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hUTP14a在非小细胞肺癌组织中的表达 预览
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作者 张春凤 刘云 +1 位作者 陆敏 杜晓娟 《北京大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期145-150,共6页
目的:hUTP14a通过促进p53和Rb降解以及增强c-Myc致癌活性促进肿瘤的发生,且在人肝癌和结直肠癌组织中表达升高。本研究检测hUTP14a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)组织中的表达,并分析hUTP14a的表达水平与NSCLC患者... 目的:hUTP14a通过促进p53和Rb降解以及增强c-Myc致癌活性促进肿瘤的发生,且在人肝癌和结直肠癌组织中表达升高。本研究检测hUTP14a在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)组织中的表达,并分析hUTP14a的表达水平与NSCLC患者临床特征的关系。方法:收集2003年5月至2006年4月在北京大学第三医院接受手术治疗并经过组织病理学确诊的123例NSCLC患者的组织蜡块标本(鳞状细胞癌53例,腺癌70例),采用免疫组织化学染色方法分析癌组织及其邻近癌旁非肿瘤组织中hUTP14a的表达水平,应用SPSS 17.0软件的χ^2检验,以患者的性别、年龄、组织类型、肿瘤大小、分化程度以及临床分期等临床病理特征进行分组,对组间肺癌组织中hUTP14a的表达率进行比较。结果:hUTP14a在肺癌组织中的阳性表达率为37.4%(46/123),在癌旁组织中的阳性表达率为0(0/123),在肺癌组织中的表达率显著高于癌旁非肿瘤组织(P<0.001);hUTP14a在肺腺癌中的表达率为48.6%(34/70),在鳞状细胞癌中的表达率为22.6%(12/53),均显著高于相应的癌旁组织[0 (0/70),0 (0/53)];hUTP14a在肺腺癌中的表达率显著高于在鳞状细胞癌中的表达率(48.6% vs. 22.6%,χ^2=8.66,P=0.03)。进一步分析肺鳞状细胞癌、腺癌与各临床病理特征之间的关系发现,hUTP14a在病理分期(pTNM)晚期的肺鳞状细胞癌患者肿瘤组织中的表达率显著高于pTNM早期的鳞状细胞癌患者,而与肺腺癌的pTNM分期没有显著关联性,未见hUTP14a表达与肺癌的其他临床病理特征存在关联。结论:hUTP14a在肺癌组织中特异性表达升高,而且与肺鳞状细胞癌的pTNM分期具有关联性,提示hUTP14a有可能成为早期筛查诊断NSCLC的候选标志物。 展开更多
关键词 hUTP14a 非小细胞肺癌 免疫组织化学 鳞状细胞癌 腺癌
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采用杆状病毒/昆虫表达系统纯化蛋白制备抗hUTP14a多克隆抗体
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作者 张春凤 刘惠蛟 +1 位作者 任鹏伟 杜晓娟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期341-348,共8页
为制备兔抗人hUTP14a多克隆抗体并鉴定其抗体的特异性,本研究通过杆状病毒/昆虫表达系统制备并纯化Flag-hUTP14a-his蛋白,免疫新西兰家兔。ELISA方法检测免疫兔的抗血清滴度达到1∶10~5(体积比)时取血清,并通过Protein A免疫亲和层析柱... 为制备兔抗人hUTP14a多克隆抗体并鉴定其抗体的特异性,本研究通过杆状病毒/昆虫表达系统制备并纯化Flag-hUTP14a-his蛋白,免疫新西兰家兔。ELISA方法检测免疫兔的抗血清滴度达到1∶10~5(体积比)时取血清,并通过Protein A免疫亲和层析柱纯化抗体。在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)中过表达Flag-hUTP14a,或用小干扰RNA(small interference RNA, siRNA)沉默内源的hUTP14a蛋白表达后,提取细胞总蛋白质。经Western印迹分析制备的多克隆抗体的特异性;通过细胞免疫化学染色、细胞免疫荧光、免疫组织化学染色和免疫沉淀(immunoprecipitation, IP)实验对hUTP14a抗体的特异性进行鉴定。研究证实,制备的抗hUTP14a多克隆抗体能够特异性识别内源及外源表达的hUTP14a蛋白。该抗体可以用于细胞免疫荧光、细胞免疫化学染色、免疫组织化学染色、Western印迹及免疫沉淀等技术,为进一步研究hUTP14a的生物学功能提供了特异性抗体。 展开更多
关键词 hUTP14a 杆状病毒/昆虫表达系统 多克隆抗体
细胞焦亡研究进展 预览
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作者 潘少容 曾克武 白云 《生理科学进展》 CAS 北大核心 2019年第2期135-140,共6页
细胞焦亡是一种促炎性的细胞程序性死亡方式,其生化及形态学特征、发生机制都与细胞凋亡等其他细胞死亡方式有着显著的不同。细胞焦亡的发生不仅与感染性疾病有关,而且与代谢性疾病、神经系统疾病和动脉粥样硬化等疾病的发生、发展密切... 细胞焦亡是一种促炎性的细胞程序性死亡方式,其生化及形态学特征、发生机制都与细胞凋亡等其他细胞死亡方式有着显著的不同。细胞焦亡的发生不仅与感染性疾病有关,而且与代谢性疾病、神经系统疾病和动脉粥样硬化等疾病的发生、发展密切相关。通过对细胞焦亡发生机制及其与相关疾病发生、发展的关系进行研究,有利于了解这些疾病的发病机理,并为治愈这些疾病提供新的思路及作用靶点。 展开更多
关键词 细胞焦亡 胱天蛋白酶 炎症小体
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间充质干细胞作用机制的研究进展
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作者 黄庆雷 沈丽 邓钺 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2019年第2期108-128,共21页
间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞.取决于局部微环境的刺激, MSCs可产生大量生物活性物质,具有造血支持、提供营养、激活内源性干/祖细胞、组织损伤修复、免疫调节、促进血管... 间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)是一类具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞.取决于局部微环境的刺激, MSCs可产生大量生物活性物质,具有造血支持、提供营养、激活内源性干/祖细胞、组织损伤修复、免疫调节、促进血管新生、抗细胞凋亡、抗氧化、抗纤维化以及归巢等多方面的作用.临床试验结果表明, MSCs在许多疾病治疗中都表现出很好的效果,特别是自身免疫性疾病、组织损伤性疾病和退行性疾病等.然而, MSCs在疾病治疗中的作用机制尚不明确,本文重点介绍了目前研究发现的MSCs作用机制,这些机制主要包括转分化和细胞融合、旁分泌作用、细胞与细胞接触依赖、胞外囊泡和线粒体转移以及表观遗传学调控等.此外,还讨论了能够增强MSCs临床治疗效果的方法. 展开更多
关键词 间充质干细胞 作用机制 细胞接触依赖 线粒体转移 表观遗传学调控
一种N取代4,6-二氯靛红的抗癌机制研究
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作者 杨玉林 赵翔 张页 《中华肿瘤防治杂志》 北大核心 2018年第18期1283-1289,共7页
目的癌症已成为威胁人类健康的最严重疾病之一,研发新型抗癌药,揭示其作用机制,具有重要医学意义。本研究报道了一种新型4,6-二氯靛红衍生物(FMDOS)的抗癌活性及其作用机制。方法利用酸性磷酸酶法检测FMDCIS对癌细胞体外增殖的影... 目的癌症已成为威胁人类健康的最严重疾病之一,研发新型抗癌药,揭示其作用机制,具有重要医学意义。本研究报道了一种新型4,6-二氯靛红衍生物(FMDOS)的抗癌活性及其作用机制。方法利用酸性磷酸酶法检测FMDCIS对癌细胞体外增殖的影响;观察在FMDCIS作用下人肝细胞癌HepG2细胞的形态变化;应用流式细胞术分析FMDCIs对细胞周期的影响;于25℃离心分离可溶性的微管蛋白二聚体与不溶的聚合微管蛋白,检测FMDCIS处理组和对照组HepG2细胞内微管组装水平的差异;蛋白质印迹法检测FMDCIS所致细胞周期和凋亡通路中关键调控蛋白的改变;荧光染料单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine,MDC)检测自噬小体的变化。结果FMDCIS对人肝癌HepG2和BEL-7402细胞,以及小鼠乳腺癌4T1细胞均有显著的杀伤效果,其中对HepG2细胞的杀伤效果最强,其IC50为0.57μg/mL。而FMDCIS对人胎肝细胞L02的Ic50为1.67μg/mL,明显高于HepG2细胞,表明FMDCIS对胎肝细胞的毒性相对较弱。光镜显示,FMDCIS作用后的HepG2细胞铺展能力丧失并变成圆形。流式细胞术检测结果显示,HepG2细胞在FMDCIS孵育6、12和24h后,G2/M期占比分别为(10.2±0.5)%、(71.3±1.3)%、(82.3±1.2)%,与对照组相比差异有统计学意义,F=161.38,P〈0.01,表明FMDCIS可将HepG2细胞阻断于G2/M期。此外,随着FM—DCIS作用时间的延长,G2/M峰左移,提示发生了染色体丢失和有丝分裂灾难。对照组HepG2细胞内可溶性微管蛋白与不溶性聚合微管蛋白之比值为1.01±0.02,而在FMDCIS给药组孵育24h后,可溶性与聚合微管蛋白比值增加到2.01±0.23(F=10.38,P〈0.01),表明FMDCIS具有秋水仙素样的抗微管药活性,可抑制细胞内微管组装。蛋白质印迹法检测结果显示,在FMDCIS作用下,HepG2细胞内周期蛋白CyclinB1含量增高,F 展开更多
关键词 靛红 抗癌药 细胞周期阻滞 细胞周期蛋白 微管蛋白 有丝分裂 细胞凋亡 自噬
一种N取代靛红衍生物对肝癌细胞的作用及机制 预览
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作者 何静宇 赵翔 张页 《基础医学与临床》 CSCD 2018年第8期1074-1079,共6页
目的探讨一种新型N取代靛红衍生物(3MMIS)诱导肝癌细胞Hep G2产生周期阻滞并死亡的相关机制。方法利用酸性磷酸酶法检测体外抗癌活性。光镜下观察细胞的形态变化特征。流式细胞计检测细胞周期。Western blot检测细胞周期相关蛋白水平... 目的探讨一种新型N取代靛红衍生物(3MMIS)诱导肝癌细胞Hep G2产生周期阻滞并死亡的相关机制。方法利用酸性磷酸酶法检测体外抗癌活性。光镜下观察细胞的形态变化特征。流式细胞计检测细胞周期。Western blot检测细胞周期相关蛋白水平。检测3MMIS对微管组装的影响。结果 3MMIS对Hep G2细胞的IC50为0.4 mg/L。经过药物处理后细胞变圆,并出现很多囊泡。药物作用后细胞周期被阻滞在G2/M期,Cyclin B1持续增多,cyclin D1、cyclin E、E2F1、Rb和c-Myc的蛋白水平显著下调。3MMIS作用下细胞内可溶性游离微管蛋白增多,不溶性聚合微管蛋白减少。结论 3MMIS可以通过干扰微管蛋白的聚合引起Hep G2细胞发生周期阻滞,从而诱导细胞死亡。 展开更多
关键词 靛红 自噬 细胞周期阻滞 微管蛋白 抗癌药
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小叶莲有效成分对人乳腺癌细胞增殖、细胞周期及线粒体膜电位的影响 预览 被引量:1
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作者 孔越 王庆辉 +3 位作者 尚明英 肖军军 孟书聪 蔡少青 《中国药房》 CAS 北大核心 2017年第10期1368-1371,共4页
目的:探讨小叶莲提取物、有效成分及成分组合对人乳腺癌细胞增殖的影响及机制。方法:采用酸性磷酸酶法测定小叶莲4种提取物[乙醇提取物(Xc)、乙醇提取物石油醚萃取物(Xp)、乙醇提取物乙酸乙酯萃取物(Xe)、乙醇提取物正丁醇萃取... 目的:探讨小叶莲提取物、有效成分及成分组合对人乳腺癌细胞增殖的影响及机制。方法:采用酸性磷酸酶法测定小叶莲4种提取物[乙醇提取物(Xc)、乙醇提取物石油醚萃取物(Xp)、乙醇提取物乙酸乙酯萃取物(Xe)、乙醇提取物正丁醇萃取物(Xz)]、5种有效成分[鬼臼毒素(S1)、去氧鬼臼毒素(S2)、4-去甲去氧鬼臼毒素(S3)、8-异戊烯基山柰酚(S4)、8,2′-二异戊烯基槲皮素-3-甲醚(S5)]以及3种有效成分组合{组合1[S1-S2-S3-S4-S5(2∶4∶1∶4∶32),Z1]、组合2[S2-S4(1∶1),Z2]、组合3[S3-S4(1∶4),Z3]}对人乳腺癌MDA-MB-231、MCF-7细胞增殖的影响;流式细胞仪检测上述样品对MDA-MB-231、MCF-7(或T47D)细胞周期和细胞线粒体膜电位的影响。结果:小叶莲有效成分组合Z1对MDA-MB-231、MCF-7细胞具有显著抑制作用,其半数抑制浓度(IC50)分别为(0.27±0.2)、(0.11±0.1)μg/mL;提取物Xc、Xp、Xe,有效成分S2、S4以及成分组合Z2、Z3对MDA-MB-231、MCF-7(或T47D)细胞的增殖均有较强抑制作用,IC50均小于15μg/mL;各提取物和有效成分均可阻滞MDA-MB-231、MCF-7细胞周期于G2/M期;各有效成分组合均可阻滞MDA-MB-231、T47D细胞周期于G0/G1期,并能降低MDA-MB-231、T47D细胞线粒体膜电位。结论:小叶莲有效成分及成分组合可通过影响细胞周期和线粒体膜电位,从而抑制乳腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 小叶莲 有效成分 有效成分组合 人乳腺癌MDA-MB-231细胞 人乳腺癌MCF-7细胞 人乳腺癌T47D细胞 细胞周期 线粒体膜电位
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OSKM诱导过表达c-Jun肝癌细胞重编程
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作者 苏铭 韩烁 +5 位作者 张明智 李睿智 魏示若 曾沃坦 刘进稳 沈丽 《解剖学报》 CSCD 北大核心 2017年第3期296-302,共7页
目的构建OSKM诱导的过表达c-Jun肝癌细胞(C3A-c-Jun)重编程细胞系,探讨外源性c-Jun对肝癌细胞重编程的影响。方法通过C3A细胞稳定过表达c-Jun后进行OSKM诱导重编程,通过碱性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印迹法,免疫荧光等技术对细... 目的构建OSKM诱导的过表达c-Jun肝癌细胞(C3A-c-Jun)重编程细胞系,探讨外源性c-Jun对肝癌细胞重编程的影响。方法通过C3A细胞稳定过表达c-Jun后进行OSKM诱导重编程,通过碱性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印迹法,免疫荧光等技术对细胞进行鉴定,建立C3A-c-Jun诱导肿瘤干细胞系C3A-c-Jun-i CSCs。结果 C3A-c-Jun-i CSCs克隆呈圆顶状,边缘圆钝,克隆内细胞小且排列紧密,多层分布,碱性磷酸酶染色阳性,mRNA和蛋白水平均可表达多潜能性标记物OCT4、SOX2;C3A-c-Jun-i CSCs组外源性和内源性Sox2的表达量均明显高于C3A-i CSCs对照组;在重编程过程中c-Jun持续表达。结论 OSKM诱导C3A、C3A-c-Jun肝癌细胞重编程,分别建立C3A-i CSCs和C3A-c-Jun-i CSCs细胞系,发现外源性c-Jun通过上调Sox2基因的表达,启动下游一系列反应,对肝癌细胞重编程过程起促进作用。 展开更多
关键词 C-JUN 诱导 肿瘤干细胞 重编程 免疫印迹法 C3A细胞
多样本人腮腺间充质干细胞诱导iPS细胞的对比研究 预览 被引量:1
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作者 颜兴 李扬 +1 位作者 许诺 张方明 《口腔医学》 CAS 2016年第11期972-975,979共5页
目的研究比较不同样本腮腺间充质干细胞(hPMSCs)生成诱导多潜能干细胞(iPSCs)的效果。方法分别分离培养3个患者的h PMSCs,应用游离质粒混合因子(OCT3/4、SOX2、KLF4、c-MYC、LIN28、TP53 shRNA)电转导法重编程诱导获得iPS细胞(h ... 目的研究比较不同样本腮腺间充质干细胞(hPMSCs)生成诱导多潜能干细胞(iPSCs)的效果。方法分别分离培养3个患者的h PMSCs,应用游离质粒混合因子(OCT3/4、SOX2、KLF4、c-MYC、LIN28、TP53 shRNA)电转导法重编程诱导获得iPS细胞(h PMSC-iPSCs)。比较在相同条件下3个不同供体来源腮腺细胞诱导iPS细胞的差异。结果 3个不同样本人腮腺间充质干细胞都成功诱导iPSCs,形成率分别为0.11%、0.10%、0.09%,无显著性差异(P〉0.05);诱导形成iPS克隆时间有差异(P〈0.05);形成iPSCs后维持培养倍增时间无差异(P〉0.05)。结论不同患者可分离获得hPMSCs后成功诱导hPMSC-iPSCs,诱导效率无差异,诱导时间有差异。 展开更多
关键词 诱导多潜能干(iPS)细胞 腮腺 间充质干细胞
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p38信号通路参与P19 CL6细胞早期心肌分化 预览
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作者 黄巧丽 李涛 +3 位作者 姜科声 刘羿男 李贤慧 刘元伟 《浙江师范大学学报:自然科学版》 CAS 2015年第1期95-102,共8页
以P19CL6小鼠畸胎瘤细胞心肌分化为模型,研究了p38信号通路在干细胞心肌分化早期阶段的作用.在诱导剂二甲基亚砜作用下,P19CL6细胞分化为自发跳动的心肌细胞,表达心肌标志性基因.在诱导分化过程中,p38信号通路活化.采用特异性抑制剂SB20... 以P19CL6小鼠畸胎瘤细胞心肌分化为模型,研究了p38信号通路在干细胞心肌分化早期阶段的作用.在诱导剂二甲基亚砜作用下,P19CL6细胞分化为自发跳动的心肌细胞,表达心肌标志性基因.在诱导分化过程中,p38信号通路活化.采用特异性抑制剂SB203580在早期分化阶段封闭p38信号通路,结果发现:高剂量SB203580诱导细胞凋亡;低剂量SB203580抑制心肌祖细胞标志基因GATA4和Nkx2.5的表达,并显著下调生心性信号分子BMP2和BMP4的表达.而过表达p38α质粒则能促进P19CL6细胞表达GATA4和Nkx2.5.表明p38信号通路正性调控P19CL6细胞的早期心肌分化,并维持细胞的增殖和存活能力. 展开更多
关键词 P19CL6细胞 心肌分化 P38激酶 信号通路
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神经干细胞分化调控机制的研究进展 被引量:3
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作者 幸华杰 李梦桃 +1 位作者 宋青 白云 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期140-144,共5页
神经干细胞(NSCs)是一类具有自我更新和多方向分化潜能的干细胞,可以分化为神经元,星形胶质细胞和少突胶质细胞。自从1992年Reynolds等从小鼠纹状体中分离到神经干细胞之后,相关的研究已经取得了很大的进展。然而由于中枢神经系统... 神经干细胞(NSCs)是一类具有自我更新和多方向分化潜能的干细胞,可以分化为神经元,星形胶质细胞和少突胶质细胞。自从1992年Reynolds等从小鼠纹状体中分离到神经干细胞之后,相关的研究已经取得了很大的进展。然而由于中枢神经系统内神经干细胞数量较少,而神经系统损伤后移植的外源的神经干细胞大多分化为神经胶质细胞,进而形成瘢痕组织,限制了神经系统的恢复。因此,如何实现神经干细胞的定向诱导分化成为当前该领域的核心问题。 展开更多
关键词 神经干细胞 分化 机制
外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响 预览
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作者 吴文涛 葛瑞民 +3 位作者 董林 刘秀秀 张小燕 沈丽 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期98-101,共4页
目的探讨外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响。方法构建可表达持续活化型Gli2的慢病毒载体,包装慢病毒颗粒,继而感染小鼠星形胶质细胞,对其生物学特性的改变进行鉴定。结果研究发现,含有外源表达的持续活化型Gli... 目的探讨外源表达持续活化型Gli2对小鼠星形胶质细胞生物学特性的影响。方法构建可表达持续活化型Gli2的慢病毒载体,包装慢病毒颗粒,继而感染小鼠星形胶质细胞,对其生物学特性的改变进行鉴定。结果研究发现,含有外源表达的持续活化型Gli2的小鼠星形胶质细胞在神经干细胞培养基中连续培养13 d后可获得形成细胞球的能力,且形成的细胞球与正常的小鼠神经球在形态上相近;对所形成的细胞球做免疫荧光染色,结果显示神经干细胞的特异性标志物Nestin呈阳性。结论在小鼠星形胶质细胞中外源表达持续活化型Gli2后可使其获得形成神经球样细胞球的能力。 展开更多
关键词 神经干细胞 中枢神经系统损伤 持续活化型 GLI2 神经球 慢病毒转染法 星形胶质细胞 NESTIN
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儿童传染性单核细胞增多症多个临床检测指标的诊断价值 预览 被引量:2
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作者 伏洁 崔红 周士新 《武警医学》 CAS 2013年第9期770-773,共4页
目的 探讨儿童传染性单核细胞增多症(infectiousmononucleosis,IM)的检测指标的诊断价值。方法观察101例IM患儿发热天数与多种检测指标,如EB病毒DNA(DNAcopiesofEpstein—Barrvirus,EBV—DNA)、EB衣壳蛋自(viralcap—sidantigen... 目的 探讨儿童传染性单核细胞增多症(infectiousmononucleosis,IM)的检测指标的诊断价值。方法观察101例IM患儿发热天数与多种检测指标,如EB病毒DNA(DNAcopiesofEpstein—Barrvirus,EBV—DNA)、EB衣壳蛋自(viralcap—sidantigen,VCA)抗体、异型淋巴细胞、血液中WBC和ALT等指标之间的关系。结果IM患儿的发热天数与多种检测指标的关系用散点图趋势分析提示,不同的检测指标随着发热天数变化趋势不同。IM患儿在发热早期和中期(发热8d内),EBV—DNA和IgG—VCA的检出阳性率较高(分别是77.2%和76.9%);发热后期EBV—DNA和IgG—VCA(发热12d后)迅速下降。结论在IM患儿发热的初期和中期检测EBV—DNA和VCA的IgG抗体,有助于患儿的特异性诊断。 展开更多
关键词 儿童传染性单核细胞增多症 EB病毒DNA EB衣壳蛋白抗体 发热天数
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邻硝基苯基靛红查尔酮单用或与抗癌药或抑制剂联用的抗癌活性 预览 被引量:2
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作者 戚雨婷 张丽君 +1 位作者 赵翔 张页 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第12期1544-1548,共5页
目的 研究邻硝基苯基靛红查尔酮(ONIC)单独和联合用药的抗癌效果并分析其机制。方法 检测ONIC对体外培养癌细胞的增殖抑制。用Chou氏法和金氏法探讨ONIC与10种抗癌药或通路抑制剂的联用效果。结果 ONIC对8种癌细胞系均有显著抗癌活性... 目的 研究邻硝基苯基靛红查尔酮(ONIC)单独和联合用药的抗癌效果并分析其机制。方法 检测ONIC对体外培养癌细胞的增殖抑制。用Chou氏法和金氏法探讨ONIC与10种抗癌药或通路抑制剂的联用效果。结果 ONIC对8种癌细胞系均有显著抗癌活性。与ONIC有协同作用的药物有5种:HSP90抑制剂17-AAG、Arf抑制剂布雷菲德菌素A、蛋白酶体抑制剂硼替佐米、mTOR抑制剂雷帕霉素、ERK1/2抑制剂U0126。与ONIC拮抗的药物有3种:RhoA抑制剂法舒地尔、PI3K抑制剂LY294002、LKB1-AMPK激动剂甲福明。微管稳定剂紫杉醇和Rac1抑制剂NSC23766与ONIC有叠加作用。结论 ONIC不仅自身有强抗癌活性,而且与不同药物联用具有特异的协同或拮抗效果,提示其机制可能与ONIC作用于RhoA和mTOR的上下游通路有关。 展开更多
关键词 靛红 查尔酮 抗癌药 协同作用 联合用药
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儿童传染性单核细胞增多症的热程与EB病毒DNA阳性率和拷贝数相关性及临床意义的探讨 预览 被引量:4
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作者 伏洁 周士新 +5 位作者 崔红 刘晓红 张英超 丁瑛雪 姜丽娜 王新宝 《中国医刊》 CAS 2012年第11期43-45,共3页
目的探讨儿童传染性单核细胞增多症(IM)的热程与EB病毒DNA(EBV—DNA)检测阳性率的相关性及临床诊断意义。方法回顾性分析2011年5月至2012年5月住院的IM患儿32例,分析其热程与EBV—DNA阳性率和拷贝数的关系。结果儿童IM治疗前EBV—... 目的探讨儿童传染性单核细胞增多症(IM)的热程与EB病毒DNA(EBV—DNA)检测阳性率的相关性及临床诊断意义。方法回顾性分析2011年5月至2012年5月住院的IM患儿32例,分析其热程与EBV—DNA阳性率和拷贝数的关系。结果儿童IM治疗前EBV—DNA的阳性率为68.75%(20/32),拷贝数平均为1.39×10^7/ml(中位数8.36×10^4/ml),检测时发病时间平均6.6天(中位数8.0天)。患儿治疗前EBV—DNA的阳性率分别为1~4天91.67%、5~8天61.54%、9~12天33.33%、13~16天0。热程1~4天EBV—DNA的检出阳性率和拷贝数均高于其他各组,差异有显著性(P〈0.05)。4组患儿EBV—DNA的阳性率随着热程的增加而呈直线下降,相关系数R=0.99(P〈0.05)。结论在患儿发热早期(1~4天)检测EBV—DNA对儿童IM的诊断有很高的价值,而发热9天以后,该项检测在临床诊断上意义不大。 展开更多
关键词 儿童 传染性单核细胞增多症 EB病毒DNA 荧光定量PCR 热程
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低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞的生长抑制作用及其机制 预览
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作者 李映 王畅 +2 位作者 谭业辉 甄红英 姚程 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期249-253,I0003共6页
目的:探讨低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞生长的影响及其可能的作用机制,为以肿瘤干细胞为靶点的肿瘤治疗提供依据。方法:体外培养P19细胞,实验分非加药组、阿霉素组和力达霉素组。MTT法检测力达霉素处理P19细胞后的剂量曲线和时... 目的:探讨低剂量力达霉素对小鼠P19胚胎癌细胞生长的影响及其可能的作用机制,为以肿瘤干细胞为靶点的肿瘤治疗提供依据。方法:体外培养P19细胞,实验分非加药组、阿霉素组和力达霉素组。MTT法检测力达霉素处理P19细胞后的剂量曲线和时间曲线。流式细胞术进一步确定力达霉素和阿霉素处理过的P19细胞的非凋亡剂量,并检测其细胞周期改变。Rea-l time PCR、Western blotting和免疫荧光化学技术检测力达霉素和阿霉素处理过的P19细胞中转录因子Oct4 mRNA和蛋白质的表达水平。结果:MTT法分析结果显示,力达霉素和阿霉素分别处理P19细胞后的半数有效抑制浓度(IC50)为1×10^-11mol·L^-1和0.5×10^-6mol·L^-1,从0.001 nmol·L^-1到0.1 nmol·L^-1浓度范围内的力达霉素处理细胞120 h后,仍可有效抑制小鼠P19胚胎癌细胞生长。流式细胞术分析表明,非凋亡剂量0.01 nmol·L^-1力达霉素阻滞P19细胞生长发生在G1期,而0.5μmol·L^-1阿霉素阻滞P19细胞生长则发生在G2期。Rea-l time PCR、Western blotting和免疫荧光化学实验均揭示低剂量力达霉素下调P19细胞中的Oct4表达,而阿霉素无此作用。结论:低剂量力达霉素抑制P19细胞生长可能与其下调了胚胎干细胞基因Oct4有关。 展开更多
关键词 力达霉素 P19胚胎癌细胞 转录因子Oct4
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一种改良的蛋白质电泳考马斯亮蓝G-250染色方法 预览 被引量:6
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作者 张瑶 刘芳 张页 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第8期953-955,共3页
目的建立一种简便、低毒的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法。方法电泳后的凝胶经短暂固定后,用含氨基磺酸的考马斯亮蓝G-250溶液染色,无需脱色。结果该方法灵敏度高于经典考马斯亮蓝R-250染色方法,并去除了常规染色和脱色液中有毒... 目的建立一种简便、低毒的蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法。方法电泳后的凝胶经短暂固定后,用含氨基磺酸的考马斯亮蓝G-250溶液染色,无需脱色。结果该方法灵敏度高于经典考马斯亮蓝R-250染色方法,并去除了常规染色和脱色液中有毒的甲醇等溶剂。结论改良方法具有灵敏度高、染色背景浅、节省染料、直接显色无需脱色及配方安全低毒等优点。 展开更多
关键词 电泳 聚丙烯酰胺 蛋白质染色 考马斯亮蓝
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PCR片段测序和基因分型两种方法对肯尼迪病的诊断(英文)
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作者 何其华 张小燕 +3 位作者 陆爱丽 兰峰 洪天配 沈丽 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期 283-288,共6页
X连锁脊延髓肌萎缩症(SBMA)或肯尼迪病是一种成年人发病的神经变性疾病,以肌无力与慢性、进行性肌萎缩为特征.通过PCR片段测序和基因分型法准确检测雄激素受体(AR)基因CAG复制数目,兄弟俩(来自同一个中国家庭)被确诊为隐性遗传性S... X连锁脊延髓肌萎缩症(SBMA)或肯尼迪病是一种成年人发病的神经变性疾病,以肌无力与慢性、进行性肌萎缩为特征.通过PCR片段测序和基因分型法准确检测雄激素受体(AR)基因CAG复制数目,兄弟俩(来自同一个中国家庭)被确诊为隐性遗传性SBMA.为了得到该中国家庭SMBA家系人员AR基因的CAG复制数目,我们采用了PCR片段测序和基因分型两种方法.在该SMBA家系中有两个已发病的成年男性、未发病的年轻男性,及女性基因携带者.两个已发病男性患者AR基因中CAG三核苷酸串重复数目分别是48和45.以前的研究表明特定三核苷酸串重复数目的扩增可导致人类遗传性神经障碍疾病发病。我们的研究结果完全支持这一观点,SMBA中国家系的三核苷酸CAG拷贝数目检测结果表明,AR基因CAG扩增数目与SMBA发病相关. 展开更多
关键词 雄性激素受体 CAG多重三核苷酸重复 肯尼迪病 脊延髓肌萎缩症 X连锁
成骨细胞复合原位成型磷酸钙骨水泥的细胞学研究 预览 被引量:1
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作者 张洲 乔朋艳 +3 位作者 肖军军 董利民 谢秋菲 徐韬 《北京大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期 67-72,共6页
目的:通过体外细胞培养实验,观察分析壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥、β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)/磷酸钙骨水泥、含钾磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞的影响以及固化后10 d细胞的生物活性变化。方法:首先以兔的骨... 目的:通过体外细胞培养实验,观察分析壳聚糖微球/磷酸钙骨水泥、β-磷酸三钙(β-tricalcium phosphate,β-TCP)/磷酸钙骨水泥、含钾磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞的影响以及固化后10 d细胞的生物活性变化。方法:首先以兔的骨髓为组织来源,采用密度梯度分离法和贴壁分离法分离培养原代兔骨髓基质细胞(rabbitmarrow stromal cell,rMSC),通过流式细胞分析和分选得到成分比较单一的兔骨髓基质细胞,经过体外诱导得到兔成骨细胞,用茜素红染色法验证其成骨功能。将rMSC分别与上述3种骨水泥固化块及其浆料复合培养,空白对照组是直接在24孔板上接种细胞,每组4个样本。在复合培养的第1、4、7、10天,通过酸性磷酸酶(acid phosphataseassay,APA)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性测定,检测细胞的增殖和分化能力;吖啶橙(acridine or-ange,AO)染色后荧光显微镜观察,对细胞进行计数并分析。环境扫描电子显微镜观察细胞在材料表面的生长、黏附状况。各组结果进行双因素方差分析,用LSD法进行组间比较。结果:3种骨水泥浆料在固化过程中均对rMSC有较大影响,细胞的增殖活性(复合培养第10天APA活性浆料组吸光度平均值分别为0.049,0.050,0.049;固化块组分别为0.898,0.867,0.909;P〈0.001)和分化能力(复合培养第10天ALP活性浆料组平均值分别为0.775,0.782,0.798 U/g protein;固化块组分别为49.288,49.631,49.744 U/g protein;P〈0.001)均明显低于固化块组,细胞数目也明显减少(复合培养第10天细胞数目每视野平均为3.7,3.7,3.7个;固化块组分别为91.1,89.7,93.7个,P〈0.001),且这种影响是不可恢复的;rMSC在3种骨水泥的固化块上能较好地黏附,细胞数目、增殖和分化能力基本不受影响。结论:可注射性磷酸钙骨水泥浆料固化过程对成骨细胞有较大的影响,用成骨细胞复合浆料前需对细胞采取� 展开更多
关键词 成骨细胞 磷酸钙类 骨代用品
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巢蛋白基因沉默通过激活细胞周期依赖性激酶(cdk5)促进大鼠神经胶质瘤细胞C6的迁移和增殖 被引量:1
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作者 兰宝金 鲁文静 +8 位作者 兰峰 曹翠丽 葛瑞民 陈玲珑 张小燕 陆爱丽 吴碧莲 马晓雯 沈丽 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期419-425,共7页
中间纤维蛋白巢蛋白(nestin)在各种胚胎前体细胞及成熟组织中均有表达.近年一些研究显示,巢蛋白的表达上调和一些恶性肿瘤的病理特征有相关性.但是,巢蛋白在干细胞分化及肿瘤发生中的作用还不为人知.在本研究中,我们运用短发卡状的RN... 中间纤维蛋白巢蛋白(nestin)在各种胚胎前体细胞及成熟组织中均有表达.近年一些研究显示,巢蛋白的表达上调和一些恶性肿瘤的病理特征有相关性.但是,巢蛋白在干细胞分化及肿瘤发生中的作用还不为人知.在本研究中,我们运用短发卡状的RNA为工具,以大鼠神经胶质瘤细胞系C6为模型,对巢蛋白的功能进行了研究.划痕实验和迁移实验的结果均显示,巢蛋白基因沉默可以促进C6细胞的迁移.同时,BrdU渗入实验显示,此过程伴随着细胞增殖的增加.进一步研究显示,细胞周期依赖性激酶cdk5的活性在此过程中有显著的增加.此外,巢蛋白基因沉默所引起的迁移改变可以被cdk5特异性抑制剂roscovitine所回复,而对细胞增殖则没有显著影响.综上所述,本研究揭示了巢蛋白基因沉默与神经胶质瘤细胞的迁移和增殖相关,而cdk5是此过程的重要调节因子. 展开更多
关键词 中间纤维 巢蛋白 RNA干扰 迁移 增殖
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