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利用CRISPR/Cas9双基因敲除系统初步解析大豆GmSnRK1.1和GmSnRK1.2对ABA及碱胁迫的响应 预览 被引量:1
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作者 李慧卿 陈超 +4 位作者 陈冉冉 宋雪薇 李佶娜 朱延明 丁晓东 《遗传》 CSCD 北大核心 2018年第6期496-507,共12页
蔗糖非发酵相关激酶(sucrose non-fermenting related protein kinases,Sn RKs)是广泛存在于植物中的一类Ser/Thr蛋白激酶,在植物的生长、发育、代谢和抗逆等方面具有重要调节作用。大豆(Glycine max L.)基因组中含有4个Sn RK1同源... 蔗糖非发酵相关激酶(sucrose non-fermenting related protein kinases,Sn RKs)是广泛存在于植物中的一类Ser/Thr蛋白激酶,在植物的生长、发育、代谢和抗逆等方面具有重要调节作用。大豆(Glycine max L.)基因组中含有4个Sn RK1同源基因,其中GmSnRK1.1和GmSnRK1.2为两个主要表达基因,可能参与大豆多种抗逆途径。为解析大豆GmSnRK1.1和GmSnRK1.2对ABA及碱胁迫的响应,本研究构建了双靶点CRISPR载体定向敲除GmSnRK1.1和GmSnRK1.2基因,利用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes)介导大豆遗传转化,获得双基因敲除突变体毛状根,经测序鉴定双基因突变率为48.6%;同时,利用实验室前期构建的植物超量表达载体获得超量表达GmSnRK1基因大豆毛状根。经25μmol/L ABA处理15 d,对照组和超量表达毛状根的生长受到明显抑制,其根长与根鲜重均显著低于双基因敲除突变体毛状根;经50 mmol/L Na HCO3处理15 d,对照组和双基因敲除突变体毛状根的生长受到明显抑制,其根长与根鲜重均显著低于超量表达毛状根。本研究建立的CRISPR/Cas9系统能够有效地对大豆进行GmSnRK1.1和GmSnRK1.2双基因敲除,基因敲除突变降低了植物对ABA的敏感性及对碱胁迫的耐性,研究结果初步说明Sn RK1激酶在植物响应非生物胁迫中具有重要作用。 展开更多
关键词 大豆 CRISPR/Cas9 GmSnRK1.1 GmSnRK1.2 ABA信号 碱胁迫
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转GsERF71基因苜蓿的培育及耐碱性 预览
2
作者 王子君 陈冉冉 +8 位作者 朱娉慧 于洋 陈超 孙晓丽 段香波 杜建英 任皓 刘琪 朱延明 《草业科学》 CSCD 2018年第11期2683-2693,共11页
基于东北农业大学农业生物功能基因重点实验室前期野生大豆(Glycine soja)碱胁迫转录组数据,从中获得碱胁迫应答基因GsERF71,选用USER载体构建GsERF71植物超量表达载体,利用农杆菌介导的子叶节侵染法转化紫花苜蓿(Medicago savita),最... 基于东北农业大学农业生物功能基因重点实验室前期野生大豆(Glycine soja)碱胁迫转录组数据,从中获得碱胁迫应答基因GsERF71,选用USER载体构建GsERF71植物超量表达载体,利用农杆菌介导的子叶节侵染法转化紫花苜蓿(Medicago savita),最终得到69株抗性植株;其中13株通过PCR检测为阳性植株。Southern blot检测获得2株阳性植株,RT-PCR检测发现,这2个株系均为阳性,说明GsERF71已成功整合至苜蓿基因组并能在转录水平上有表达。对非转基因和转基因株系对野生型和转基因株系进行扦插扩繁,分别用0、100、150 mmol·L-1 NaHCO 3的营养液处理转基因植株14 d,进行耐碱性形态指标及生理指标的分析,包括株高、根长和脯氨酸含量、相对质膜透性、丙二醛叶绿素含量、过氧化物酶活性的分析。结果表明,非转基因植株的相对质膜透性和丙二醛含量显著高于转基因苜蓿(P<0.05),而叶绿素含量、株高、根长、脯氨酸含量以及过氧化物酶活性显著低于转基因苜蓿(P<0.05)。因此,GsERF71基因的超量表达提高了苜蓿的耐碱能力。 展开更多
关键词 肇东苜蓿 GsERF71 遗传转化 PCR RT-PCR SOUTHERN BLOT 耐碱性
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碱胁迫应答基因GsARHP的克隆及转基因紫花苜蓿的耐碱性分析 预览 被引量:2
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作者 陈冉冉 朱娉慧 +6 位作者 贾博为 宋雪薇 王子君 李佶娜 李强 丁晓东 朱延明 《草业学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期92-103,共12页
本研究基于实验室前期野生大豆碱胁迫转录组数据,筛选出一个碱胁迫下上调表达的假定蛋白基因,暂命名为GsARHP(alkali stress related hypothetical protein gene)。首先利用Real-time PCR方法验证了GsARHP基因受碱胁迫诱导表达。生物... 本研究基于实验室前期野生大豆碱胁迫转录组数据,筛选出一个碱胁迫下上调表达的假定蛋白基因,暂命名为GsARHP(alkali stress related hypothetical protein gene)。首先利用Real-time PCR方法验证了GsARHP基因受碱胁迫诱导表达。生物信息学分析表明,该基因编码一个含有130个氨基酸的亲水蛋白,含有信号肽但无跨膜结构域;构建了GsARHP植物超量表达载体,利用农杆菌介导的子叶节侵染法转化肇东紫花苜蓿,通过PCR,Southern Blot和RT-PCR方法检测获得了3个超量表达GsARHP基因的转基因株系,并对其耐碱性进行了分析。结果表明,在0,100和150mmol/L NaHCO3处理14d后,非转基因株系明显萎蔫、黄化甚至死亡,而转基因株系则长势良好;进一步分析其生理指标显示,相对质膜透性与丙二醛含量均显著低于非转基因株系(P〈0.01),而叶绿素含量与CAT活性显著高于非转基因株系(P〈0.01),说明GsARHP基因的超量表达可以增强紫花苜蓿的耐碱能力。 展开更多
关键词 野生大豆 GsARHP基因 碱胁迫 紫花苜蓿 遗传转化
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碱胁迫相关基因GsWRKY15的克隆及其转基因苜蓿的耐碱性分析 预览 被引量:3
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作者 朱娉慧 陈冉冉 +6 位作者 于洋 宋雪薇 李慧卿 杜建英 李强 丁晓东 朱延明 《作物学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1319-1327,共9页
WRKY蛋白属于锌指型转录调控因子,能够参与植物多种逆境响应。本研究利用前期野生大豆盐碱胁迫RNA-seq测序数据,从构建的碱胁迫基因调控网络中筛选并克隆到GsWRKY15基因。分析GsWRKY15在碱胁迫下野生大豆根中的表达模式,发现该基因受碱... WRKY蛋白属于锌指型转录调控因子,能够参与植物多种逆境响应。本研究利用前期野生大豆盐碱胁迫RNA-seq测序数据,从构建的碱胁迫基因调控网络中筛选并克隆到GsWRKY15基因。分析GsWRKY15在碱胁迫下野生大豆根中的表达模式,发现该基因受碱胁迫诱导显著上调表达,且在胁迫后1h表达量最高。分析GsWRKY15基因在野生大豆各组织中的表达特异性,发现该基因在各组织中均有表达,花中表达量最高。采用根癌农杆菌侵染苜蓿子叶节方法,将GsWRKY15转化肇东苜蓿,获得39株抗性植株。通过PCR、Southernblot和RT-PCR方法分析抗性植株,获得了超量表达GsWRKY15基因的转基因株系并对其进行了耐碱性分析。在150mmolL–1NaHCO3处理2周后转基因苜蓿生长状态良好,而非转基因苜蓿出现萎蔫、变黄,甚至死亡;非转基因苜蓿的相对质膜透性和丙二醛含量显著高于转基因苜蓿,而叶绿素含量显著低于转基因苜蓿;同时分析碱胁迫下转基因植株中胁迫相关基因的表达模式,发现H+-Ppase、NADP-ME、KIN1、RD29A基因的表达量高于非转基因苜蓿。结果表明GsWRKY15基因的超量表达能够显著增强苜蓿的耐碱能力。 展开更多
关键词 野生大豆 GsWRKY15 肇东苜蓿 农杆菌 耐碱性
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抗菌肽天蚕素B基因在纳豆芽胞杆菌中的表达 预览
5
作者 张双 骆超超 +1 位作者 武彩霞 高学军 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2016年第1期57-61,共5页
抗菌肽是生物体内经诱导产生的一类具有生物活性的小分子多肽。天蚕素B(Cecropin B)是最早从天蚕体内分离得到的一种热稳定的可溶性多肽,在已分离的众多抗菌肽中抗性较强。纳豆芽胞杆菌具有优良的益生特性,本研究选择枯草芽胞杆菌的... 抗菌肽是生物体内经诱导产生的一类具有生物活性的小分子多肽。天蚕素B(Cecropin B)是最早从天蚕体内分离得到的一种热稳定的可溶性多肽,在已分离的众多抗菌肽中抗性较强。纳豆芽胞杆菌具有优良的益生特性,本研究选择枯草芽胞杆菌的一种表达载体p HT43,将抗菌肽天蚕素B基因导入纳豆芽胞杆菌中,验证其在目的菌中是否能够表达和稳定传代以及进行抗菌活性分析。结果表明,天蚕素B基因在纳豆芽胞杆菌中表达,并能稳定传代,能够提高纳豆芽胞杆菌的抑菌活性,抗金黄色葡萄球菌的活性优于干酪乳杆菌和枯草芽胞杆菌。本研究为该重组菌作为饲料添加剂的应用提供了技术基础。本文首次报道天蚕素B在纳豆枯草芽胞杆菌中表达。 展开更多
关键词 天蚕素B 纳豆芽胞杆菌 表达 传代 抑菌
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大豆MYB转录因子的全基因组鉴定及生物信息学分析 被引量:3
6
作者 成舒飞 端木慧子 +3 位作者 陈超 刘艾林 肖佳雷 朱延明 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期52-57,共6页
MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,近年的研究表明其广泛参与多种生物学过程。MYB转录因子在其N端含有其特有的DNA结合基序(MYB-binding domain),能够与DNA分子大沟结合而调控基因表达。本研究通过生物信息学手段,在全... MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,近年的研究表明其广泛参与多种生物学过程。MYB转录因子在其N端含有其特有的DNA结合基序(MYB-binding domain),能够与DNA分子大沟结合而调控基因表达。本研究通过生物信息学手段,在全基因组水平上筛选鉴定出了304个大豆MYB类转录因子,并对其进行了分类和保守结构域分析;通过与拟南芥的MYB基因进行系统发生分析,将304个大豆MYB转录因子分为了22个亚类;染色体定位分析表明大豆MYB转录因子在所有染色体上都有分布,部分染色体间的MYB蛋白序列高度相似,表明此类基因在进化上具有相同的来源;利用野生大豆盐、碱胁迫下转录组数据,分析MYB基因的表达模式,发现部分MYB转录因子能够响应盐、碱胁迫的诱导,且在盐、碱胁迫下具有不同的表达模式。 展开更多
关键词 大豆 MYB 转录因子 生物信息学
耐碱GsCHX19基因的克隆及对苜蓿的遗传转化
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作者 杨浩 朱延明 《作物杂志》 CAS 北大核心 2016年第3期37-44,F0003共9页
基于实验室前期野生大豆G07256碱胁迫转录组数据,结合生物信息学方法筛选得到响应碱胁迫的cation/H+逆向转运蛋白基因Gs CHX19,克隆了Gs CHX19基因全长CDS编码序列并将其构建到p CAMBIA330035Su植物超量表达载体中。以肇东紫花苜蓿为... 基于实验室前期野生大豆G07256碱胁迫转录组数据,结合生物信息学方法筛选得到响应碱胁迫的cation/H+逆向转运蛋白基因Gs CHX19,克隆了Gs CHX19基因全长CDS编码序列并将其构建到p CAMBIA330035Su植物超量表达载体中。以肇东紫花苜蓿为受体材料,通过农杆菌介导法将重组的植物表达载体转化其子叶节,用含0.5mg/L草铵膦的筛选培养基进行筛选,获得20株抗性植株。采用PCR方法检测抗性植株中bar基因的表达,获得16株PCR阳性植株。对获得的PCR阳性植株进行RT-PCR及real-time PCR检测,鉴定共获得11株RT-PCR阳性植株,且证明Gs CHX19基因在各转基因植株中均有不同程度的表达。结果表明,Gs CHX19基因成功转化苜蓿,并且得到表达,该转基因植株将为耐盐碱转基因苜蓿新品种的培育提供重要的试验材料。 展开更多
关键词 Cation/H^+逆向转运蛋白 GsCHX19 野生大豆 苜蓿 遗传转化
抗鸡传染性法氏囊病病毒抗体Fab的表达及其中和活性的测定 预览
8
作者 张瑛杰 尹杰超 +5 位作者 李天鹤 周兵 徐鹏飞 荆燕 任桂萍 李德山 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期866-870,共5页
为表达抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体Fab并检测其中和活性,本研究将抗IBDV抗体的轻链(L)和重链片段(Fd)基因分别克隆于pET-27b(+)载体中,并转化于大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达。将L和Fd片段包涵体蛋白变性后等量... 为表达抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)抗体Fab并检测其中和活性,本研究将抗IBDV抗体的轻链(L)和重链片段(Fd)基因分别克隆于pET-27b(+)载体中,并转化于大肠杆菌Rosetta(DE3)进行诱导表达。将L和Fd片段包涵体蛋白变性后等量混合于复性液中,制备Fab并对其进行活性鉴定。结果显示L和Fd蛋白相对分子质量大小分别为25ku和28ku。Westemblot和ELISA检测结果表明,获得的抗体Fab大小约为50ku,并且与VP2蛋白和不同病毒株均具有特异性结合能力。体外中和试验结果表明,获得的IBDV抗体Fab具有中和活性,可以有效阻断IBDV(B87株)对鸡胚成纤维细胞(DF1)的感染。本实验获得的IBDV抗体Fab有望成为治疗IBD的候选生物制剂,为研制治疗IBD抗体制剂奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 FAB抗体 共复性 中和活性 治疗性抗体
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中国荷斯坦牛乳腺中β-酪蛋白的变化研究 预览
9
作者 甄贞 曲波 +1 位作者 姜毓君 李庆章 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期4-6,9共4页
对乳腺中β-酪蛋白在蛋白水平和基因水平的表达研究进行对比,系统阐述中国荷斯坦牛乳腺中β-酪蛋白的变化规律。结果表明:中国荷斯坦牛乳腺发育过程中,β-酪蛋白出现在妊娠中期,表达水平逐渐升高,至泌乳期达到最高,退化期逐渐下降。β... 对乳腺中β-酪蛋白在蛋白水平和基因水平的表达研究进行对比,系统阐述中国荷斯坦牛乳腺中β-酪蛋白的变化规律。结果表明:中国荷斯坦牛乳腺发育过程中,β-酪蛋白出现在妊娠中期,表达水平逐渐升高,至泌乳期达到最高,退化期逐渐下降。β-酪蛋白基因表达水平在青春期很低,到妊娠期迅速升高。整个泌乳期β-酪蛋白表达水平比较平稳,各时点无差异,而其基因表达水平却有显著差异。退化早期,β-酪蛋白及其基因表达水平开始逐渐下降,但仍与青春期有显著差异。 展开更多
关键词 中国荷斯坦牛 乳腺 激光扫描共聚焦显微技术 Β-酪蛋白
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开展生物仪器分析实验课教学实践的体会 被引量:1
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作者 甄贞 苍晶 +3 位作者 曲波 孙喆 李璐 高学军 《黑龙江畜牧兽医:下半月》 CAS 北大核心 2015年第5期144-145,共2页
生物仪器分析实验课系东北农业大学研究生的专业必修课,它的开设旨在培养和训练学生将科学理论应用到实践能力。文章将从五个方面论述生物仪器分析实验课的教学实践体会。
关键词 生物仪器分析实验课 大型仪器 教学理论 教学实践 教学方法
激光扫描共聚焦显微镜技术在教学中的应用
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作者 甄贞 张莉 +3 位作者 李庆章 高学军 崔英俊 林叶 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第8期265-267,共3页
激光扫描共聚焦显微镜技术是一种高精度的显微成像技术,它可以对荧光标记的细胞和组织进行形态学的定位和定量观察,是现今最先进的分子和细胞生物学研究技术。文章以东北农业大学生命科学学院生物仪器分析实验课中开设激光扫描共聚焦显... 激光扫描共聚焦显微镜技术是一种高精度的显微成像技术,它可以对荧光标记的细胞和组织进行形态学的定位和定量观察,是现今最先进的分子和细胞生物学研究技术。文章以东北农业大学生命科学学院生物仪器分析实验课中开设激光扫描共聚焦显微镜技术课为例,注重对课程内容、教学方法进行改革和探索,以获得良好的教学效果,提高教学质量。 展开更多
关键词 激光扫描共聚焦显微镜 实验教学 教学探讨 大型仪器 教学改革
转OsDREB3基因大豆外源基因拷贝数的确定及标准分子的构建 预览
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作者 孙喆 刘营 +2 位作者 张明辉 李璐 高学军 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期61-67,共7页
为建立抗逆转OsDREB3基因大豆快速稳定的品系特异性检测方法,本试验通过实时Real-time PCR方法,以大豆凝集素基因(lectin)作为内源参照基因,确定了外源基因OsDREB3在转OsDREB3基因大豆基因组中的拷贝数为单拷贝,为建立快速、有效的品... 为建立抗逆转OsDREB3基因大豆快速稳定的品系特异性检测方法,本试验通过实时Real-time PCR方法,以大豆凝集素基因(lectin)作为内源参照基因,确定了外源基因OsDREB3在转OsDREB3基因大豆基因组中的拷贝数为单拷贝,为建立快速、有效的品系特异性检测方法奠定基础.同时,在原有构建的含4种转基因大豆品系特异性序列的标准分子载体上又增加了转OsDREB3基因大豆品系特异性序列,新构建了含有5种转基因大豆品系特异性序列的标准分子及大豆内参照基因(lectin),已完全满足对现有国内覆盖面最大的5种转基因大豆同时、快速筛查检测工作的需要. 展开更多
关键词 转OsDREB3基因大豆 外源基因 拷贝数 标准分子
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小G蛋白Ran对奶牛乳腺上皮细胞mTOR和Jak2/Stat5信号通路的影响 被引量:1
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作者 吴迪 骆超超 +3 位作者 黄建国 刘静 高学军 刘玉芬 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1302-1306,共5页
为探讨小G蛋白Ran对β-酪蛋白合成的主要信号通路mTOR和Jak2/Stat5及其增殖的影响,本研究对Ran进行瞬时转染和稳定转染,Western blot检测细胞中mTOR、p-mTOR、Stat5和p-Stat5的表达;高压液相层析仪检测酪蛋白的分泌量;CASY细胞活力分析... 为探讨小G蛋白Ran对β-酪蛋白合成的主要信号通路mTOR和Jak2/Stat5及其增殖的影响,本研究对Ran进行瞬时转染和稳定转染,Western blot检测细胞中mTOR、p-mTOR、Stat5和p-Stat5的表达;高压液相层析仪检测酪蛋白的分泌量;CASY细胞活力分析仪分析细胞活力。结果显示,Ran过表达时,细胞活力显著增加(P〈0.01),细胞中mTOR、p-mTOR、Stat5和p-Stat5的表达均也显著增加(P〈0.01);表明Ran可能激活细胞中的mTOR通路和Jak2/Stat5通路,对乳腺上皮细胞的泌乳与增殖有正向调节作用。 展开更多
关键词 RAN 奶牛 乳腺上皮细胞 mTOR通路 Jak2/Stat5通路 乳蛋白
14-3-3γ蛋白协同mTOR信号通路影响奶牛乳腺上皮细胞生理功能
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作者 刘静 骆超超 +3 位作者 黄建国 吴迪 高学军 刘玉芬 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期32-39,共8页
14-3-3γ作为蛋白质与蛋白质之间的"桥梁蛋白",广泛参与细胞凋亡、细胞分裂、信号转导和蛋白质合成等生物体所有的重要生命活动的调节。以体外培养的荷斯坦奶牛(Vaccas)乳腺上皮细胞(dairy cow mammary gland epithelial cells,DCM... 14-3-3γ作为蛋白质与蛋白质之间的"桥梁蛋白",广泛参与细胞凋亡、细胞分裂、信号转导和蛋白质合成等生物体所有的重要生命活动的调节。以体外培养的荷斯坦奶牛(Vaccas)乳腺上皮细胞(dairy cow mammary gland epithelial cells,DCMECs)为模型,研究14-3-3γ对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂合成的影响。瞬时和稳定转染p GCMV/IRES/EGFP/14-3-3γ即14-3-3γ过表达的奶牛乳腺上皮细胞,应用CASY细胞活力分析仪分析细胞活力的变化,测定细胞中甘油三脂(triglyceride,TG)和β-酪蛋白(β-Casein,CSN2)的合成,并且通过Western blot检测DCMECs中m TOR(mammalian target of rapamycin,m TOR)和p-m TOR的表达量,探究14-3-3γ影响奶牛乳腺上皮细胞生理功能的机制。结果显示,瞬时和稳定转染p GCMV/IRES/EGFP/14-3-3γ的奶牛乳腺上皮细胞相对正常培养的奶牛乳腺上皮细胞,细胞活力极显著增强(P〈0.01),CSN2和TG表达量极显著增加(P〈0.01),同时m TOR和p-m TOR的表达量也显著增加(P〈0.01)。研究结果表明14-3-3γ参与泌乳关键信号通路即m TOR信号通路,能够增强乳腺上皮细胞活力,促进奶牛乳腺上皮细胞CSN2和TG的合成,丰富了奶牛泌乳信号通路,为乳品质研究提供了新的理论依据。 展开更多
关键词 14-3-3γ 奶牛 乳腺上皮细胞 MTOR 信号通路
大豆GmUGD基因家族生物信息学分析 预览 被引量:2
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作者 朱延明 朱毅 +3 位作者 端木慧子 肖佳雷 于洋 刘艾林 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期23-29,共7页
尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(UGD)是多糖合成中的一个关键酶,广泛参与植物生长发育与非生物胁迫响应过程。采用生物信息学方法,在全基因组水平预测出10个大豆Gm UGD基因;序列分析结果显示,Gm UGD基因均具有UDP-葡萄糖/GDP-甘露糖脱氢酶家... 尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(UGD)是多糖合成中的一个关键酶,广泛参与植物生长发育与非生物胁迫响应过程。采用生物信息学方法,在全基因组水平预测出10个大豆Gm UGD基因;序列分析结果显示,Gm UGD基因均具有UDP-葡萄糖/GDP-甘露糖脱氢酶家族的3个典型结构域;基因复制分析表明,80%Gm UGD基因存在复制事件;系统发生分析结果显示,Gm UGD基因分为三类,分类结果与基因复制分析结果基本吻合;基于Uni Gene数据库与GEO数据库的表达模式分析显示,根中Gm UGD基因的ESTs最多,上胚轴中最少;另外,Gm UGD基因能够响应盐碱胁迫诱导,在大豆根和叶中表达模式不同。结果可为进一步研究大豆Gm UGD基因功能提供理论依据。 展开更多
关键词 GmUGD基因 大豆 生物信息学 序列分析 表达分析
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大豆CML家族基因的生物信息学分析 被引量:1
16
作者 陈超 端木慧子 +3 位作者 朱丹 刘艾林 肖佳雷 朱延明 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期957-963,共7页
CMLs蛋白是一类具有Ca2+结合的EF-hand保守结构域蛋白,广泛参与钙依赖的信号传导途径,在植物生长发育及生物胁迫与非生物胁迫响应中起着重要的作用。通过NCBI和植物基因组注释数据库等筛选并获得了68个大豆GmCML蛋白;分析了所有蛋白的... CMLs蛋白是一类具有Ca2+结合的EF-hand保守结构域蛋白,广泛参与钙依赖的信号传导途径,在植物生长发育及生物胁迫与非生物胁迫响应中起着重要的作用。通过NCBI和植物基因组注释数据库等筛选并获得了68个大豆GmCML蛋白;分析了所有蛋白的基本特性;通过与拟南芥CMLs基因的进化树分析表明,GmCML家族基因属于8个亚类;对GmCML家族基因进行了染色体定位与重复基因进化关系分析,发现其具有较高的进化速率;序列比对发现GmCML类蛋白含有2~4个保守的EF-hand结构域;利用芯片数据对野生大豆在碱胁迫下的叶和根中的CMLs基因表达模式进行了分析,得到26个GsCML基因在碱胁迫下有显著的差异表达,且在根和叶中的差异表达模式不同,表明这些基因参与植物碱胁迫应答,且具组织表达特异性。 展开更多
关键词 大豆 CMLs EF-HAND 生物信息学 进化分析
中国荷斯坦牛乳腺不同发育时期乳腺细胞内大分子成分变化研究 预览 被引量:3
17
作者 甄贞 曲波 +1 位作者 姜毓君 李庆章 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期71-77,共7页
文章采用PAS法、油红O染色法、茚三酮-Schiff法等经典组织化学方法,结合生物显微图像分析,对中国荷斯坦牛乳腺不同发育时期乳腺内大分子成分变化进行研究。结果表明,中国荷斯坦牛乳腺发育过程中,青春期、妊娠初中期和退化期乳腺中... 文章采用PAS法、油红O染色法、茚三酮-Schiff法等经典组织化学方法,结合生物显微图像分析,对中国荷斯坦牛乳腺不同发育时期乳腺内大分子成分变化进行研究。结果表明,中国荷斯坦牛乳腺发育过程中,青春期、妊娠初中期和退化期乳腺中的糖类以糖蛋白和蛋白聚糖为主;妊娠晚期和泌乳期以乳糖为主。乳腺中的蛋白质以糖蛋白和蛋白聚糖为主;妊娠中晚期和泌乳期以乳蛋白为主。乳腺中的脂类主要为富含三酰甘油的脂肪组织,在不同发育时期呈现不同的生理状态。 展开更多
关键词 中国荷斯坦牛 乳腺 发育 大分子成分
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金黄色葡萄球菌对嗜酸乳杆菌抑菌活性的影响 预览 被引量:2
18
作者 刘营 于微 +3 位作者 孙喆 张明辉 高学军 敖金霞 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期628-631,共4页
为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)诱导嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)抑菌活性作用,本实验利用牛津杯法、高效液相色谱法以及real-time PCR方法,检测L.acidophilus与不同比例的S.aureus混合培养接种处理后培养液抑菌圈大小变化、乳酸含... 为研究金黄色葡萄球菌(S.aureus)诱导嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)抑菌活性作用,本实验利用牛津杯法、高效液相色谱法以及real-time PCR方法,检测L.acidophilus与不同比例的S.aureus混合培养接种处理后培养液抑菌圈大小变化、乳酸含量、乳酸脱氢酶活力变化以及L.acidophilus的ldh和glyA基因表达量的变化。结果表明,L.acidophilus与1%S.aureus混合培养12 h后与10%混合培养组及L.acidophilus单独培养对照组相比,抑菌圈直径增加最明显,乳酸含量和乳酸脱氢酶活力增加显著,ldh基因和glyA基因表达量达到峰值,表明与1%S.aureus混合培养具有诱导L.acidophilus产生最强抑菌作用。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 金黄色葡萄球菌 抑菌活性
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OsDREB3大豆品系特异性巢式PCR及多重PCR检测方法的建立 预览 被引量:2
19
作者 刘营 张明辉 +2 位作者 甄贞 李璐 高学军 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期7-11,共5页
为建立转基因大豆-OsDREB3巢式PCR检测方法和转基因大豆多重PCR检测方法,选择转基因大豆GTS40—3—2、A2704—12及OsDREB3DNA作为多重PCR方法的待检测基因模板,成功实现3种转基因大豆、4组不同片段同时扩增和检测。结果表明,可视性... 为建立转基因大豆-OsDREB3巢式PCR检测方法和转基因大豆多重PCR检测方法,选择转基因大豆GTS40—3—2、A2704—12及OsDREB3DNA作为多重PCR方法的待检测基因模板,成功实现3种转基因大豆、4组不同片段同时扩增和检测。结果表明,可视性好,检测下限达0.1%。转基因大豆OsDREB3巢PCR方法所用引物满足品系特异定性检测方法要求,其检测灵敏度达0.005%。 展开更多
关键词 转基因大豆 OsDREB3 品系特异性 巢式PCR 多重PCR
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转cry6Aa2m基因大豆遗传稳定性分析及农艺性状调查 被引量:2
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作者 杨秋姣 孙晓丽 +4 位作者 孙明哲 陈超 赵超越 纪巍 朱延明 《大豆科学》 CSCD 北大核心 2014年第5期629-633,共5页
以前期获得的转抗虫基因cry6Aa2m大豆T4代植株4个株系为材料,采用PCR及RT-PCR检测方法进行了外源基因遗传稳定性及表达情况分析。并以受体品种(东农50)为对照,进行了产量性状、形态性状、品质性状及环境适应能力等农艺性状的调查。结... 以前期获得的转抗虫基因cry6Aa2m大豆T4代植株4个株系为材料,采用PCR及RT-PCR检测方法进行了外源基因遗传稳定性及表达情况分析。并以受体品种(东农50)为对照,进行了产量性状、形态性状、品质性状及环境适应能力等农艺性状的调查。结果表明:cry6Aa2m基因能够在T4代转基因植株中遗传并表达;在产量性状上,除转基因株系DpC6b7单株结荚数显著低于对照外,其余3个株系的百粒重和单株结荚数与对照相比无显著差异;在形态性状上,除转基因株系DpC6b37株高显著低于对照外,其余株系的生育期、结荚习性、花色、叶形与对照也均无显著差异;在品质性状上,与对照相比,DpC6b37粗蛋白含量高2%,粗脂肪含量高5%。株系DpC6b7则粗蛋白含量高4%,粗脂肪含量低1%;在环境适应能力方面,转基因株系种子萌发率、落粒率、种子休眠期、杂草竞争性与对照均无显著差异。综合结果表明cry6Aa2m基因能够稳定遗传并表达,其中株系DpC6b4和DpC6b8所调查的农艺性状均不劣于受体品种。 展开更多
关键词 大豆 抗虫基因cry6Aa2m 遗传稳定性 农艺性状
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