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氯化血红素诱导脊髓组织脑红蛋白高表达对脊髓损伤大鼠运动功能的保护作用 预览
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作者 高海浩 尚爱加 +3 位作者 陶本章 高燕 李伟光 张成岗 《解放军医学院学报》 CAS 2019年第1期58-61,67共5页
目的探讨氯化血红素(Hemin)诱导脊髓组织脑红蛋白高表达对脊髓损伤大鼠运动功能的保护作用。方法健康雄性SD大鼠90只随机分为对照组(假手术组)、手术组、氯化血红素处理组(造模后腹腔注射氯化血红素溶液)。采用大鼠后肢功能BBB评分评价... 目的探讨氯化血红素(Hemin)诱导脊髓组织脑红蛋白高表达对脊髓损伤大鼠运动功能的保护作用。方法健康雄性SD大鼠90只随机分为对照组(假手术组)、手术组、氯化血红素处理组(造模后腹腔注射氯化血红素溶液)。采用大鼠后肢功能BBB评分评价各组大鼠实验后1 d、3 d、7 d、14 d、28 d、56 d时的运动功能差异。结果大鼠脊髓组织Ngb免疫组化结果显示初中期氯化血红素处理组脊髓组织Ngb阳性细胞数最高,手术组次之,对照组最低。其中,Hemin处理组与手术组阳性细胞密度高于对照组。BBB评分结果显示术后对照组各时间点的评分最高;手术组得分最低,手术组的表现不仅从评分上明显低于另外两组,且恢复速度也明显低于Hemin处理组,Hemin处理组恢复速度为三组中最快。结论氯化血红素诱导脊髓损伤大鼠脊髓组织内脑红蛋白高表达,改善了脊髓损伤大鼠的运动评分并提高了脊髓损伤后运动功能的恢复速度。 展开更多
关键词 氯化血红素 脑红蛋白 脊髓损伤 大鼠
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肝胆肿瘤术后难治性复发患者的精准医学临床实践
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作者 崔超 胡丙洋 +9 位作者 万涛 武聚山 林栋栋 李玉 冯林春 徐白萱 戴广海 叶慧义 徐平 卢实春 《中华肝胆外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期241-245,共5页
目的总结肝胆肿瘤术后难治性复发患者应用靶向与免疫联合精准治疗的初步临床效果,探讨精准医学时代多学科综合治疗在肝胆肿瘤术后难治性复发患者治疗中的价值。方法前瞻性收集解放军总医院第一医学中心肝胆外科2016年6月至2019年1月门... 目的总结肝胆肿瘤术后难治性复发患者应用靶向与免疫联合精准治疗的初步临床效果,探讨精准医学时代多学科综合治疗在肝胆肿瘤术后难治性复发患者治疗中的价值。方法前瞻性收集解放军总医院第一医学中心肝胆外科2016年6月至2019年1月门诊及住院诊治的52例肝胆肿瘤术后难治性复发患者资料,其中男性37例,女性15例,年龄(56.2±8.5)岁。基于二代基因测序和其他组学包括蛋白组学的结果,为患者制定最适的治疗方案。随访并使用修订的实体瘤疗效评价标准(mRECIST)评估疗效。结果52例患者随访3~31个月,中位随访时间7个月。完全缓解(CR)14例,部分缓解(PR)8例,稳定(SD)14例,疾病进展(PD)16例(其中死亡4例),总的客观缓解率(ORR)为42.3%(22/52),疾病控制率(DCR)为69.2%(36/52)。中位无进展生存期为7个月。6个月生存率、1年生存率分别为100.0%(48/48)和87.5%(21/24)。结论精准医学理念在肝胆肿瘤术后难治性复发患者治疗中有良好的指导作用,多靶点酪氨酸激酶抑制剂合并免疫检查点阻断剂联合治疗方案可获得较好的疾病控制率,建议临床上进一步推广使用。 展开更多
关键词 肝肿瘤 胆囊肿瘤 复发 精准医学
人骨髓间充质干细胞在兔膀胱脱细胞基质微环境中的生物学特性 预览
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作者 谭云鹤 邢俊平 郭子宽 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期55-59,共5页
目的利用兔膀胱脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)构建微环境,从细胞增殖能力、表面标记物及分子蛋白水平探讨其对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived stem cells,hBMSCs)的影响。方法制备BAMG浸泡液培养基,... 目的利用兔膀胱脱细胞基质(bladder acellular matrix graft,BAMG)构建微环境,从细胞增殖能力、表面标记物及分子蛋白水平探讨其对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow-derived stem cells,hBMSCs)的影响。方法制备BAMG浸泡液培养基,MTT法检测其对hBMSCs增殖的影响;流式细胞仪检测hBMSCs表面标志物CD44、CD45、CD73及PDGFRβ的表达;RT-PCR检测BAMG微环境对PPAR、OCN、α-SMA等基因表达的影响,Western blot检测不同处理方法OCT-4蛋白的表达情况。结果hBMSCs与BAMG有良好的相容性;实验组与对照组细胞曲线均呈"S"型增殖,于第3天进入快速增殖期,第7天趋于平稳;两组细胞CD44、CD45、CD73、PDGFRβ的表达量基本一致,差异不具有统计学意义;OCN、PPAR、α-SMA两组均表达目的基因;Western blot法检测亦显示OCT-4阳性表达。结论hBMSCs在兔BAMG的微环境中仍能良好保持原有的生物学特性,将该种子细胞与基质材料结合可构建需要的组织材料,为泌尿系统组织工程修复提供可能。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 膀胱脱细胞基质 RT-PCR 生物学特性 OCT-4
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南京铱-192放射源丢失事故受照者照后3年细胞遗传学随访观察
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作者 秦永春 陈英 +5 位作者 王进 张学清 王福如 陈维 史晓东 余宁乐 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2019年第4期453-456,共4页
目的探讨南京'5.7'放射事故受照者铱-192放射源照后3年染色体畸变的衰变规律。方法于受照后3年采集依-192放射源受照者周围血,采用常规染色体畸变分析、微核分析、G-显带核型分析,检测染色体非稳定性畸变率、双核细胞微核率和... 目的探讨南京'5.7'放射事故受照者铱-192放射源照后3年染色体畸变的衰变规律。方法于受照后3年采集依-192放射源受照者周围血,采用常规染色体畸变分析、微核分析、G-显带核型分析,检测染色体非稳定性畸变率、双核细胞微核率和稳定性畸变率,并根据相关结果进行剂量重建。结果受照者受照后3年'双着丝粒体+着丝粒环状染色体'(以下简称'双+环')畸变率为6.5%,下降至照后6 d双+环畸变率(21.0%)的31.0%;采用双+环畸变率估算的生物剂量为0.75 Gy,约为受照后6 d的初始估算剂量(1.52 Gy)的50.0%。双核淋巴细胞微核率为63‰,根据微核率估算的受照剂量为0.71 Gy,与双+环畸变率估算剂量相近。G-显带核型分析观察到的染色体总畸变率为41.0%,稳定性畸变率为30.0%,易位率为15.0%,根据易位率进行剂量重建的结果为1.50~1.89 Gy,与初始估算剂量(1.52 Gy)接近。结论非稳定性染色体畸变的衰变可能受到诸多因素的影响,其衰变规律尚需积累更多更为详实的数据。采用染色体稳定性畸变尤其是易位率对早先受照进行剂量重建是一种较为理想的方法。 展开更多
关键词 铱-192 染色体畸变 G-显带 核型分析 剂量重建
蒺藜炒制过程中蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K的变化规律及机制研究
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作者 袁芮 王丽丽 +4 位作者 张龙霏 张超 袁曜晖 宋晓 马百平 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第15期3297-3304,共8页
采用HPLC-ELSD测定不同炒制程度的蒺藜中蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K含量,结果发现蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K的含量均呈先升高后降低趋势,2个皂苷均在火候最佳时含量最高。通过蒺藜总皂苷提取物的模拟炮制发现,在炮制时间一定时,随着炮制... 采用HPLC-ELSD测定不同炒制程度的蒺藜中蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K含量,结果发现蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K的含量均呈先升高后降低趋势,2个皂苷均在火候最佳时含量最高。通过蒺藜总皂苷提取物的模拟炮制发现,在炮制时间一定时,随着炮制温度由180℃升高至240℃蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K的含量逐渐减少。在一定温度下,随炮制时间的延长蒺藜皂苷K含量先升高后降低,在5 min时含量最高;而蒺藜呋甾皂苷B含量仅在180℃时,随着炮制时间的增加,呈先升高后降低趋势,在10 min时含量最高;在200,220,240℃时,随着炮制时间的增加,蒺藜呋甾皂苷B含量逐渐降低。采用超高效液相色谱-飞行时间质谱定性分析tribuluside A,蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K 3种蒺藜皂苷单体的模拟炮制产物,证实含有C-22-OH的tribuluside A和蒺藜皂苷I在蒺藜炮制中发生脱羟基反应分别转化生成含有C-20-C-22位双键的蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K,从而使两者含量升高;蒺藜呋甾皂苷B和蒺藜皂苷K的C-3和C-26位含有糖链,在蒺藜炮制中发生脱糖反应生成单糖链皂苷和短糖链皂苷,从而使两者含量降低。该研究为下一步揭示蒺藜的炮制原理提供了依据。 展开更多
关键词 蒺藜 炮制 蒺藜呋甾皂苷B 蒺藜皂苷K 成分含量变化 脱羟基反应 脱糖反应
间充质干细胞来源的细胞外囊泡:免疫相关疾病的理想细胞替代疗法
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作者 马聪 张青宜 +1 位作者 郭子宽 王恒湘 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期159-163,共5页
间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)作为一种具有多向分化潜能的非造血干细胞,已被应用于多种组织损伤与免疫相关疾病的治疗。MSC获得如此广泛应用的原因与其强大的促进受损组织再生和免疫调控功能密不可分。近年来,MSC的免疫调... 间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)作为一种具有多向分化潜能的非造血干细胞,已被应用于多种组织损伤与免疫相关疾病的治疗。MSC获得如此广泛应用的原因与其强大的促进受损组织再生和免疫调控功能密不可分。近年来,MSC的免疫调控功能已在多种免疫相关疾病的治疗中得到广泛验证。研究表明,MSC免疫调节作用的发挥主要通过旁分泌,其中,MSC分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicle, EV)发挥着重要作用。EV可以复制MSC的多种免疫调节功能,但是,MSC-EV在MSC的免疫调节中具体发挥哪些作用,MSC-EV能否替代MSC用于免疫相关疾病的治疗?文章结合以上问题,对近年来MSC与MSC-EV的免疫调控功能进行综述。 展开更多
关键词 间充质干细胞 细胞外囊泡 免疫调控
DNA条形码技术及其在微生物资源鉴别保护中的应用研究 预览
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作者 施佳辉 田飞 +1 位作者 唐蜀昆 徐平 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2018年第4期77-83,共7页
DNA条形码作为一种新型的物种鉴定、分类、鉴别和溯源方法,通过生物信息学分析将标准DNA片段进行分析比对实现。经过多年的发展,该技术现已成为物种鉴定和分类的研究热点。回顾十余年来DNA条形码技术的发展历程,介绍了这一技术的进展与... DNA条形码作为一种新型的物种鉴定、分类、鉴别和溯源方法,通过生物信息学分析将标准DNA片段进行分析比对实现。经过多年的发展,该技术现已成为物种鉴定和分类的研究热点。回顾十余年来DNA条形码技术的发展历程,介绍了这一技术的进展与成果,分析了该技术的优势及局限,并展望了DNA条形码的应用前景,为后续研究提供参考。 展开更多
关键词 DNA条形码 线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ 物种鉴定 资源保护
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LC-MS/MS法测定人血浆中抗辐射新药E0703和代谢物E0703-tone的质量浓度及药动学研究
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作者 褚利娟 甘慧 +3 位作者 高月 窦桂芳 孟志云 邸欣 《沈阳药科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期763-768,共6页
目的 建立同时测定人血浆中E0703及其代谢物E0703-tone的LC-MS/MS分析方法,并应用于E0703在人体内的药动学研究。方法 以5-雄烯二醇为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-体积分数0.1%甲酸水溶液(体积比85∶15)为流动相经CAPCELL P... 目的 建立同时测定人血浆中E0703及其代谢物E0703-tone的LC-MS/MS分析方法,并应用于E0703在人体内的药动学研究。方法 以5-雄烯二醇为内标,血浆样品用乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-体积分数0.1%甲酸水溶液(体积比85∶15)为流动相经CAPCELL PAK C_(18)M GIII色谱柱分离,质谱检测采用电喷雾离子源(ESI)正离子化方式,以多反应监测(MRM)方式分别监测离子对m/z 339.2→253.1(E0703)、m/z 337.4→269.1(E0703-tone)和m/z 273.2→159.2(内标)。8名健康受试者单次口服E0703 20 mg,在不同时刻采集血浆样品进行LC-MS/MS分析,采用Phoenix 64(Win Nonlin6.4)的非房室模型计算药动学参数。结果 E0703和E0703-tone标准曲线的线性范围均为1~500μg·L~(-1)(r≥0.99),批内精密度分别≤8.0%和9.1%,批间精密度分别≤14.4%和13.3%;准确度分别为-10.0%~6.0%和-5.1%~-1.4%。E0703进入人体内迅速代谢为E0703-tone,E0703-tone的达峰时间为(1.28±0.76)h,达峰质量浓度为(28.9±19.8)μg·L~(-1),血浆消除半衰期为(2.61±0.44)h。结论 本方法适用于E0703人体药动学研究。 展开更多
关键词 雌激素药 药代动力学 液相色谱-质谱法
蜘蛛抱蛋属植物内生细菌的多样性及其抗菌活性筛选 被引量:3
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作者 方晓梅 柏菁璘 +3 位作者 游雪甫 马百平 张玉琴 余利岩 《微生物学通报》 CSCD 北大核心 2018年第4期836-847,共12页
【背景】药用植物中蕴含多样性丰富的内生菌资源,这些微生物产生的多种新型物质在制药领域表现出较好的应用前景。【目的】研究蜘蛛抱蛋属(Aspidistra Ker-Gawl.)植物内生细菌的多样性,探索药用植物内生细菌在药用活性产物方面的开发... 【背景】药用植物中蕴含多样性丰富的内生菌资源,这些微生物产生的多种新型物质在制药领域表现出较好的应用前景。【目的】研究蜘蛛抱蛋属(Aspidistra Ker-Gawl.)植物内生细菌的多样性,探索药用植物内生细菌在药用活性产物方面的开发潜力,以期发现具有抗菌活性的次级代谢产物。【方法】对9种13株新鲜的蜘蛛抱蛋植物进行表面消毒,采用5种分离培养基分离内生细菌;根据菌落形态特征排除重复菌株,并测定其16S rRNA基因序列,构建系统进化树分析内生细菌多样性;将菌株分别用2种培养基发酵,使用耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis ATCC 700044)、水稻白叶枯菌(Xanthomonas oryzae PXO99A)、白色念珠菌(Candidaalbicans ATCC 10231)、肺炎雷伯菌(Klebsiella pneumoniae ATCC 700603)和耐药粪肠球菌HH22(Enterococcus faecalis HH22)5种检定菌对分离菌株的发酵液进行抑菌活性筛选。【结果】从植物组织中分离得到了234株内生细菌,根据形态初步排重得到156株植物内生细菌;基于16S rRNA基因序列构建的系统进化树显示它们分属于3门10目22科29属,其中链霉菌属(Streptomyces)、芽孢杆菌属(Bacillus)、微杆菌属(Microbacterium)、类芽孢杆菌属(Paenibacillus)和根瘤菌属(Rhizobium)的菌株广泛地分布在不同种的蜘蛛抱蛋植株中,且占据一定优势;发现可能的潜在新分类单元6个;156株内生细菌中38株菌的发酵液具有抑菌活性,初筛阳性率为23.7%。【结论】蜘蛛抱蛋植物组织中含有种类多样的内生细菌,它们可能是抗菌生物活性次级代谢产物的有效来源。 展开更多
关键词 蜘蛛抱蛋 内生细菌 多样性 抑菌活性
IKBKE在烟气凝集物诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程中的作用
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作者 周继红 洪磊 +7 位作者 蒋鹏 袁娜娜 李勤 陈余清 王效静 朱茂祥 杨陟华 李伟 《第三军医大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第13期1221-1228,共8页
目的 探讨核因子κB抑制蛋白E抗体(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon,IKBKE)在卷烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用及其分子机制。方法 CS... 目的 探讨核因子κB抑制蛋白E抗体(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon,IKBKE)在卷烟烟气凝集物(cigarette smoke condensate,CSC)诱导永生化人支气管上皮细胞BEP2D恶性转化中的作用及其分子机制。方法 CSC慢性染毒BEP2D细胞至P70代(0.001支烟/m L),裸鼠皮下成瘤实验观察染毒细胞是否发生恶性转化;采用Western blot检测各代细胞以及CSC急性染毒BEP2D细胞(0.006支烟/mL)4、8、12、24 h和48 h后IKEBE的表达;免疫组化检测烟熏1、3、9个月A/J小鼠外周小气道和瘤体组织IKBKE的表达;慢病毒IKBKE-siRNA感染P70细胞,观察其对细胞增殖、细胞克隆形成和凋亡的影响;观察敲减IKBKE对STAT3信号通路分子表达的影响及STAT3信号通路激活剂IL-6对细胞恶性转化的影响。结果 与P0、P50细胞相比,P70细胞具有恶性转化表型;IKBKE显著高表达于P70细胞(P〈0.05),亦是CSC诱导的早期分子事件;在烟气暴露A/J小鼠肺肿瘤组织中IKBKE表达显著增高(P〈0.01);siRNA沉默IKBKE可显著抑制细胞增殖和细胞克隆形成,诱导细胞凋亡;该作用与抑制STAT3磷酸化有关。结论 IKBKE可能通过调控STAT3通路抑制细胞凋亡,促进其增殖,参与吸烟诱导肺癌发生。 展开更多
关键词 肺癌 核因子κB抑制蛋白E抗体 卷烟烟气凝集物 人支气管上皮细胞
海藻多糖锌配合物的组成及其对THP-1细胞耗氧的影响
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作者 先宏 张莉 +3 位作者 宋曙辉 步卫东 丛建波 计峰 《营养学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期261-265,271共6页
目的通过海藻多糖(SP)与锌离子(II)络合成一种新型的海藻多糖锌(SPZC),在比较SP和SPZC二者理化性质、结构组成基础上,对锌离子的多糖螯合物在单核细胞THP-1细胞耗氧的影响做了初步的研究。方法:用苯酚法法测定SP和SPZC的总多糖... 目的通过海藻多糖(SP)与锌离子(II)络合成一种新型的海藻多糖锌(SPZC),在比较SP和SPZC二者理化性质、结构组成基础上,对锌离子的多糖螯合物在单核细胞THP-1细胞耗氧的影响做了初步的研究。方法:用苯酚法法测定SP和SPZC的总多糖含量、Hodgson法测定二者的硫酸根含量和Folin酚试剂法等化学法测定二者主要作用成分,气相色谱(GC)分析了二者所含的主要单糖及摩尔比,红外光谱(IR)分析多糖二者的主要成分基团等。用ESR自旋捕捉法检测了二者对细胞的呼吸爆发作用(respiratory burst,RB)下耗氧量的影响,以及利用活性氧(reactive oxygen species,ROS)的荧光探针(2,7-二氢二氯荧光素,DCFH-DA)分析了PMA激活THP-1细胞后ROS产生的变化。结果 SP络合上锌离子成为SPZC后也具有很好的稳定性,二者之间的主要成分含量变化明显,多糖含量、蛋白质含量、硫酸根离子下降明显;而SPZC中Zn(II)的含量为15%。通过GC分析,表明锌离子的配位反应,使得SP的单糖组成也有改变;IR图谱可以发现SP结合上锌离子后,图谱上的特征性峰发生位移、钝化或消失,而代之有SPZC核的类型峰。RB结果,提示在细胞受到激发的短暂时间内,SPZC比SP更能维持细胞的RB在一个更高水平;而同样细胞激发后的较长时间内,ROS产生的荧光染色,相较SP对ROS产生有一定的淬灭作用,而SPZC则能触发ROS产生更多。结论 SP同锌离子(II)络合产生的SPZC,增加了新的有机锌来源;同时,SPZC对比SP,其抗氧化性能有所减弱。 展开更多
关键词 海藻多糖 海藻多糖锌 THP-1 呼吸爆发 活性氧
扎伊尔型埃博拉病毒核酸检测试剂国家参考品的研制
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作者 石大伟 田亚宾 +4 位作者 李玉华 朱玉洁 陈苏红 周海卫 张春涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2018年第6期617-623,共7页
目的研制可用于扎伊尔型埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)核酸检测试剂质量评价的国家参考品,并建立相关试剂的质量标准。方法通过分子生物学方法制备含有5种EBOV核蛋白和糖蛋白基因目的片段的RNA噬菌体颗粒、质粒菌液和RNA体外转录产物... 目的研制可用于扎伊尔型埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)核酸检测试剂质量评价的国家参考品,并建立相关试剂的质量标准。方法通过分子生物学方法制备含有5种EBOV核蛋白和糖蛋白基因目的片段的RNA噬菌体颗粒、质粒菌液和RNA体外转录产物作为参考品候选样本,使用6种出血热病毒、虫媒病毒培养液和含拉沙热病毒核蛋白和糖蛋白基因的质粒菌液作为阴性参考品候选样本。分别应用培养法和荧光定量PCR确定病毒滴度和核酸浓度,应用RT-PCR、荧光定量PCR对候选样本进行序列鉴定和交叉污染检查。采用RNase A和DNaseⅠ抵抗试验确认RNA噬菌体颗粒的包装完整性。对于序列正确、无污染的候选样本进行稀释分装,发放5家EBOV核酸检测试剂生产企业进行适用性验证,根据结果确定参考品盘的阳性、阴性、最低检测限和精密度组成及试剂质量标准。结果RNA噬菌体颗粒包装的RNA序列与预期完全一致,颗粒包装完整且内含DNA残留污染低于RNA含量的1/10 000,可以用于制备参考品。经适用性验证,确定国家核酸参考品盘包括4份阳性、16份阴性参考品(其中8份型别特异性参考品)、14份最低检测限和2份(4支)精密度参考品,均为冰冻样本。适用性验证结果显示,各申报试剂均能检出扎伊尔型EBOV核酸,但最低检测限存在一定差异。结论建立的扎伊尔型EBOV核酸检测试剂国家参考品适用于现有的5家已申报应急审批的扎伊尔型EBOV核酸检测试剂,可用于相关试剂的质量控制,且对于该类试剂的研发具有重要指导意义。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 核酸 检测试剂 参考品 质量控制
深度覆盖的蛋白质组精准鉴定与定量新技术 被引量:1
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作者 张丽华 单亦初 +2 位作者 张弓 张养军 张祥民 《中国基础科学》 2018年第1期49-52,共4页
蛋白质,尤其是低丰度蛋白质,种类和含量的变化在调控生命过程中发挥着至关重要的作用。因此深度覆盖的蛋白质组精准鉴定与定量新技术对深入认识蛋白质机器的动态变化规律具有重要意义。针对目前蛋白质组定性定量分析领域存在的可变剪... 蛋白质,尤其是低丰度蛋白质,种类和含量的变化在调控生命过程中发挥着至关重要的作用。因此深度覆盖的蛋白质组精准鉴定与定量新技术对深入认识蛋白质机器的动态变化规律具有重要意义。针对目前蛋白质组定性定量分析领域存在的可变剪切和新生肽链组鉴定灵敏度低、蛋白质组精准定量覆盖度低以及纯化蛋白质全序列测定准确度低等关键科学问题。通过发展可变剪切和新生肽链组的高灵敏鉴定技术、基于高效标记和特征肽段的蛋白质组精准定量技术、基于高效分离的蛋白质组深度覆盖定量技术以及纯化蛋白质的全序列高准确测定技术等具有原始创新性的新一代蛋白质组学分析技术,显著提高蛋白质组分析的灵敏度、精准度和覆盖度,并将发展的新技术示范性用于与生物医药、国家安全和人口健康领域密切相关的耐药菌、耐辐射球菌、人肝癌高低转移细胞株等的深度覆盖蛋白质组精准定量分析,进而为满足国家重大领域的实际需求提供关键技术支撑。 展开更多
关键词 蛋白质组学 深度覆盖 精准定量 蛋白质测序
基于谱图库的蛋白质鉴定策略研究进展
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作者 蔚德睿 马洁 +3 位作者 解增言 白明泽 朱云平 舒坤贤 《生物工程学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期525-536,共12页
基于质谱的蛋白质组学快速发展,蛋白质质谱数据也呈指数式增长。寻找速度快、准确度高以及重复性好的鉴定方法是该领域的一项重要任务。谱图库搜索策略直接比较实验谱图与谱图库中的真实谱图,充分利用了谱图中的丰度、非常规碎裂模式和... 基于质谱的蛋白质组学快速发展,蛋白质质谱数据也呈指数式增长。寻找速度快、准确度高以及重复性好的鉴定方法是该领域的一项重要任务。谱图库搜索策略直接比较实验谱图与谱图库中的真实谱图,充分利用了谱图中的丰度、非常规碎裂模式和其他的一些特征,使得搜索更加快速和准确,成为蛋白质组学的主流鉴定方法之一。文中介绍基于谱图库的蛋白质组质谱数据鉴定策略,并针对其中两个关键步骤——谱图库构建方法和谱图库搜索方法进行深入介绍,探讨了谱图库策略的进展和挑战。 展开更多
关键词 蛋白质鉴定 串联质谱 谱图库 谱图库搜索 谱图聚类
注射用重组人肿瘤坏死因子受体突变体-Fc融合蛋白对中国健康志愿者血浆中肿瘤坏死因子-α浓度水平的影响
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作者 王艺曈 李艳 +9 位作者 刘畅 王炜 王茜 董立厚 陈适 臧彦楠 谢振伟 栗占国 宋海峰 方翼 《中国临床药理学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第3期312-315,326共5页
目的研究不同剂量重组人肿瘤坏死因子受体突变体-Fc融合蛋白[rhTNFR(m):Fc]单次皮下给药对中国健康志愿者血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响。方法研究纳入56例健康成年志愿者,分为6个剂量组,分别腹部皮下注射rhTNFR(... 目的研究不同剂量重组人肿瘤坏死因子受体突变体-Fc融合蛋白[rhTNFR(m):Fc]单次皮下给药对中国健康志愿者血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的影响。方法研究纳入56例健康成年志愿者,分为6个剂量组,分别腹部皮下注射rhTNFR(m):Fc 10,20,35,50,65,75 mg,测定给药前(0 h),给药后4,48,96,168,216,264,312,384,480 h的血浆中游离TNF-α和总TNF-α的浓度。结果单次给药0~264 h后,各个剂量组志愿者体内游离TNF-α和总TNF-α浓度均出现了显著升高;在给药264~480 h后,血浆中游离TNF-α和总TNF-α浓度逐渐下降;给药后480 h,游离TNF-α浓度几乎降至正常。在10~75 mg剂量内,血浆中游离TNF-α和总TNF-α在体内的暴露量(Cmax)与rhTNFR(m):Fc的剂量之间无明显的线性相关性。结论中国健康志愿者单次给予rhTNFR(m):Fc后,可引起血浆中游离TNF-α和总TNF-α水平的升高,因此,血浆中游离TNF-α和总TNF-α水平可能并不适合作为该类药物的药效学评价指标。 展开更多
关键词 重组人肿瘤坏死因子受体突变体-Fc融合蛋白 肿瘤坏死因子-Α 依那西普
人尿液蛋白质N-糖肽富集和质谱鉴定的新方法研究 预览
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作者 黄俊杰 焦丰龙 +3 位作者 王和平 朱丽华 秦伟捷 钱小红 《质谱学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期149-157,共9页
蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生理过程,是研究多种重大疾病诊断标志物的热点。与其他体液活检样本相比,尿液可以无创、大量获取,并且不受稳态调节的影响,能够在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态。因此,人尿液蛋白质N-... 蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生理过程,是研究多种重大疾病诊断标志物的热点。与其他体液活检样本相比,尿液可以无创、大量获取,并且不受稳态调节的影响,能够在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态。因此,人尿液蛋白质N-糖基化的规模化研究对疾病诊断标记物的筛选和治疗靶点的发现均具有重大意义。由于人尿液中的N-糖蛋白含量有限,修饰比例较低,在质谱分析时N-糖肽易被高丰度的非糖肽所掩盖,难以鉴定。因此,发展高效、高选择性的富集材料是实现尿蛋白N-糖基化深度覆盖的必要前提。本研究利用巯基-烯点击化学反应,使用[3-(甲基丙烯酰氨基)丙基]二甲基(3-硫代丙基)氢氧化铵内盐(SPP)制备了两性离子修饰亲水硅胶材料(SPP-SiO2)。该材料成功地应用于标准糖蛋白和健康人尿蛋白N-糖肽的富集和质谱检测,共鉴定了包含1 065个位点的633个尿液糖蛋白,比文献报道的鉴定规模提高了12.2%,证明了该亲水材料在尿液糖蛋白质组研究中的应用潜力。 展开更多
关键词 巯基-烯点击化学法 尿蛋白 N-糖肽 富集 质谱鉴定
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兔膀胱脱细胞基质对人骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响
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作者 谭云鹤 邢俊平 郭子宽 《中国临床研究》 CAS 2018年第5期589-592,共4页
目的研究兔膀胱脱细胞基质(BAMG)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖及分化能力的影响,并探讨其构建膀胱修复材料的可行性。方法采用正常人骨髓体外分离培养原代hBMSCs。用兔膀胱构建BAMG,制备BAMG浸泡液培养基,并以BAMG浸泡液培养... 目的研究兔膀胱脱细胞基质(BAMG)对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖及分化能力的影响,并探讨其构建膀胱修复材料的可行性。方法采用正常人骨髓体外分离培养原代hBMSCs。用兔膀胱构建BAMG,制备BAMG浸泡液培养基,并以BAMG浸泡液培养基为基础配制成骨、成脂、成平滑肌分化的诱导剂。将hBMSCs分别用正常培养液、正常诱导液、BAMG浸泡液及BAMG诱导液培养。采用苏木素-伊红(HE)与Masson三色染色法进行组织形态鉴定。采用流式细胞术及活细胞荧光染料羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记法检测BAMG浸泡液培养基对hBMSCs的生长毒性;分别观察以BAMG浸泡液为基础的诱导剂对hBMSCs成骨、成脂、成平滑肌的分化能力的影响。结果成功构建BAMG标本,与未处理的膀胱组织相比,已去除绝大多数细胞核,组织结构更加疏松、多孔。BAMG浸泡液与正常培养基对hBMSCs增殖无差异。诱导后的hBMSCs仍能高效分化为成骨、成脂、成平滑肌细胞。结论 BAMG不影响hBMSCs的增殖和分化能力,可作为支架材料,应用于膀胱组织工程中。 展开更多
关键词 人骨髓间充质干细胞 膀胱脱细胞基质 增殖 分化
质谱方法实现抗体类药物糖链修饰的鉴定与定量研究
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作者 黄怡 李晓宇 +2 位作者 田芳 钱小红 应万涛 《中国生物工程杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期32-41,共10页
目的:基于液质联用的串联质谱技术,建立基于完整糖肽水平的抗体药糖型定性定量分析方法,并用于生物仿制药糖型研究。方法:基于液相色谱质谱技术,从完整糖肽水平对糖型进行定性定量分析,同时与传统超高效液相荧光检测(ultra performan... 目的:基于液质联用的串联质谱技术,建立基于完整糖肽水平的抗体药糖型定性定量分析方法,并用于生物仿制药糖型研究。方法:基于液相色谱质谱技术,从完整糖肽水平对糖型进行定性定量分析,同时与传统超高效液相荧光检测(ultra performance liquid chromatography_fluorescence detection,UPLC-FLR)结果比较,获得最优分析策略,并用于曲妥珠单抗仿制药批次间糖型定性定量分析。结果:UPLC-FLR方法定量分析了贝伐单抗7种糖型;液质联用方法定量19种糖型;经亲水相互作用色谱(hydrophilic interaction liquid chromatography,HILIC)富集后,定量22种糖型。曲妥珠单抗仿制药批次间糖型定量结果显示良好的一致性。结论:基于液质联用的方法,具有速度快、灵敏度高、检测糖型种类多等优势,有望作为一种稳定的抗体药物糖蛋白位点特异性定量分析策略。 展开更多
关键词 超高效液相荧光检测 液质联用 抗体药物 完整糖肽定量
新型双季吡啶醛肟盐HCM的高效液相色谱法质控 预览
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作者 池艳妮 肖炳坤 +1 位作者 杨建云 黄荣清 《科学技术与工程》 北大核心 2018年第1期196-200,共5页
为建立新型双季吡啶醛肟盐HCM含量测定的液相色谱分析新方法。采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈,0.5%十二烷基硫酸钠缓冲盐(加入0.2%三乙胺,磷酸溶液调节至pH2.5),梯度(1~4 min43%乙腈,4~6 ... 为建立新型双季吡啶醛肟盐HCM含量测定的液相色谱分析新方法。采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱(5μm,4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈,0.5%十二烷基硫酸钠缓冲盐(加入0.2%三乙胺,磷酸溶液调节至pH2.5),梯度(1~4 min43%乙腈,4~6 min 43%~51%乙腈,6~30 min 51%乙腈,30~35 min 51%~43%乙腈,35~40 min,43%乙腈)洗脱;流速为1.0 m L/min;检测波长为290 nm;进样体积为20μL;柱温为室温。上述色谱条件下HCM主峰保留时间22.9 min,对称性良好(〈1.05),理论塔板数〉7 500;且在0.04~0.14 mg/m L的范围内,进样浓度与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9,n=6);检测限为3 ng,定量限为9 ng;仪器精密度、日内、日间精密度及重复性的RSD均小于2%。所建立的液相色谱方法精密度高,准确度好,可用于新型双季吡啶醛肟盐HCM的含量测定及质量控制。 展开更多
关键词 双季吡啶醛肟盐 质控研究 高效液相色谱法
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吡唑并嘧啶类化合物的合成及其催眠作用的研究
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作者 张帅 黄荣清 《现代药物与临床》 CAS 2018年第5期1009-1012,共4页
目的设计并合成吡唑并嘧啶类化合物,并对其进行催眠作用研究。方法以乙酮类衍生物和N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛为起始原料,再与3-氨基-4-氰基吡唑反应制备一系列吡唑并嘧啶类化合物;分别对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠的催眠作用和阈上... 目的设计并合成吡唑并嘧啶类化合物,并对其进行催眠作用研究。方法以乙酮类衍生物和N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛为起始原料,再与3-氨基-4-氰基吡唑反应制备一系列吡唑并嘧啶类化合物;分别对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠的催眠作用和阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠的催眠作用进行研究。结果设计并合成了7个目标化合物,其结构经-1H-NMR和ESI-MS确证。阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠的催眠作用研究表明化合物AL-5、AL-7有一定的协同戊巴比妥钠的催眠作用(P〈0.05),化合物AL-1、AL-3具有明显的催眠作用(P〈0.01)。阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠的催眠作用研究表明AL-1、AL-3、AL-5和AL-7组的睡眠持续时间均显著延长(P〈0.01、0.05),表明这些化合物有镇静催眠的效果。结论改进了吡唑并嘧啶类化合物的合成工艺,操作简单、成本低、产率较高;通过小鼠的行为学观察法对化合物的药效做了初步的评价,为今后的合成研究提供了方向。 展开更多
关键词 吡唑并嘧啶类化合物 非苯二氮类 镇静催眠 合成工艺 催眠作用
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