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CaMKⅡγ基因沉默对破骨细胞分化中NFATc1、TRAP、c-Src基因表达的影响 预览
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作者 刘梦楠 王会 +3 位作者 戚孟春 董伟 李任 孙红 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2019年第4期294-299,共6页
目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Calmodulin-dependent kinase Ⅱ,CaMKⅡ)γ基因沉默对破骨细胞分化过程中活化T-细胞核因子c1(Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)、非受体酪氨酸激酶(Cell-sarcoma receptor coa... 目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Calmodulin-dependent kinase Ⅱ,CaMKⅡ)γ基因沉默对破骨细胞分化过程中活化T-细胞核因子c1(Nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)、非受体酪氨酸激酶(Cell-sarcoma receptor coactivator,c-Src)、抗酒石酸酸性磷酸酶(Tartrate resistant acid phosphatase,TRAP)基因表达的影响,探讨CaMKⅡγ在破骨细胞分化中的作用和分子机制。方法用慢病毒构建CaMKⅡγRNA干扰载体,转染RAW264.7细胞,实验分为A、B、C三组,分别为对照组、阴性载体组和干扰载体组;三组细胞转染12 h后,用50 ng RANKL诱导向破骨细胞分化;诱导5 d后收获细胞,采用实时荧光定量PCR、Western blot、免疫荧光化学检测三组细胞中NFATc1、TRAP、c-Src基因表达情况。结果 C组中NFATc1、TRAP、c-Src mRNA水平较A组分别下降了49.86%、43.65%和53.57%(P<0.001),蛋白水平分别下降了54.22%、46.75%和45.86%(P<0.001);而B组与A组比较无统计学差异(P>0.05)。免疫荧光化学检测C组上述基因荧光强度明显弱于A、B组,且破骨细胞生成明显少于A、B组。结论 CaMKⅡγRNA干扰显著抑制了NFATc1、TRAP、c-Src基因表达,提示CaMKⅡγ在破骨细胞分化中起着关键调控作用。 展开更多
关键词 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ RNA干扰 活化T细胞核因子c1 非受体酪氨酸激酶 抗酒石酸酸性磷酸酶
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CaMKⅡδ基因沉默对破骨细胞分化功能及c-fos/c-jun/CREB基因的影响 预览
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作者 张誉泓 戚孟春 +1 位作者 董伟 孙红 《国际口腔医学杂志》 CAS CSCD 2019年第4期420-425,共6页
目的探索编码钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱδ的基因沉默对破骨细胞分化功能的影响以及c-fos、c-jun、CREB基因在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用,以揭示破骨细胞分化调控的分子机制。方法构建CaMKⅡδ RNA干扰载体,转染至小鼠RAW264.7... 目的探索编码钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱδ的基因沉默对破骨细胞分化功能的影响以及c-fos、c-jun、CREB基因在CaMKⅡδ调控破骨细胞分化中的作用,以揭示破骨细胞分化调控的分子机制。方法构建CaMKⅡδ RNA干扰载体,转染至小鼠RAW264.7细胞,确定干扰效率。病毒转染细胞后,用50 ng·mL^-1核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导,5 d后收获,通过耐酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)检测、牛骨吸收陷窝检测沉默CaMKⅡδ基因对破骨细胞分化、骨吸收功能的影响;48 h后收获,利用实时聚合酶链式反应(PCR)、Westernblot等方法检测c-fos、c-jun、CREB的表达情况。结果 CaMKⅡδ RNA干扰在mRNA和蛋白质水平的干扰效率分别为70.6%和72.2%。 CaMKⅡδ RNA干扰可显著降低 c-fos、c-jun和CREB的mRNA水平,下调幅度分别为74%、49%和24%,CaMKⅡδ RNA干扰可显著降低c-Fos、c-Jun和CREB的水平,下调幅度分别为74.3%、61.3%和59.2%。结论 CaMKⅡδ RNA干扰可在mRNA和蛋白质水平显著抑制c-fos、c-jun、CREB的表达,其共同参与CaMKⅡδ对破骨细胞分化的调控。 展开更多
关键词 破骨细胞 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ C-FOS C-JUN 环腺苷酸反应原件结合蛋白
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钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ RNA干扰载体构建及对破骨细胞分化和骨吸收的影响 预览
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作者 王艺睿 王会 +3 位作者 戚孟春 董伟 冯晓洁 孙红 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第4期557-561,共5页
目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)RNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响。方法构建3个CaMKⅡγRNA慢病毒重组干扰载体;阴性载体转染RAW264.7细胞,确定最适转染滴度值(MOI)和转染效率。用重组载体转染细胞,确定干扰效果最佳的... 目的研究钙调蛋白依赖性激酶Ⅱγ(CaMKⅡγ)RNA干扰对破骨细胞分化和骨吸收的影响。方法构建3个CaMKⅡγRNA慢病毒重组干扰载体;阴性载体转染RAW264.7细胞,确定最适转染滴度值(MOI)和转染效率。用重组载体转染细胞,确定干扰效果最佳的重组载体用于后续实验。细胞分为对照组、阴性载体组、干扰载体组;病毒转染5d后通过TRAP染色及牙本质磨片骨吸收陷窝检测3组破骨细胞生成及骨吸收情况。结果成功构建了3个CaMKⅡγ重组干扰载体;最适MOI值为30,转染效率>80%。#3重组载体干扰效果最佳,干扰效率在mRNA及蛋白水平分别为78.16%和67.02%(P<0.01)。3组细胞中,干扰载体组多核破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数和面积较对照组分别下降了59.99%、54.19%和57.94%(P<0.01),而阴性载体组和对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论CaMKⅡγRNA干扰可显著抑制破骨细胞生成和骨吸收功能。 展开更多
关键词 钙调蛋白依赖性激酶IIγ 破骨细胞 RNA干扰 慢病毒
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CaMKⅡδ慢病毒过表达载体构建及其对破骨细胞分化的影响 预览 被引量:1
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作者 张艳波 戚孟春 +4 位作者 董伟 张广峰 冯晓洁 温黎明 孙红 《实用医学杂志》 北大核心 2018年第13期2123-2127,共5页
目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶IIδ(CaMKIIδ)过表达对破骨细胞分化的影响。方法筛选破骨细胞分化中CaMKIIδ高表达转录本,构建过表达载体。RAW264.7细胞分成对照组、空载体组和过表达组,检测CaMKIIδ表达情况;并在分化诱导5 d后... 目的研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶IIδ(CaMKIIδ)过表达对破骨细胞分化的影响。方法筛选破骨细胞分化中CaMKIIδ高表达转录本,构建过表达载体。RAW264.7细胞分成对照组、空载体组和过表达组,检测CaMKIIδ表达情况;并在分化诱导5 d后检测破骨细胞生成及骨吸收情况。结果CaMKIIδ转录本2和3在破骨细胞分化中高表达;用转录本2构建了过表达载体,建立了稳定转染株。过表达组CaMKIIδmRNA水平较对照组、空载体组分别上升107.8%和85.7%(P<0.05),蛋白水平分别上升37.2%和37.1%(P<0.05),证实重组CaMKIIδ在细胞中得到有效表达。CaMKIIδ过表达组破骨细胞数目、牙本质吸收陷窝数和面积与对照组和空载体组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CaMKIIδ过表达对破骨细胞分化和骨吸收无明显影响。 展开更多
关键词 钙离子/钙调蛋白依赖性激酶IIδ 基因重组 破骨细胞 慢病毒 核因子ΚB受体活化因子配体
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NFATc1过表达对唑来膦酸诱发的破骨细胞生成抑制的影响 预览 被引量:1
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作者 张广峰 阴露佳 +4 位作者 戚孟春 董伟 冯晓洁 温黎明 孙红 《广东医学》 北大核心 2017年第12期1795-1799,共5页
目的 研究活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)过表达对唑来膦酸诱发的破骨细胞生成抑制的挽救效应。方法 小鼠NFATc1重组慢病毒转染RAW264.7细胞,验证NFATc1蛋白表达。细胞分为A、B两组,分别转染空白载体和NFATc1重组载体。两组细胞均用50... 目的 研究活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)过表达对唑来膦酸诱发的破骨细胞生成抑制的挽救效应。方法 小鼠NFATc1重组慢病毒转染RAW264.7细胞,验证NFATc1蛋白表达。细胞分为A、B两组,分别转染空白载体和NFATc1重组载体。两组细胞均用50ng/mL核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导5d,并在第2天加入1×10-6mmol/mL唑来膦酸作用2d。第6天收获细胞,检测破骨细胞的生成和功能及NFATc1、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、酪氨酸激酶(c-Src)基因的表达情况。结果 NFATc1蛋白在细胞中均有表达。B组TRAP阳性破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数目和面积显著高于A组(P〈0.01)。B组NFATc1、TRAP、c-Src的蛋白水平显著高于A组(P〈0.01);B组3个基因mRNA水平显著高于A组(P〈0.01)。免疫荧光细胞化学检测也得到相似的结果。结论 NFATc1过表达对唑来膦酸诱发的破骨细胞生成及NFATc1、TRAP、c-Src基因表达的抑制具有挽救效应;NFATc1作为Ca2+信号的关键分子,在唑来膦酸诱发的破骨细胞生成抑制中起着关键作用。 展开更多
关键词 活化T细胞核因子蛋白c1 基因重组 唑来膦酸 破骨细胞 抗酒石酸酸性磷酸酶
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唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ与钙调蛋白结合及下游基因表达的影响 被引量:1
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作者 王会 董伟 +3 位作者 戚孟春 孙红 冯晓洁 温黎明 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期120-125,共6页
目的探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^2+/calmodnlin.dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activation of cells-1,NFATc1)、抗酒石... 目的探讨唑来膦酸对破骨细胞分化中Ca^2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^2+/calmodnlin.dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)与钙调蛋结合及下游活化T细胞核因子c1(nuclear factor of activation of cells-1,NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acidphos phatase,TRAP)基因表达的影响,探索其抑制破骨细胞分化的分子机制。方法将小鼠RAW264.7细胞分为A、B两组,每组均以5×10^3个/孔接种于直径为30mm的培养皿中培养。A组(对照组)在NF-κB受体激活蛋白配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导下向破骨细胞形成,B组(唑来膦酸组)在RANKL诱导培养1d后加用1×10^-6mol/L唑来膦酸处理2d。应用免疫共沉淀co.immunoprecipitation,Co-IP)及反向Co-IP对CaMKⅡ与钙调蛋白的结合进行分析;应用蛋白质印迹法及免疫荧光细胞化学检测两组NFATc1、TRAP蛋白表达,并对破骨细胞生成进行评价。结果B组新生多核破骨细胞数、牙本质吸陷窝数和面积分别为(11.3±1.5)个、(8.7±2.1)个和(5034.4+775.4)μm^2,均显著低于A组[分别为(37.7±5.7)个、(23.0±4.0)个和(15042.7±1906.0)μm^2](P〈0.01)。Co—IP及反向Co—IP检测显示,B组CaMKII与钙调蛋白的结合较A组分别显著下降了59.8%和50.9%(P〈0.01);在总蛋白中,B组钙调蛋白与CaMKll蛋白较A组,分别显著降低了52.1%和51.5%(P〈0.01)。NFATc1、TRAP蛋白水平B组较A组显著下降了52.4%和38.9%(P〈0.01);免疫荧光化学检测也显示B组蛋白表达强度较A组弱。结论唑来膦酸可以显著抑制破骨细胞分化中CaMKⅡ与钙调蛋白的结合,并下调下游NFATc1、TRAP的蛋白表达。 展开更多
关键词 钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶2 钙调蛋白 唑来膦酸 免疫沉淀法
优化对比剂注射方案对冠状动脉CTA图像的影响 被引量:2
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作者 陈伟彬 冯莉 +3 位作者 张伟杰 宫凤玲 王星稳 张惠英 《临床放射学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1712-1715,共4页
目的探讨冠状动脉CTA时不同对比剂注射方案对图像质量的影响,优化注射方案。方法选取体重指数相似患者320例,分为A、B、C、D四组,进行冠状动脉CTA。A组对比剂采用双相注射方案,先期注射对比剂70 ml,而后注射生理盐水20 ml;B组采用双相... 目的探讨冠状动脉CTA时不同对比剂注射方案对图像质量的影响,优化注射方案。方法选取体重指数相似患者320例,分为A、B、C、D四组,进行冠状动脉CTA。A组对比剂采用双相注射方案,先期注射对比剂70 ml,而后注射生理盐水20 ml;B组采用双相注射方案,先期注射对比剂50 ml,而后注射混合液(生理盐水-对比剂1∶1)20 ml,C组采用三相注射方案,先期注射对比剂50 ml,第二时相注射混合液(生理盐水-对比剂1∶1)20 ml,而后无缝隙注射生理盐水20 ml;D组采用双相注射方案,先期注射对比剂50 ml,而后注射混合液(生理盐水-对比剂1∶1)20 ml,扫描时间较常规延迟5 s。比较四组冠状动脉CTA图像中冠状动脉三大分支和升主动脉(AO)CT值之间有无差异,比较四组上腔静脉、右心室硬化伪影发生率及室间隔显示率。结果与A组比较,B、C两组对比剂虽减少10 ml,但三组间AO及冠状动脉三大分支CT值比较无统计学意义(P〉0.05),而D组CT值较A、B、C三组降低(P〈0.05);B组上腔静脉、右心室硬化伪影发生率高于A、C、D三组(P〈0.05),C、D两组室间隔显示率无统计学差异(P〉0.05),但高于A、B两组(P〈0.05)。结论采用三时相对比剂注射方案,可以有效降低对比剂用量,保证图像质量,清晰显示室间隔,为冠状动脉疾病的诊断提供影像依据。 展开更多
关键词 冠状动脉 对比剂 注射方法 图像质量
对比剂不同注射方案对冠状动脉CTA图像质量的影响 预览 被引量:2
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作者 陈伟彬 冯莉 +3 位作者 张伟杰 宫凤玲 王星稳 张惠英 《医学研究杂志》 2017年第5期171-174,3共5页
目的 分析冠状动脉CTA扫描时对比剂的不同注射方案对其图像影响,寻求最佳注射方案。方法 选取240例体重相近患者随机平均分成A、B、C 3组行冠状动脉CTA扫描。A组应用双期注射方案,首次注入70ml对比剂,随后追加20ml生理盐水;B组应用... 目的 分析冠状动脉CTA扫描时对比剂的不同注射方案对其图像影响,寻求最佳注射方案。方法 选取240例体重相近患者随机平均分成A、B、C 3组行冠状动脉CTA扫描。A组应用双期注射方案,首次注入70ml对比剂,随后追加20ml生理盐水;B组应用双期注射方案,首次注入50ml对比剂,随后追加20ml混合剂(盐水∶对比剂为1∶1),C组应用3期注射方案,首次注入50ml对比剂,第2期注入20ml混合剂(盐水∶对比剂为1∶1),随后追加生理盐水20ml。评价3组CTA图像升主动脉(AO)及冠状动脉三大分支CT值比较,差异有无统计学意义,比较3组间上腔静脉、右心室硬化伪影及室间隔显示情况。结果 与A组比较,B、C两组在减少10ml对比剂情况下,3组间AO及冠状动脉三大分支CT值比较,差异无统计学意义(P〉0.05),B组上腔静脉、右心室硬化伪影高于A、C两组(P〈0.05),C组室间隔显示率高于A、B两组(P〈0.05)。结论 应用第3时相对比剂注射方案,既能有效减少造影剂用量,又能保证图像质量,较好地显示室间隔,对冠状动脉疾病的诊断具有一定意义。 展开更多
关键词 冠状动脉 对比剂 注射方法 图像质量
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CaMKIIδ在破骨细胞分化不同阶段表达规律的研究 预览 被引量:5
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作者 陆大壮 刘娟娟 +3 位作者 戚孟春 温黎明 李任 孙红 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1870-1874,共5页
目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca MKII)δ在破骨细胞分化不同阶段的表达规律,以揭示其在破骨细胞分化中的作用。方法:应用50μg/L核因子κB受体激活因子配体(RANKL)诱导小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化;通过抗酒石... 目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca MKII)δ在破骨细胞分化不同阶段的表达规律,以揭示其在破骨细胞分化中的作用。方法:应用50μg/L核因子κB受体激活因子配体(RANKL)诱导小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及骨磨片吸收陷窝检测评价破骨细胞生成情况;同时于诱导第0、1、3、5天末通过免疫荧光细胞化学、RT-q PCR和Western blot法检测Ca MKIIδ的mRNA及蛋白表达水平。结果:TRAP染色及骨吸收陷窝检测显示于诱导第5天有多核破骨细胞生成。第0、1、3、5天Ca MKIIδ的mRNA表达水平分别为1.028±0.041、2.478±0.087、10.524±1.284和42.914±2.667,蛋白相对水平分别为0.762、0.963、1.802和3.136,免疫荧光细胞化学检测显示Ca MKIIδ的荧光6强度呈时间依赖性递增。结论:Ca MKIIδ的表达随破骨细胞分化逐步增高,提示Ca MKIIδ在破骨细胞分化中可能起着关键调控作用。 展开更多
关键词 钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶IIδ 破骨细胞 核因子κB受体激活因子配体 抗酒石酸酸性磷酸酶
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256层螺旋CT评价胸廓内动脉与冠状动脉的解剖学关系 预览 被引量:1
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作者 陈伟彬 冯莉 +1 位作者 宫凤玲 张惠英 《天津医药》 CAS 2015年第9期1056-1059,共4页
目的 应用256层螺旋CT血管造影术评价自体胸廓内动脉与冠状动脉的解剖学关系。方法 分析200例因胸痛行胸主动脉及冠状动脉造影检查患者的血管造影图像,测量两侧胸廓内动脉及冠状动脉各主要分支的长度、内径,以及主动脉-冠状动脉搭桥长... 目的 应用256层螺旋CT血管造影术评价自体胸廓内动脉与冠状动脉的解剖学关系。方法 分析200例因胸痛行胸主动脉及冠状动脉造影检查患者的血管造影图像,测量两侧胸廓内动脉及冠状动脉各主要分支的长度、内径,以及主动脉-冠状动脉搭桥长度等解剖学参数数值。结果 胸廓内动脉内径为(2.52±0.38)mm,胸廓内动脉自起点至终端长度为(190.12±1.90)mm。两侧胸廓内动脉管腔内径及长度比较差异均无统计学意义。冠状动脉前降支、左旋支、对角支、右冠状动脉及后室间支内径分别为(2.82±0.25)、(2.60±0.12)、(2.22±0.25)、(3.02±0.27)和(2.35±0.35)mm,除右冠状动脉内径高于胸廓内动脉内径外,其余与胸廓内动脉内径差异均无统计学意义。游离移植于升主动脉起始部上方2 cm搭桥至前室间支中点、沿左旋支途径搭桥至房室交点、沿右冠状动脉途径搭桥至房室交点弧形长度和自房室交点至后室间支中点长度均低于胸廓内动脉长度(P〈0.05);原位移植除自胸廓内动脉起始部至前降支中点弧形长度与胸廓内动脉长度比较差异无统计学意义,至左旋支房室交点、至右冠状动脉房室交点弧形长度均高于胸廓内动脉长度(P〈0.05)。结论 胸廓内动脉与冠状动脉主要分支内径接近,原位移植适用于心前壁血管,用游离胸廓内动脉移植,其长度可满足桥接升主动脉与任何冠状动脉。 展开更多
关键词 胸部动脉 冠状动脉 体层摄影术 螺旋计算机 体层摄影术 X线计算机机 血管造影术 256层螺旋CT
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沙利度胺对双膦酸盐相关颌骨坏死的影响 预览 被引量:3
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作者 宋志强 董伟 +3 位作者 阴露佳 刘娟娟 孙红 戚孟春 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1084-1089,共6页
目的 研究沙利度胺对双膦酸盐相关颌骨坏死的影响。方法36只大鼠随机分成A、B、C组,分别接受生理盐水、唑来膦酸、唑来膦酸+沙利度胺治疗。用药3周后,拔除大鼠左上颌第1磨牙。拔牙后4、8周,收获标本,评价颌骨坏死、微血管生成及细... 目的 研究沙利度胺对双膦酸盐相关颌骨坏死的影响。方法36只大鼠随机分成A、B、C组,分别接受生理盐水、唑来膦酸、唑来膦酸+沙利度胺治疗。用药3周后,拔除大鼠左上颌第1磨牙。拔牙后4、8周,收获标本,评价颌骨坏死、微血管生成及细胞凋亡情况。结果拔牙后4、8周,大鼠上颌骨拔牙创处均无死骨裸露,但B组、C组部分标本可见一些小的瘘管。组织学检查显示,A组标本未见死骨,而B组、C组在拔牙窝周围可见小块死骨。B组、C组拔牙窝周围区域空骨陷窝百分比和死骨面积显著多于A组(P〈0.01),而骨陷窝密度则显著下降。B组、C组微血管密度较A组也显著降低,在4周时分别下降了和25.87%和55.27%(P〈0.01),在8周时分别下降了45.62%和72.84%(P〈0.01);凋亡细胞数则在4周时分别增长了54.80%和87.89%(P〈0.01),在8N分别增长了208.08%和250.58%(P〈0.01)。结论沙利度胺加重了唑来膦酸诱发的早期阶段的颌骨坏死;沙利度胺和唑来膦酸对颌骨坏死的作用与微血管生成抑制有关。 展开更多
关键词 唑来膦酸 血管生成 双膦酸盐 颌骨坏死 沙利度胺
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CaMKⅡγ在破骨细胞分化中的表达规律 预览 被引量:1
12
作者 李瑛 戚孟春 +4 位作者 董伟 王会 冯晓洁 温黎明 孙红 《中南大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第3期240-245,共6页
目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKⅡγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用。方法:用50 ng/m L核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5天收获细胞,用抗酒石酸酸性... 目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ(CaMKⅡγ)在破骨细胞分化中的表达规律,以揭示其作用。方法:用50 ng/m L核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导RAW264.7细胞向破骨细胞分化,于诱导后第0,1,3,5天收获细胞,用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价破骨细胞生成情况,并用RT-PCR、Western印迹、免疫荧光细胞化学法检测CaMKⅡγm RNA和蛋白表达。结果:多核破骨细胞在诱导后第3天开始出现,第5天达到最多。分化第0,1,3,5天,CaMKⅡγm RNA相对表达水平分别为(1.067±0.179),(1.840±0.070),(9.493±0.453)和(30.767±0.573);蛋白相对表达水平分别为(0.454±0.065),(0.613±0.021),(0.858±0.019)和(0.980±0.023);除第1天的蛋白相对水平外,其他时间点CaMKⅡγm RNA和蛋白表达差异均有统计学意义,且呈时间依赖性增强(P〈0.01)。免疫荧光细胞化学法检测也显示CaMKⅡγ蛋白表达在破骨细胞分化过程中逐步增加。结论:CaMKⅡγ表达随破骨细胞分化呈时间依赖性增加,提示其在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用。 展开更多
关键词 钙离子/钙调蛋白依赖性激酶γ 破骨细胞 受体活化核因子-κB配体 抗酒石酸酸性磷酸酶染色
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钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响 被引量:8
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作者 刘娟娟 董伟 +3 位作者 戚孟春 冯晓洁 李任 孙红 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期22-27,共6页
目的 研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ(Ca2+/Calmodulin dependent kinase Ⅱδ,CaMKⅡδ) RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响,以证实其在破骨细胞分化中的作用。方法 应用慢病毒构建CaMKⅡδ RNA干扰载体,并确... 目的 研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ(Ca2+/Calmodulin dependent kinase Ⅱδ,CaMKⅡδ) RNA干扰对下游基因表达及破骨细胞分化的影响,以证实其在破骨细胞分化中的作用。方法 应用慢病毒构建CaMKⅡδ RNA干扰载体,并确定最佳感染复数(multiplicity of infection,MOI)值及转染效率。小鼠RAW264.7细胞分为对照组、空白载体组和干扰组。转染5 d后收获细胞,确定干扰效率;并检测RNA干扰对活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、非受体酪氨酸激酶(c-Src)基因表达及破骨细胞分化的影响。结果 成功构建了CaMKⅡδ RNA干扰载体,最佳转染MOI值为30,转染效率可达78%(P〈0.05)。重组病毒对CaMKⅡδ的干扰效率在mRNA水平超过78%,在蛋白水平超过70%(P〈0.01)。CaMKⅡδ RNA干扰显著降低NFATc1、TRAP和c-Src基因,与对照组、空白载体组比较,其mRNA水平下降分别超过了47.8%、43.3% 和48.5%(P〈0.05,P〈0.01),蛋白相对水平分别超过了61.1%、48.2%和39.6%%(P〈0.01);免疫荧光细胞化学检测也得到相似结果。CaMKⅡδ RNA干扰也显著降低了破骨细胞生成及骨吸收功能;与其他两组比较,干扰组破骨细胞数、牙本质吸收陷窝数目和面积下降分别超过了49.8%、47.6%和61.3%(P〈0.01)。结论 CaMKⅡδ RNA干扰可显著下调其下游NFATc1、TRAP、c-Src基因表达并抑制破骨细胞分化;CaMKⅡδ 在破骨细胞分化中可能发挥关键调控作用。 展开更多
关键词 破骨细胞 钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱδ RNA干扰 活化T细胞核因子蛋白c1 抗酒石酸酸性磷酸酶 非受体酪氨酸激酶
唑来膦酸对破骨细胞分化中CaMKⅡδ及下游基因表达的影响 预览 被引量:2
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作者 王会 刘娟娟 +3 位作者 戚孟春 董伟 李任 孙红 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第10期1308-1311,共4页
目的 研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞分化中钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)以及下游信号基因表达的影响。方法 将小鼠破骨前体细胞RAW264.7细胞分为对照组和ZOL组;两组细胞均用50μg/L核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导与第... 目的 研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞分化中钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)以及下游信号基因表达的影响。方法 将小鼠破骨前体细胞RAW264.7细胞分为对照组和ZOL组;两组细胞均用50μg/L核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导与第5天收获,ZOL组同时加用1×10-6 mol/L ZOL处理2d。5d后收获细胞,检测破骨细胞生成及CaMKⅡδ、活化T细胞核因子蛋白c1(NFATc1)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)及c-Src基因表达情况。结果 ZOL组TRAP+多核破骨细胞数目、牙本质吸收陷窝数目和面积分别是(20.0±3.2)、(18.0±4.2)和(6 335.3±1 043.2)μm2,显著低于对照组的(36.0±8.4)、(37.2±5.0)和(11 636.2±3 661.1)μm2(P〈0.05或P〈0.01),分别下降了44.4%、51.6%和45.6%。ZOL处理还使破骨细胞分化中CaMKⅡδ及下游因子NFATc1、TRAP和c-Src基因表达产生显著抑制,mRNA水平分别下降了44.1%、49.0%、53.8%和49.6%(P〈0.05或P〈0.01),蛋白水平分别下降了43.5%、32.2%、45.5%和48.0%(P〈0.05或P〈0.01)。免疫荧光化学检测显示ZOL组CaMKⅡδ、NFATc1、TRAP和c-Src的荧光强度较对照组也明显减弱。结论 ZOL可显著抑制破骨细胞生成和骨吸收功能,并下调破骨细胞分化中CaMKⅡδ及下游NFATc1、TRAP和c-Src基因表达。 展开更多
关键词 破骨细胞 唑来膦酸 钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ 活化T细胞核因子c1 抗酒石酸酸性磷酸酶 C-SRC
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儿童急性横贯性脊髓炎患儿脑脊液中miR-182-5p上调促进CREB蛋白表达的实验研究 预览 被引量:2
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作者 王志杰 郭晓玲 +5 位作者 刘海英 王天仪 李焕龙 张铮 周搏 门秀丽 《中国实用医药》 2017年第16期67-68,共2页
目的从微小RNA(microRNA)组学角度探索儿童急性横贯性脊髓炎(ATM)发生的分子生物学机制,以期寻找关键治疗靶点。方法使用microarray4.0芯片检测儿童急性横贯性脊髓炎患儿脑脊液中发生改变的microRNA,运用生物信息学方法论证发挥关... 目的从微小RNA(microRNA)组学角度探索儿童急性横贯性脊髓炎(ATM)发生的分子生物学机制,以期寻找关键治疗靶点。方法使用microarray4.0芯片检测儿童急性横贯性脊髓炎患儿脑脊液中发生改变的microRNA,运用生物信息学方法论证发挥关键调控作用的microRNA,进行靶基因预测。运用反转录荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)技术进行生物学与技术重复。检测关键microRNA靶蛋白的表达量并分析样本间靶蛋白与目标microRNA表达变化趋势相关性。结果急性横贯性脊髓炎患儿脑脊液样本中共有247个microRNA发生表达变化,microRNA-182-5p(miR-182-5p)特征性上调明显。生物信息分析结果显示c AMP应答元件结合蛋白(CREB)可为miR-182-5p的靶基因,与miR-182-5p趋势相反。结论儿童急性横贯性脊髓炎脑脊液中miR-182-5p上调导致CREB下调,使神经元轴突生长能力下降。miR-182-5p是儿童急性横贯性脊髓炎治疗的关键靶点之一。 展开更多
关键词 儿童急性横贯性脊髓炎 脑脊液 微小RNA cAMP应答元件结合蛋白 治疗靶点
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唑来膦酸对破骨细胞分化中钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ和Ⅳ基因表达的影响 预览 被引量:3
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作者 刘娟娟 李鹏 +4 位作者 董伟 冯晓洁 温黎明 孙红 戚孟春 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期19-23,I0002共6页
目的:研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞(OC)分化及信号分子钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱ、Ⅳ基因表达的影响,阐明其作用机制。方法:应用小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化。细胞分为对照组和ZOL组,用核因子κB受体激活蛋白... 目的:研究唑来膦酸(ZOL)对破骨细胞(OC)分化及信号分子钙调蛋白依赖性激酶(CaMK)Ⅱ、Ⅳ基因表达的影响,阐明其作用机制。方法:应用小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7向破骨细胞分化。细胞分为对照组和ZOL组,用核因子κB受体激活蛋白配体(RANKL)诱导5d,ZOL组同时加用ZOL处理2d,第5天收集细胞后检测OC生成及CaMKⅡ、CaMKⅣ基因表达情况。结果:ZOL组中多核OC数、骨吸收陷窝数和面积分别为33.0±1.0、46.0±3.5和(4 125.9±674.8)μm2,明显低于对照组的66.6±3.2、86.0±9.2和(9 418.3±1 260.8)μm2(P〈0.05或P〈0.01)。与对照组比较,ZOL组细胞中CaMKⅡ和CaMKⅣ基因表达水平明显降低(P〈0.05),CaMKⅡmRNA和蛋白表达水平分别下降了39.3%和58.9%,CAMKⅣmRNA和蛋白表达水平分别下降了51.7%和46.8%(P〈0.01)。免疫荧光化学,与对照组比较,ZOL组细胞中CaMKⅡ、Ⅳ蛋白荧光强度明显下降(P〈0.05或P〈0.01)。结论:ZOL在OC多核化阶段可以明显抑制OC的生成和骨吸收功能,并下调CaMKⅡ和CaMKⅣ基因表达。信号分子CaMKⅡ和CaMKⅣ可能参与了唑来膦酸对OC形成和功能的抑制作用,并在该过程中发挥重要的作用。 展开更多
关键词 唑来膦酸 破骨细胞 钙调蛋白依赖性激酶
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氧化应激在类固醇糖尿病大鼠胰岛细胞损伤中的作用
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作者 王洁康 门秀丽 +1 位作者 董丽儒 宋旭东 《中国煤炭工业医学杂志》 2016年第6期868-872,共5页
目的采用高脂饮食联合地塞米松腹腔注射的方法建立类固醇糖尿病大鼠模型,初步探讨氧化应激对大鼠胰岛β细胞损伤的影响。方法 30只雄性SD大鼠,随机分为二组:NC组以普通维持饲料喂养,HF组以MD45%脂肪含量饲料喂养。12周后HF组随机分为HF... 目的采用高脂饮食联合地塞米松腹腔注射的方法建立类固醇糖尿病大鼠模型,初步探讨氧化应激对大鼠胰岛β细胞损伤的影响。方法 30只雄性SD大鼠,随机分为二组:NC组以普通维持饲料喂养,HF组以MD45%脂肪含量饲料喂养。12周后HF组随机分为HFO亚组和HF+DEX亚组,HF+DEX亚组腹腔注射地塞米松,余2组腹腔注射等剂量生理盐水,各组喂养饲料不变。16周后取腹主动脉血离心后备用。建模过程中定期监测体重、空腹血糖、空腹胰岛素、血浆甘油三酯、总胆固醇含量,并进行OGTT。检测血浆中胰岛素、C肽、SOD和MDA含量。结果第十二周,HF组大鼠比NC组的体重、血浆甘油三酯、总胆固醇、空腹胰岛素均升高(P〈0.01),葡萄糖曲线下面积增加(P〈0.05),但空腹血糖变化不明显(P〉0.05)。第十六周,HF+DEX亚组大鼠与HFO亚组相比体重下降(P〈0.01),空腹血糖、血浆甘油三酯、总胆固醇升高(P〈0.05),葡萄糖曲线下面积增加(P〈0.01),血浆胰岛素及C肽含量降低(P〈0.01),血浆SOD活力下降,MDA含量升高(P〈0.01)。结论采用高脂饮食联合地塞米松腹腔注射的方法可成功建立类固醇糖尿病大鼠模型,氧化应激可能是造成胰岛素细胞损伤的作用机制之一。 展开更多
关键词 氧化应激 类固醇糖尿病 胰岛细胞
塞来昔布联合紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡的协同作用及其机制 预览
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作者 周贺 刘军 +3 位作者 柳雅玲 王丽 李开济 门秀丽 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期446-451,I0001共7页
目的:观察塞来昔布联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,探讨环氧化酶2(Cox-2)抑制剂与化疗药物协同作用的可能机制。方法:将MCF-7细胞分为空白对照组(不含药物作用的培养基)、塞来昔布组(含不同浓度塞来昔布的培养基)、紫... 目的:观察塞来昔布联合紫杉醇对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响,探讨环氧化酶2(Cox-2)抑制剂与化疗药物协同作用的可能机制。方法:将MCF-7细胞分为空白对照组(不含药物作用的培养基)、塞来昔布组(含不同浓度塞来昔布的培养基)、紫杉醇组(含不同浓度紫杉醇的培养基)和塞来昔布联合紫杉醇组(含不同浓度塞来昔布和不同浓度紫杉醇的培养基)。Hoechst 33258染色观察各组MCF-7细胞凋亡形态;MTT法检测各组MCF-7细胞存活率;流式细胞术检测各组MCF-7细胞周期分布和细胞凋亡率;Western blotting法检测各组MCF-7细胞中B淋巴细胞瘤2(bcl-2)、细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达量。结果:Hoechst33258染色,与空白对照组比较,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7凋亡细胞数增多,塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7凋亡细胞最多,并随塞来昔布浓度增加而增加。MTT法检测,塞来昔布组和紫杉醇组MCF-7细胞存活率均随药物作用时间的延长而降低;而在相同时间段内,50mg·L。塞来昔布与30μg·L-1紫杉醇联合应用组MCF-7细胞存活率低于单独使用两药时的细胞存活率(P〈0.05)。流式细胞术检测,塞来昔布组细胞阻滞于G0/G1期,紫杉醇组细胞阻滞于G2/M期;与空白对照组比较,塞来昔布联合紫杉醇组细胞周期分布改变最明显,在G0/G1期及G2/M期的细胞比例均有明显升高,S期细胞比例下降。AnnexinV/PI双染,药物刺激细胞6h后,塞来昔布组和紫杉醇组细胞早期凋亡率均高于空白对照组(P〈0.05),塞来昔布联合紫杉醇组细胞早期凋亡率高于其他组(P〈0.05)。Western blotting法检测,与空白对照组比较,塞来昔布组、紫杉醇组和塞来昔布联合紫杉醇组MCF-7细胞中bcl-2蛋白和p-ERK蛋白表达量均下调,塞来昔布联合紫杉醇组下调最明显� 展开更多
关键词 塞来昔布 紫杉醇 乳腺肿瘤 MCF-7细胞 B淋巴细胞瘤2
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