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波动性高糖对氧糖剥夺/再复供神经元存活的影响
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作者 陈秋月 张丹红 +4 位作者 王莉 张叶青 陈慧红 陈富强 何泽宝 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期61-66,共6页
目的探讨波动性高糖对氧糖剥夺/再复供(OGD/R)后神经元存活的影响。方法原代培养小鼠海马神经元,待细胞融合达到80%左右时传代培养。取对数生长期细胞置于缺氧状态(37℃、5%CO2、95%N2)的培养箱中模拟细胞缺氧,将培养液更换为无糖Hank... 目的探讨波动性高糖对氧糖剥夺/再复供(OGD/R)后神经元存活的影响。方法原代培养小鼠海马神经元,待细胞融合达到80%左右时传代培养。取对数生长期细胞置于缺氧状态(37℃、5%CO2、95%N2)的培养箱中模拟细胞缺氧,将培养液更换为无糖Hank平衡盐溶液(HBSS)模拟细胞缺糖;设常糖常氧对照组。细胞缺氧缺糖处理6h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态,用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测细胞活性,再进行分组实验。将细胞随机分为4组,分别采用含不同浓度葡萄糖培养基,置于常氧、5%CO2、37℃培养条件下继续培养72h,制备OGD/R模型模拟细胞缺血/再灌注。低糖对照组用含5.5mmol/L葡萄糖的培养基培养;恒定高糖组用含33.0mmol/L葡萄糖的培养基培养;波动高糖组日间用含33.0mmol/L葡萄糖的培养基培养3h,再用含5.5mmol/L葡萄糖的培养基培养2h,交替3次,夜间用含33.0mmol/L葡萄糖的培养基过夜;高渗对照组用含5.5mmol/L葡萄糖的培养基与甘露醇配制,渗透压与恒定高糖组相同,有效糖浓度与常糖常氧对照组相同,以排除高糖培养基引起的渗透压变化对结果的影响。各组细胞培养72h后,倒置相差显微镜下观察细胞形态学改变;用CCK-8试剂盒测定细胞活性;用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果倒置相差显微镜下显示,常糖常氧对照组细胞饱满,折光性强,胞核明显,突起清晰,细胞活性较高。缺氧缺糖处理6h后,细胞皱缩,折光性差,核质不清,突起不清晰,细胞活性较常糖常氧对照组明显降低(A值:0.34±0.06比1.09±0.06,P<0.01),说明细胞氧糖剥夺(OGD)模型制备成功。更换不同浓度葡萄糖继续培养72h后,低糖对照组细胞皱缩,胞膜不完整,核质不清,坏死细胞较多;恒定高糖组细胞折光性差,大量细胞漂浮,胞核不明显;而波动高糖组细胞形态正常,细胞折光性稍降低,坏死细胞较少;高渗对照组与恒定高糖组细胞状态接近。与� 展开更多
关键词 波动性高糖 氧糖剥夺/再复供 海马神经元 存活
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