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重组黄热病毒疫苗的研制现状
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作者 李文桂 陈雅棠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第1期123-125,共3页
黄热病毒引起的黄热病是一种常见的动物传染病。黄热病毒可诱导感染的宿主产生细胞和体液免疫应答,可通过分子生物学技术改造为理想的疫苗载体,从而表达寄生虫和病毒的多种蛋白。这些病原体包括恶性疟原虫、约氏疟原虫、枯氏锥虫、日本... 黄热病毒引起的黄热病是一种常见的动物传染病。黄热病毒可诱导感染的宿主产生细胞和体液免疫应答,可通过分子生物学技术改造为理想的疫苗载体,从而表达寄生虫和病毒的多种蛋白。这些病原体包括恶性疟原虫、约氏疟原虫、枯氏锥虫、日本脑炎病毒、登革病毒、拉沙病毒和猴免疫缺陷病毒等,本文拟就这方面的研制现状进行综述。 展开更多
关键词 黄热病毒 疫苗 综述
黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立
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作者 郑夔 戴俊 +3 位作者 刘丽娟 袁帅 孙芳芳 黄吉城 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第3期153-157,共5页
目的建立一种根据颜色变化判断结果的黄热病毒可视化RT-LAMP快速核酸检测方法。方法针对112株目前GeneBank上所有基因亚型黄热病毒株的5’端非编码区保守性核苷酸序列,设计黄热病毒特异性LAMP引物,建立黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法。... 目的建立一种根据颜色变化判断结果的黄热病毒可视化RT-LAMP快速核酸检测方法。方法针对112株目前GeneBank上所有基因亚型黄热病毒株的5’端非编码区保守性核苷酸序列,设计黄热病毒特异性LAMP引物,建立黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法。评价该方法的特异性、灵敏性,并用临床样本和模拟样本进行应用性验证。结果建立的RT-LAMP方法有较高的特异性,与登革病毒、裂谷热病毒、西尼罗病毒、乙脑病毒及基孔肯雅病毒无交叉反应;用体外转录的RNA模板评估,其灵敏性可达102拷贝/μl;用口岸发热病例血清样本验证,该方法可检出血清中的黄热病毒。结论建立的黄热病毒可视化RT-LAMP检测方法操作简便、快速、特异性好,可应用于黄热病毒的现场检测。 展开更多
关键词 黄热病毒 环介导等温扩增 等温扩增
Rift Valley Fever Virus and Yellow Fever Virus in Urine:A Potential Source of Infection
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作者 Meng Li Beibei Wang +10 位作者 Liqiang Li Gary Wong Yingxia Liu Jinmin Ma Jiandong Li Hongzhou Lu Mifang Liang Ang Li Xiuqing Zhang Yuhai Bi Hui Zeng 《中国病毒学:英文版》 CAS CSCD 2019年第3期342-345,共4页
Dear Editor,In recent years,the incidence of human infections caused by emerging or re-emerging pathogens has rapidly increased.Diseases that were once regional now have the ability to spread globally in a short amoun... Dear Editor,In recent years,the incidence of human infections caused by emerging or re-emerging pathogens has rapidly increased.Diseases that were once regional now have the ability to spread globally in a short amount of time and pose a wider threat to public health(Weaver et al.2018).Yellow fever virus(YFV,family Flaviviridae,genus Flavivirus)is a mosquito-borne flavivirus that causes yellow fever in humans and has been endemic in Africa and Latin America for many years(Domingo et al.2018). 展开更多
关键词 YELLOW FEVER VIRUS A POTENTIAL SOURCE INFECTION
一种黄热病毒反转录恒温热隔绝式PCR检测方法
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作者 赵俊华 李伟刚 +5 位作者 杜田 苏影 汪海波 涂承宁 杨泽 莫秋华 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2019年第4期229-232,共4页
目的建立能在野外或现场应用的黄热病毒反转录恒温热隔绝式PCR(reverse transcription-insulated isothermal PCR,RT-iiPCR)快速检测方法。方法针对黄热病毒基因组5’UTR保守区设计检测引物和TaqMan-MGB探针,优化引物、探针、Taq酶、反... 目的建立能在野外或现场应用的黄热病毒反转录恒温热隔绝式PCR(reverse transcription-insulated isothermal PCR,RT-iiPCR)快速检测方法。方法针对黄热病毒基因组5’UTR保守区设计检测引物和TaqMan-MGB探针,优化引物、探针、Taq酶、反转录酶和PCR增强剂等各组分的浓度,利用分析平台,建立黄热病毒RT-iiPCR检测方法,评价方法的稳定性、特异性、灵敏度和检测限等指标。结果建立了稳定可靠的黄热病毒RT-iiPCR检测方法,在分析平台上只需一键操作即可在58 min内完成检测并自动报告结果。性能评价试验显示该方法稳定性好,特异性和灵敏度分别达到100.00%和92.31%,检测下限≥1 000拷贝。结论率先建立了黄热病毒RT-iiPCR检测方法,该方法简便实用,适合于现场快速检测。 展开更多
关键词 恒温热隔绝式PCR 黄热病毒 黄病毒 现场检测
黄热病毒NS1蛋白的制备及免疫原性鉴定 预览
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作者 刘朵朵 任瑞文 +5 位作者 张培 李春缘 余楠 刘乐斌 陈荣华 陈月 《中国人兽共患病学报》 CSCD 北大核心 2018年第5期424-428,433共6页
目的原核系统克隆表达黄热病毒(yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),鉴定其免疫原性。方法以YFV-17D疫苗株为模板,常规分子生物学方法构建pQE30-YFV NS1表达载体,原核表达纯化YFVNS1重组蛋白;免疫印... 目的原核系统克隆表达黄热病毒(yellow fever virus,YFV)非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),鉴定其免疫原性。方法以YFV-17D疫苗株为模板,常规分子生物学方法构建pQE30-YFV NS1表达载体,原核表达纯化YFVNS1重组蛋白;免疫印记、免疫荧光和酶联免疫吸附实验验证其免疫原性。结果成功构建重组质粒pQE30-YFV NS1,制备纯化可溶性YFV NS1蛋白;该重组YFV NS1蛋白与登革病毒、黄热病毒、乙脑病毒、西尼罗河病毒免疫小鼠腹水及寨卡病毒NS1、YFV NS1蛋白免疫小鼠血清均发生反应,重组YFV NS1蛋白免疫小鼠血清与YFV感染细胞超声上清也发生反应。结论获得高纯度YFV NS1重组蛋白,且具有较好的免疫原性,含天然NS1蛋白表位,为基于NS1黄热病毒早期抗原诊断方法和蛋白功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 黄热病毒 非结构蛋白1 免疫原性
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黄热病毒实验诊断过程中的风险及其控制
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作者 李洁 陈丽娟 +6 位作者 吕燕宁 杜轶威 卢桂兰 石伟先 崔淑娟 王全意 庞星火 《中国病毒病杂志》 CAS 2018年第5期400-405,共6页
目的将黄热病毒实验诊断过程中的生物安全和生物安保风险降到最低。方法识别可疑黄热病病例样本在检测前、检测中及检测后的生物危害风险,依据风险分析和评估结果制定并采取风险防控措施。结果在检测前进行风险识别和分析,优化病原检测... 目的将黄热病毒实验诊断过程中的生物安全和生物安保风险降到最低。方法识别可疑黄热病病例样本在检测前、检测中及检测后的生物危害风险,依据风险分析和评估结果制定并采取风险防控措施。结果在检测前进行风险识别和分析,优化病原检测所需场所、仪器、材料及人员,确定操作规程及人员防护措施;对检测中样本开启、处理、分装、暂存及检测后废弃物处理、实验环境消毒、样本保藏及上送等各阶段开展风险识别及风险再评估,持续优化、完善防控措施。结论本研究为黄热病及其他蚊媒传播传染病的风险评估和应对措施制定提供了参考和依据。 展开更多
关键词 黄热病毒 诊断 生物安全 风险 识别 控制
寨卡病毒及其疫苗研究 被引量:6
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作者 田德桥 陈薇 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期1-15,共15页
寨卡病毒与黄热病毒、登革热病毒、日本脑炎病毒、西尼罗病毒等都属于蚊媒传播的黄病毒属病毒。寨卡病毒分离于1947年,但由于分布区域有限,所致寨卡热症状较轻,很长一段时间并没有引起太多的关注。最近一些年,特别是2015年后,巴西的寨... 寨卡病毒与黄热病毒、登革热病毒、日本脑炎病毒、西尼罗病毒等都属于蚊媒传播的黄病毒属病毒。寨卡病毒分离于1947年,但由于分布区域有限,所致寨卡热症状较轻,很长一段时间并没有引起太多的关注。最近一些年,特别是2015年后,巴西的寨卡疫情暴发及其与新生儿小头畸形的关联,引起了全球越来越多的关注。疫苗是应对寨卡疫情的重要手段,目前全球有30余个机构在进行寨卡病毒疫苗的研发。本文综述了寨卡病毒的生物学、流行病学、临床特征以及当前不同类型寨卡病毒疫苗研发现状,同时对其他几种黄病毒属病毒批准和临床阶段疫苗情况进行了概述,以为相关研究人员提供参考。 展开更多
关键词 寨卡病毒 黄热病毒 登革热病毒 日本脑炎病毒 疫苗
Crystal structure of the C-terminal fragment of NS1 protein from yellow fever virus
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作者 Haiyuan Wang Min Han +5 位作者 Jianxun Qi Rolf Hilgenfeld Tingrong Luo Yi Shi George F.Gao Hao Song 《中国科学:生命科学英文版》 SCIE CAS CSCD 2017年第12期1403-1406,共4页
我国首起4例输入性黄热病患者的临床护理
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作者 杨博 刘小冬 +5 位作者 刘欣 陈志海 张莉 冯玉涵 张伟 蒋荣猛 《中华现代护理杂志》 2017年第7期957-959,共3页
目的 了解黄热病患者的临床表现,探讨护理措施.方法 收集我国首起4例输入性黄热病患者的临床资料,密切观察患者病情变化,给予对症支持治疗及护理措施.结果 4例患者均表现为高热、黄染、肌肉酸痛、头晕、出血倾向,2例重症患者严重的肝肾... 目的 了解黄热病患者的临床表现,探讨护理措施.方法 收集我国首起4例输入性黄热病患者的临床资料,密切观察患者病情变化,给予对症支持治疗及护理措施.结果 4例患者均表现为高热、黄染、肌肉酸痛、头晕、出血倾向,2例重症患者严重的肝肾功能衰竭及中枢神经系统受损.结论 黄热病发病急,临床主表现为发热、肝肾功能损害、出血、中枢神经系统损伤,因本病无特效抗病毒药物,所以密切观察患者病情变化,加强相关护理措施,为医生提供第一手资料,给予对症支持治疗是患者康复的前提;对前往疫区人员加强疫苗宣传,接种黄热病疫苗,做好个人防蚊措施是预防黄热病的关键. 展开更多
关键词 黄热病病毒 护理 临床症状
应用高通量测序技术鉴别中国输入性黄热病毒野毒株与疫苗株 被引量:1
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作者 刘林 张益 +7 位作者 李阿茜 张硕 张全福 李川 严延生 马学军 梁米芳 李德新 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2017年第4期353-356,共4页
目的 鉴别2016年3月我国3例输入性黄热病例为2016年安哥拉流行的黄热病毒野毒株感染,还是黄热病毒疫苗相关疾病,亦或是二者的混合感染.方法 应用IonTorrent PGM测序平台,对3例黄热病病例血液或尿液标本进行高通量测序,对所获得的3株黄... 目的 鉴别2016年3月我国3例输入性黄热病例为2016年安哥拉流行的黄热病毒野毒株感染,还是黄热病毒疫苗相关疾病,亦或是二者的混合感染.方法 应用IonTorrent PGM测序平台,对3例黄热病病例血液或尿液标本进行高通量测序,对所获得的3株黄热病毒序列进行基因组特征分析.分析黄热病毒野毒株与疫苗株核酸序列差异,以同源性较低区域序列作为参考序列将高通量测序获得的短序列做回贴和比对.结果 从3份黄热患者标本中获得了部分黄热病毒基因组,其中从第二例患者标本中获得了全长蛋白编码区序列.3株病毒与2016年从中国第一例输入性黄热病例中分离的病毒株CNYF01 R/2016株和来自安哥拉的1971年毒株Angola71株具有极高的相似性,都属于安哥拉型黄热病毒.分析得到5段黄热病毒野毒株与疫苗株核酸序列差异较大的区域,在这5段区域中,3份标本测序获得短序列与野毒株均有多个匹配,而与疫苗株则没有匹配.结论 3例黄热患者的血液或尿液标本中未检测到黄热病毒疫苗株17D株基因组序列,高通量测序证实3人均为2016年安哥拉流行的黄热病毒野毒株感染. 展开更多
关键词 黄热病毒 高通量测序
含5种烈性出血热病毒的假病毒阳性参考品的制备 被引量:1
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作者 曹雪锋 康晓平 +4 位作者 冉鑫 霍耐凡 吴晓燕 李裕昌 杨银辉 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期713-716,737共5页
目的 利用慢病毒载体系统制备含有马尔堡病毒(Marburg virus)、扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebola virus)、苏丹型埃博拉病毒(Sudan Ebola virus)、拉沙热病毒(Lassa fever virus)和黄热病毒(Yellow fever virus)5种烈性病毒核... 目的 利用慢病毒载体系统制备含有马尔堡病毒(Marburg virus)、扎伊尔型埃博拉病毒(Zaire Ebola virus)、苏丹型埃博拉病毒(Sudan Ebola virus)、拉沙热病毒(Lassa fever virus)和黄热病毒(Yellow fever virus)5种烈性病毒核酸片段的假病毒,为其核酸检测提供一种通用的阳性参考品。方法 体外合成该5种病毒的目的基因片段,通过融合PCR技术将5个片段连接成一条基因,然后克隆到慢病毒表达载体上,并与其辅助载体共转染293T细胞;转染后分别于48、72 h收集培养上清,用DNase和RNase进行消化处理及纯化浓缩,最后提取核酸,利用普通PCR和实时荧光定量PCR鉴定假病毒是否包装成功。结果 测序结果表明,体外合成的该5种病毒的目的基因片段已正确连接并插入慢病毒载体中;载体转染293T细胞后收集上清中的假病毒,提取核酸经上述两种PCR鉴定均可特异性检测到靶基因,表明已成功包装出含该5种出血热病毒靶基因的假病毒颗粒。结论 该研究获得的假病毒颗粒可作为上述5种出血热相关烈性病毒核酸检测的通用阳性参考品。 展开更多
关键词 马尔堡病毒 扎伊尔型埃博拉病毒 苏丹型埃博拉病毒 拉沙热病毒 黄热病毒 假病毒 阳性参考品
随机引物在黄热病毒核酸检测中的应用 被引量:1
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作者 田茵 刘翌 +7 位作者 王飞 孙福军 张绍福 刘建礼 王正 乌日嘎 祁晓丽 李岩 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2016年第3期172-174,共3页
目的将随机引物应用于黄热病毒核酸检测,为口岸快速准确地检测黄热病毒提供技术支持。方法采用随机引物和特异性引物进行逆转录,分别用自行设计的引物、探针和参考文献的引物、探针,用实时荧光PCR方法对6份黄热病毒阳性尿液样本进行黄... 目的将随机引物应用于黄热病毒核酸检测,为口岸快速准确地检测黄热病毒提供技术支持。方法采用随机引物和特异性引物进行逆转录,分别用自行设计的引物、探针和参考文献的引物、探针,用实时荧光PCR方法对6份黄热病毒阳性尿液样本进行黄热病毒核酸检测,并对检测结果进行比较。结果与特异性引物逆转录相比,随机引物逆转录的实时荧光PCR Ct值差别不显著(F值=0.11,P〉0.05)。结论随机引物可直接应用于黄热病毒检测,也可在口岸传染病监测中发挥其他作用。 展开更多
关键词 黄热病毒 随机引物 实时荧光RT-PCR
重组酶介导扩增方法快速检测黄热病毒 被引量:1
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作者 郑伟 徐琦 +3 位作者 罗鹏 冯娟 郭利川 应清界 《中国卫生检验杂志》 CAS 2016年第1期1-3,共3页
目的本研究采用重组酶介导的等温核酸扩增方法(RAA),通过使用逆转录酶,建立黄热病毒的一步法等温核酸扩增(RT-RAA)方法。方法根据黄热病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析RT-RAA的重复性、特异性、灵敏度;以所建立方法对... 目的本研究采用重组酶介导的等温核酸扩增方法(RAA),通过使用逆转录酶,建立黄热病毒的一步法等温核酸扩增(RT-RAA)方法。方法根据黄热病毒基因组保守序列设计引物和探针,建立并分析RT-RAA的重复性、特异性、灵敏度;以所建立方法对黄热病毒样本进行检测,同时以基因测序进行验证。结果黄热病毒RT-RAA扩增,体系中加入40 U的逆转录酶扩增效果最佳。该方法检测时间短(〈20 min),并且灵敏度高,检测下限可达100 copy,与登革病毒、西尼罗病毒、日本乙型脑炎病毒、基孔肯雅热病毒等蚊媒病毒无交叉反应,具有良好的特异性。结论构建的黄热病毒RT-RAA方法具有快速、特异以及灵敏的特点,适应于黄热病毒的口岸快速检测。 展开更多
关键词 重组酶介导扩增 黄热病毒 分子检测
北京市4例输入性黄热病病例病毒全基因组特征分析 被引量:2
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作者 崔淑娟 潘阳 +9 位作者 梁志超 李洁 吕燕宁 孙玉兰 窦相峰 田丽丽 黎新宇 王全意 陈丽娟 庞星火 《国际病毒学杂志》 2016年第6期368-371,共4页
目的 通过对2016年北京市4例输入性黄热病病毒全基因组深度测序分析,以期对病毒进行溯源、分析疫苗有效性以及防控策略提供分子依据.方法 将荧光PCR检测为阳性的血液、尿液样本利用Ion Torrent PGM平台进行全基因组深度测序,通过MEGA 6.... 目的 通过对2016年北京市4例输入性黄热病病毒全基因组深度测序分析,以期对病毒进行溯源、分析疫苗有效性以及防控策略提供分子依据.方法 将荧光PCR检测为阳性的血液、尿液样本利用Ion Torrent PGM平台进行全基因组深度测序,通过MEGA 6.0软件中邻接法进行遗传进化分析,并采用Lasergene Protean软件进行E蛋白氨基酸变异分析及抗原性分析.结果 从首例病人的血液样本和其他3个病例的尿液样本中分别获得了黄热病病毒的全基因组序列.遗传进化树分析结果表明,4例黄热病病毒基因组与安哥拉71株(AY968064)高度同源,相似度分别达99.21%、98.11%、98.02%、98.39%.4例黄热病病毒E蛋白的氨基酸序列与安哥拉71株的序列分析相似度分别达99.6%、99.39%、99.01%、99.59%.4例黄热病病毒E蛋白抗原性与17D疫苗株(X03700)的E蛋白抗原性比较分析无明差异.结论 4例黄热病病毒都是安哥拉流行株类似株,目前使用的17D疫苗具有有效性. 展开更多
关键词 黄热病病毒 全基因组测序 遗传进化树分析 氨基酸突变
Yellow fever and Hajj: with all eyes on Zika, a familiar flavivirus remains a threat
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作者 QantaA. Ahmed Ziad A. Memish 《医学前沿:英文版》 CAS CSCD 2016年第4期527-530,共4页
多重实时荧光定量RT-PCR法快速检测3种蚊媒病毒 被引量:2
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作者 吴忠华 罗鹏 +1 位作者 吕沁风 郑伟 《中国卫生检验杂志》 2015年第12期1975-1977,共3页
目的建立多重实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,用于黄热病毒(YFV)、登革热病毒(DFV)、基孔肯雅热病毒(CHIKV)的同时检测和鉴别诊断。方法分别针对YFV 3'UTR基因、DFV 3'UTR C-M基因和CHIKV nsp2基因保守区设计特异性引物和Taq ... 目的建立多重实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,用于黄热病毒(YFV)、登革热病毒(DFV)、基孔肯雅热病毒(CHIKV)的同时检测和鉴别诊断。方法分别针对YFV 3'UTR基因、DFV 3'UTR C-M基因和CHIKV nsp2基因保守区设计特异性引物和Taq Man探针,建立并优化多重实时荧光定量RT-PCR反应体系,评价方法的特异性、敏感性和稳定性,并用临床标本进行验证。结果该方法可同时检测YFV、DFV和CHIKV,检测结果的特异性强,灵敏度达1×103copy/ml,结果的重复性很好,其变异系数分别为1.03%、0.90%和0.34%。临床确诊的11例DFV标本,5例CHIKV标本和10例黄热病疫苗标本核酸检测结果皆为阳性。结论研究建立的多重实时荧光定量RT-PCR方法可同时检测YFV、DFV和CHIKV,灵敏度高、特异性强、稳定性好,是一种可同时快速检测多种蚊媒病毒的新方法。 展开更多
关键词 黄热病毒 登革热病毒 基孔肯雅热病毒 多重实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应 检测
黄热病病毒检测方法学的研究进展 被引量:1
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作者 陈淑丹 吴忠华 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2014年第2期141-144,共4页
本文对黄热病病毒检测方法进行了综述。黄热病病毒的检测技术对该病的快速诊断,流行病学调查以及接种人群血清抗体的有效监测意义重大。正确快速地检测出黄热病病毒对保障我国人民健康安全和经济发展均有重大意义。
关键词 黄热病病毒 检测方法 进展
黄热病毒逆转录环介导等温扩增检测方法的建立
18
作者 吕沁风 陈寅 +3 位作者 吴忠华 郑伟 张严峻 李禾 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期184-190,共7页
【目的】建立一种简便快速的黄热病毒分子检测方法。【方法】运用RT-LAMP (Reserve transcription loop-mediated isothermal amplification)技术设计一套引物特异性识别黄热病毒E基因中的6个区域,建立高效简便的黄热病毒等温扩增检... 【目的】建立一种简便快速的黄热病毒分子检测方法。【方法】运用RT-LAMP (Reserve transcription loop-mediated isothermal amplification)技术设计一套引物特异性识别黄热病毒E基因中的6个区域,建立高效简便的黄热病毒等温扩增检测方法。【结果】该检测方法具有良好的特异性,与其他虫媒病毒无交叉反应。同时检测灵敏度可达到0.066 pg,与RT-PCR相比,灵敏度高100倍左右。模拟样本检测与预期相符,临床样本未检测到阳性标本。【结论】该方法为黄热病毒检疫提供了一种可在简便环境中特异、灵敏的快速检测手段。 展开更多
关键词 黄热病毒 RT-LAMP 检测
黄热病毒特异性抗原片段的筛选与鉴定 被引量:2
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作者 胡文龙 唐博恒 +5 位作者 任瑞文 李瑞生 沓世远 马美茵 杨虹 梁克峰 《中国预防医学杂志》 CAS 2013年第2期114-117,共4页
目的通过系统的生物信息学分析和实验验证,筛选黄热病毒的特异抗原片段,为免疫诊断试剂的研制奠定基础。方法分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对黄热病毒蛋白进行分析,参考亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性及二级结构信息,对黄热病毒... 目的通过系统的生物信息学分析和实验验证,筛选黄热病毒的特异抗原片段,为免疫诊断试剂的研制奠定基础。方法分别利用DNAStar及ANTHEPROT软件对黄热病毒蛋白进行分析,参考亲水性、抗原性、可塑性、表面可及性及二级结构信息,对黄热病毒可能的共有及特异性抗原表位进行系统的预测分析,分析其在不同毒株中的保守性,并对预测得分值较高的抗原区域进行RT-PCR扩增,利用pMal-c2x原核表达系统进行原核表达,Western blot验证其免疫学反应原性,检测阳性抗原片段经亲和纯化后,包被ELISA微孔板,进一步验证其免疫学反应特异性及检测敏感性。结果其中27段抗原片段获高效表达,经Western blot筛选及ELISA进一步验证,原核表达抗原片段YFV22表现良好特异抗,可检测低至1∶12 800倍稀释的黄热病毒多克隆抗体,与所试其他参考病毒多克隆抗体无交叉反应。结论经系统筛选、验证,获黄热病毒特异性抗原片段1段,为其免疫学诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 黄热病毒 抗原表位 原核表达 ELISA
应用DPO引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法 被引量:17
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作者 徐焕洲 平芮巾 +5 位作者 季汝武 王琳 杨鹏飞 张丽萍 岳启安 胡孔新 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2012年第2期73-77,共5页
目的应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitisVirus,JEV)、黄热病毒(YellowFeverVirus,YFV)、西尼罗病毒(WestNileVirus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Loui... 目的应用双启动寡核苷酸引物(Dual Priming Oligonucleotide,DPO)技术建立同时检测日本脑炎病毒(JapaneseEncephalitisVirus,JEV)、黄热病毒(YellowFeverVirus,YFV)、西尼罗病毒(WestNileVirus,WNV)、圣路易斯脑炎病毒(St.Louis encephalitis virus,SLEV)和登革病毒(Dengue virus,DV)5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法。方法利用Primer Premier5.0软件设计5种病毒的特异性DPO引物,对引物浓度、Mg2+浓度和退火温度进行优化,测定多重RT-PCR反应的特异性和敏感性。结果应用DPO引物技术建立的多重RT-PCR方法可特异性扩增JEV、YFV、WNV、SLEV和DV的142 bp、293 bp、377 bp、630 bp和521 bp基因片段,灵敏度分别为5 000 PFU/ml、4 500 PFU/ml、2.3×105copies/μl、2.6×104copies/μl和1.37×104copies/μl,蚊虫模拟添加实验未发生非特异反应。结论应用DPO引物技术建立的针对5种蚊媒病毒的多重RT-PCR检测方法有良好的敏感性和特异性,可以同时对JEV、YFV、WNV、SLEV和DV进行检测。 展开更多
关键词 DPO引物 多重RT-PCR 日本脑炎病毒 黄热病毒 西尼罗病毒 圣路易斯脑炎病毒 登革病毒
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