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大蒜防御素基因AsPDF1的克隆与表达分析
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作者 陈东 范海云 +5 位作者 高世雯 王广龙 王云鹏 陈伯清 王连臻 熊爱生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期177-184,共8页
植物防御素是一类低分子量、富含半胱氨酸的抗菌多肽,是植物防御生物和非生物侵害的重要物质之一。为了解大蒜中防御素的序列特征和功能,本研究利用RT-PCR方法从大蒜‘苍山四六瓣’中克隆得到防御素基因AsPDF1。序列分析结果表明,来源... 植物防御素是一类低分子量、富含半胱氨酸的抗菌多肽,是植物防御生物和非生物侵害的重要物质之一。为了解大蒜中防御素的序列特征和功能,本研究利用RT-PCR方法从大蒜‘苍山四六瓣’中克隆得到防御素基因AsPDF1。序列分析结果表明,来源于大蒜的防御素基因含有1个246 bp的开放阅读框,编码81个氨基酸。推测其编码的蛋白质分子量为8.45 kDa,等电点(pI)为9.36。该蛋白含有8个保守的半胱氨酸, N端有一段23个氨基酸组成的信号肽区域,空间结构由1个α螺旋和3股反向平行的β折叠构成。在进化关系上,大蒜防御素与禾本科的小麦和高粱防御素蛋白最为接近。荧光定量PCR分析表明, AsPDF1在根、鳞茎、叶片中均有表达,在根中表达量最高,且能响应盐胁迫的诱导。本研究克隆的大蒜防御素基因为进一步鉴定防御素基因的生物学功能和表达调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 大蒜 防御素 盐胁迫 基因克隆 表达分析
水芹咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因的克隆与表达特性分析 预览
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作者 朱胜琪 徐德宝 +4 位作者 王永鑫 冯凯 刘洁霞 仇亮 熊爱生 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期51-58,共8页
[目的]本文旨在研究水芹咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因(OjCCoAOMT)的序列及其表达特性,了解该基因在水芹木质素代谢中的作用。[方法]利用RT-PCR技术从水芹中克隆OjCCoAOMT基因,用生物信息学方法对获得的序列进行分析,并利用实时荧光定量... [目的]本文旨在研究水芹咖啡酰辅酶A-O-甲基转移酶基因(OjCCoAOMT)的序列及其表达特性,了解该基因在水芹木质素代谢中的作用。[方法]利用RT-PCR技术从水芹中克隆OjCCoAOMT基因,用生物信息学方法对获得的序列进行分析,并利用实时荧光定量PCR技术研究该基因在水芹不同组织以及不同贮藏条件下的表达。[结果]序列分析结果表明:OjCCoAOMT基因包含1个长度为726bp的开放阅读框(ORF),编码241个氨基酸,蛋白相对分子质量为27.111×10^3,理论等电点为5.38。OjCCoAOMT蛋白属于疏水性蛋白,无序化比例为12.45%,空间结构主要由8个α-螺旋和7个β-折叠组成。多重比对与系统树分析结果表明:OjCCoAOMT蛋白与同科植物欧芹的进化关系最近。实时荧光定量PCR显示,在‘八卦洲水芹’和‘南选八卦洲紫水芹’的叶片及叶柄中OjCCoAOMT基因的表达量差异显著。在室温(25℃)、低温(4℃)和室温黑暗(25℃)3种贮藏条件下OjCCoAOMT基因表达量差异较大,低温(4℃)下表达量最高。2个品种的基因表达量也具有显著差异。[结论]OjCCoAOMT蛋白有较高的保守性。OjCCoAOMT基因在水芹中的表达具有明显的组织特异性和材料差异性,同时在低温(4℃)条件下表达量最高。 展开更多
关键词 水芹 OjCCoAOMT基因 序列分析 多重比对 表达分析
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胡萝卜WRKY69基因(DcWRKY69)的克隆及其对不同植物生长调节剂的响应 预览
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作者 张榕蓉 王雅慧 +3 位作者 李彤 丁旭 徐志胜 熊爱生 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期1-10,共10页
以胡萝卜品种‘黑田五寸’(Daucus carota var.sativa‘Heitian Wucun’)为研究对象,采用RT-PCR技术从叶片cDNA中克隆获得DcWRKY69基因片段,并对该基因及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;同时,采用RT-qPCR技术比较了0.1 mmol·... 以胡萝卜品种‘黑田五寸’(Daucus carota var.sativa‘Heitian Wucun’)为研究对象,采用RT-PCR技术从叶片cDNA中克隆获得DcWRKY69基因片段,并对该基因及其编码的氨基酸序列进行生物信息学分析;同时,采用RT-qPCR技术比较了0.1 mmol·L^-1茉莉酸甲酯(MeJA)、1.0 mmol·L^-1水杨酸(SA)、0.1 mmol·L^-1赤霉素(GA3)和0.1 mmol·L^-1脱落酸(ABA)处理12 h内叶中DcWRKY69基因相对表达量的差异。结果表明:DcWRKY69基因包含1个长度为783 bp的开放阅读框(ORF),编码260个氨基酸;DcWRKY69转录因子氨基酸序列在第52至第110位含有1个WRKY结构域,其锌指结构类型为C2 H2型,理论相对分子质量为30030,理论等电点为pI 4.78;该转录因子含有34个磷酸化位点,无信号肽和跨膜结构,亲水性氨基酸较多,且酸性氨基酸比例最高(27%);该转录因子的二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链和随机卷曲组成,比例分别为21.92%、4.23%、11.92%和61.92%。序列比对和系统进化树分析结果表明:WRKY转录因子在植物进化过程中具有高度的保守性。RT-qPCR分析结果表明:经MeJA、SA、GA3和ABA处理后,DcWRKY69基因相对表达量的变化趋势不同,分别在处理后8、12、1和4 h达到峰值,且显著高于对照(处理0 h)。研究结果显示:DcWRKY69转录因子属于Ⅱ类WRKY转录因子,为亲水性蛋白,且可能属于非分泌蛋白;DcWRKY69基因可能参与胡萝卜对不同植物生长调节剂的响应过程,但其对不同植物生长调节剂的响应模式存在差异。 展开更多
关键词 胡萝卜 WRKY69转录因子 基因克隆 序列分析 植物生长调节剂 基因表达
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芹菜β-胡萝卜素羟化酶基因AgBCH1的克隆及表达特性分析
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作者 王雨薇 郝建楠 +5 位作者 罗鑫 李静文 段奥其 刘洁霞 冯凯 熊爱生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期14-22,共9页
胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase, BCH)在植物类胡萝卜素生物合成中起着重要的作用。芹菜是伞形科一种重要的叶菜类蔬菜作物,含有丰富的类胡萝卜素。本文以芹菜‘六合黄心芹’为实验材料,从中克隆获得编码芹菜β-胡萝卜素羟化... 胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase, BCH)在植物类胡萝卜素生物合成中起着重要的作用。芹菜是伞形科一种重要的叶菜类蔬菜作物,含有丰富的类胡萝卜素。本文以芹菜‘六合黄心芹’为实验材料,从中克隆获得编码芹菜β-胡萝卜素羟化酶的基因AgBCH1。序列分析结果显示,该基因全长933 bp,编码310个氨基酸。进化树分析表明,芹菜AgBCH1蛋白的进化高度保守,与同科的胡萝卜DcBCH1蛋白的进化关系最为相近。序列比对分析显示,植物BCH1氨基酸序列具有较高的同源性,芹菜与同科的胡萝卜BCH1氨基酸序列一致性达到87.94%。Ag BCH1蛋白相对分子质量34 505.73,理论等电点9.10,为亲水性蛋白。芹菜Ag BCH1蛋白三级蛋白结构包括5个α螺旋及6个β折叠,无序化比例为14.84%。利用实时定量PCR对经过低温(4°C)、高温(38°C)、盐(0.2mol·L-1 Na Cl)、干旱(200 g·L-1 PEG) 4种非生物胁迫处理的60 d芹菜叶片中Ag BCH1基因的相对表达量进行检测,发现Ag BCH1基因对这4种逆境胁迫均有响应,尤其对高温胁迫响应明显,且高温处理8 h后表达量最高。 展开更多
关键词 芹菜 β-胡萝卜素羟化酶基因 克隆 非生物胁迫 基因表达
不结球白菜游离小孢子培养及植株再生研究 预览
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作者 黄天虹 张娅 +2 位作者 梁超凡 侯喜林 李英 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期240-247,共8页
为进一步优化不结球白菜游离小孢子培养技术体系,本研究以20个不同基因型的不结球白菜为试验材料,研究不同基因型、4℃低温胁迫处理时间和头孢噻胯浓度对游离小孢子胚胎发生的影响,并对小孢子胚胎发育和再生过程进行观察和倍性鉴定。结... 为进一步优化不结球白菜游离小孢子培养技术体系,本研究以20个不同基因型的不结球白菜为试验材料,研究不同基因型、4℃低温胁迫处理时间和头孢噻胯浓度对游离小孢子胚胎发生的影响,并对小孢子胚胎发育和再生过程进行观察和倍性鉴定。结果表明,当花瓣/花药(P/A)长度比值为0.85~1.10时,不结球白菜小孢子主要处于单核晚期;共有10个基因型不结球白菜出胚,其中出胚率最大的为H20,平均出胚率为7.75胚·10蕾-1;4℃低温胁迫处理1 d时不结球白菜出胚率最高;头孢噻胯对不结球白菜出胚率的影响与基因型密切相关;从胚状体到再生幼苗阶段,不结球白菜基因型不同,其胚胎再生频率也不同;倍性鉴定共检测出21个双单倍体和2个单倍体,自然加倍率为91.3%,不结球白菜植株形态表现出明显的多样性。本研究结果为不结球白菜游离小孢子高效培养体系的优化提供了一定的技术支撑。 展开更多
关键词 不结球白菜 游离小孢子培养 基因型 胚胎发生 头孢噻胯
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大蒜谷胱甘肽硫转移酶基因AsGST的克隆及其对盐胁迫的响应 预览
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作者 梁志乐 尚珂含 +3 位作者 王立辉 周瑾 王广龙 熊爱生 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1088-1095,共8页
为了解大蒜GST基因及其编码的蛋白质的结构特征,分析GST基因在不同组织及盐胁迫条件下的表达特性,采用RT-PCR方法克隆得到大蒜苍山四六瓣GST基因,采用BLAST、DNAMAN、ProtParam、MEGA5、Swiss-Model等生物信息工具分析其序列特征,利用... 为了解大蒜GST基因及其编码的蛋白质的结构特征,分析GST基因在不同组织及盐胁迫条件下的表达特性,采用RT-PCR方法克隆得到大蒜苍山四六瓣GST基因,采用BLAST、DNAMAN、ProtParam、MEGA5、Swiss-Model等生物信息工具分析其序列特征,利用实时荧光定量PCR方法,分析AsGST基因在大蒜根、鳞茎和叶片中的表达差异及其对盐胁迫的响应情况。结果表明,大蒜AsGST基因全长663 bp,编码220个氨基酸,推测蛋白质分子质量为25.58 kDa,理论等电点为6.55,属于tau类GST家族。植物GST的序列相似性较低,但在结构上相对保守。在蛋白的N端含有谷胱甘肽特异结合位点(G位点),C端含有可变性较大的疏水底物结合位点(H位点),在进化关系上AsGST与茄科作物较近。空间结构分析表明,大蒜GST的三级结构由3个β-折叠和11个α-螺旋构成。实时荧光定量PCR显示,苍山四六瓣中GST基因在根中的表达量最高,其次是叶,在鳞茎中的表达量较低,具有明显的组织特异性。盐胁迫处理4 h后,各组织内AsGST基因的表达量均升至最高,说明该基因可响应盐胁迫逆境信号。本研究结果为进一步研究大蒜GST基因的功能奠定了一定的理论基础。 展开更多
关键词 大蒜 盐胁迫 AsGST基因 基因克隆 表达分析
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番茄2个ERF-B1亚族转录因子基因的克隆及其对生物和非生物胁迫响应 预览
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作者 王雅慧 李彤 +3 位作者 黄莹 刘洁霞 王枫 熊爱生 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1893-1904,共12页
为进一步研究番茄ERF转录因子调控植物抗逆的分子机理,本研究以番茄浙杂-301为试验材料,分别克隆获得2个乙烯反应元件结合蛋白基因SlERF83和SlERF109,并对其进行序列及表达分析。结果表明,番茄SlERF83和SlERF109基因分别含有678 bp和669... 为进一步研究番茄ERF转录因子调控植物抗逆的分子机理,本研究以番茄浙杂-301为试验材料,分别克隆获得2个乙烯反应元件结合蛋白基因SlERF83和SlERF109,并对其进行序列及表达分析。结果表明,番茄SlERF83和SlERF109基因分别含有678 bp和669 bp的开放阅读框,编码225和222个氨基酸,各含有1个保守的AP2结构域,属于亲水性蛋白。进化分析表明,这2个ERF转录因子均属于AP2/ERF家族中ERF亚族的B1组。SlERF83和SlERF109三级结构都含有1个α-螺旋和3个β-折叠。酵母单杂交及β-半乳糖苷酶活性测定结果证明SlERF83转录因子可以与GCC-box结合。番茄2个ERF蛋白启动子含有多种逆境相关的顺式作用元件。采用荧光定量PCR检测SlERF83和SlERF109在非生物和生物胁迫下的表达,结果表明,高盐和干旱胁迫下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制;水杨酸处理能够诱导SlERF83和SlERF109基因的表达;茉莉酸甲酯处理下SlERF83表达水平提高,SlERF109表达量降低;番茄黄化曲叶病毒侵染下,SlERF83和SlERF109基因的表达均被抑制。SlERF83和SlERF109转录因子可能参与了番茄对生物及非生物胁迫的响应过程。本研究结果为进一步深入开展ERF转录因子调控番茄抗逆分子机制研究提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 番茄 转录因子 乙烯反应元件结合蛋白 生物和非生物胁迫 酵母单杂交 响应
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胡萝卜ABF转录因子基因DcABF1的克隆与非生物胁迫应答分析 预览
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作者 郝建楠 王雨薇 +3 位作者 段奥其 冯凯 却枫 熊爱生 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1731-1740,共10页
ABF转录因子是一种碱性亮氨酸拉链类蛋白,与植物的生长发育和逆境调控密切相关。该研究以胡萝卜‘君川红’为材料,克隆出编码ABF转录因子的基因DcABF1,分析其编码氨基酸的序列组成、进化关系和蛋白质理化性质等;采用实时荧光定量PCR方... ABF转录因子是一种碱性亮氨酸拉链类蛋白,与植物的生长发育和逆境调控密切相关。该研究以胡萝卜‘君川红’为材料,克隆出编码ABF转录因子的基因DcABF1,分析其编码氨基酸的序列组成、进化关系和蛋白质理化性质等;采用实时荧光定量PCR方法检测DcABF1基因在不同非生物胁迫下的应答模式。结果显示:DcABF1基因含有一个长1 293 bp开放阅读框,编码430个氨基酸,其蛋白质分子量为104.96 kD,理论等电点为4.85。对DcABF1蛋白与其他植物的ABF家族成员进行同源性比对与进化树分析表明,DcABF1与榴莲中的ABF亲缘关系最近。蛋白质功能域预测发现,DcABF1蛋白中有28.84%的α螺旋和56.05%的无规则卷曲。DcABF1基因启动子区域含有多个顺式调控元件。实时荧光定量PCR分析表明,DcABF1基因对高温、低温、盐胁迫均有响应,其表达水平在盐处理下均高于对照,且于处理后4 h达到峰值,呈先上升后下降的趋势,但干旱处理下DcABF1基因的表达水平与对照相比均下降。 展开更多
关键词 胡萝卜 ABF 转录因子 启动子分析 非生物胁迫 基因表达
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芹菜品种‘津南实芹’AgICE1基因的克隆及其对非生物胁迫的响应 预览
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作者 杨青青 刘洁霞 +3 位作者 徐志胜 冯凯 黄莹 熊爱生 《植物资源与环境学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期16-24,共9页
从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnan Shiqin’)叶片RNA中克隆获得1个转录因子基因,命名为AgICE1。序列分析结果显示:AgICE1基因含有1个长度为1 455 bp的开放阅读框(ORF),编码484个氨基酸。AgICE1转录因子氨基酸... 从芹菜(Apium graveolens Linn.)品种‘津南实芹’(‘Jinnan Shiqin’)叶片RNA中克隆获得1个转录因子基因,命名为AgICE1。序列分析结果显示:AgICE1基因含有1个长度为1 455 bp的开放阅读框(ORF),编码484个氨基酸。AgICE1转录因子氨基酸序列的理论相对分子质量为53 140,理论等电点为pI 5.09,为亲水性蛋白。AgICE1转录因子的氨基酸组成中脂肪族氨基酸的比例最高,酸性氨基酸的比例次之,碱性氨基酸的比例较低,芳香族氨基酸的比例最低。序列比对与系统进化分析结果表明:ICE1转录因子在不同植物中高度保守。实时荧光定量PCR检测结果表明:AgICE1基因在叶片中的相对表达水平显著高于在根和叶柄中的相对表达水平;在高温(38℃)、低温(4℃)、干旱(质量体积分数20%PEG6000)和高盐(0.2 mol·L-1 NaCl)处理下,AgICE1基因的相对表达水平总体上升高。研究结果表明:AgICE1转录因子在芹菜非生物胁迫调控中起重要作用。 展开更多
关键词 芹菜 AgICE1转录因子 基因克隆 非生物胁迫 相对表达水平
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胡萝卜DcPSY2基因克隆及其在非生物胁迫响应中的表达分析
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作者 丁旭 王雅慧 +3 位作者 李彤 张榕蓉 徐志胜 熊爱生 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期2110-2119,共10页
类胡萝卜素(carotenoids)作为一种重要的营养物质,广泛存在于胡萝卜(Daucus carota)中。番茄红素(lycopene)是一种主要的类胡萝卜素,对植物生长发育和逆境响应有重要作用。八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase,PSY)是番茄红素合成的... 类胡萝卜素(carotenoids)作为一种重要的营养物质,广泛存在于胡萝卜(Daucus carota)中。番茄红素(lycopene)是一种主要的类胡萝卜素,对植物生长发育和逆境响应有重要作用。八氢番茄红素合成酶(phytoene synthase,PSY)是番茄红素合成的关键酶之一。利用RT-PCR(reverse transcription PCR)技术从胡萝卜’君川红’中克隆获得ORF长为1317 bp、编码438个氨基酸的DcPSY2基因(GenBank No.NM001329167.1)。将DcPSY2与其他17种植物中PSY蛋白的氨基酸序列进行多重比对,结果显示其总体相似性为82.22%,可见PSY蛋白是高度保守的蛋白质。进化关系表明,胡萝卜DcPSY2蛋白与红木(Bixa orellana)PSY蛋白进化关系最近。胡萝卜DcPSY2蛋白是亲水性、非分泌蛋白,且无信号肽,属于类异戊二烯合成C1超级家族(isoprenoid biosyn C1 superfamily)成员,在各细胞器中均有分布。二级结构预测表明,胡萝卜DcPSY2由53.65%的α-螺旋、5.48%的β-折叠、12.79%的延伸主链和28.08%的随机卷曲组成。qRT-PCR结果显示,DcPSY2基因在高温(38℃)、低温(4℃)、干旱(200 g/L PEG6000)和高盐(200 mmol/L NaCl)4种非生物胁迫下均有明显响应。在高温和高盐胁迫下,DcPSY2基因在处理2 h后表达量达到峰值;在低温和干旱胁迫下,DcPSY2基因的表达量在处理后1 h时显著上调(P<0.05)。本研究结果为DcPSY2基因在胡萝卜生长发育中的功能研究及其在抗逆育种中的应用研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 胡萝卜 八氢番茄红素合成酶(PSY) 基因克隆 表达分析 非生物胁迫
多头切花菊品种茎、枝特性评价体系构建与品种评价 预览
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作者 马婉茹 房伟民 +4 位作者 王海滨 张飞 陈素梅 陈发棣 管志勇 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第14期2515-2524,共10页
【目的】茎、枝特性是切花菊的重要商品性状,建立多头切花菊茎、枝特性评价体系,为筛选优良茎、枝特性的品种提供理论指导。【方法】通过对多头切花菊300个品种的9个与茎、枝特性相关的性状进行连续两个年度的观察记录,借助专家调查法... 【目的】茎、枝特性是切花菊的重要商品性状,建立多头切花菊茎、枝特性评价体系,为筛选优良茎、枝特性的品种提供理论指导。【方法】通过对多头切花菊300个品种的9个与茎、枝特性相关的性状进行连续两个年度的观察记录,借助专家调查法、层次分析法以及K-Means聚类分析法建立评价体系,并进行品种评价。【结果】应用层次分析法确定了9个性状的权重值,其中花朵横向聚拢程度和花朵竖向聚拢程度的权重值最大,均为0.219,其次是花枝角度、茎充实程度,权重值分别为0.123、0.121;综合9个评价指标,通过K-Means聚类分析法将300个品种划分为4个等级,62个品种为优秀、114个品种为良好、80个品种为一般、44个品种为较差,分别占比为20.7%、38%、26.7%、14.6%。【结论】运用专家调查法、层次分析法和K-Means聚类分析法构建出的评价体系可以有效的对多头切花菊品种茎、枝特性进行评价分级,筛选出的优良品种可以在生产中推广应用。 展开更多
关键词 多头切花菊 茎、枝特性 层次分析法 评价体系 K-Means聚类分析
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菊花扦插生根能力的量化评价
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作者 孙炜 于瑞宁 +3 位作者 张飞 蒋甲福 陈发棣 房伟民 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期540-548,共9页
测定了51个菊花品种插穗扦插12 d后的根数、平均根长、根粗、最长根长、根表面积、根投影面积和平均单根根尖数,对这7个形态指标进行相关性和主成分分析,采用隶属函数法对扦插苗的生根能力进行综合评价。结果表明:不同菊花品种的根数、... 测定了51个菊花品种插穗扦插12 d后的根数、平均根长、根粗、最长根长、根表面积、根投影面积和平均单根根尖数,对这7个形态指标进行相关性和主成分分析,采用隶属函数法对扦插苗的生根能力进行综合评价。结果表明:不同菊花品种的根数、平均根长、平均单根根尖数和最长根长的差异较大,但平均根粗、根表面积和根投影面积差异较小。主成分分析将7个单项指标转换成2个相互独立的因子,累积贡献率为84.01%。隶属函数法计算扦插苗生根能力的综合指标值、隶属函数值和综合得分后发现,综合得分值主要集中在0.20~0.40之间,共有23个品种,占总数的45.1%;综合得分值≥0.40的5个品种均为盆栽小菊,其中最大的‘钟山云歌’为0.88,生根能力最强;综合得分值≤0.10共10个品种,其中6个为传统秋菊,最小的‘国华由季’和‘国华八十祝’仅为0.03,生根能力最弱。 展开更多
关键词 菊花 插穗 生根 主成分分析 隶属函数法 量化评价
菊花脑×甘菊种间F1杂种的鉴定和遗传多样性分析
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作者 刘颖鑫 李沛曈 +5 位作者 迟天华 王海滨 管志勇 房伟民 陈发棣 张飞 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1553-1564,共12页
利用SSR和SRAP标记及表型性状研究了二倍体菊花近缘种菊花脑(Chrysanthemum nankingense)与甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)种间杂种的真实性和遗传多样性。结果表明,131个杂交F1代单株中,122个为真杂种,真杂种率为93.13%。42对SS... 利用SSR和SRAP标记及表型性状研究了二倍体菊花近缘种菊花脑(Chrysanthemum nankingense)与甘菊(Chrysanthemum lavandulifolium)种间杂种的真实性和遗传多样性。结果表明,131个杂交F1代单株中,122个为真杂种,真杂种率为93.13%。42对SSR引物组合在菊花脑、甘菊及其122个F1杂种中扩增得到123个多态性条带,平均每对引物扩增出3条多态性条带;18对SRAP引物组合扩增得到55个多态性条带,平均每对引物扩增出3条多态性条带。菊花脑×甘菊种间F1杂种之间的遗传相似系数介于0.44~0.90,表型变异系数在10.16%~16.67%之间,且存在超亲个体,说明种间杂种的遗传变异丰富;杂种的叶片表型偏向于母本。基于表型性状和SSR、SRAP分子标记的UPGMA聚类分析将亲本和122个杂交后代都分为7类,绝大多数杂种后代与母本菊花脑聚在一起,而父本甘菊和少部分杂种株系分别单独聚在一起,表明F1代与母本更为相似。母本与种间杂种的平均遗传相似性系数(0.62)高于父本(0.54),说明该杂种群体在遗传上更接近母本,与表型观察结果相吻合。 展开更多
关键词 菊花近缘种 菊花脑 甘菊 种间杂交 杂种鉴定 分子标记 遗传多样性
黄瓜单链DNA结合蛋白基因CsWHY1的克隆及表达分析 预览
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作者 袁高雅 沈佳 +4 位作者 赵宇 王星 张璐 李季 陈劲枫 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期246-252,共7页
[目的]单链DNA结合蛋白Whirly(WHY)是植物体内广泛存在的一类转录因子,在植物叶片衰老等方面具有重要作用。本文旨在克隆黄瓜单链DNA结合蛋白基因CsWHY1,初步分析其表达特征,为黄瓜叶片衰老的功能研究提供参考。[方法]以华北型黄瓜‘993... [目的]单链DNA结合蛋白Whirly(WHY)是植物体内广泛存在的一类转录因子,在植物叶片衰老等方面具有重要作用。本文旨在克隆黄瓜单链DNA结合蛋白基因CsWHY1,初步分析其表达特征,为黄瓜叶片衰老的功能研究提供参考。[方法]以华北型黄瓜‘9930’‘长春密刺’和‘新泰密刺’为试验材料,克隆CsWHY1的cDNA全长,应用生物信息学方法对该基因进行生物信息学分析,并利用洋葱表皮细胞瞬时表达系统对CsWHY1蛋白进行亚细胞定位,同时通过RT-qPCR技术分析CsWHY1基因在3个黄瓜品种不同组织中的表达模式。[结果]CsWHY1基因包含1个长度为831bp的开放阅读框(ORF),共编码276个氨基酸,蛋白理论相对分子质量为30.729×10^3,理论等电点(pI)为9.00,属于亲水蛋白。氨基酸序列分析表明,CsWHY1蛋白具有保守的Whirly结构域,在双子叶植物和单子叶植物中高度同源,且与甜瓜亲缘关系最近。亚细胞定位发现CsWHY1蛋白在洋葱表皮的质体上表达。荧光定量PCR分析其表达模式,发现CsWHY1在不同黄瓜品种不同组织中均有表达,叶片中表达量最高,根和茎中表达量较低,其中衰老叶片中的表达量显著高于成熟叶片。[结论]CsWHY1基因的表达具有组织特异性,在衰老叶片高表达,参与了黄瓜叶片衰老进程。 展开更多
关键词 黄瓜 CsWHY1基因 叶片衰老 基因克隆 表达分析
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乙烯信号通路转录因子EIL1参与番茄单性结实的机制 预览
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作者 钟廷龙 朱拼玉 +3 位作者 王雪艳 王团团 李季 陈劲枫 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期811-817,共7页
[目的]本文旨在探究乙烯信号通路转录因子EIL1对番茄果实形成的作用。[方法]以EIL1过量表达转基因番茄(EIL-OX)、EIL1共抑制表达转基因番茄(EIL-CS)、EIL1启动子驱动GUS报告基因的转基因番茄(PE1∷GUS)和DR5启动子驱动GUS报告基因转基... [目的]本文旨在探究乙烯信号通路转录因子EIL1对番茄果实形成的作用。[方法]以EIL1过量表达转基因番茄(EIL-OX)、EIL1共抑制表达转基因番茄(EIL-CS)、EIL1启动子驱动GUS报告基因的转基因番茄(PE1∷GUS)和DR5启动子驱动GUS报告基因转基因番茄(DR5∷GUS)为材料,采用RT-qPCR和ELISA等技术研究在番茄果实形成过程中EIL1的转录变化和生长素水平变化;通过杂交、Ag+处理以及GUS染色,分析乙烯和生长素在番茄果实形成过程中的互作机制。[结果]RT-qPCR结果显示,在番茄果实形成和成熟的过程中SlEIL1基因的表达量呈“升高-降低-升高”的趋势。表型分析发现,EIL-OX植株较矮,叶片小且向地生长,出现大量侧枝,部分花蕾凋亡且植株提前衰老;EIL-CS植株自交形成的胚珠发育异常,产生无籽果实,同时ELISA检测表明EIL-CS植株果实发育过程中生长素含量高于EIL-OX和野生型植株。GUS染色结果显示,PE1∷GUS植株EIL1在萼片中大量表达,DR5∷GUS植株生长素主要分布在果柄、萼片处,且授粉后萼片与子房交接处的生长素含量降低。EIL-OX/DR5∷GUS和Ag+处理的野生型植株中生长素主要出现在果柄处。[结论]EIL1能够阻碍生长素从果柄向子房运输,授粉受精或下调表达EIL1均能解除这种阻碍,提高子房生长素水平,形成果实。 展开更多
关键词 番茄 单性结实 乙烯 生长素 激素互作
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水芹类黄酮3'-羟化酶基因的克隆与表达特性分析 被引量:1
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作者 康美玲 冯凯 +3 位作者 段希 王柯文 王枫 熊爱生 《植物生理学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期282-290,共9页
类黄酮3'-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3'H)属于细胞色素P450家族(cytochromeP450,CYP450),在植物主要成色物质花青素的合成中发挥重要作用。本实验以‘八卦洲水芹’以及紫色叶柄突变型水芹为实验材料,利用RT-PCR方法,从... 类黄酮3'-羟化酶(flavonoid 3′-hydroxylase,F3'H)属于细胞色素P450家族(cytochromeP450,CYP450),在植物主要成色物质花青素的合成中发挥重要作用。本实验以‘八卦洲水芹’以及紫色叶柄突变型水芹为实验材料,利用RT-PCR方法,从紫色叶柄突变型水芹的cDNA中克隆得到编码类黄酮3'-羟化酶的基因,命名为OjF3'H1。序列分析显示,OjF3'H1基因全长1575bp,共编码524个氨基酸。OjF3'H1蛋白相对分子质量为58292.59,理论等电点为6.77。系统进化分析显示,OjF3'H1蛋白具有高度保守性,与同属伞形科的胡萝卜F3'H1进化关系最近。OjF3'H1编码的蛋白属于疏水蛋白,无序化比例为5.53%,空间结构主要由α-螺旋和β-折叠组成。实时定量PCR分析显示,OjF3'H1在不同品种水芹茎中相对表达量有明显差异,紫色叶柄突变型水芹中OjF3'H1的表达量明显比‘八卦洲水芹’中高。 展开更多
关键词 水芹 类黄酮3'-羟化酶基因 克隆 叶柄 表达分析
不结球白菜醛酮还原酶BcAKR4C9基因的克隆及表达分析 预览 被引量:1
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作者 张飞雪 虞章红 +4 位作者 刘坤宇 文锴 王建军 侯喜林 李英 《南京农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期240-247,共8页
[目的]本文旨在探究醛酮还原酶AKR4C亚家族BcAKR4C9基因在不同激素处理及逆境胁迫中的表达模式,从而分析BcAKR4C9基因在不结球白菜作物中的生长代谢和逆境胁迫中可能发挥的作用。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,克隆了BcAKR4C9基... [目的]本文旨在探究醛酮还原酶AKR4C亚家族BcAKR4C9基因在不同激素处理及逆境胁迫中的表达模式,从而分析BcAKR4C9基因在不结球白菜作物中的生长代谢和逆境胁迫中可能发挥的作用。[方法]以不结球白菜‘苏州青’为材料,克隆了BcAKR4C9基因的全长,应用生物信息学分析了其氨基酸序列,并通过实时荧光定量PCR技术分析BcAKR4C9基因在不同组织,高温、低温、NaCl胁迫、伤害胁迫,以及水杨酸、茉莉酸甲酯和脱落酸等处理下的基因表达变化。[结果]序列分析表明,BcAKR4C9基因包含1个长度为948 bp的开放式阅读框(ORF),编码315个氨基酸。氨基酸序列多重比对和进化树分析表明,BcAKR4C9与其他植物AKR4C9基因同源性较高,具有高度保守性。荧光定量PCR分析表明,BcAKR4C9在叶片中的表达量高于根中,高温和低温处理下表达上调,且具有相似的表达模式。在0-20 g·L^-1 NaCl质量浓度范围内基因相对表达量随NaCl质量浓度的升高而升高,伤害处理后能够迅速产生应激响应,并能够被水杨酸、茉莉酸甲酯和脱落酸诱导表达。[结论]不结球白菜BcAKR4C9基因能够被不同激素诱导表达,并且参与到多种逆境胁迫响应。 展开更多
关键词 不结球白菜 醛酮还原酶AKR4C亚家族 序列分析 非生物胁迫
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胡萝卜ACC合成酶基因DcACS的克隆与表达分析 预览
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作者 王广龙 却枫 +2 位作者 陈伯清 任旭琴 熊爱生 《核农学报》 CSCD 北大核心 2018年第12期2326-2334,共9页
为分析ACS基因在胡萝卜不同组织和逆境胁迫条件下的表达情况,以胡萝卜品种黑田五寸为试验材料,克隆得到编码1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(ACS)的基因DcACS,采用DNAMAN、NCBI、ExPASy和MEGA 5.1等生物信息学软件对其序列特征进行分析,并... 为分析ACS基因在胡萝卜不同组织和逆境胁迫条件下的表达情况,以胡萝卜品种黑田五寸为试验材料,克隆得到编码1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶(ACS)的基因DcACS,采用DNAMAN、NCBI、ExPASy和MEGA 5.1等生物信息学软件对其序列特征进行分析,并利用实时荧光定量PCR检测其在不同胡萝卜组织和非生物胁迫条件下的表达水平。序列分析结果表明,胡萝卜DcACS基因全长1 485 bp,编码494个氨基酸;推测的氨基酸序列含有ACS特有的7个保守结构域和4个不变氨基酸残基,在进化关系上与葫芦科的黄瓜和香瓜亲缘关系最接近。实时荧光定量PCR结果表明,DcACS基因在叶片中的表达量最高,具有明显的组织特异性,并响应高温、低温、干旱和盐胁迫等非生物胁迫。本研究克隆的DcACS基因为研究胡萝卜生长发育及响应非生物胁迫等过程提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 1-氨基环丙烷-1-羧酸合成酶 基因克隆 非生物胁迫 表达分析 胡萝卜
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芹菜NAC转录因子基因AgNAC1的克隆及其对非生物胁迫的响应
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作者 段奥其 冯凯 +2 位作者 刘洁霞 徐志胜 熊爱生 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2018年第6期1125-1135,共11页
通过RT-PCR方法,从芹菜‘六合黄心芹’和‘文图拉’中分别克隆获得编码NAC转录因子的基因AgNAC1。利用生物信息学方法分析其编码氨基酸序列组成、蛋白质理化性质、亲缘关系、空间结构等,采用荧光定量PCR技术检测基因在不同非生物胁迫下... 通过RT-PCR方法,从芹菜‘六合黄心芹’和‘文图拉’中分别克隆获得编码NAC转录因子的基因AgNAC1。利用生物信息学方法分析其编码氨基酸序列组成、蛋白质理化性质、亲缘关系、空间结构等,采用荧光定量PCR技术检测基因在不同非生物胁迫下的表达水平。结果表明:‘六合黄心芹’和‘文图拉’AgNAC1开放阅读框长度均为957bp,编码318个氨基酸,其蛋白质相对分子量分别为36.89和36.77 kD,理论等电点分别为5.94和5.78。AgNAC1蛋白与不同植物中NAC家族成员同源性比对和进化树分析表明,其与胡萝卜Dc NAC属于同一个分支,进化距离最近。蛋白功能域预测显示,AgNAC1有多个α螺旋和β转角二级结构单元。荧光定量PCR结果表明,AgNAC1在芹菜叶中表达量最高,具有组织特异性,同时对高温、低温、干旱和盐胁迫均有响应。‘六合黄心芹’中AgNAC1的表达水平在高温处理24 h达到最高。‘文图拉’中AgNAC1的表达水平在高温、低温及盐处理后2h和8h高于对照,呈现先下降后上升的趋势,在干旱处理4 h时表达水平最高。 展开更多
关键词 芹菜 NAC转录因子 表达分析 非生物胁迫
芹菜中类胡萝卜素合成相关番茄红素ε–环化酶基因AgLCYE的克隆与表达分析 被引量:2
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作者 李静文 马静 +3 位作者 却枫 王枫 徐志胜 熊爱生 《园艺学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期341-350,共10页
番茄红素ε–环化酶(lycopene epsilon cyclase,LCYE)是类胡萝卜素合成途径中的关键酶。从‘津南实芹’中克隆获得番茄红素ε–环化酶基因AgLCYE。序列分析结果显示,AgLCYE包含1个1 590bp的开放阅读框,编码529个氨基酸。氨基酸序列多... 番茄红素ε–环化酶(lycopene epsilon cyclase,LCYE)是类胡萝卜素合成途径中的关键酶。从‘津南实芹’中克隆获得番茄红素ε–环化酶基因AgLCYE。序列分析结果显示,AgLCYE包含1个1 590bp的开放阅读框,编码529个氨基酸。氨基酸序列多重比对表明,芹菜和其他物种的LCYE同源性为77.68%,AgLCYE和同属伞形科的胡萝卜LCYE氨基酸序列同源性高达98.07%。AgLCYE蛋白与胡萝卜LCYE蛋白进化关系最近。AgLCYE蛋白属于亲水性蛋白,预测的蛋白质三级结构中有9个α螺旋和18个β折叠。无序化分析结果表明,AgLCYE编码的氨基酸序列有4个无序化区域。用UPLC方法对30、45和60 d龄芹菜叶中叶黄素和α–胡萝卜素的含量进行测定,30 d时叶黄素含量最高,45 d时最低,45和60 d时无显著性差异,叶片中的叶黄素含量均高于叶柄。芹菜叶片和叶柄中均没有检测到α–胡萝卜素的存在。荧光定量表达分析结果显示,随着生长期的增加,叶片中AgLCYE的相对表达量逐渐升高;叶柄中逐渐降低。 展开更多
关键词 芹菜 类胡萝卜素 番茄红素ε–环化酶基因 叶黄素 α–胡萝卜素
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