期刊文献+
共找到6篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
利用酵母双杂交研究与Ca^2+CRAC通道Orail相互作用蛋白 预览
1
作者 夏孝强 李芳华 +2 位作者 季一飞 余守洋 田军龙 《华西医学》 CAS 2008年第3期 429-430,共2页
目的:利用酵母双杂交等技术研究与CRAC通道蛋白Orail发生相互作用的蛋白质,从而揭示CRAC通道分子作用机制。方法:以Orail-C端为诱饵蛋白筛选大鼠海马和皮质cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,运用营养缺陷型培养,X-β-Gal蓝斑筛选... 目的:利用酵母双杂交等技术研究与CRAC通道蛋白Orail发生相互作用的蛋白质,从而揭示CRAC通道分子作用机制。方法:以Orail-C端为诱饵蛋白筛选大鼠海马和皮质cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,运用营养缺陷型培养,X-β-Gal蓝斑筛选等实验去除假阳性克隆,并通过GST-Pulldown体外实验验证其相互作用。结果:以Orai1-C端为诱饵最终筛出了几个阳性克隆,经测序分析,发现了其中一个感兴趣的蛋白。结论:Orail可以和该蛋白发生相互作用,其相互作用可能与CRAC通道功能调节有关。 展开更多
关键词 CRAC通道 Orail 酵母双杂交 蛋白相互作用
在线阅读 下载PDF
基于CA杂合启动子基因敲入载体的构建 预览
2
作者 崔义元 陈米娜 +1 位作者 王德华 李芳华 《华西医学》 CAS 2008年第3期 431-433,共3页
目的:改造原有的Rosa26基因敲入系统,引入启动能力更强的CA杂合启动子(由鸡actin启动子和SV40增强子融合而成)。方法:运用PCR,限制性内切酶酶切及T4连接酶连接的方法,构建带有CA启动子的基因敲入载体。结果:成功地对原有Rosa26基... 目的:改造原有的Rosa26基因敲入系统,引入启动能力更强的CA杂合启动子(由鸡actin启动子和SV40增强子融合而成)。方法:运用PCR,限制性内切酶酶切及T4连接酶连接的方法,构建带有CA启动子的基因敲入载体。结果:成功地对原有Rosa26基因敲入系统进行了改造,引入了CA启动子,并且成功构建了mGluR5基因敲入载体。结论:基于CA杂合启动子的基因敲入载体具有更强的启动能力,而且能够在某些特定组织中增强目的基因的表达,为今后研究基因功能及疾病模型小鼠的制备奠定了良好基础。 展开更多
关键词 Rosa26基因敲入系统 CA杂合启动子 MGLUR5
在线阅读 下载PDF
用基于galK的同源重组的方法构建arc基因表达增强的载体 预览
3
作者 邓蓉康 杜晓霞 +2 位作者 陈米娜 季一飞 崔义元 《华西医学》 CAS 2008年第3期 433-435,共3页
目的:利用同源重组的方法,将arcBAC(bacteria artificial chromosome)启动子区域的SRE(serumre-sponse element)改造成Gal4结合序列,以此通过Gal4/UAS系统增强arc基因表达。方法:在大肠杆菌中利用依赖于噬菌体基因的同源重组,通过... 目的:利用同源重组的方法,将arcBAC(bacteria artificial chromosome)启动子区域的SRE(serumre-sponse element)改造成Gal4结合序列,以此通过Gal4/UAS系统增强arc基因表达。方法:在大肠杆菌中利用依赖于噬菌体基因的同源重组,通过galK正负筛选的方法改造arcBAC。结果:成功将arc启动子区域的SRE改造成Gal4结合序列,并且没有影响arc基因的其他序列。结论:成功改造BAC,可以将此BAC用在Gal4/UAS系统增强arc基因表达的实验中。 展开更多
关键词 RECOMBINEERING galK正负筛选 细菌人工染色体
在线阅读 下载PDF
用重组工程技术快速构建Shank3条件性敲除载体 预览
4
作者 王德华 陈米娜 崔义元 《华西医学》 CAS 2008年第3期 438-441,共4页
目的:构建Shank3条件性敲除载体,最终用于构建Shank3条件性敲除小鼠。方法:用重组工程技术来快速高效地构建条件敲除载体。结果:成功构建得到Shank3条件性敲除载体。结论:重组工程技术是一个用于构建条件性敲除载体成熟而高效的方法。
关键词 重组工程技术 条件性敲除
在线阅读 下载PDF
LanCL1融合蛋白表达纯化及其多克隆抗体制备鉴定 预览
5
作者 余守洋 陈米娜 +4 位作者 季一飞 夏孝强 李芳华 王德华 崔义元 《华西医学》 CAS 2008年第4期 682-683,共2页
目的:获得LanCL1原核和真核表达融合蛋白,制备兔抗LanCL1的多克隆抗体以用于LanCL1基因功能研究。方法:PCR扩增LanCL1 CDS编码区序列,分别亚克隆至原核和真核表达载体上。将真核表达重组质粒用脂质体转染HEK293细胞成功获得了pRK5-Lan... 目的:获得LanCL1原核和真核表达融合蛋白,制备兔抗LanCL1的多克隆抗体以用于LanCL1基因功能研究。方法:PCR扩增LanCL1 CDS编码区序列,分别亚克隆至原核和真核表达载体上。将真核表达重组质粒用脂质体转染HEK293细胞成功获得了pRK5-LanCL1真核表达融合蛋白。同时将原核表达重组质粒化学转化BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导GST-LanCL1原核表达融合蛋白,谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化,透析浓缩获得高纯度GST-LanCL1融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并用Western Blot检测抗体。结果:获得了LanCL1真核和原核表达重组融合蛋白。经亲和纯化后的GST-LanCL1融合蛋白纯度达到90%,BCA蛋白定量浓度约0.44mg/mL。获得了高效价的特异性兔抗LanCL1多克隆抗体。结论:成功进行了LanCL1融合蛋白的原核和真核表达,并获得抗LanCL1的高灵敏度的多克隆抗体,为LanCL1进一步功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 LanCL1 真核表达 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
在线阅读 下载PDF
Rheb1基因多克隆抗体的制备 预览
6
作者 罗茂文 杜晓霞 +2 位作者 李芳华 陈米娜 夏孝强 《华西医学》 CAS 2008年第4期 684-685,共2页
目的:在大肠杆菌BL21中表达并纯化GST-Rheb1融合蛋白,以之免疫成年新西兰大白兔,获得Rheb1多克隆抗体。方法:运用PCR,限制性内切酶酶切及T4连接酶连接的方法,构建带有Rheb1基因的真核和原核表达载体;IPTG诱导GST融合蛋白高表达,通过... 目的:在大肠杆菌BL21中表达并纯化GST-Rheb1融合蛋白,以之免疫成年新西兰大白兔,获得Rheb1多克隆抗体。方法:运用PCR,限制性内切酶酶切及T4连接酶连接的方法,构建带有Rheb1基因的真核和原核表达载体;IPTG诱导GST融合蛋白高表达,通过皮下注射免疫新西兰大白兔,并取血清进行免疫印记分析抗体效价。结果:成功的制备了高效价的Rheb1兔多克隆抗体。结论:Rheb1多克隆抗体的成功制备,将为研究Rheb1基因的功能发挥重要的作用。 展开更多
关键词 Rheb1 多克隆抗体 融合蛋白
在线阅读 下载PDF
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部 意见反馈