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抗A抗B血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品的建立 预览
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作者 孙彬裕 曲守方 +4 位作者 于婷 孙楠 孙晶 胡泽斌 黄杰 《中国医药生物技术》 2019年第4期369-372,共4页
ABO血型系统是人类第一个血型系统,也是人类血型系统中抗原免疫性最强的[1]。至今人们已发现红细胞上有36个血型系统,300多种血型抗原。ABO血型系统是临床输血和器官移植中最重要的血型系统,对献血者和受血者ABO血型的预先确认是输血工... ABO血型系统是人类第一个血型系统,也是人类血型系统中抗原免疫性最强的[1]。至今人们已发现红细胞上有36个血型系统,300多种血型抗原。ABO血型系统是临床输血和器官移植中最重要的血型系统,对献血者和受血者ABO血型的预先确认是输血工作中最为重要的实验,错误的ABO血型定型将导致严重的输血反应[2-3]。 展开更多
关键词 血型定型试剂 国家参考品 单克隆抗体 ABO血型系统 抗B 抗A 血型抗原 器官移植
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甲胎蛋白免疫测定用国家标准品的建立 预览
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作者 孙彬裕 曲守方 +4 位作者 于婷 孙楠 孙晶 胡泽斌 黄杰 《中国医药生物技术》 2019年第2期185-188,共4页
甲胎蛋白(AFP)是一种血清糖基化蛋白,在正常成人血清中含量极少。AFP主要由胎儿卵黄囊和肝脏产生,其次是胃肠道黏膜、肾脏也可少量合成。AFP是单链糖蛋白,分子量65~70kD,其物理化学特性和氨基酸组成类似于血清白蛋白,但抗原性不同[1-3]... 甲胎蛋白(AFP)是一种血清糖基化蛋白,在正常成人血清中含量极少。AFP主要由胎儿卵黄囊和肝脏产生,其次是胃肠道黏膜、肾脏也可少量合成。AFP是单链糖蛋白,分子量65~70kD,其物理化学特性和氨基酸组成类似于血清白蛋白,但抗原性不同[1-3]。作为一种肿瘤标记物,AFP可以用于肿瘤的诊断疗效监控,70%~95%的原发性肝癌患者呈现AFP水平升高,AFP异常升高提示原发性肝癌的发生[4-7]。妊娠期可通过AFP监测进行疾病的筛查和诊断,产前普查羊水中AFP水平可监控胎儿异常,孕妇血清异常升高提示胎儿神经管缺陷畸形,如脊柱裂、无脑儿、脑积水等,AFP降低提示未出生的婴儿有唐氏综合征的危险性[8-11]。 展开更多
关键词 甲胎蛋白 国家标准品 免疫测定 AFP异常 肿瘤标记物 原发性肝癌 胎儿异常 糖基化蛋白
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应用二代测序技术进行胚胎植入前遗传学筛查及诊断的基本原理 预览
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作者 李丽莉 孙楠 +5 位作者 张文新 林一鑫 方雅亮 梁家杰 黄杰 曲守方 《中国医学装备》 2019年第7期7-14,共8页
辅助生殖技术的发展已帮助越来越多不孕不育的夫妇解决生育难题,而胚胎植入前遗传学筛查(PGS)及胚胎植入前遗传学诊断(PGD)进一步排除了存在遗传缺陷的胚胎,并选择健康胚胎进行植入,从而极大降低了新生儿患遗传性疾病的概率。这两项技... 辅助生殖技术的发展已帮助越来越多不孕不育的夫妇解决生育难题,而胚胎植入前遗传学筛查(PGS)及胚胎植入前遗传学诊断(PGD)进一步排除了存在遗传缺陷的胚胎,并选择健康胚胎进行植入,从而极大降低了新生儿患遗传性疾病的概率。这两项技术最初采用基于分子杂交或聚合酶链式反应(PCR)的检测方法,随后微阵列技术也被应用其中。随着人类基因组计划的完成,DNA测序技术进入高速发展的阶段,二代测序(NGS)采用鸟枪法为基本测序策略,结合生物信息学工具,以高通量、较低成本、检测项目覆盖面广、自动化程度高、可检测未知片段等优势,正不断扩大在PGS/PGD中的应用,同时也对辅助生殖技术产生了深远的影响。 展开更多
关键词 二代测序技术 胚胎植入前遗传学筛查 胚胎植入前遗传学诊断
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TaqMan-MGB荧光探针法检测北京地区幽门螺杆菌gyrA基因第87位密码子和第91位密码子耐药突变 预览 被引量:1
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作者 沈维祥 胡泽斌 +3 位作者 陈春峰 张小燕 成虹 郜恒骏 《中国医药生物技术》 2017年第4期325-329,共5页
目的采用TaqM an-MGB荧光探针法检测北京地区幽门螺杆菌喹诺酮类耐药位点gyr A基因第87位密码子和第91位密码子突变情况,比较与药敏试验和一代测序法的一致性。方法收集北京大学第一医院消化内科门诊尿素酶试验阳性的患者252例,所有患... 目的采用TaqM an-MGB荧光探针法检测北京地区幽门螺杆菌喹诺酮类耐药位点gyr A基因第87位密码子和第91位密码子突变情况,比较与药敏试验和一代测序法的一致性。方法收集北京大学第一医院消化内科门诊尿素酶试验阳性的患者252例,所有患者均使用MGB荧光探针法和一代测序法对喹诺酮类耐药位点gyr A基因第87位密码子和第91位密码子进行检测。其中158例患者同时进行药敏试验检测,同时分析耐药位点突变发生率与耐药表型的关系。结果 158例传统培养联合药敏法检测的标本中成功培养出85例,占53.8%,其中耐药型菌株40例,敏感型菌株42例。而MGB荧光探针法成功检出155例,占98.1%,其中野生型93例,突变型62例。在药敏试验检测出的85例阳性标本中,两种方法检出的符合率为94.1%。252例标本中,一代测序法成功检测出234例,占92.9%,其中野生型160例,突变型74例。在74例突变型标本中,含gyr A基因第87位密码子突变的标本占60.8%,含gyr A基因第91位密码子突变的标本占39.2%。MGB荧光探针法成功检测出250例,占99.2%,其中野生型161例,突变型89例。在89例突变组标本中,含gyr A基因第87位密码子突变的标本占64.0%,含gyr A基因第91位密码子突变的标本占36.0%。一代测序法和MGB荧光探针法在区分是否含有突变上的符合率为95.3%。结论 Taq Man-MGB荧光探针法可快速、敏感地检测患者胃黏膜标本中幽门螺杆菌喹诺酮类耐药位点gyr A基因第87位密码子和第91位密码子的突变情况,与药敏试验和一代测序法有较高的符合性。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 MGB荧光探针 喹诺酮类耐药
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采用细胞质特异性定位的荧光探针观察细胞多核化现象 预览
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作者 吴峰 刘建彬 胡泽斌 《中国医药生物技术》 2017年第5期449-452,共4页
细胞多核化是指一个细胞的细胞质中同时存在两个或多个细胞核。细胞多核化现象的产生通常是由于处于基因组复制中的细胞,其染色体运动发生异常,形成了不同大小的细胞核。这些大小不一的细胞核均被核膜包裹,对于比较小的细胞核,通常称为... 细胞多核化是指一个细胞的细胞质中同时存在两个或多个细胞核。细胞多核化现象的产生通常是由于处于基因组复制中的细胞,其染色体运动发生异常,形成了不同大小的细胞核。这些大小不一的细胞核均被核膜包裹,对于比较小的细胞核,通常称为微核或核片段。细胞多核化现象既存在于病理状态的细胞,也可以存在于生理状态的细胞中。 展开更多
关键词 核化 荧光探针 染色体运动 病理检验 核染色 特异性 微核 无水乙腈 真空蒸馏 慢性炎症
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基因编辑技术在CHO工程细胞株改造中的应用研究进展 预览
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作者 蔡俊立 胡泽斌 沈毅珺 《中国医药生物技术》 2017年第2期171-173,共3页
基因编辑技术是近几年迅速发展起来、可实现对基因组进行靶向精确修饰的一种生物技术,通过该技术可对基因进行定位突变、插入或敲除。从最初应用的锌指核酸酶(zinc-finger nucleases,ZFNs)到转录激活样效应因子核酸酶(transcription ... 基因编辑技术是近几年迅速发展起来、可实现对基因组进行靶向精确修饰的一种生物技术,通过该技术可对基因进行定位突变、插入或敲除。从最初应用的锌指核酸酶(zinc-finger nucleases,ZFNs)到转录激活样效应因子核酸酶(transcription activator-like effectors nucleases,TALENs),再到近两年愈加火热的CRISPR/Cas9系统,随着新基因编辑工具的不断发掘,对基因组进行定向改造的工作将变得更加高效精准、方便快捷。 展开更多
关键词 工程细胞株 CHO 编辑技术 编辑工具 FINGER 基因片段 效应因子 靶向 应用研究 基因敲除
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人巨细胞病毒IgG抗体检测试剂盒国家监督抽验质量评价 预览 被引量:1
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作者 胡泽斌 曲守方 +2 位作者 孙彬裕 杨振 黄杰 《中国医药生物技术》 2017年第6期567-569,共3页
人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,CMV),属疱疹病毒科,乙组疱疹亚科,分子量为150×10~6 D,是直径为200 nm的线状双链DNA病毒,人是其唯一的宿主。巨细胞病毒的主要感染途径是与被感染病人接触,包括接触被感染病人的唾液、生... 人类巨细胞病毒(human cytomegalovirus,CMV),属疱疹病毒科,乙组疱疹亚科,分子量为150×10~6 D,是直径为200 nm的线状双链DNA病毒,人是其唯一的宿主。巨细胞病毒的主要感染途径是与被感染病人接触,包括接触被感染病人的唾液、生殖器分泌物、尿液和乳汁,同时也可通过胎盘传播或发生医源性传染. 展开更多
关键词 巨细胞病毒 抗体检测 试剂盒 国家监督 疱疹病毒科 国家参考品 IgG 酶联免疫法 风疹病毒 产品注册
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染色体拷贝数变异国家参考品的制备及标定 预览
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作者 贾峥 张文新 +3 位作者 李丽莉 孙楠 曲守方 黄杰 《分子诊断与治疗杂志》 2019年第4期256-262,294共8页
目的制备染色体拷贝数变异(CNVs)国家参考品,并进行标定。方法收集3份正常人样本,24份染色体非整倍体异常样本,11份微缺失微重复样本,提取基因组DNA,制备成国家参考品。用4家协作单位的染色体拷贝数检测试剂盒对国家参考品性能进行验证... 目的制备染色体拷贝数变异(CNVs)国家参考品,并进行标定。方法收集3份正常人样本,24份染色体非整倍体异常样本,11份微缺失微重复样本,提取基因组DNA,制备成国家参考品。用4家协作单位的染色体拷贝数检测试剂盒对国家参考品性能进行验证,确定准确性,并考察国家参考品在不同条件下(37℃条件下放置4周;放置于37℃条件下4周,期间拿出反复冻融3次)的稳定性及均匀性。结果对43份浓度为15(±1)ng/μL国家参考品的检测结果中,有三家单位均检测出国家参考品标示的结果,有1家单位漏检一例嵌合体样本(1p36 30%)。经不同条件(37℃条件下放置4周;放置于37℃条件下4周,期间拿出反复冻融3次)处理的国家参考品的稳定性结果均一致,均匀性的结果均一致,表明满足参考品的要求。结论成功建立染色体拷贝数变异国家参考品,该参考品可满足对染色体拷贝数检测的要求,经多家实验室进行验证,可用于国内大多数试剂盒的性能评价及临床实验室的质量评价。 展开更多
关键词 拷贝数变异 国家参考品 协作标定
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利用NGS技术同时检测缺失和点突变型地中海贫血 预览
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作者 黄杰 杨旭 +2 位作者 孙楠 孙彬裕 曲守方 《分子诊断与治疗杂志》 2019年第2期79-85,95共8页
目的建立一种跨越断裂点PCR(Gap-PCR)结合下一代测序技术的地中海贫血基因检测方法。方法对地中海贫血核酸国家参考品进行PCR扩增,PCR产物进行高通量测序。结果 32例国家参考品涉及的3种α突变型别,16种β突变型别,4种α缺失型别,2种β... 目的建立一种跨越断裂点PCR(Gap-PCR)结合下一代测序技术的地中海贫血基因检测方法。方法对地中海贫血核酸国家参考品进行PCR扩增,PCR产物进行高通量测序。结果 32例国家参考品涉及的3种α突变型别,16种β突变型别,4种α缺失型别,2种β缺失型别全部检出,均与原型别一致。结论本研究通过建立基于Gap-PCR结合下一代测序技术检测地贫的方法进一步完善了遗传病基因诊断方法,对遗传病的携带人群筛查,优生优育咨询,防止出生缺陷等方面具有重要意义。 展开更多
关键词 Gap-PCR 高通量测序 地中海贫血 缺失型别 突变型别
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人细小病毒B19IgG抗体检测试剂国家参考品的建立及应用 预览
10
作者 周海卫 田亚宾 +2 位作者 郭世富 黄颖 张春涛 《标记免疫分析与临床》 CAS 2018年第2期282-285,292共5页
目的建立人细小病毒B19IgG抗体检测试剂国家参考品并对试剂质量进行评价。方法收集并筛选B19IgG抗体阳性和阴性样本,建立人细小病毒B19IgG抗体检测试剂国家参考品,包括:阳性参考品10份、阴性参考品10份、重复性参考品1份和最低检测... 目的建立人细小病毒B19IgG抗体检测试剂国家参考品并对试剂质量进行评价。方法收集并筛选B19IgG抗体阳性和阴性样本,建立人细小病毒B19IgG抗体检测试剂国家参考品,包括:阳性参考品10份、阴性参考品10份、重复性参考品1份和最低检测限参考品5份,以WHO第二代B19抗体(IgG)参考品进行溯源和标定,并进行稳定性考察。使用建立的参考品对人细小病毒B19IgG抗体检测试剂盒进行质量评价。结果重复性参考品的标定结果为16IU/mL,最低检测限参考品(S1~S4)的标定结果分别为29、14、7、4IU/mL,s5为阴性基质血浆;室温(25℃)放置3d、4℃放置5d及反复冻融5次均不影响参考品的稳定性;试剂质量评价结果显示,阴性符合率1家为9/10,其余均为10/10,阳性符合率均为10/10,重复性均符合要求,最低检测限结果1家为14IU/mL、2家为7IU/mL、3家为4IU/mL。结论建立的参考品能够用于人细小病毒B19IgG抗体检测试剂盒的质量控制。 展开更多
关键词 人细小病毒B19 IGG抗体 参考品 质量评价
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细菌感染多重核酸检测试剂参考品的建立 预览
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作者 刘东来 周海卫 +3 位作者 石大伟 沈舒 田亚宾 张春涛 《传染病信息》 2018年第3期209-214,共6页
目的 建立细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,为相关产品的质量评价提供依据。方法 选择34种可导致中枢神经系统、血液、呼吸道、肠道以及生殖道感染的致病性细菌或真菌,培养富集后应用全自动细菌鉴定及药物敏感分析系统V... 目的 建立细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,为相关产品的质量评价提供依据。方法 选择34种可导致中枢神经系统、血液、呼吸道、肠道以及生殖道感染的致病性细菌或真菌,培养富集后应用全自动细菌鉴定及药物敏感分析系统VITEK2进行鉴定。鉴定正确的菌株,应用梯度稀释法测定浓度后进行分组混合成高浓度样本。应用全基因组第二代测序技术验证混合样本的组成情况和特异性。选择基于不同原理的多重核酸检测试剂进行协作标定,根据标定结果确定参考品的质量标准,并对参考品的稳定性进行考察。结果 本参考品由28种细菌和6种真菌混合成7支混合参考品,编号为M1~M7,其中细菌的终浓度约为1×108~1×109 CFU/ml,真菌的终浓度约为1×106~1×107 CFU/ml。经全基因组第二代测序技术验证,参考品的组成正确且无交叉污染情况。分别应用基于PCR-熔解曲线、等温扩增以及靶向扩增第二代测序技术的多重核酸检测试剂对参考品进行检测,结果显示本参考品经过适当稀释后能够对试剂的准确性、特异性、重复性以及最低检出限等性能指标进行评价,且参考品各混合菌株间无交叉反应。稳定性研究结果表明反复冻融3次不影响本参考品的稳定性。结论 本研究建立了细菌感染多重核酸检测试剂参考品并制定其质量标准,能够应用于相关参考品的质量评价。 展开更多
关键词 细菌感染 多重核酸检测试剂 参考品
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