝细胞和肝癌细胞细胞核的大小并统计Ag-NOR的数目。方法 :同一个实验室分别培养正常肝细胞和肝癌细胞,用胰酶分别洗脱贴壁生长的细胞,用核仁银染法制片,显微镜下观察并比较肝细胞与肝癌细胞Ag-NOR数目,肝细胞1~3个,肝癌细胞4~8个,且肝癌细胞较正常肝细胞大、形态不规则。结果 :正常肝细胞和肝癌细胞活性相差较大,正察常肝癌细胞的活性与核仁组成区相关嗜银蛋白(Ag-NORs)的关系较密切。结论 :本实验说明AgNOR颗粒数目对肝癌细胞活性具有较高估测价值。 展开更多
关键词 正常肝细胞 肝癌细胞 核仁银染 转录活性
Molecular characterization of chalcone isomerase (CHI) regulating flower color in herbaceous peony (Paeonia lactiflora Pall.) 预览
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作者 WU Yan-qing ZHU Meng-yuan +2 位作者 JIANG Yu ZHAO Da-qiu TAO Jun 《农业科学学报:英文版》 SCIE CAS CSCD 2018年第1期122-129,共8页
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催乳激素对山羊脂肪酸合酶基因转录活性的影响 预览 被引量:1
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作者 李君 权凯 +4 位作者 张桂枝 赵金艳 邓红雨 赫秋亚 史怀平 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第8期2255-2262,共8页
为探讨催乳激素对体外培养的山羊乳腺上皮细胞脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)基因转录活性的调控作用,试验分别用不同浓度的胰岛素(insulin,INS)、雌激素(estradiol,E_2)、催乳素(prolactin,PRL)及不同激素组合(INS+PR... 为探讨催乳激素对体外培养的山羊乳腺上皮细胞脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FASN)基因转录活性的调控作用,试验分别用不同浓度的胰岛素(insulin,INS)、雌激素(estradiol,E_2)、催乳素(prolactin,PRL)及不同激素组合(INS+PRL、E_2+INS+PRL)处理山羊乳腺上皮细胞24h,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测催乳激素对FASN基因mRNA表达水平的影响。细胞转染山羊FASN基因启动子报告基因载体,同样用不同浓度的胰岛素、雌激素、催乳素及激素组合处理24h,利用双荧光素酶报告基因系统检测催乳激素对FASN基因启动子活性的影响。结果发现,用雌激素、催乳素处理山羊乳腺上皮细胞后,FASN基因启动子活性及mRNA水平极显著或显著上调(P〈0.01;P〈0.05),雌激素浓度为10、100μmol/L和催乳素浓度为0.1和1μg/mL时效果最为明显,而胰岛素对FASN基因的启动子活性及mRNA水平没有显著影响(P〉0.05)。用不同激素组合(INS+PRL、E_2+INS+PRL)处理细胞均能显著上调FASN基因启动子活性及mRNA表达水平(P〈0.05)。结果表明,雌激素和催乳素能够调控FASN基因的转录活性,为进一步研究泌乳过程中FASN基因的分子调控机制提供理论依据。 展开更多
关键词 山羊 脂肪酸合酶(FASN) 催乳激素 转录活性
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转录因子PAX4调控湖羊FSHR基因转录活性 预览
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作者 王德迪 李隐侠 +5 位作者 姚一龙 潘增祥 决肯 依明 曹少先 李齐发 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期919-926,共8页
本研究旨在了解湖羊FSHR基因5′-UTR序列特征和转录因子调控,为揭示湖羊FSHR基因转录调控机制提供依据。采集3只成年湖羊母羊的心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、大肠、小肠、子宫和卵巢11种组织,采用PCR扩增和克隆测序技术获得湖羊FSHR基... 本研究旨在了解湖羊FSHR基因5′-UTR序列特征和转录因子调控,为揭示湖羊FSHR基因转录调控机制提供依据。采集3只成年湖羊母羊的心、肝、脾、肺、肾、胃、肌肉、大肠、小肠、子宫和卵巢11种组织,采用PCR扩增和克隆测序技术获得湖羊FSHR基因5′-UTR序列,生物信息学方法分析其序列特征,RT-PCR技术分析转录因子PAX4在湖羊11种组织中的表达情况;合成湖羊PAX4基因过表达载体pcDNA3.1-PAX4,并将其转染到猪卵巢颗粒细胞(GCs),用流式细胞仪测定了GCs的细胞凋亡率。双荧光素酶报告基因系统检测PAX4对湖羊FSHR基因转录活性的影响。结果表明,湖羊FSHR基因5'-UTR全长为161bp,含有典型的E-box、CAAT-box和GC-box等转录调控元件以及GATA-2、Sp1和PAX4等转录因子结合位点。转录因子PAX4在湖羊各组织中均有表达,其中在卵巢组织中等表达。湖羊PAX4过表达载体可在卵巢颗粒细胞高效表达(P〈0.01)。过表达湖羊PAX4基因后,卵巢颗粒细胞凋亡率显著上升(P〈0.05),卵巢颗粒细胞和COS-7细胞中FSHR基因5'-UTR双荧光素酶报告载体的荧光素酶活性显著(P〈0.05)或极显著(P〈0.01)下调。综上表明,转录因子PAX4抑制湖羊FSHR基因转录活性,从而促进卵巢颗粒细胞凋亡。 展开更多
关键词 湖羊 FSHR PAX4 5'-UTR 转录活性
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拟南芥WRKY61转录因子的转录活性与互作蛋白分析 预览 被引量:1
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作者 范晓江 郭小华 +2 位作者 牛芳芳 杨博 江元清 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2018年第1期1-8,共8页
该研究采用双荧光素酶报告系统、酵母双杂交和双分子荧光互补实验,对拟南芥AtWRKY61的转录活性及与AtWRKY61转录因子的互作蛋白进行了分析,并用qRT-PCR方法分析AtWRKY61对多种非生物逆境的响应特征,为进一步揭示AtWRKY61的功能与分子调... 该研究采用双荧光素酶报告系统、酵母双杂交和双分子荧光互补实验,对拟南芥AtWRKY61的转录活性及与AtWRKY61转录因子的互作蛋白进行了分析,并用qRT-PCR方法分析AtWRKY61对多种非生物逆境的响应特征,为进一步揭示AtWRKY61的功能与分子调控机制奠定基础。绿色荧光蛋白介导的亚细胞定位分析显示,AtWRKY61定位于细胞核内;基于原生质体的双荧光素酶报告系统和酵母实验发现,AtWRKY61具有转录抑制活性。qRT-PCR分析表明,AtWRKY61对多种非生物逆境的处理具有明显的响应,可能是在多条信号通路中发挥作用。酵母双杂交与双分子荧光互补分析表明,AtWRKY61与自身以及同组的AtWRKY9和AtWRKY72存在互作关系,暗示可能通过形成WRKY复合物来行使特定的转录抑制功能。 展开更多
关键词 拟南芥 AtWRKY61 转录活性 互作蛋白
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猪EIF2S3基因启动子的克隆、活性及转录调控元件分析 预览
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作者 龙熙 柴捷 +3 位作者 赵久刚 蓝静 郭宗义 张廷焕 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第A01期38-44,共7页
旨在初步分析猪EIF2S3基因的启动子活性以及转录调控元件。利用生物信息学分析、PCR扩增、基因克隆、细胞转染、双荧光素酶活性分析等方法,获得了EIF2S3基因启动子区域的序列特征,构建了不同片段长度的EIF2S3基因启动子区的双荧光素酶... 旨在初步分析猪EIF2S3基因的启动子活性以及转录调控元件。利用生物信息学分析、PCR扩增、基因克隆、细胞转染、双荧光素酶活性分析等方法,获得了EIF2S3基因启动子区域的序列特征,构建了不同片段长度的EIF2S3基因启动子区的双荧光素酶报告基因载体并分析了其荧光素酶活性,进而确定了EIF2S3基因的核心启动子区域以及关键的调控区域,最后还预测了关键调控区域的转录因子及其结合位点。结果表明,EIF2S3基因候选启动子区包含3个核心启动子以及2个CpG岛;-706~+200bp为EIF2S3基因的核心启动子区域,-706~-253bp为EIF2S3基因启动子的关键调控区域,且发挥正向调节作用,而-1563~-706bp不存在任何对EIF2S3基因启动子活性有影响的调控元件;EIF2S3基因启动子的关键调控区域包含440个转录因子结合位点,且多个转录因子在此区域均有多个结合位点,如SP1、KLF4、MyoD1、MyoG、NFKB1。为进一步研究猪EIF2S3基因的表达机制奠定了基础。 展开更多
关键词 EIF2S3 启动子 转录活性 转录因子
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碱茅(Puccinellia tenuiflora)MYBAS1-like基因的克隆与功能分析
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作者 何玉龙 张欣欣 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2018年第7期2964-2974,共11页
为了研究碱茅(Puccinellia tenuiflora)转录因子Put MYBAS1-like的功能及其在非生物胁迫下的表达特性。本研究利用差异显示法,从Na HCO3逆境胁迫下的碱茅(Puccinellia tenuiflora)c DNA文库中克隆得到MYB基因片段。利用实时荧光定量... 为了研究碱茅(Puccinellia tenuiflora)转录因子Put MYBAS1-like的功能及其在非生物胁迫下的表达特性。本研究利用差异显示法,从Na HCO3逆境胁迫下的碱茅(Puccinellia tenuiflora)c DNA文库中克隆得到MYB基因片段。利用实时荧光定量PCR、RACE技术克隆得到Put MYBAS1-like的全长序列。生物信息学表明:该基因序列中存在522 bp的开放阅读框,编码173个氨基酸,预测蛋白分子量为19.68 k D,其N端含有一个约45个氨基酸组成的MYB特征结构域。因与二穗短柄草(Brachypodium distachyon)MYBAS1-like基因同源性较高,命名为Put MYBAS1-like(Alternative splicing MYB transcription factor)。本研究还采用了实时荧光定量PCR的方法分析Put MYBAS1-like基因在几种非生物胁迫下表达的情况,通过酵母单杂交实验验证其转录活性以及分析其转录激活区,同时构建Put MYBAS1-like基因的植物过表达载体,为后续分析Put MYBAS1-like基因功能特性研究提供理论依据。 展开更多
关键词 碱茅 PutMYBAS1-like 非生物胁迫 基因表达 转录活性
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