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从光合作用和有机酸积累角度探索转GsPPCK1和GsPPCK3基因苜蓿耐碱性增强的生理机制 预览
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作者 才华 许慧慧 +3 位作者 孙娜 宋婷婷 任永晶 杨圣秋 《草业学报》 CSCD 北大核心 2018年第8期107-117,共11页
光合作用影响着植物的生长发育及产量,并在盐碱胁迫响应中起到积极作用。前期研究将光合途径中野生大豆来源的GsPPCK1和GsPPCK3基因转入苜蓿,所获得转基因苜蓿耐碱性提高。从光合作用和有机酸积累角度探索转GsPPCK1和GsPPCK3基因苜蓿耐... 光合作用影响着植物的生长发育及产量,并在盐碱胁迫响应中起到积极作用。前期研究将光合途径中野生大豆来源的GsPPCK1和GsPPCK3基因转入苜蓿,所获得转基因苜蓿耐碱性提高。从光合作用和有机酸积累角度探索转GsPPCK1和GsPPCK3基因苜蓿耐碱性增强的生理机制。结果表明,碱胁迫9d后,叶绿素的相对含量下降,转基因株系P1-5、P3-8与未处理相比变化并不显著,分别下降了11.27%、13.30%,而非转基因株系的叶绿素含量下降了39.11%。转基因株系P1-5、P3-8光合速率(Pn)、蒸腾速率(Tr)、气孔导度(Gs)及胞间CO2浓度(Ci)在胁迫处理后也有下降趋势,但下降的幅度仅为非转基因植株下降幅度的1/2。光合途径中NADP-苹果酸脱氢酶、NADP-苹果酸酶、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶、丙酮酸正磷酸二激酶、核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶等关键酶的酶活及有机酸(苹果酸、柠檬酸、草酰乙酸、磷酸烯醇式丙酮酸)含量在碱胁迫处理后均呈上升趋势,而转基因株系P1-5、P3-8的光合酶活和4种有机酸含量与非转基因对照相比上升极显著(P〈0.01)。PEPC(Medtr4g079860.1)、NADP-ME(Medtr8g014390.1)、NADP-MDH(Medtr1g043040.1)、PPDK(Medtr4g118350.1)及Rubisco(Medtr4g021210.1)基因的表达呈先上升后下降趋势,转基因株系中基因的表达变化较非转基因对照更为显著(P〈0.01)。由此表明,在正常情况下,GsPPCK1和GsPPCK3基因的超量表达并未影响植物的光合作用,但是在碱胁迫下,转基因苜蓿的光合作用受碱胁迫的抑制较小,这一过程可能与PEPC酶的激活有关。另外,光合中间产物有机酸含量的显著上升对维持细胞内pH值的稳定也起到重要作用。 展开更多
关键词 GsPPCKs 耐碱性 转基因苜蓿 光合效率 有机酸
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转AmDHN基因紫花苜蓿耐旱性的研究 预览 被引量:1
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作者 聂利珍 刘红葵 房永雨 《北方农业学报》 2017年第1期6-9,共4页
为鉴定转基因紫花苜蓿的耐旱能力,该研究以转沙冬青脱水素基因的紫花苜蓿T0植株为研究对象,通过干旱胁迫,从转基因植株的表型和生理层面检测转基因植株的抗旱特性。试验结果表明,与对照相比,干旱胁迫后转基因苜蓿和对照的茎、叶片全部干... 为鉴定转基因紫花苜蓿的耐旱能力,该研究以转沙冬青脱水素基因的紫花苜蓿T0植株为研究对象,通过干旱胁迫,从转基因植株的表型和生理层面检测转基因植株的抗旱特性。试验结果表明,与对照相比,干旱胁迫后转基因苜蓿和对照的茎、叶片全部干枯,复水后转基因苜蓿80%恢复生长,而对照则几乎全部死亡。干旱胁迫后转基因苜蓿叶片的脯氨酸(Pro)和丙二醛(MDA)含量均随处理时间推移而逐渐增加,转基因苜蓿叶片的Pro含量始终高于同期对照植株,而其MDA含量始终低于同期对照植株,且二者均达到了显著差异。结果表明,在干旱胁迫条件下,由于Am DHN基因在紫花苜蓿中的过量表达,引起植株体内脯氨酸的大量积累,可能进一步诱导脯氨酸合成相关基因的表达,最终引起转基因植株抗旱性的提高。因此,推测转Am DHN基因苜蓿的耐旱性比对照强。 展开更多
关键词 转基因紫花苜蓿 沙冬青脱水素基因 耐旱性
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沙冬青脱水素基因提高转基因紫花苜蓿的耐旱性
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作者 聂利珍 刘红葵 +2 位作者 李晓东 孙杰 房永雨 《基因组学与应用生物学》 CSCD 北大核心 2017年第7期2947-2953,共7页
为鉴定转基因紫花苜蓿的耐旱能力,本研究以转基因紫花苜蓿T0代植株为材料,通过干旱胁迫,从转基因植株的表型、生理指标和分子水平等层面检测转基因植株的抗旱特性,试验表明,干旱胁迫后转基因苜蓿和对照的茎、叶片全部干枯,而复水后转基... 为鉴定转基因紫花苜蓿的耐旱能力,本研究以转基因紫花苜蓿T0代植株为材料,通过干旱胁迫,从转基因植株的表型、生理指标和分子水平等层面检测转基因植株的抗旱特性,试验表明,干旱胁迫后转基因苜蓿和对照的茎、叶片全部干枯,而复水后转基因苜蓿大部分恢复生长,对照几乎全部死亡。干旱胁迫后苜蓿叶片的Pro和MDA含量均随处理时间延长而逐渐增加,转基因植株叶片的Pro含量高于对照,而其MDA含量低于对照植株,且二者均达到了显著差异;转基因苜蓿的离体叶片失水率也明显低于对照。在20%PEG胁迫下,植株体内ProDH和P5CS基因的相对表达量都是先升后降,转基因植株和对照中ProDH和P5CS基因的表达量显著增加,且二者在转基因植株与对照间存在显著差异。这表明,在干旱胁迫条件下,由于AmDHN基因在紫花苜蓿中的过量表达,可能引起植株体内脯氨酸的大量积累,并进一步诱导脯氨酸合成相关基因的表达,最终引起植株抗旱性的提高,因此,推测转基因苜蓿的耐旱性比对照强。 展开更多
关键词 转基因紫花苜蓿 沙冬青脱水素基因 耐旱性
利用AH1基因的遗传转化改良紫花苜蓿耐盐性 被引量:3
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作者 金太成 孟大伟 +1 位作者 王悦 杨丽萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1724-1729,共6页
由于盐胁迫严重限制了苜蓿的产量,研究构建了沙打旺(Astragalus adsurgens Pall)解螺旋酶基因AH1的植物表达载体p Cambia-AH1,并利用农杆菌介导法将目的基因转化到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中,旨在获得抗盐胁迫能力强的转基因植株... 由于盐胁迫严重限制了苜蓿的产量,研究构建了沙打旺(Astragalus adsurgens Pall)解螺旋酶基因AH1的植物表达载体p Cambia-AH1,并利用农杆菌介导法将目的基因转化到紫花苜蓿(Medicago sativa L.)中,旨在获得抗盐胁迫能力强的转基因植株。半定量RT-PCR检测和Northern杂交表明AH1基因在5个转基因株系中稳定表达。在盐胁迫条件下,与野生型对照植株相比,AH1转基因株系对中度盐胁迫(200 mmol/L Na Cl)具有较强的耐受性。而且,在中度盐胁迫条件下(200 mmol/L Na Cl),转基因植株累积了大量的游离脯氨酸和可溶糖。研究表明AH1基因可以改善植物盐渗透调节能力,从而导致了AH1转基因植株的抗盐胁迫能力的提高。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 AH1 转基因苜蓿 耐盐性
GsPPCK1和GsPPCK3基因转化苜蓿及其耐碱性分析 预览 被引量:2
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作者 王家佳 张利莉 +4 位作者 钱雪 陈明明 才华 赵超越 朱延明 《塔里木大学学报》 2014年第2期20-31,共12页
基于课题组构建的野大豆碱胁迫基因转录谱和调控网络,筛选出两个碱胁迫应答关键基因:丝苏氨酸磷酸激酶(GsPPCK1和GsPPCK3)。本研究构建了以35S为启动子,bar基因为筛选标记基因的植物超表达载体,以紫花苜蓿龙牧806子叶节为外植体,通... 基于课题组构建的野大豆碱胁迫基因转录谱和调控网络,筛选出两个碱胁迫应答关键基因:丝苏氨酸磷酸激酶(GsPPCK1和GsPPCK3)。本研究构建了以35S为启动子,bar基因为筛选标记基因的植物超表达载体,以紫花苜蓿龙牧806子叶节为外植体,通过农杆菌介导法进行了GsPPCK1和GsPPCK3的苜蓿遗传转化;通过固沙草筛选GsPPCK1获得抗性植株45株,GsPPCK3获得53株;对抗性植株进行PCR和Real-time PCR检测,最终确定基因超量表达各2个株系。为进一步研究该基因的耐碱性,用NaHCO3分别为0 mmol/L、100 mmol/L、200 mmol/L、250 mmol/L的4个浓度处理转基因苜蓿,9 d后不同NaHCO3胁迫下对转基因株系进行耐碱性相关的生理指标分析,包括质膜透性、叶绿素含量、丙二醛含量、脯氨酸含量、柠檬酸含量、SOD活性及PEPC活性,结果表明:GsPPCK1和GsPPCK3在苜蓿中的超量表达显著提高了苜蓿的耐碱性。 展开更多
关键词 苜蓿 GsPPCK基因 农杆菌介导 转基因株系 耐碱性
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转GsGST13/SCMRP基因双价苜蓿的耐盐性分析 预览 被引量:5
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作者 吴婧 才华 +5 位作者 柏锡 纪巍 魏正巍 唐立郦 赵阳 朱延明 《草业学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期257-265,共9页
本研究是将从野大豆盐碱胁迫基因表达谱中筛选得到的GsGST13基因和采用生物信息学方法改造的高甲硫氨酸蛋白基因SCMRP构建成双价植物表达载体,通过农杆菌介导法转化农菁1号苜蓿,获得超量表达的转基因苜蓿,并对其中2个转基因苜蓿株系进... 本研究是将从野大豆盐碱胁迫基因表达谱中筛选得到的GsGST13基因和采用生物信息学方法改造的高甲硫氨酸蛋白基因SCMRP构建成双价植物表达载体,通过农杆菌介导法转化农菁1号苜蓿,获得超量表达的转基因苜蓿,并对其中2个转基因苜蓿株系进行耐盐性分析及氨基酸组分分析.结果显示,转基因苜蓿具有较强的耐盐性,表现为随着盐浓度的升高,野生型苜蓿盐害不断加重,生长发育受抑制,叶片逐渐变黄、卷曲、萎蔫,而转基因苜蓿只受到轻微影响,仍能正常生长.转基因株系的丙二醛含量和过氧化氢含量显著低于非转基因株系(P<0.05),而株高,鲜重,GST活性和SOD活性显著高于非转基因对照(P<0.05,P<0.01);同时株系G16和G50的含硫氨基酸含量分别比野生型植株提高了0.57%和0.52%.说明超量表达GsGS T13/SCMRP基因增强了苜蓿的耐盐性,并提高了含硫氨基酸含量. 展开更多
关键词 转基因苜蓿 GsGST13基因 SCMRP基因 耐盐
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耐碱转GsGSTs基因苜蓿的农艺性状调查 预览 被引量:3
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作者 吴婧 朱延明 +3 位作者 王臻昱 柏锡 纪巍 才华 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第5期1105-1108,共4页
为研究前期获得的耐碱转GsGSTs基因苜蓿与其对照在农艺性状上是否存在差异,进行了产量性状和形态性状的调查与统计分析。产量性状包括鲜草产量、干物质产量及茎分枝数;形态性状包括株高增长速度、节数及节间长度,同时进行了碱胁迫下表... 为研究前期获得的耐碱转GsGSTs基因苜蓿与其对照在农艺性状上是否存在差异,进行了产量性状和形态性状的调查与统计分析。产量性状包括鲜草产量、干物质产量及茎分枝数;形态性状包括株高增长速度、节数及节间长度,同时进行了碱胁迫下表型分析。结果表明,转GsGSTs基因苜蓿植株在产量性状及形态性状方面与对照相比无显著差异。在碱胁迫下,非转基因苜蓿对照株系明显萎蔫、失绿,而转GsGSTs基因苜蓿株系均能保持较正常的生长状态。此结果说明外源基因GsGSTs在苜蓿中的表达没有改变其本身优良的农艺性状,同时其目标性状(耐碱性)有所提高,符合转基因植物安全评价中"实质等同"原则。 展开更多
关键词 转基因苜蓿 GsGSTs基因 耐碱 农艺性状
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转GsPPCK1基因苜蓿植株的获得及其耐碱性分析 预览 被引量:9
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作者 魏正巍 朱延明 +5 位作者 化烨 才华 纪巍 柏锡 王臻昱 文益东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期68-75,共8页
磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶(phosphoen01pyruvatecarboxylasekinase,PPCK)是一种钙不依赖的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)类蛋向激酶,参与碳氮代谢等多个生物学过程,然而其在碱胁迫反应中的作用尚未见报道。本研究在前期野生大豆碱... 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶激酶(phosphoen01pyruvatecarboxylasekinase,PPCK)是一种钙不依赖的丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)类蛋向激酶,参与碳氮代谢等多个生物学过程,然而其在碱胁迫反应中的作用尚未见报道。本研究在前期野生大豆碱胁迫基因表达谱数据基础上,采用同源克隆的方法分离野生大豆(Glycinesoja)PPCKl基因,该基因编码的氨基酸序列与大小(Glycinemax)PPCKl蛋白(AAQ83695.1)具有99%的相似性,被命名为GsPPCKl。在50mmolL~NaHCO,胁迫处理3h内,根和叶中GsPPCKl基因上调表达,属碱胁迫早期应答基因。通过农杆菌介导法对肇东苜蓿进行遗传转化,并对RT-PCR阳性的超表达转基因株系进行耐碱性分析,在100mmolL~NaHC03处理15d后转基因株系生长状态良好,而非转基因对照株系明显萎蔫、失绿、甚至死亡;转基因株系的丙二醛含量和相对质膜透性显著低于非转基因株系(P〈0.05),而叶绿素含量和根系活力显著高于非转基因对照(P〈0.05),说明超量表达GsPPCKl基因增强了苜蓿的耐碱能力。以上结果表明,GsPPCKl参于植物耐碱胁迫反应过程,在碱胁迫基因工程研究领域具有良好的理论和实际应用意义。 展开更多
关键词 苜蓿 GsPPCK1 转基因株系 耐碱性分析
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野生大豆GsGST19基因的克隆及其转基因苜蓿的耐盐碱性分析 预览 被引量:20
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作者 王臻昱 才华 +4 位作者 柏锡 纪巍 李勇 魏正巍 朱延明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期 971-979,共9页
谷胱甘肽S-转移酶对植物抵御逆境胁迫和解除细胞毒素起着重要作用。本研究从野大豆盐碱胁迫基因表达谱中筛选并克隆得到GsGSTl9基因,将其转化苜蓿,获得超量表达的转基因苜蓿,并对转基因苜蓿进行耐盐碱性分析。结果显示在正常培养条... 谷胱甘肽S-转移酶对植物抵御逆境胁迫和解除细胞毒素起着重要作用。本研究从野大豆盐碱胁迫基因表达谱中筛选并克隆得到GsGSTl9基因,将其转化苜蓿,获得超量表达的转基因苜蓿,并对转基因苜蓿进行耐盐碱性分析。结果显示在正常培养条件下,转基因苜蓿株系19-4和19-9的GST酶活性分别是非转基因株系的1.52倍和1.49倍。在100mmolLNaHC03处理14d后转基因株系生长状态良好,而非转基因对照株系明显萎蔫、失绿、甚至死亡;转基因株系的丙二醛含量和相对质膜透性显著低于非转基因株系(P〈0.05),而叶绿素含量和根系活力显著高于非转基因对照(P〈0.05),说明超量表达GsGSTl9基因增强了苜蓿的耐盐碱能力。 展开更多
关键词 谷胱甘肽S-转移酶(GST) 转基因苜蓿 野大豆 耐盐碱性
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转BADH基因苜蓿T-DNA侧翼序列分析及转化事件特异性分析 预览 被引量:2
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作者 张艳敏 张红梅 +4 位作者 相金英 郭秀林 刘子会 李国良 陈受宜 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期 397-404,共8页
为了从分子水平上鉴别不同的转基因株系,以转BADH基因苜蓿的T0代基因组DNA为模板,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法分离其外源基因插入位点的侧翼序列,获得了B127株系的左翼序列和右翼序列,以及B125、B138、B295和B196株系的左翼序... 为了从分子水平上鉴别不同的转基因株系,以转BADH基因苜蓿的T0代基因组DNA为模板,采用热不对称交错PCR(TAIL-PCR)方法分离其外源基因插入位点的侧翼序列,获得了B127株系的左翼序列和右翼序列,以及B125、B138、B295和B196株系的左翼序列。侧翼序列特征分析表明,有的T-DNA边界序列被删除,有的边界序列被保留,并填充了一段未知来源的核苷酸序列。根据侧翼序列中插入载体序列和紧邻插入序列的基因组序列特征,分别设计PCR扩增的上、下游引物,并对获得的42个转BADH株系分别进行左、右翼序列的扩增,结果表明,转基因植株B106、B125、B138、B157、B158、B289、B295、B305和B127具有相同的扩增条带,B203、B220、B223和B196具有相同的扩增条带,说明这些株系可能仅来源于2个转化事件。本研究建立的事件特异性检测方法可以准确地将不同的转化株系区别开来。 展开更多
关键词 转基因苜蓿 BADH T-DNA 侧翼序列 事件特异性检测
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Development of Alfalfa (Medicago sativa L.) Regeneration System and Agrobacterium-Mediated Genetic Transformation 预览
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作者 ZHANG He HUANG Qi-man SU Jin 《中国农业科学:英文版》 CAS CSCD 2010年第2期 170-178,共9页
The regeneration ability of four alfalfa (Medicago sativa L.) cultivars, Xinjiang Daye, Longdong, Gannong 1 and Gannong 3, was studied, and the effects of various cultivars, explant sources and medium recipes on regen... The regeneration ability of four alfalfa (Medicago sativa L.) cultivars, Xinjiang Daye, Longdong, Gannong 1 and Gannong 3, was studied, and the effects of various cultivars, explant sources and medium recipes on regeneration were compared. The better callus forming frequency obtained from hypocotyls of Xinjiang Daye is 88.5% and regeneration frequency is 9.8% in our initial experiments. To further optimize regeneration system for genetic transformation, we therefore changed concentrations of plant growth regulators and supplemented with glutamine into callus-induction and shoot-regeneration media. Callus forming frequency and shoot differentiation frequency were increased to 100%. The time taken to generate transgenic plants (16 weeks) was shorter than that for previouse procedure (25 weeks) and regeneration frequency was promoted to 15.1%. The results show that addition of glutamine is particularly important for shortening period of regeneration and promoting regeneration frequency. For study of genetic transformation of alfalfa, Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of Xinjiang Daye was developed based on this optimized regeneration system. The plant expression vector carrying two glutamine synthetases (GS1 and GS2) and Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase (P5CS) gene was used for alfalfa in vitro transformation. Six transgenic alfalfa plantlets with resistance to PPT were obtained. The introduction of foreign genes into plants was assessed in the transformants by PCR analysis and Southern hybridizations. 展开更多
关键词 农杆菌介导转化 紫花苜蓿 再生体系 遗传转化 谷氨酰胺合成酶 愈伤组织形成 转基因植株 植物生长调节剂
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BADH/pepB双价基因无选择标记表达载体转化苜蓿的初步研究 预览 被引量:13
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作者 杨金慧 王丕武 +2 位作者 曲静 王巍 王俊玲 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期 20-23,共4页
选用公农1号紫花苜蓿,以5~7d苗龄的无菌子叶为外植体,通过农杆菌介导法将含有甜菜碱醛脱氢酶(BADH)和酸性蛋白酶(pepB)双价基因的无选择标记表达载体导入苜蓿子叶中,并用含有Na2CO3和NaHCO3碱性盐溶液的培养基进行筛选,得到抗... 选用公农1号紫花苜蓿,以5~7d苗龄的无菌子叶为外植体,通过农杆菌介导法将含有甜菜碱醛脱氢酶(BADH)和酸性蛋白酶(pepB)双价基因的无选择标记表达载体导入苜蓿子叶中,并用含有Na2CO3和NaHCO3碱性盐溶液的培养基进行筛选,得到抗盐碱转化植株。碱性盐浓度48mmol/L宜于子叶愈伤诱导,有利于转化植株的获得。对转化植株进行PCR检测,初步证明目的基因序列已经整合到苜蓿基因组中。移栽成活的13棵碱性盐抗性植株经PCR检测有3棵植株呈阳性。 展开更多
关键词 无选择标记表达载体 BADH pepB 转化 苜蓿
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盐胁迫下转基因紫花苜蓿同工酶活性和可溶性糖含量的变化 预览 被引量:9
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作者 王玉祥 王涛 张博 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第3期 22-25,共4页
试验以NaCl为胁迫因子,设置0,0.3%,0.5%,0.7%共4个盐浓度梯度,研究不同盐胁迫对转基因苜蓿和保定苜蓿体内SOD,POD,CAT活性和可溶性糖含量的变化。试验表明,转基因苜蓿和保定苜蓿的酶活性以及可溶性糖含量受盐胁迫影响比... 试验以NaCl为胁迫因子,设置0,0.3%,0.5%,0.7%共4个盐浓度梯度,研究不同盐胁迫对转基因苜蓿和保定苜蓿体内SOD,POD,CAT活性和可溶性糖含量的变化。试验表明,转基因苜蓿和保定苜蓿的酶活性以及可溶性糖含量受盐胁迫影响比较大,转基因苜蓿的酶活性和可溶性糖含量随着盐浓度的增加而增加,尤其是可溶性糖变化比较明显;在NaCl盐浓度为0.3%时,保定苜蓿的SOD,CAT活性和可溶性糖含量达到最低,POD活性最高。 展开更多
关键词 盐胁迫 转基因 苜蓿 酶活性 可溶性糖
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转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿的培育及鉴定 被引量:12
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作者 周辉 李文桂 +1 位作者 叶艳菊 周必英 《热带医学杂志》 CAS 2009年第4期354-357,365共5页
目的培育并鉴定转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究转基因苜蓿疫苗提供依据。方法将构建好的pBI—Eg95-EgA31质粒电穿孔转化根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA440d株,利用重组根瘤农杆菌(rAt)侵染苜... 目的培育并鉴定转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究转基因苜蓿疫苗提供依据。方法将构建好的pBI—Eg95-EgA31质粒电穿孔转化根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,At)LBA440d株,利用重组根瘤农杆菌(rAt)侵染苜蓿(alfalfa)叶片,卡那霉素抗性筛选伤愈组织体胚,培育转基因苜蓿.用SDS-PAGE、Western—blot、PCR和RT—PCR鉴定转基因苜蓿。结果SDS—PAGE和Western-blot证实Eg95-EgA31融合基因在苜蓿中得到表达,表达产物分子质量约为37500Mr,表达效率约占苜蓿叶总蛋白的0.05%,且能被感染细粒棘球蚴的鼠血清特异识别。PCR和RT—PCR均扩增出1016bp Eg95-EgA31融合基因片段。结论成功培育了转细粒棘球绦虫Eg95-EgA31融合基因苜蓿,为进一步研究细粒棘球绦虫转基因苜蓿疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 转基因苜蓿 培育 鉴定
碱性成纤维细胞生长因子在苜蓿中的表达 预览 被引量:2
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作者 韩秀文 张美萍 +3 位作者 蒋世翠 王艳芳 李校堃 王义 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期 455-459,共5页
为了降低bFGF(basic fibroblast growth factor)的生产成本,结合植物生物反应器的优点,就bFGF在转基因苜蓿中的表达进行了探索。将bFGF插入植物表达载体pBⅡ21中,获得了含有bFGF基因的植物表达pBIcbFGF,再将pBIcbFGF利用冻融法转... 为了降低bFGF(basic fibroblast growth factor)的生产成本,结合植物生物反应器的优点,就bFGF在转基因苜蓿中的表达进行了探索。将bFGF插入植物表达载体pBⅡ21中,获得了含有bFGF基因的植物表达pBIcbFGF,再将pBIcbFGF利用冻融法转到农杆菌中。利用农杆菌介导法将基因转化保定苜蓿,转基因苜蓿在TM-1培养基+20mg/L卡那霉素(Kan)+200mg/L特美汀(Tim)中诱导分化,在生根培养基中生根,获得再生植株。再生植株通过PCR检测、RT—PCR及Western blot证实外源基因已经在苜蓿中成功表达。获得含有目的蛋白的阳性植株。为苜蓿作为植物生物反应器生产bFGF奠定了理论及技术基础。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 转基因苜蓿 基因表达
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卡那霉素叶片涂抹法田间筛选转基因苜蓿的研究 预览 被引量:9
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作者 燕丽萍 夏阳 +4 位作者 梁慧敏 王友平 刘翠兰 王振猛 李丽 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2009年第14期 22-26,共5页
以田间生长的苜蓿为材料进行卡那霉素(Kan)涂抹叶片筛选转基因植株最佳浓度和适宜观察时间的研究,并对筛选的抗性植株进行了PCR检测验证。结果表明,Kan叶片涂抹田间筛选的最佳浓度为1000mg/L,观察时间以12天为宜;经PCR检测验证,Kan筛... 以田间生长的苜蓿为材料进行卡那霉素(Kan)涂抹叶片筛选转基因植株最佳浓度和适宜观察时间的研究,并对筛选的抗性植株进行了PCR检测验证。结果表明,Kan叶片涂抹田间筛选的最佳浓度为1000mg/L,观察时间以12天为宜;经PCR检测验证,Kan筛选抗性苗的阳性检测率达到93.8%。研究建立了一种在田间对转基因苜蓿进行大量筛选的简便方法,对于转基因苜蓿材料的选育具有重要利用价值。 展开更多
关键词 转基因苜蓿 Kan 涂抹 PCR检测
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双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究 预览 被引量:11
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作者 熊恒硕 康俊梅 +2 位作者 杨青川 孙彦 唐克轩 《中国草地学报》 CSCD 2008年第1期 21-26,共6页
以中苜1号无菌苗子叶为外植体,采用农杆菌介导的叶盘法,将含有CryIA(a)/CryIA(c)基因、半夏凝集素(pta)基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中,在含除草剂的筛选培养基中连续筛选,获得抗性转化植株... 以中苜1号无菌苗子叶为外植体,采用农杆菌介导的叶盘法,将含有CryIA(a)/CryIA(c)基因、半夏凝集素(pta)基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中,在含除草剂的筛选培养基中连续筛选,获得抗性转化植株。研究了农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间等因素对苜蓿转化效率的影响,结果表明:各因素对苜蓿转化率均有不同程度的影响,当转化的菌液浓度ODsoo为0.6、浸染时间为10min、共培养时间为3d时转化效率较好。载体的抗性基因为除草剂草丁膦抗性的Bar基因,对子叶外植体的最佳筛选浓度为8mg/L;抑制农杆菌所用Carb的有效工作浓度为400mg/L,以后继代逐次减少用量到100mg/L;按此方法以根癌农杆菌菌株EHA105介导,将双基因Bt和pta导入紫花苜蓿品种“中苜1号”,最终获得122棵除草剂草丁膦(ppt)抗性的植株,经过初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测,有30棵检测到特异性条带,表明外源基因已成功整合到苜蓿基因组中,并在转录水平得到表达。 展开更多
关键词 双价抗虫 转基因植株 CryIA(a/c)基因 pta基因 紫花苜蓿
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转rstB基因苜蓿耐盐性初评(简报) 预览 被引量:9
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作者 王玉祥 王涛 张博 《草地学报》 CAS CSCD 2008年第5期 539-541,共3页
rstB基因来源于费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)耐盐菌株RT19。该基因可以使费氏中华根瘤芮盐敏感突变体RC3—3恢复耐盐性,推测该读码框编码的基因与渗透调节相关,并命名为rstB。rstB基因核苷酸序列和蛋白序列在NCBI基因Bank... rstB基因来源于费氏中华根瘤菌(Sinorhizobium fredii)耐盐菌株RT19。该基因可以使费氏中华根瘤芮盐敏感突变体RC3—3恢复耐盐性,推测该读码框编码的基因与渗透调节相关,并命名为rstB。rstB基因核苷酸序列和蛋白序列在NCBI基因Bank上同源性比对分析结果显示,rstB基因编码一糖基/苷转移酶。属于糖基/苷转移酶第二家族成员(glycosyl transferase),该酶参与细胞壁的生物学功能,为多功能酶。糖基转移酶是糖基化过程的关键酶,它的表达和细胞周期密切相关。在细胞分化阶段,许多糖基转移酶的基因是表达的,为此出现了一系列糖类异质体作为分化抗原,它可以催化以尿苷二磷酸葡萄糖(UDP—glucose)、尿苷二磷酸N乙酰基氨基半乳糖(UDP—N—acetyl—galactosamine)、鸟苷二磷酸N乙酰基一甘露糖(GDP—mannose)、胞嘧啶二磷酸3-脱氧-D-岩藻糖(CDP-abequose)等糖基为供体的转糖基反应,其受体较多,包括纤维素(cellulose)、磷酸化的长醇(dolichol phosphate)和磷擘酸质(teichoic acids)等,也参与包膜的形成。 展开更多
关键词 转基因苜蓿 耐盐性 rstB基因
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农杆菌介导灰绿藜NHX1基因转化新疆大叶苜蓿的研究 预览 被引量:8
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作者 潘竟丽 张富春 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2007年第4期 418-422,共5页
利用转基因技术能够快速有效地获得抗盐碱苜蓿的新品种,但苜蓿的品种直接影响着其再生能力和遗传转化,因此建立农杆菌介导的大叶苜蓿转基因体系对于大叶苜蓿抗逆新品种培育具有重要的促进作用。将新疆盐生植物灰绿藜(Chenopodium gla... 利用转基因技术能够快速有效地获得抗盐碱苜蓿的新品种,但苜蓿的品种直接影响着其再生能力和遗传转化,因此建立农杆菌介导的大叶苜蓿转基因体系对于大叶苜蓿抗逆新品种培育具有重要的促进作用。将新疆盐生植物灰绿藜(Chenopodium glaucum Linn.)的Na^+/H^+反向运输体基因Cg-NHX1构建在植物表达载体pBIN438上,并转化入根瘤农杆菌EHA105,以5-7d苗龄的新疆大叶紫花苜蓿(Medicago.sativa)子叶为转化受体,通过重组EHA105介导的子叶浸染法将Cg-NHX1基因导入新疆大叶紫花苜蓿中,获得了抗卡那霉素的再生植株。提取转基因植株基因组DNA,进行PCR检测和Southem blot分析,结果表明Cg-NHX1基因已经被整合到新疆大叶紫花苜蓿基因组中。研究成功地获得灰绿藜NHX1基因转化的新疆大叶紫花苜蓿植株,并在新疆大叶紫花苜蓿遗传转化影响因素的研究中,发现茵液浓度OD600nm为0.2-0.3,浸染时间20min适宜于子叶愈伤诱导,有利于基因转化植株的获得。 展开更多
关键词 新疆大叶紫花苜蓿 灰绿藜Cg-NHXl基因 转基因苜蓿
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转基因苜蓿研究进展 被引量:4
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作者 胡清泉 玉永雄 《中国草地》 CSCD 2005年第5期 58-62,共5页
就苜蓿基因工程在育种上的研究、转基因技术在苜蓿上的进展做了简要介绍.
关键词 转基因育种 苜蓿 基因工程
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