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临床分离变形杆菌不典型第1类整合子结构分析
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作者 魏取好 肖林林 +2 位作者 胡庆丰 李万翔 刘维薇 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期440-445,共6页
目的确定临床分离变形杆菌中不典型第1类整合子的结构。方法在26株第1类整合酶基因阳性可变区扩增失败的变形杆菌临床分离株中,选取6株通过反向PCR扩增第1类整合酶基因周围DNA片段,PCR产物测序结果通过BLAST进行比对分析,确定同源目... 目的确定临床分离变形杆菌中不典型第1类整合子的结构。方法在26株第1类整合酶基因阳性可变区扩增失败的变形杆菌临床分离株中,选取6株通过反向PCR扩增第1类整合酶基因周围DNA片段,PCR产物测序结果通过BLAST进行比对分析,确定同源目标序列后,查看GenBank该提取码对应序列文件靶序列周围序列,再根据周围序列设计合成引物进行重叠PCR并测序验证。结果通过反向PCR及重叠PCR测序分析,26株变形杆菌临床分离株中,25株细菌第1类整合子可变区结构全部或部分确定,其中22株细菌第1类整合子可变区结构为estX-psp-aadA2-cmlA1-aadA1a-qacI-tnpA-sul3,另3株第1类整合子可变区分别为estX-psp-aadA2-cmlA1、dfrA14、IS26,均缺失3′保守区。结论反向PCR可用于临床菌株中不典型第1类整合子结构分析,在临床分离变形杆菌中首次检出基因盒psp及基因盒组合estX-psp-aadA2-cmlA1-aadA1a-qacI-tnpA-sul3、estX-psp-aadA2-cmlA1。 展开更多
关键词 整合子 基因盒 反向PCR 耐药性 变形杆菌
肝癌中DNA甲基化标志物的研究进展
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作者 黎毓光 孙奋勇 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期79-81,共3页
肝细胞癌是高发病率和高死亡率的恶性肿瘤,治疗的关键在于早期诊断。DNA甲基化是表观遗传学最为重要的机制之一,探讨DNA甲基化致癌机制的改变可为肝细胞癌诊断提供理论依据,同时特定基因的甲基化水平也可作为生物标志物用于肝细胞癌... 肝细胞癌是高发病率和高死亡率的恶性肿瘤,治疗的关键在于早期诊断。DNA甲基化是表观遗传学最为重要的机制之一,探讨DNA甲基化致癌机制的改变可为肝细胞癌诊断提供理论依据,同时特定基因的甲基化水平也可作为生物标志物用于肝细胞癌早期诊断和预后评估。 展开更多
关键词 肝细胞 DNA甲基化 早期诊断 预后 肿瘤标记 生物学
miR-29c通过Tiam1抑制人食管鳞状细胞癌侵袭和转移的研究 预览 被引量:5
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作者 褚庆华 张婕 孙奋勇 《检验医学》 CAS 2015年第6期635-640,共6页
目的研究微小RNA(miR)-29c通过靶向T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭和迁移的影响。方法通过细胞划痕和transwell实验观察miR-29c过表达的ESCC细胞侵袭迁移能力的变化;通过免疫印迹法和sensor ... 目的研究微小RNA(miR)-29c通过靶向T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)基因对食管鳞状细胞癌(ESCC)细胞侵袭和迁移的影响。方法通过细胞划痕和transwell实验观察miR-29c过表达的ESCC细胞侵袭迁移能力的变化;通过免疫印迹法和sensor reporter实验研究miR-29c对Tiam1的调控作用和靶标位点;在细胞"拯救"实验中通过免疫印迹法检测相关蛋白表达量的变化以及用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞形态的改变,研究miR-29c抑制ESCC细胞侵袭迁移的调节机制。结果细胞划痕实验和transwell实验显示miR-29c能抑制ESCC细胞的侵袭迁移;通过生物信息学方法预测miR-29c的靶基因是Tiam1;免疫印迹法和sensor reporter检测结果显示miR-29c通过与Tiam1 3'-非翻译区(UTR)结合降解Tiam1;细胞功能"拯救"实验的细胞划痕、免疫印迹法和免疫荧光结果显示miR-29c能抑制Tiam1的表达,导致激活态Rac1-三磷酸鸟苷(GTP)减少,致使细胞运动状态改变,迁移能力减弱;而人工合成的针对Tiam1的特异siRNA分子siTiam1的干涉作用能"拯救"miR-29C对ESCC细胞迁移能力的抑制。结论 miR-29C通过降解Tiam1 mRNA,下调了Rac1的激活水平,导致细胞运动状态变化,从而抑制ESCC细胞的侵袭迁移。 展开更多
关键词 微小RNA-29c T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1 食管鳞状细胞癌 侵袭转移
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外周血microRNAs在结直肠癌诊疗中的应用及检测方法进展 被引量:1
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作者 刘维薇 胡婷婷 关明 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期653-656,共4页
microRNAs作为新型肿瘤诊疗检测指标对肿瘤的早期筛查及鉴别诊断具有重要的临床价值,特别是外周血microRNAs检测因其低侵人性和高灵敏度,临床应用前景广阔。本文分析了近年来外周血microRNAs在结直肠癌诊疗中的应用,同时也对microRNA... microRNAs作为新型肿瘤诊疗检测指标对肿瘤的早期筛查及鉴别诊断具有重要的临床价值,特别是外周血microRNAs检测因其低侵人性和高灵敏度,临床应用前景广阔。本文分析了近年来外周血microRNAs在结直肠癌诊疗中的应用,同时也对microRNAs作为肿瘤标志物在临床应用中存在的问题,特别是众多影响因素所致的检测结果不稳定等制约其发展的主要原因进行了探讨。 展开更多
关键词 结直肠肿瘤 微RNAS 肿瘤标记 生物学
骨髓贴壁细胞向破骨细胞的分化 预览 被引量:2
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作者 陈婧 马纪 孙奋勇 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第7期985-990,共6页
背景:一般认为采用贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能够贴壁的细胞为间充质干细胞,并能分化成为成骨、成脂肪及成软骨细胞,其中贴壁的细胞是否有分化为破骨细胞的潜能尚不明确。 目的:检测贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能贴壁的细胞是否... 背景:一般认为采用贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能够贴壁的细胞为间充质干细胞,并能分化成为成骨、成脂肪及成软骨细胞,其中贴壁的细胞是否有分化为破骨细胞的潜能尚不明确。 目的:检测贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能贴壁的细胞是否能够分化为破骨细胞。 方法:采用贴壁法得到小鼠原代间充质干细胞,以及通过贴壁1-5d后得到不同时间贴壁的骨髓细胞。原代间充质干细胞及不同时间贴壁的骨髓细胞分别用普通培养基,及含m-csf和RANKL培养基,培养9 d后进行碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶染色。原代间充质干细胞传代后,第2代间充质干细胞分为4组,分别用普通培养基、含m-csf培养基、含RANKL培养基及含m-csf和RANKL的培养基培养,9 d后进行碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶染色。 结果与结论:贴壁法得到较均一的间充质干细胞,原代及传代贴壁细胞的联合诱导组抗酒石酸酸性磷酸酶染色均为阳性,说明原代和传代的贴壁骨髓细胞中均有可以分化为破骨细胞的细胞。不同时间贴壁的细胞诱导后碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶染色有差异,说明不同时间贴壁的细胞存在分化差异。 展开更多
关键词 组织构建 骨细胞 骨髓间充质干细胞 破骨细胞 造血细胞 贴壁分离法 分离 培养 诱导 分化
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miRNA-195在膀胱癌细胞中功能的研究 预览 被引量:1
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作者 陈婧 孙奋勇 马纪 《检验医学》 CAS 2014年第5期540-544,共5页
目的:研究微小RNA(miRNA)-195对人膀胱癌细胞5637增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体方法将miRNA-195转染至人膀胱癌细胞5637(miRNA-195组),同时以只转染病毒载体的5637细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链... 目的:研究微小RNA(miRNA)-195对人膀胱癌细胞5637增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法利用阳离子脂质体方法将miRNA-195转染至人膀胱癌细胞5637(miRNA-195组),同时以只转染病毒载体的5637细胞作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测转染细胞中miRNA-195的表达量。采用噻唑蓝(MTT)法、细胞计数法和集落形成实验测定miRNA-195对5637细胞体外增殖的影响。采用划痕试验、Transwell实验、Matrigel 肿瘤细胞侵袭实验检测miRNA-195对5637细胞迁移、侵袭能力的影响。结果实时荧光定量PCR检测结果表明转染后的5637细胞高表达miRNA-195。MTT法、细胞计数法及集落形成实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞在体外的增殖,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。划痕实验、Transwell实验以及Matrigel肿瘤细胞侵袭实验证明miRNA-195可以抑制5637细胞的迁移和侵袭能力,miRNA-195组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miRNA-195能够抑制膀胱癌细胞5637在体外的增殖、迁移以及侵袭能力。 展开更多
关键词 微小RNA-195 人膀胱癌细胞 细胞增殖 细胞迁移
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国外实验室自建项目管理带给我们的启示 预览 被引量:2
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作者 刘维薇 郑特 +1 位作者 徐科 关明 《中华临床实验室管理电子杂志》 2014年第3期1-4,共4页
实验室自建项目(1aboratory evelopedtests,LDTs)在个体化诊断中发挥越来越重要的作用,同时也变得越来越复杂,风险很高,存在的问题和隐患亟待解决。国外,尤其是美国对LDTs的监管经历了几十年演变,逐步认识并强调监管的重要性,... 实验室自建项目(1aboratory evelopedtests,LDTs)在个体化诊断中发挥越来越重要的作用,同时也变得越来越复杂,风险很高,存在的问题和隐患亟待解决。国外,尤其是美国对LDTs的监管经历了几十年演变,逐步认识并强调监管的重要性,进一步规范各项监管措施。我国目前虽未允许LDTs在临床应用,但临床转化指日可待。理想的监管模式应该包括公正的、基于风险管理的监管方案、逐步监管、能力验证、临床有效性和实用性以及紧急使用授权规定等多个方面。LDTs是检验医学发展的一次机遇,应逐步建立并完善。 展开更多
关键词 实验室自建项目 监管 医学实验室
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miR-203调控NEDD9抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231侵袭及迁移作用机制研究 被引量:2
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作者 褚庆华 张婕 孙奋勇 《诊断学理论与实践》 2014年第5期505-510,共6页
目的 :研究mi R-203抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞NEDD9蛋白的作用对细胞侵袭和迁移的影响。方法:mi R-203脂质体转染MDA-MB-231细胞,通过细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化;通过蛋白印迹检测mi R-203对NEDD9表达... 目的 :研究mi R-203抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞NEDD9蛋白的作用对细胞侵袭和迁移的影响。方法:mi R-203脂质体转染MDA-MB-231细胞,通过细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化;通过蛋白印迹检测mi R-203对NEDD9表达的调控作用,并用sensor reporter确定mi R-203的靶标位点;最后,通过细胞"拯救"实验研究相关蛋白表达量的变化,用免疫荧光-激光共聚焦显微镜观察细胞片状伪足和黏着斑的改变,探究mi R-203对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移能力的调节机制。结果:细胞划痕实验和Transwell实验显示,mi R-203抑制了MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力;通过生物信息学网站预测mi R-203的靶基因是NEDD9;蛋白印迹和sensor reporter检测结果显示,mi R-203通过与NEDD9 3′-UTR结合,下调NEDD9;共转染si NEDD9和mi R-203的"拯救"实验后的细胞划痕实验、蛋白印迹和免疫荧光-激光共聚焦结果显示,mi R-203抑制NEDD9表达导致激活态Rac1-GTP减少,致使细胞运动状态改变,侵袭迁移能力减弱,而si NEDD9干涉作用能"拯救"mi R-203对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制。结论 :mi R-203通过降解NEDD9,下调激活的Rac1水平,导致乳腺癌细胞MDA-MB-231片状伪足和黏着斑的减少或消失,从而抑制细胞的侵袭及迁移。 展开更多
关键词 miR-203 NEDD9 乳腺癌 侵袭 迁移
2013版《医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的应用说明》改版解读 预览 被引量:8
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作者 刘维薇 关明 《中华临床实验室管理电子杂志》 2013年第1期36-40,共5页
中国合格评定国家认可委员会2013版《医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的应用说明》,与既往版本有较大更新和改动,尤其在设备维修后的性能验证、新开项目方法学性能评估和室内质量控制方面,要求更为细化严格,新增内... 中国合格评定国家认可委员会2013版《医学实验室质量和能力认可准则在基因扩增检验领域的应用说明》,与既往版本有较大更新和改动,尤其在设备维修后的性能验证、新开项目方法学性能评估和室内质量控制方面,要求更为细化严格,新增内容较多,这对提高基因扩增检验的医学实验室质量和能力具有重要的指导意义。本文对此变化解读如下。 展开更多
关键词 基因扩增 医学实验室
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miR-34a通过调控YY1抑制肾癌细胞的增殖及侵袭 预览 被引量:2
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作者 王明丽 李智 +2 位作者 徐晋豫 翁文浩 许闪闪 《检验医学》 CAS 2012年第8期635-640,共6页
目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对... 目的探讨miR-34a在肾癌组织中表达、miR-34a对人肾癌ACHN细胞增殖和侵袭的影响及调控机制。方法实时聚合酶链反应(PCR)检测miR-34a在20例肾癌及癌旁组织中的表达;采用脂质体转染法将miR-34a mimics转染入肾癌ACHN细胞中,试验分空白对照组、阴性对照组、miR-34a mimics转染组。实时PCR检测转染24 h后miR-34a表达量;噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;Transwell及Matrigel检测细胞侵袭能力;实时PCR和蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1表达水平。结果与癌旁组织相比,20例癌组织中miR-34a平均表达量为1.06±0.67,显著低于癌旁组织(1.62±0.83,P〈0.01);转染后24 h,miR-34a mimics转染组的miR-34a表达量为157.04±13.01,较阴性对照组显著上调(P〈0.01);miR-34a mimics转染组细胞增殖能力显著降低(P〈0.01),细胞生长被阻滞在G0/G1期;细胞侵袭能力明显减弱(P〈0.01);转染miR-34a mimics后YY1基因在mRNA表达无明显变化(P〉0.05),蛋白水平下调。结论 miR-34a在肾癌中低表达,可能与肾癌的发生有关;miR-34a调控YY1的表达可能是抑制肾癌细胞生物活性的重要机制之一。 展开更多
关键词 MIR-34A YY1 细胞增殖 侵袭 肾癌
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两种测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C方法的结果比较 预览 被引量:3
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作者 谢媛 李丹 +2 位作者 徐丙根 褚庆华 李智 《检验医学》 CAS 北大核心 2008年第5期 520-522,共3页
目的了解颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA)和颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)结果的相关性,为不同的方法学检测血清CysC是否具有一致性提供参考依据。方法按照美国临床实验标准化委员会(NCCLS... 目的了解颗粒增强散射免疫比浊法(PENIA)和颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)测定血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(CysC)结果的相关性,为不同的方法学检测血清CysC是否具有一致性提供参考依据。方法按照美国临床实验标准化委员会(NCCLS)EP9-A文件进行评估,将测得的数据进行相关回归分析,计算2种方法间的偏倚。结果PENIA和PETIA测定CysC的相关方程为YPETIA=1.352XPENIA-0.009,相关系数(r)=0.976。结论这2种方法测定血清CysC有良好的相关性。当实验室内同一项目存在2套以上分析系统检测时,应对其进行对比分析和偏倚评估,为室间评价结果提供参考依据。 展开更多
关键词 半胱氨酸蛋白酶抑制剂C 颗粒增强散射免疫比浊法 颗粒增强透射免疫比浊法
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类风湿因子分型与慢性肝炎关系的探讨 预览
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作者 谢嫒 李智 +1 位作者 许丙根 褚庆华 《世界感染杂志》 2006年第5期 413-414,426,共3页
目的探讨各型RF(IgM-RF、IgG-RF、IgA-RF)与慢性肝炎的关系。方法检测分析86例慢性肝炎病人的各型RF,将其分为肝硬化及慢性肝炎组,另设正常对照组50例,测定血清IgM-RF、IgG-RF、IgA-RF、TB、DB、ALT、ALP、γ-GT,对各组指标进行... 目的探讨各型RF(IgM-RF、IgG-RF、IgA-RF)与慢性肝炎的关系。方法检测分析86例慢性肝炎病人的各型RF,将其分为肝硬化及慢性肝炎组,另设正常对照组50例,测定血清IgM-RF、IgG-RF、IgA-RF、TB、DB、ALT、ALP、γ-GT,对各组指标进行统计分析及相关性研究。结果与对照组相比,慢性肝炎组中仅有IgM-RF及血清DB、ALT的变化有显著性差异;肝硬化组中IgA—RF、IgM-RF及各项肝功能指标的变化差异均有显著性。肝硬化组与慢性肝炎组相比,IgA-RF、TB、DB、ALP、γ-GT水平的变化差异有显著性。肝硬化组IgA-RF与血清TB值的变化有较高相关性(r=0.564,P〈0.01)。结论IgM-RF在慢性肝炎时检测有一定意义,IgA-RF在肝硬化病人有明显升高与肝脏的持续性损伤及疾病的严重性有着必然的联系。 展开更多
关键词 类风湿因子 分型 慢性肝炎 肝硬化
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乙型肝炎病毒耐药基因测序检测性能验证 被引量:1
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作者 胡婷婷 陈宇明 +1 位作者 关明 刘维薇 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期776-779,共4页
目的:探讨在ISO15189以及美国病理学家协会( CAP)实验室认可体系下,建立使用一代测序(Sanger测序法)进行乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因检测的项目性能验证标准。方法方法学建立。2012年8至12月收集复旦大学附属华山医院肝炎门诊及... 目的:探讨在ISO15189以及美国病理学家协会( CAP)实验室认可体系下,建立使用一代测序(Sanger测序法)进行乙型肝炎病毒(HBV)耐药基因检测的项目性能验证标准。方法方法学建立。2012年8至12月收集复旦大学附属华山医院肝炎门诊及住院患者中临床表现HBV耐药患者25例。从测定下限、精密度、正确性、分析特异性、可报告范围/参考范围等方面进行性能评估。测序质量的验证基于整体测序图谱的荧光信号值、性噪比、测序峰图、QV值等评估参数进行。结果可检测出正常背景下10%~20%的突变;有较好的精密度;正确性100%;未发现有明显干扰及交叉污染。结论测序方法的性能验证要结合实际应用。特别是测序分析的质量评估需要针对不同的检测目的以及检测对象建立相关标准并适当进行调整以符合临床需要。本试验方法检测乙型肝炎耐药基因可应用于临床检测。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 抗药性 病毒 DNA 病毒 病毒载量 序列分析 DNA 聚合酶链反应
血清CysC与尿微量蛋白在肾脏疾病诊断中的意义 预览 被引量:1
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作者 谢媛 李智 +3 位作者 许丙根 左玫 褚庆华 王艳 《世界感染杂志》 2005年第3期 216-218,共3页
目的研究血清半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C(CysC)与尿微量蛋白在肾脏疾病诊断中的意义。方法检测分析103例肾脏疾病病人,按肾小球滤过率(GFR)将其分为肾功能重度受损组、中度受损组、轻度受损组和肾功能正常对照组,测定血清CysC、BUN、Cr... 目的研究血清半胱氨酸蛋白酶抑制蛋白C(CysC)与尿微量蛋白在肾脏疾病诊断中的意义。方法检测分析103例肾脏疾病病人,按肾小球滤过率(GFR)将其分为肾功能重度受损组、中度受损组、轻度受损组和肾功能正常对照组,测定血清CysC、BUN、Cr和尿微量蛋白α1—MG、ALB、IgG、RBP,各组指标进行统计分析及相关性研究。结果与对照组相比,重、中度受损组各项指标均明显升高,差异有显著性;而轻度受损组仅血清CysC和尿ALB的差异有显著性(P<0.01和P<0.05)。血清CysC与GFR有较高相关性(r=-0.744,P<0.01)。在肾脏轻度受损时,尿微量蛋白的异常早于血清CysC。结论检测病人尿微量蛋白可诊断早期肾脏疾病,检测血清CysC以了解肾功能受损的程度。 展开更多
关键词 血清CYSC 尿微量蛋白 肾脏疾病
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