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铜绿假单胞菌Ⅵ型分泌系统和群体感应系统参与生物被膜形成
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作者 邹雅如 李颖 +1 位作者 伍勇 汪怀周 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期732-736,共5页
目的探讨铜绿假单胞菌中Ⅵ型分泌系统(T6SS)和群体感应(QS)系统在铜绿假单胞菌生物被膜形成中的作用。方法将铜绿假单胞菌生物被膜阳性的模式菌株PAO1制备成生物被膜菌和浮游菌。采用实时荧光定量PCR法检测菌株中T6SS相关溶血素共调节蛋... 目的探讨铜绿假单胞菌中Ⅵ型分泌系统(T6SS)和群体感应(QS)系统在铜绿假单胞菌生物被膜形成中的作用。方法将铜绿假单胞菌生物被膜阳性的模式菌株PAO1制备成生物被膜菌和浮游菌。采用实时荧光定量PCR法检测菌株中T6SS相关溶血素共调节蛋白(Hcp)基因Hcp1、Hcp2和Hcp3,QS系统相关基因LasR,胞外多糖相关多糖合成位点基因A(PslA)和菌膜基因A(PelA),以及Ⅳ型菌毛基因(PilA)和鞭毛蛋白基因(FliC)的表达水平。采用独立样本t检验比较PAO1生物被膜菌与浮游菌中上述基因表达的差异。结果 PAO1生物被膜菌PslA、PelA、PilA和FliC基因的相对表达量均明显高于浮游菌,分别为浮游菌的714、274、604和42倍(P均<0.05),提示制备的PAO1生物被膜菌形成了具有鞭毛和菌毛结构的成熟生物被膜。PAO1生物被膜菌Hcp1、Hcp2、Hcp3和LasR基因的相对表达量均明显高于浮游菌,分别为浮游菌的1 045、11 268、6 654和1 226倍(P均<0.05),提示T6SS和QS系统与PAO1菌生物被膜的形成有关。结论铜绿假单胞菌中T6SS和QS系统可能参与生物被膜形成,其具体调控机制有待进一步研究。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 型分泌系统 群体感应系统 生物被膜
Ⅵ型分泌系统2核心组分ClpB对禽致病性大肠杆菌生物学特性及致病性的影响
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作者 王栋 王少辉 +8 位作者 徐凤 孟庆美 刘新 许漩 杨登辉 韩先干 丁铲 张焕容 于圣青 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期834-840,共7页
构建禽致病性大肠杆菌(APEC)Ⅵ型分泌系统2(T6SS2)clpB基因缺失株、互补株,研究clpB基因对APEC生物学特性及致病性的影响。采用Red同源重组系统构建APEC clpB基因缺失株,并利用低拷贝质粒pSTV28构建互补株。比较分析野生株、缺失株... 构建禽致病性大肠杆菌(APEC)Ⅵ型分泌系统2(T6SS2)clpB基因缺失株、互补株,研究clpB基因对APEC生物学特性及致病性的影响。采用Red同源重组系统构建APEC clpB基因缺失株,并利用低拷贝质粒pSTV28构建互补株。比较分析野生株、缺失株与互补株的生长曲线、运动性、生物被膜形成能力、黏附侵袭能力、胞内存活能力、动物致病力等生物学特性的差异。结果显示,clpB基因缺失不影响APEC的生长速度和黏附侵袭能力。然而,缺失ClpB导致APEC运动能力降低、生物被膜形成能力升高、HD-11胞内存活能力降低、体内存活能力及致病力降低。本研究分析了T6SS2核心组分Clp B的作用,为阐述APEC T6SS2致病作用提供了参考。 展开更多
关键词 禽致病性大肠杆菌 型分泌系统 clpB基因 致病性
青枯菌Po82菌株Ⅵ型分泌系统基因簇功能研究 预览
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作者 罗亚婷 许景升 +2 位作者 徐进 张昊 冯洁 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期38-45,共8页
Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)是革兰氏阴性细菌中新近发现的分泌系统,控制细菌的毒性和蛋白泌出。本试验构建了植物青枯菌Po82菌株的T6SS基因簇完全缺失菌株,从全局水平初步分析了T6SS的功能。与野生型菌株相比,T6SS基... Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)是革兰氏阴性细菌中新近发现的分泌系统,控制细菌的毒性和蛋白泌出。本试验构建了植物青枯菌Po82菌株的T6SS基因簇完全缺失菌株,从全局水平初步分析了T6SS的功能。与野生型菌株相比,T6SS基因簇的缺失导致了突变菌株运动能力显著增强,在接种前期突变株病情指数明显下降;通过qRT-PCR分析Ⅲ型分泌系统效应子基因,其中popA、popB和popP基因表达量上调,而popC表达水平下调。T6SS基因簇的缺失影响了Po82菌株的运动能力和Ⅲ型效应子基因的表达,使得Po82病程延长。这些结果说明,T6SS参与青枯菌的致病过程,且T6SS与T3SS之间有复杂的未知调控关系。 展开更多
关键词 青枯菌 型分泌系统 基因簇 致病力
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植物青枯菌Ⅵ型分泌系统核心基因vasK突变株的构建及其致病性的测定 预览 被引量:2
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作者 张丽勍 许景升 +1 位作者 徐进 冯洁 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期 33-37,共5页
[目的] 通过测试vasK基因突变株对番茄的致病力变化,评价该基因在青枯菌致病过程中的作用。[方法]根据青枯菌(Ralstonia solanacearum)中存在的Ⅵ型分泌系统基因簇中的核心基因vasK序列设计PCR引物,扩增并克隆vasK基因,将庆大... [目的] 通过测试vasK基因突变株对番茄的致病力变化,评价该基因在青枯菌致病过程中的作用。[方法]根据青枯菌(Ralstonia solanacearum)中存在的Ⅵ型分泌系统基因簇中的核心基因vasK序列设计PCR引物,扩增并克隆vasK基因,将庆大霉素抗性基因(Gm)插入vasK基因内部,克隆至自杀质粒pK18mobsacB中,获得重组自杀质粒pK18-vasK-Gm。将自杀质粒电转化至青枯菌GMI1000感受态细胞中,采用同源重组双交换法,将野生型vasK基因置换。对vasK基因突变菌株进行三步筛选和PCR扩增鉴定。[结果] 筛选获得了具有庆大霉素抗性的目标基因被抗性基因替换的青枯菌突变株(GMI1000-m)。土壤接种番茄青枯菌结果显示,突变株GMI1000m的致病性较野生型GMI1000明显下降。[结论]vasK基因在青枯菌致病过程中具有重要作用。 展开更多
关键词 青枯菌 型分泌系统 vasK基因
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大肠埃希菌Ⅵ型分泌系统相关蛋白多克隆抗体制备及分泌蛋白检测 预览 被引量:1
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作者 施潇磊 陈小溪 +4 位作者 金锐 李浩 薛佩 姚玉峰 陶晶 《上海交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期共5页
目的为研究新近发现的大肠埃希菌(E.coli)Ⅵ型分泌系统的组成和功能,制备与之相关的三种重要蛋白AaiC、CRP和OmpA的多克隆抗体,并对分泌蛋白AaiC进行检测。方法采用PCR技术扩增出目的基因,并将其连接到pET-22b或pQE80原核表达载体中,酶... 目的为研究新近发现的大肠埃希菌(E.coli)Ⅵ型分泌系统的组成和功能,制备与之相关的三种重要蛋白AaiC、CRP和OmpA的多克隆抗体,并对分泌蛋白AaiC进行检测。方法采用PCR技术扩增出目的基因,并将其连接到pET-22b或pQE80原核表达载体中,酶切及测序鉴定正确后转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达蛋白并纯化,使用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western blotting检测抗体。应用AaiC抗体检测E.coli RS218菌株分泌蛋白。结果重组质粒构建成功,并能够在E.coli中高效表达,免疫得到AaiC、CRP和OmpA高效价的特异性多克隆抗体。AaiC抗体检测证实RS218菌株能够分泌AaiC蛋白。结论成功制备了E.coli三种重要蛋白AaiC、CRP和OmpA的特异性抗体,检测出RS218菌株分泌AaiC蛋白,为进一步研究E.coliⅥ型分泌系统的生物学功能以及E.coli的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 型分泌系统 多克隆抗体 分泌蛋白
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细菌Ⅵ型分泌系统的研究进展 被引量:3
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作者 李俊 俞盈 王豪举 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期291-296,共6页
Ⅵ型分泌系统(Type Ⅵ secretion system,T6SS)是最近发现的一种新的分泌系统,广泛存在于革兰氏阴性菌变形菌门细菌中,主要由构成分泌系统的结构蛋白、形成跨膜管道结构的转位蛋白、分泌蛋白以及一些对分泌系统起辅助功能的蛋白组成。... Ⅵ型分泌系统(Type Ⅵ secretion system,T6SS)是最近发现的一种新的分泌系统,广泛存在于革兰氏阴性菌变形菌门细菌中,主要由构成分泌系统的结构蛋白、形成跨膜管道结构的转位蛋白、分泌蛋白以及一些对分泌系统起辅助功能的蛋白组成。T6SS能够增强细菌对外界环境的适应性,介导细菌对宿主细胞的致病力以及其他功能。 展开更多
关键词 型分泌系统 结构 功能 调控
利用Red重组系统敲除鲍曼不动杆菌 asaA 基因 预览
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作者 李磊 王一诺 邹清华 《微生物学免疫学进展》 2019年第1期14-18,共5页
目的利用Red重组系统敲除鲍曼不动杆菌ATCC17978的asaA。方法设计上下游引物中包含asaA的同源序列,并以pKD4质粒为模板,扩增含有卡那霉素抗性基因的DNA片段。将该片段转化于表达重组酶的17978感受态细胞中,在卡那霉素筛选压力下,得到经... 目的利用Red重组系统敲除鲍曼不动杆菌ATCC17978的asaA。方法设计上下游引物中包含asaA的同源序列,并以pKD4质粒为模板,扩增含有卡那霉素抗性基因的DNA片段。将该片段转化于表达重组酶的17978感受态细胞中,在卡那霉素筛选压力下,得到经两次同源双交换的具有卡那霉素基因标记的突变菌株。随后,在重组酶的作用下将抗性基因去除,最终得到无抗性基因标记的突变菌株ΔasaA。结果通过该重组系统,首先将卡那霉素抗性基因的DNA片段替换了基因组中asaA的DNA片段,然后将卡那霉素抗性基因的DNA片段消除,最终获得了asaA缺失的突变体。结论通过Red重组系统为鲍曼不动杆菌中其他基因的缺失突变提供方法与思路。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 基因敲除 型分泌系统 asaA
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利用Red重组系统敲除鼠伤寒沙门氏菌Ⅵ型分泌系统相关基因
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作者 王萍 董俊芳 邹清华 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第11期2529-2536,共8页
【背景】沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌,可引起广泛的胃肠炎以及伤寒、副伤寒,其致病机制一直未被阐明。基因敲除技术在研究沙门氏菌致病性方面发挥了重要作用,然而目前的敲除技术仍存在费时、成功率低的问题。研究发现鼠伤寒沙... 【背景】沙门氏菌是一种重要的人畜共患病原菌,可引起广泛的胃肠炎以及伤寒、副伤寒,其致病机制一直未被阐明。基因敲除技术在研究沙门氏菌致病性方面发挥了重要作用,然而目前的敲除技术仍存在费时、成功率低的问题。研究发现鼠伤寒沙门氏菌含有Ⅵ型分泌系统,其组成成分之一溶血素共调节蛋白(Hemolysin-coregulated protein,Hcp)可能在其致病过程中发挥了重要作用。【目的】拟通过对3个编码Hcp蛋白的基因进行敲除,在鼠伤寒沙门氏菌中建立一套方便快捷的重组系统,从而用于沙门氏菌致病性的研究。【方法】以pKD4为模板,扩增两端带有目的基因同源序列的卡那霉素抗性基因片段,将片段导入含重组酶系统的目的菌,重组后再导入质粒pCP20消除抗性基因片段,达到无痕敲除的效果。【结果】对3个单独的hcp基因及其组合进行了敲除,得到了所需的基因缺失株,并总结出了一些实验过程中可能遇到的问题的解决方案。【结论】Red重组系统可用于鼠伤寒沙门菌的基因敲除,通过优化同源片段的长度、PCR模板浓度、L-阿拉伯糖加入时间、实验过程中的温度等实验条件,提高Red重组系统在沙门氏菌中的重组效率。此方法简单、快速,重组效率高,值得推广。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 型分泌系统 溶血素共调节蛋白 RED重组系统
鲍曼不动杆菌Ⅵ型分泌系统研究进展 预览
9
作者 董俊芳 邹清华 《微生物学免疫学进展》 2018年第2期68-71,共4页
鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是一种临床常见的不动杆菌,属革兰阴性非发酵菌,其多重耐药性严重降低了治疗选择性,对全球的医疗系统造成极大威胁。VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)是革兰阴性细菌中... 鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)是一种临床常见的不动杆菌,属革兰阴性非发酵菌,其多重耐药性严重降低了治疗选择性,对全球的医疗系统造成极大威胁。VI型分泌系统(type VI secretion system,T6SS)是革兰阴性细菌中广泛存在的毒力系统,可通过直接接触将效应因子注入临近细菌导致其死亡,实现自我保护。T6SS在AB中高度保守,越来越多的证据表明,T6SS在AB感染致病过程中发挥着重要作用。现对ABT6SS的组成、功能凋坊笔青而的研容辨羼椎一撑;术柏淬人科赛AR的碲病两耐药棚制提位依棍#柏苴睛格辑世叁老 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 型分泌系统 多重耐药
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细菌Ⅵ型分泌系统概述 被引量:1
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作者 谭超 王君 邹黎黎 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第3期285-288,共4页
细菌Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)是一种在结构和作用机制上与噬菌体尾部类似的细胞器,二者均通过与靶细胞直接接触转运效应蛋白。最新研究表明,T6SS通过VipA/VipB鞘的收缩推动VgrG刺和Hcp管插入到靶细胞壁及细胞膜中,... 细菌Ⅵ型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS)是一种在结构和作用机制上与噬菌体尾部类似的细胞器,二者均通过与靶细胞直接接触转运效应蛋白。最新研究表明,T6SS通过VipA/VipB鞘的收缩推动VgrG刺和Hcp管插入到靶细胞壁及细胞膜中,再通过Hcp管将抗菌及抗真核细胞效应子注入靶细胞,最后以ClpV介导的ATP依赖途径恢复构象。本文对T6SS的结构、功能及调控的最新进展进行综述。 展开更多
关键词 型分泌系统 噬菌体 结构 功能 调控 综述
绿脓杆菌特有的Tsi2三维结构——一种全新卷曲螺旋构象的类抗毒素蛋白 被引量:2
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作者 王维 丁璟珒 王大成 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第7期640-646,共7页
绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)利用六型分泌系统(T6SS)向其他竞争性细菌分泌毒素效应分子Tse2,这是一种新发现的绿脓杆菌获得生存优势的分子机制.为了避免同类间的误杀,绿脓杆菌合成一种特异结合Tse2的抑制蛋白Tsi2来保护自己.... 绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)利用六型分泌系统(T6SS)向其他竞争性细菌分泌毒素效应分子Tse2,这是一种新发现的绿脓杆菌获得生存优势的分子机制.为了避免同类间的误杀,绿脓杆菌合成一种特异结合Tse2的抑制蛋白Tsi2来保护自己.序列分析显示,Tsi2是绿脓杆菌特有的一种新型类抗毒素蛋白.我们利用SAD方法成功地解析了Tsi2 1.8魡分辨率的晶体结构.Tsi2的三维结构采用一种规则的卷曲螺旋的结构特征,这是抗毒素分子中的一种全新的折叠方式,不同于经典的抗毒素分子在没有结合毒素分子状态下采用无规则构象的结构特征;二聚体是Tsi2的功能单位,二聚体内两个Tsi2单体通过广阔的疏水相互作用紧密结合,形成"夹子"状独特的二聚体组装方式;位于二聚体界面上的两个凹槽分别结合对称分子的两段螺旋,提供了Tsi2与Tse2结合可能的分子部位.该研究工作结果对于认识Tsi2抗毒素蛋白的分子本质,揭示其发挥抗毒素活性的结构基础,并为进一步开展Tse2-Tsi2复合物的结构与功能研究奠定了坚实的基础. 展开更多
关键词 绿脓杆菌 六型分泌系统 Tsi2-Tse2 抗毒素 卷曲螺旋