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埃博拉病毒抗体间接血凝检测方法的建立
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作者 张颖 曹增国 +13 位作者 吴芳芳 李国华 李恩涛 焦翠翠 迟航 金宏丽 韩秋雪 张胜男 王化磊 冯娜 高玉伟 赵永坤 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期688-694,共7页
以纯化后的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)糖蛋白(GP)作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,进行最佳反应条件优化,建立间接血凝抗体检测方法。以EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F(ab’)_2为待检样品进行检测,并将检测结果与假病毒... 以纯化后的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)糖蛋白(GP)作为抗原,致敏醛化的绵羊红细胞,进行最佳反应条件优化,建立间接血凝抗体检测方法。以EBOV高免马血清、纯化的IgG和精制免疫球蛋白F(ab’)_2为待检样品进行检测,并将检测结果与假病毒中和试验检测结果相比较。结果显示,该方法可特异性检测EBOV抗体,与马尔堡病毒、裂谷热病毒等的阳性血清均不发生反应;与假病毒中和试验测得的抗体效价增长规律相一致。结果表明,本试验成功建立了EBOV抗体间接血凝检测方法,该方法安全、简便、快捷,为EBOV疫苗免疫后的效果评价提供了又一新的检测方法。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 糖蛋白(GP) 间接血凝试验 抗体检测
裂谷热病毒eGn蛋白的制备及免疫原性验证
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作者 韩秋雪 黄培 +11 位作者 毕津豪 金宏丽 赵永坤 焦翠翠 张胜男 徐胜男 张颖 曹增国 迟航 王化磊 杨松涛 夏咸柱 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1506-1512,共7页
通过PCR扩增裂谷热病毒(RVFV) Gn蛋白胞外区(eGn)基因,连入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-RVFV-eGn。将重组质粒转化至感受态BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经HisTrapTMFF蛋白纯化柱纯化目的蛋白。将目的蛋白免疫BALB/c... 通过PCR扩增裂谷热病毒(RVFV) Gn蛋白胞外区(eGn)基因,连入原核表达载体pET-30a(+),构建重组质粒pET-30a(+)-RVFV-eGn。将重组质粒转化至感受态BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,经HisTrapTMFF蛋白纯化柱纯化目的蛋白。将目的蛋白免疫BALB/c小鼠,分离小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,筛选分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体,免疫荧光鉴定制备的单克隆抗体特性。结果显示,PCR扩增出1 287 bp的目的基因;构建的重组质粒转化BL21细胞后可有效表达目的蛋白,确定最佳表达条件为30℃,0.8 mmol/L IPTG诱导5 h,目的蛋白以包涵体形式表达;纯化后目的蛋白纯度为94.136%;制备的单克隆抗体可特异性识别哺乳动物细胞表达的Gn蛋白,表明RVFV eGn蛋白具有良好的免疫原性。研究结果为裂谷热新型疫苗和快速诊断试剂的研制奠定基础。 展开更多
关键词 裂谷热病毒 Gn胞外区(eGn) 单克隆抗体
马抗中东呼吸综合征冠状病毒特异性F(ab’)2的制备
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作者 邱泊宁 胡星星 +8 位作者 闫飞虎 王翀 崔健男 盖微微 曹增国 王化磊 赵永坤 杨松涛 夏咸柱 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期173-180,共8页
目的采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab’)2。方法以经MERS-Co V病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高... 目的采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab’)2。方法以经MERS-Co V病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,原核表达的MERS-CoV刺突蛋白S受体结合域(S-receptor binding domain,S-RBD)为抗原蛋白制备免疫亲和柱,提取制备抗原特异性IgG或F(ab’)2。间接ELISA法检测各样品的活性,MERS假病毒中和试验检测样品的中和活性,BCA法测定样品的浓度,并计算收率。结果所制备的特异性IgG与特异性F(ab’)2的纯度分别为90. 1%和92. 8%,收率分别为8. 7%和3. 07%;在相同的浓度下,所制备的特异性IgG或F(ab’)2的活性和中和活性均高于对照组中的血清总Ig G或总F(ab’)2。结论成功制备了马抗MERS-CoV特异性IgG或F(ab’)2,为建立更加安全与高效的抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)2制备工艺奠定了基础。 展开更多
关键词 中东呼吸综合征 冠状病毒 病毒样颗粒 免疫亲和层析 免疫球蛋白 F(ab’)2
2018年云南省思茅地区猪场蚊PCV2检测及ORF2基因遗传进化分析
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作者 李金凤 哈卓 +7 位作者 李成辉 赵冠宇 李卓昕 张涵 郭影成 鲁会军 张英 金宁一 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第7期746-749,754共5页
目的了解云南省思茅地区猪场蚊携带猪圆环病毒2型(PCV2)情况及蚊源PCV2的遗传进化特征。 方法采集云南省思茅地区3个猪场周围蚊标本94份并检测PCV2携带情况,PCR扩增ORF2基因,对得到的ORF2基因进行同源性、系统进化树分析和抗原位点比对... 目的了解云南省思茅地区猪场蚊携带猪圆环病毒2型(PCV2)情况及蚊源PCV2的遗传进化特征。 方法采集云南省思茅地区3个猪场周围蚊标本94份并检测PCV2携带情况,PCR扩增ORF2基因,对得到的ORF2基因进行同源性、系统进化树分析和抗原位点比对分析。 结果PCR检测蚊PCV2阳性率为15.96%(15/94),得到的14个ORF2序列之间的核苷酸同源性为89.5%~99.9%,对应氨基酸同源性为86.2%~99.6%;与NCBI GenBank收录的22个参考ORF2序列的核苷酸同源性为79.9%~99.9%,对应的氨基酸同源性为79.5%~99.6%。系统进化树分析PCV2a亚型1个,PCV2b亚型5个,PCV2d亚型8个。抗原位点比对分析显示,PCV2Cap蛋白氨基酸变异位点主要位于50-70aa,131-140aa,200-220aa 3个区段。 结论云南省猪场蚊PCV2携带率较高,主要毒株为PCV2b和PCV2d亚型,且以PCV2d亚型较多,与我国当前猪感染PCV病毒型群体内流行情况相符。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 ORF2基因 同源性分析 遗传进化分析
广西地区猪圆环病毒2型和猪圆环病毒3型基因型监测及遗传进化分析
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作者 李金凤 哈卓 +7 位作者 辛佳亮 李卓昕 张涵 郭影成 郑敏 那少龙 鲁会军 金宁一 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第5期10-15,22共7页
为了明确猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV-2)和猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type3,PCV-3)在广西地区的分子流行病学情况,试验通过PCR方法对2017年来自广西不同地区的80份猪肺脏样品进行PCV-2和PCV-3核酸检测,并对PCV-... 为了明确猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2,PCV-2)和猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type3,PCV-3)在广西地区的分子流行病学情况,试验通过PCR方法对2017年来自广西不同地区的80份猪肺脏样品进行PCV-2和PCV-3核酸检测,并对PCV-2和PCV-3的阳性样品进行ORF2基因的扩增和测序,同时利用生物信息学软件DNAStar和MEGA6.06对PCV-2和PCV-3的ORF2基因进行同源性分析和构建遗传进化树。结果表明:2017年广西地区PCV-2和PCV-3的总感染率分别为43.8%(35/80)和33.8%(27/80),PCV-2和PCV-3的共感染率为16.3%(13/80)。试验获得的19个PCV-2ORF2基因序列之间的核昔酸同源性为93.6%-99.9%,对应氨基酸同源性为93.1%~100%;19个PCV-2ORF2基因序列与国内外参考毒株ORF2基因序列的核昔酸同源性为82.8%-99.9%,对应氨基酸同源性为83.3%-99.6%。试验获得的2个PCV-3ORF2基因序列之间的核昔酸同源性为99.8%,对应氨基酸同源性为100%;2个PCV-3ORF2基因序列与国内外参考毒株ORF2基因序列的核昔酸同源性为97.7%-99.8%,对应氨基酸同源性为96.2%~100%。获得的19个PCV-2ORF-2基因序列中,12个为PCV-2b亚型,7个为PCV-2d亚型;获得的2个PCV-3ORF2基因序列为PCV-3a亚型,与丹麦和中国湖南分离得到的PCV-3亲缘关系较近。说明PCV-2和PCV-3在广西地区猪群中感染率很高,PCV-2感染主要以PCV-2b亚型为主.PCV-3之间高度保守,分布无地域性规律。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 猪圆环病毒3型 ORF2基因 遗传进化分析 同源性分析 分子流行病学
基于昆虫细胞表达的鹅细小病毒VP3蛋白的VP3-ELISA诊断方法的建立
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作者 陈雪明 张树梅 +6 位作者 林委卫 孙悦 陈秀红 呼喝巴特儿 刘明 葛明 张云 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1112-1118,共7页
将鹅细小病毒EP22株VP3基因克隆到杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTB中,酶切鉴定及测序筛选出阳性重组转座载体pFastBac-VP3,转化至含有杆状病毒穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-VP3,在脂... 将鹅细小病毒EP22株VP3基因克隆到杆状病毒转移载体pFast-Bac-HTB中,酶切鉴定及测序筛选出阳性重组转座载体pFastBac-VP3,转化至含有杆状病毒穿梭载体Bacmid的DH10Bac感受态细胞,构建杆状病毒表达载体,获得重组转座子rBacmid-VP3,在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得到含鹅细小病毒VP3基因的重组杆状病毒rBV-VP3。经SDS-PAGE、Western-blot以及免疫组化试验证实,VP3基因在Sf9细胞中成功表达。利用表达的VP3蛋白建立VP3-ELISA血清学检测方法并对130份鹅血清样品进行检测,以中和试验作为金标准进行对比试验。结果显示,VP3-ELISA检测方法的特异性为100%,敏感性为96.2%,并且VP3-ELISA与其他鹅病阳性血清间不出现交叉反应性。上述研究结果表明,本研究建立的VP3-ELISA是一种特异的、灵敏的血清学诊断方法。 展开更多
关键词 鹅细小病毒 VP3基因 杆状病毒表达 VP3-ELISA
影响伊犁昭苏地区肠胃蝇产卵因素的研究 预览
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作者 阎晓菲 马玉辉 +5 位作者 任晓艺 童婷 李新龙 李海 巴音查汗 刘善辉 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第2期55-60,共6页
为了解影响伊犁昭苏地区肠胃蝇(Gastrophilus intestinalis,G.intestinalis)产卵因素,采集3个马场的伊犁马体表附着的虫卵,进行形态学鉴定,并采用SPSS19.0统计软件分析产卵量与马匹体表部位、被毛颜色、年龄、海拔之间的关系。结果显示... 为了解影响伊犁昭苏地区肠胃蝇(Gastrophilus intestinalis,G.intestinalis)产卵因素,采集3个马场的伊犁马体表附着的虫卵,进行形态学鉴定,并采用SPSS19.0统计软件分析产卵量与马匹体表部位、被毛颜色、年龄、海拔之间的关系。结果显示,虫卵前端具有斜的卵盖,末端黏附于马毛上,平均大小为131.8μm×38.5μm,形状指数3.42,鉴定为肠胃蝇虫卵;以鬃毛、肩胛部、前腿部位,黑骝和红骝颜色的被毛,中年期的马匹,海拔最高的马场中的肠胃蝇产卵量最多。本研究结果表明马匹体表部位、被毛颜色、年龄、海拔对肠胃蝇的产卵有一定的影响,该结果为今后探讨马胃蝇产卵与其流行病学之间的关系提供了前提和基础。 展开更多
关键词 肠胃蝇 产卵量 影响因素
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寨卡病毒DNA疫苗pVAX-ZikaME构建及新型佐剂的筛选
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作者 刘云霞 田明尧 +5 位作者 哈卓 曹亮 郭丹丹 孙文超 鲁会军 金宁一 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1135-1139,共5页
选用1种递送载体与4种免疫刺激增强剂混合,与赛卡病毒DNA疫苗pVAX-ZikaME联合免疫BALB/c小鼠,观察新型佐剂对DNA疫苗抗原的免疫应答能力。首先构建表达ZikaME蛋白的DNA疫苗,然后将重组质粒转染至HEK293细胞,采用Western blot检测目的蛋... 选用1种递送载体与4种免疫刺激增强剂混合,与赛卡病毒DNA疫苗pVAX-ZikaME联合免疫BALB/c小鼠,观察新型佐剂对DNA疫苗抗原的免疫应答能力。首先构建表达ZikaME蛋白的DNA疫苗,然后将重组质粒转染至HEK293细胞,采用Western blot检测目的蛋白的表达。用配制的佐剂与重组的DNA疫苗联合免疫BALB/c小鼠,通过细胞亚群检测、淋巴细胞增殖试验和特异性抗体检测验证新型佐剂的增强免疫效果。结果显示,Western blot检测所构建的DNA疫苗表达68 000目的蛋白。用重组疫苗辅以佐剂免疫小鼠,免疫35 d时淋巴细胞增殖刺激组刺激指数、细胞亚群分化、特异性抗体水平均高于对照PBS组(P<0.05)。结果表明,DNA疫苗pVAX-ZikaME辅以新型佐剂免疫小鼠可增强机体对该疫苗的免疫应答能力。 展开更多
关键词 新型佐剂 寨卡病毒 ME蛋白 DNA疫苗
2012-2017年辽宁省猪流感血清学调查分析 预览
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作者 兰德松 魏澍 侯振中 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期91-95,共5页
目的 摸清近年来辽宁省规模猪场猪流感流行状况。方法 本研究于2012年10月至2017年3月从辽宁省规模化猪场中采集猪血清样品共计2161份,采用血凝抑制试验(HI)进行了欧亚类禽型H1N1(EAH1N1)、2009甲型H1N1(pdm/09H1N1)、H3N2SIV和H7N9亚... 目的 摸清近年来辽宁省规模猪场猪流感流行状况。方法 本研究于2012年10月至2017年3月从辽宁省规模化猪场中采集猪血清样品共计2161份,采用血凝抑制试验(HI)进行了欧亚类禽型H1N1(EAH1N1)、2009甲型H1N1(pdm/09H1N1)、H3N2SIV和H7N9亚型流感病毒抗体检测。结果 2012-2017年期间,EAH1N1年平均抗体阳性率分别为29.00%、49.62%、42.50%、3.64%、1.46%、13.89%;pdm/09H1N1年平均抗体阳性率分别为6.49%、12.69%、18.00%、64.24%、39.79%、35.56%;H3N2年平均抗体阳性率分别为0.87%、1.54%、0、0、0、0;H7N9亚型抗体未检测到;2012-2014年期间辽宁省猪群中EAH1N1SIV为优势亚型,2015-2016年期间EAH1N1SIV抗体阳性率明显下降,最低至1.46%,2017年EAH1N1SIV抗体阳性率又显著上升至13.89%;而2012-2015年期间辽宁省猪群中pdm/09H1N1SIV抗体阳性率逐年升高,2015年达到最高值至64.55%,2015-2017年期间辽宁省猪群中SIVpdm/09H1N1为优势亚型;SIV感染表现出一定的区域性分布特征,辽东、辽南和辽北地区阳性率较辽西和辽中地区高。结论 检测结果表明,2012-2017年间辽宁省猪群中EAH1N1和pdm/09H1N1亚型SIV感染较为普遍,H3N2亚型流感抗体阳性率较低,未检测到H7N9流感病毒抗体。 展开更多
关键词 猪流感 血清学调查 血凝抑制试验
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感染大肠杆菌F17湖羊羔羊脾脏中差异circRNA分析 预览
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作者 邹双霞 金澄艳 +11 位作者 鲍建军 王悦 陈炜昊 吴天弋 王利宏 吕晓阳 高雯 王步忠 朱国强 戴国俊 师东方 孙伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1090-1101,共12页
【背景】羊大肠杆菌病是一种以剧烈腹泻和败血症为特征的急性传染病,是规模化羊场最为常见高发的细菌性疾病之一,尤其是初生羔羊易被产肠毒素大肠杆菌(ETEC)感染,引起羔羊腹泻,又叫羔羊白痢,使养殖场遭受严重的经济损失。而传统的抗生... 【背景】羊大肠杆菌病是一种以剧烈腹泻和败血症为特征的急性传染病,是规模化羊场最为常见高发的细菌性疾病之一,尤其是初生羔羊易被产肠毒素大肠杆菌(ETEC)感染,引起羔羊腹泻,又叫羔羊白痢,使养殖场遭受严重的经济损失。而传统的抗生素治疗方案存在诸多缺陷。【目的】本研究通过让湖羊羔羊口服大肠杆菌F17菌株获得不腹泻和腹泻的羔羊个体,筛选出服用大肠杆菌F17菌毛后不腹泻与腹泻型个体中差异表达的circRNA,进而探究circRNA在绵羊抗腹泻中的作用,从而发现与抗大肠杆菌病性状相关的候选基因。从circRNA层面上,加深对绵羊拮抗大肠杆菌F17菌株的认识,确定绵羊拮抗大肠杆菌F17菌株的功能基因。【方法】用CIRI软件从头预测circRNA,利用RNA-seq技术,首次筛选出感染大肠杆菌F17菌株后不腹泻与腹泻型羔羊个体脾脏中差异表达的(DE)circRNA,对差异表达转录本进行GO富集分析,结合GO注释结果对其功能进行描述。统计每个GO条目中所包括的差异转录本个数,并用Fisher’s exact test计算每个GO条目中差异转录本富集的显著性。然后随机选择6个DE circRNA,利用q-PCR分别验证这6个DE circRNA在不腹泻和腹泻组羔羊脾脏内的相对表达水平,进而利用Miranda软件来预测与miRNA结合的circRNA以及miRNA的靶基因,根据miRNA靶基因的功能注释来阐明此部分circRNA的功能,分析circRNA-miRNA-mRNA相互作用,最后用q-PCR验证circRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平。【结果】绘制参考序列后,鉴定出已知的7 730个circRNA,DE circRNA与GO数据库进行比对,发现一共有60条circRNA被注释和分类到297个功能亚类中。利用RNA-seq在不腹泻和腹泻羔羊脾脏中筛选出60个差异表达的(DE) circRNA,其中31个上调和29个下调,用q-PCR验证随机选择的6个DE circRNA在不腹泻组和腹泻组羔羊体内的相对表达水平,发现与RNA-seq结� 展开更多
关键词 大肠杆菌F17 circRNA 湖羊 circRNA-miRNA-mRNA互作
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长春狐狸、貉和家兔养殖场十二指肠贾第虫基因型分析 预览
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作者 于利利 李显赫 +4 位作者 李建华 宫鹏涛 杨举 李巍 张西臣 《动物医学进展》 北大核心 2019年第2期84-86,共3页
为了解长春地区狐狸、貉和家兔养殖场的十二指肠贾第虫感染情况,基于十二指肠贾第虫GDH基因位点分别设计2对引物,对养殖场的120份狐狸粪便样品、60份貉粪便样品和148份家兔粪便样品十二指肠贾第虫进行检测和基因型分析。结果表明,在来... 为了解长春地区狐狸、貉和家兔养殖场的十二指肠贾第虫感染情况,基于十二指肠贾第虫GDH基因位点分别设计2对引物,对养殖场的120份狐狸粪便样品、60份貉粪便样品和148份家兔粪便样品十二指肠贾第虫进行检测和基因型分析。结果表明,在来自狐狸的粪便中检测出阳性样品44份,阳性率为36.7%,基因型均为基因亚型AI;6份貉阳性样品,阳性率为10.0%,基因型均为集聚体D;41份家兔阳性样品,阳性率为27.7%,其中4份是集聚体B,其他是集聚体A中的基因亚型AI。结果发现在长春地区貉感染贾第虫集聚体D,长春地区的狐狸感染人兽共患型的集聚体A,家兔感染人兽共患型的集聚体A和B。研究结果为该地区十二指肠贾第虫病的防控提供了参考。 展开更多
关键词 狐狸 家兔 十二指肠贾第虫 基因型
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辽宁地区猪常见传染病流行病学调查及遗传进化分析 预览
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作者 关淼 顾贵波 +4 位作者 杨本勇 赵培 闫明 刘耀川 魏萍 《山东农业大学学报:自然科学版》 北大核心 2019年第2期308-314,共7页
为研究猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)、猪伪狂犬(Porcine pseudorabies,PR)、猪圆环病毒病(Porcine circovirusvirus disease,PCVD)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly pathogenic-Porcine reproductive and respiratory syndrome,... 为研究猪瘟(Classical Swine Fever,CSF)、猪伪狂犬(Porcine pseudorabies,PR)、猪圆环病毒病(Porcine circovirusvirus disease,PCVD)、高致病性猪繁殖与呼吸综合征(Highly pathogenic-Porcine reproductive and respiratory syndrome,HP-PRRS)在辽宁省内的发病情况及致病毒株变异情况,本研究对辽宁地区自2012年至2016年五年内4种猪常见流行病进行流行病学调查,并对扩增阳性样品的主要致病基因进行遗传进化分析。在9600份样品中,CSFV(ClassicalSwine Fever virus)阳性18例、PRV阳性12例、PCV2阳性10例、HP-PRRSV阳性5例。选取CSFV代表毒株命名为LN01,LN02,LN03;PRV代表毒株LN04,LN05;PCV代表毒株LN06,LN07;HP-PRRSV代表毒株LN08,分别对其进行遗传进化分析。结果表明,CSFV代表株中,LN01与LN02的同源性较高,二者与GD株亲缘关系最近,同源性为99%以上;LN03株与HD株同源性较高为99.5%;PRV代表株中LN04与PV株的亲缘关系最近,同源率为99.4%;LN05与PD株亲缘关系最近,同源率为98.5%;PCV2代表株中LN06与GD株的亲缘关系最近,同源率为99.5%,与HQ 395021亲缘关系最远,同源率为88.4%,LN07与BF株的亲缘关系最近,同源率99.1%;HP-PRRSV代表毒株LN08与参考株GD-SS株的亲缘关系最近,同源率为99.8%。 展开更多
关键词 CSF PR PCVD HP-PRRS 流行病学调查 遗传进化分析
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H5N1禽流感病毒感染雏鸭免疫器官TGF-β1 mRNA转录及病理损伤的变化
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作者 赵晨辉 陈威 +5 位作者 刘超男 高雪丽 吕晓萍 赵良友 姜南 郑世民 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期99-105,共7页
为了探索鹅源H5N1禽流感病毒(AIV)感染对雏鸭胸腺、脾脏、法氏囊的病理损伤及对TGF-β1 mRNA转录的影响,将120只21日龄雏鸭随机分为AIV感染组(I)和对照组(C),应用RT-PCR和免疫组织化学技术结合病理学检测方法,对上述免疫器官的细胞凋亡... 为了探索鹅源H5N1禽流感病毒(AIV)感染对雏鸭胸腺、脾脏、法氏囊的病理损伤及对TGF-β1 mRNA转录的影响,将120只21日龄雏鸭随机分为AIV感染组(I)和对照组(C),应用RT-PCR和免疫组织化学技术结合病理学检测方法,对上述免疫器官的细胞凋亡数量、病理形态变化以及TGF-β1 mRNA转录进行了系统研究。结果显示,雏鸭感染AIV后第3~5天,免疫器官的病理损伤最为明显,脾脏、胸腺和法氏囊细胞凋亡数量分别在病毒感染后第1~5天、第3~5天显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于对照雏鸭。TGF-β1 mRNA转录均在病毒感染后第1~5天较对照雏鸭明显(P<0.05)升高。上述研究结果表明,鹅源H5N1亚型AIV感染雏鸭后的初期,不但免疫器官第的淋巴细胞凋亡明显,而且TGF-β1 mRNA转录也明显升高;鹅源H5N1亚型AIV既是引起感染雏鸭免疫功能下降、呈现免疫抑制的主要因素,也是导致病毒感染雏鸭死亡的主要原因之一。 展开更多
关键词 雏鸭 鹅源H5N1禽流感病毒 免疫器官 细胞凋亡 转化生长因子-β1 MRNA转录
板蓝根超微粉对大鼠免疫功能调节作用的研究 预览
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作者 姜晓文 王雪微 +3 位作者 于文会 张欣 侯耀杰 郝敬友 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期2159-2166,共8页
为研究板蓝根经超微粉碎后对大鼠免疫功能调节的作用影响,利用环磷酰胺构建大鼠免疫低下模型,将80只SD大鼠随机分为4组,即模型组、普通粉组、超微粉组及空白对照组,每组20只。40mg/kg环磷酰胺腹腔注射5d制造免疫抑制大鼠模型,第6天开始... 为研究板蓝根经超微粉碎后对大鼠免疫功能调节的作用影响,利用环磷酰胺构建大鼠免疫低下模型,将80只SD大鼠随机分为4组,即模型组、普通粉组、超微粉组及空白对照组,每组20只。40mg/kg环磷酰胺腹腔注射5d制造免疫抑制大鼠模型,第6天开始给药,除空白组、模型组灌服生理盐水外,其他组给药5g/kg。第7、14天采集血样及大鼠肝脏、脾脏、胸腺组织,测定免疫器官指数、白细胞数量、C3b受体花环形成率(C3b-R)、红细胞免疫复合物花环形成率(ICR)、吞噬百分率、吞噬指数等指标,实时荧光定量PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)mRNA转录水平,Westernblotting法检测TNF-ɑ和IL-2蛋白表达水平。结果显示,模型组大鼠白细胞数量、体重、胸腺和脾脏免疫器官指数较空白对照组均显著降低(P<0.05)。第14天时,超微粉组巨噬细胞吞噬百分率达到54.75%,吞噬指数为0.58;C3b-R为9.44%,显著高于普通粉组(8.97%)(P<0.05),超微粉组ICR为6.09%,低于普通粉组(6.33%)(P>0.05)。与普通粉组相比,第14天板蓝根超微粉组肝脏中TNF-α、IL-2mRNA转录水平和蛋白水平的表达提高。综上所述,板蓝根超微粉和普通粉均可显著增强大鼠非特异性免疫功能,但超微粉效果优于普通粉。 展开更多
关键词 板蓝根超微粉 板蓝根普通粉 SD大鼠 免疫调节
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鸡毒支原体GroEL蛋白通过NF-κB信号通路诱导DF-1细胞释放IL-1β的研究 预览
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作者 张琳 陈莹 +5 位作者 朱可蒙 赵雅芝 潘巧 郝文君 于颖 辛九庆 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期223-228,共6页
鸡毒支原体(MG)脂质相关膜蛋白(LAMPs)在刺激宿主细胞天然免疫中起重要作用,GroEL蛋白是本实验室前期利用质谱鉴定筛选出的LAMPS中的关键组分。为研究GroEL蛋白诱导宿主细胞炎性反应的信号通路,本研究通过原核表达系统表达出MG的GroEL蛋... 鸡毒支原体(MG)脂质相关膜蛋白(LAMPs)在刺激宿主细胞天然免疫中起重要作用,GroEL蛋白是本实验室前期利用质谱鉴定筛选出的LAMPS中的关键组分。为研究GroEL蛋白诱导宿主细胞炎性反应的信号通路,本研究通过原核表达系统表达出MG的GroEL蛋白,利用激光共聚焦试验、荧光定量PCR和western blot方法分别检测GroEL蛋白的粘附特性、p65入核、磷酸化水平及IL-1β分泌情况。激光共聚焦试验结果显示,GroEL蛋白能够黏附于DF-1细胞表面并刺激DF-1细胞中p65从胞浆转入细胞核;western blot检测显示GroEL蛋白能够激活NF-κB信号通路促进p65磷酸化水平提高;荧光定量PCR检测显示GroEL蛋白能够促进IL-1β释放,当NF-κB信号通路被抑制后,IL-1β的释放显著下降(p<0.01)。本研究结果表明MG GroEL蛋白能够粘附于宿主细胞表面并通过激活NF-κB信号通路诱导宿主细胞IL-1β的释放,从而在炎症反应中发挥作用。本研究为深入研究MG致病机制提供了实验依据。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 GroEL蛋白 IL-1Β P65 NF-ΚB
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环氧树脂AB胶包埋动物组织切片的研究 预览
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作者 李林雪 牛钰薇 +2 位作者 尹航 罗继龙 白志坤 《畜牧兽医科技信息》 2019年第5期26-27,共2页
本文是探索采用环氧树脂AB胶包埋动物组织断面标本的方法,步骤包含固定、脱水、包埋和硬化。该方法制作的标本,透明度高、结构清晰,并保持了动物组织原有的形态,可长期保存,并供教学与科研使用。
关键词 环氧树脂AB胶 标本 断面
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新时代兽医专业学位研究生人文素质教育提升路径探讨
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作者 王勇 于世明 +2 位作者 李晓宇 尹怡林 张亮 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第19期169-171,共3页
在国家迫切需求高层次兽医技术人才的背景下,人文素质教育的实施对于兽医专业学位研究生的培养具有重要意义。笔者从兽医专业学位研究生教育主体、客体、介体和环体四方面分析了当前我国兽医专业学位研究生人文素质教育的现状及成因,结... 在国家迫切需求高层次兽医技术人才的背景下,人文素质教育的实施对于兽医专业学位研究生的培养具有重要意义。笔者从兽医专业学位研究生教育主体、客体、介体和环体四方面分析了当前我国兽医专业学位研究生人文素质教育的现状及成因,结合兽医专业学位研究生教育的特殊性,通过对坚持立德树人、完善课程体系、强化实践教育、丰富校园文化和优化评价体系等教育过程的阐述,探讨了兽医专业学位研究生人文素质教育的提升路径。 展开更多
关键词 兽医专业 专业学位 研究生 人文素质教育 提升路径
鹅源H5N1禽流感病毒感染对雏鸭红细胞免疫功能的影响 预览
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作者 郑世民 葛依阳 +3 位作者 马宏伟 高雪丽 刘超男 吕晓萍 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期45-51,共7页
将100只21日龄雏鸭随机分为AIV感染组(I)和对照组(C),应用免疫学和细胞培养及MTT等方法动态检测AIV感染雏鸭血液红细胞免疫黏附能力、红细胞免疫自身调控能力以及红细胞促外周血淋巴细胞增殖能力。结果表明,雏鸭感染AIV后1~14d,红细胞C3... 将100只21日龄雏鸭随机分为AIV感染组(I)和对照组(C),应用免疫学和细胞培养及MTT等方法动态检测AIV感染雏鸭血液红细胞免疫黏附能力、红细胞免疫自身调控能力以及红细胞促外周血淋巴细胞增殖能力。结果表明,雏鸭感染AIV后1~14d,红细胞C3b受体花环(E-CRR)率明显低于对照组,而红细胞免疫复合物花环(E-ICR)率明显高于对照组;AIV感染雏鸭后3~21d,红细胞C3b受体花环促进率(RFER)显著低于对照组,且红细胞C3b受体花环抑制(RFIR)率显著高于对照组;AIV感染雏鸭的红细胞对血液T、B淋巴细胞增殖促进能力明显低于对照组。表明AIV感染引起的雏鸭红细胞免疫黏附功能、自身调控能力和T、B淋巴细胞增殖能力下降,与AIV感染导致雏鸭外周血免疫功能降低密切相关。 展开更多
关键词 禽流感病毒 雏鸭 红细胞免疫 免疫黏附
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抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用 预览
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作者 唐泽群 罗海燕 +3 位作者 葛铭 郭荣 许丹蕾 张瑞莉 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1292-1300,共9页
Toll样受体3(TLR3)是激发机体天然免疫的模式识别受体,为了制备能与天然结构的鸡TLR3(chTLR3)蛋白结合的单克隆抗体,将前期构建的可以在细胞内表达的真核重组质粒pVAX1-Igk-chTLR3免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗chTLR3单克隆抗体... Toll样受体3(TLR3)是激发机体天然免疫的模式识别受体,为了制备能与天然结构的鸡TLR3(chTLR3)蛋白结合的单克隆抗体,将前期构建的可以在细胞内表达的真核重组质粒pVAX1-Igk-chTLR3免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗chTLR3单克隆抗体;并应用该抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术检测镉中毒雏鸡外周血淋巴细胞与脾内chTLR3的表达变化。结果发现,获得1株阳性杂交瘤细胞,该细胞株单个细胞染色体数量为(94±2)条,细胞上清效价为1∶25,抗体亚类鉴定为IgG3,细胞上清能够与原核表达的chTLR3胞外区蛋白及鸡外周血淋巴细胞中的chTLR3特异性结合。应用此抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术均能够在对照组和染镉组雏鸡外周血淋巴细胞及脾内检测到chTLR3的蛋白表达。结果表明,成功制备了具有天然活性的chTLR3单克隆抗体,该抗体可用于Western blot、间接免疫荧光技术及流式细胞术研究chTLR3在鸡组织细胞的分布定位、表达变化,为示踪chTLR3蛋白分布、表达及研究其在鸡发病机制中的作用提供了重要的物质基础。 展开更多
关键词 chTLR3 单克隆抗体 WESTERN BLOT 间接免疫荧光 流式细胞术
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中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交文库的构建 预览
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作者 孙莉 岳金金 +3 位作者 费东亮 李明 马鸣潇 宋铭忻 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期572-577,共6页
【目的】本研究旨在利用位点特异性重组技术(FullCoV)将中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫膜蛋白cDNA连接到pPR3-N载体上,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库。【方法】提取2-3日龄中华蜜蜂工蜂幼虫总RNA;分离mRNA后,在反转录酶... 【目的】本研究旨在利用位点特异性重组技术(FullCoV)将中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫膜蛋白cDNA连接到pPR3-N载体上,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库。【方法】提取2-3日龄中华蜜蜂工蜂幼虫总RNA;分离mRNA后,在反转录酶的作用下合成幼虫膜蛋白cDNA第1链,并合成双链cDNA。在双链cDNA的5′端加上带有重组序列的接头后,通过FullCoV技术与载体pPR3-N进行连接,然后将连接产物电转化到DH10B感受态细胞,构建中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,并对该文库插入片段大小和文库滴度进行检测。【结果】通过FullCoV技术成功构建了中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交cDNA文库,经检测,中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母cDNA文库的总库容量为1.5×10^7 cfu,文库滴度为3×10^6 cfu/mL,重组率达到100%。【结论】本研究利用FullCoV技术成功构建了中华蜜蜂幼虫膜蛋白酵母cDNA文库,为进一步探究感染中华蜜蜂的病原微生物与宿主蛋白互作研究奠定了基础。 展开更多
关键词 中华蜜蜂 cDNA 文库 滴度 酵母双杂交 FullCoV技术 蛋白质相互作用
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