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基于还原氧化石墨烯的疏水亲油膜的制备及其在油水分离中的应用
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作者 张昊东 陈靖雯 +1 位作者 张灵聪 陈京 《化工新型材料》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期223-227,共5页
通过一种简易的方法制备了基于还原氧化石墨烯的油水分离膜:首先使用简单的浸泡方法将氧化石墨烯覆盖到滤纸上,然后在180℃下加热2h,对氧化石墨烯的热处理使滤纸由亲水表面转化成疏水表面,并用X射线光电子能谱和接触角测量仪对其进行了... 通过一种简易的方法制备了基于还原氧化石墨烯的油水分离膜:首先使用简单的浸泡方法将氧化石墨烯覆盖到滤纸上,然后在180℃下加热2h,对氧化石墨烯的热处理使滤纸由亲水表面转化成疏水表面,并用X射线光电子能谱和接触角测量仪对其进行了表征。分别针对分离膜的孔径、处理温度及分离性能进行了系统研究。结果表明,制备的油水分离滤纸具有很好的稳定性和重复使用性,对不同种类的油与水的混合物的分离效率大于96%。同时,在多次重复测量及长期常温保存后仍然保持较高的通量。这种简易方法制备的油水分离材料在环境保护方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 油水分离 滤膜 疏水 超亲油 稳定性
滑菇肽对青春双歧杆菌的益生作用 预览
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作者 张业尼 钱磊 +2 位作者 刘逸寒 刘金福 张志军 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第2期162-166,共5页
研究滑菇肽对青春双歧杆菌的体外益生作用。将滑菇肽添加到青春双歧杆菌液体培养基中,测定发酵和贮存过程中活菌数变化。结果表明,滑菇肽在添加量为0.5g/L~4.0g/L时对青春双歧杆菌生长具有促进作用,发酵12小时后活菌数最高可达1.78×... 研究滑菇肽对青春双歧杆菌的体外益生作用。将滑菇肽添加到青春双歧杆菌液体培养基中,测定发酵和贮存过程中活菌数变化。结果表明,滑菇肽在添加量为0.5g/L~4.0g/L时对青春双歧杆菌生长具有促进作用,发酵12小时后活菌数最高可达1.78×10^9cfu/mL,为对照组的2.88倍(P<0.05)。滑菇肽能够增强青春双歧杆菌对酸性环境的耐受力,4℃冷藏28天后,活菌数仍维持在80%以上。添加1.0g/L滑菇肽对青春双歧杆菌的促生长作用优于低聚果糖,发酵12小时后活菌数可达1.18×10^9cfu/mL,为对照组的2.04倍(P<0.05)。滑菇肽能够促进青春双歧杆菌生长,作为双歧因子应用于青春双歧杆菌产品具有潜在价值。 展开更多
关键词 滑菇 青春双歧杆菌 益生作用
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蜂蜜艾尔精酿啤酒酿造工艺研究 预览
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作者 黄琳 许忠平 +4 位作者 闫菲 单孟颖 徐泽华 欧阳微 宋佳 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第3期134-138,共5页
以澳洲淡色艾尔大麦芽、澳洲水晶焦香麦芽、酒花和蜂蜜为原料,选用上面发酵的WB06型艾尔酵母进行发酵,酿制蜂蜜艾尔精酿啤酒。以感官评分为评价指标,通过单因素试验和响应面试验研究了原麦汁浓度、发酵温度、葡萄糖添加量及蜂蜜添加量... 以澳洲淡色艾尔大麦芽、澳洲水晶焦香麦芽、酒花和蜂蜜为原料,选用上面发酵的WB06型艾尔酵母进行发酵,酿制蜂蜜艾尔精酿啤酒。以感官评分为评价指标,通过单因素试验和响应面试验研究了原麦汁浓度、发酵温度、葡萄糖添加量及蜂蜜添加量对蜂蜜艾尔精酿啤酒感官品质的影响。结果显示,蜂蜜艾尔精酿啤酒的最佳酿造工艺条件为:原麦汁浓度12.56°P,发酵温度18℃,葡萄糖添加量7g/L,蜂蜜添加量3.05%。采用该工艺条件酿造的蜂蜜艾尔精酿啤酒产品,各项指标符合GB/T 4927—2008《啤酒》中特种啤酒质量要求,啤酒的感官评分为96.64分,酒体呈琥珀色,泡沫丰富细腻,挂杯持久,麦香、酒花、蜂蜜香气协调,口感细腻,酒体饱满。 展开更多
关键词 蜂蜜艾尔啤酒 精酿 酿造工艺 响应面法 工艺优化
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光照对灵芝液体发酵胞外多糖合成的影响
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作者 张业尼 钱磊 +2 位作者 刘逸寒 孔庆学 张志军 《北方园艺》 CAS 北大核心 2019年第2期154-159,共6页
以灵芝为试验材料,采用干质量法测定生物量,苯酚-硫酸法测定胞外多糖产量,研究了单色LED光照处理对灵芝菌丝体液体发酵合成胞外多糖的影响。结果表明:在80μmol·m-2·s^-1 LED光照12h条件下,不同LED光照处理均能促进细胞生长... 以灵芝为试验材料,采用干质量法测定生物量,苯酚-硫酸法测定胞外多糖产量,研究了单色LED光照处理对灵芝菌丝体液体发酵合成胞外多糖的影响。结果表明:在80μmol·m-2·s^-1 LED光照12h条件下,不同LED光照处理均能促进细胞生长和胞外多糖合成,其中白光LED最有利于细胞生长,蓝光LED最有利于胞外多糖合成。综合考虑生物量和胞外多糖产量,以100μmol·m^-2·s^-1蓝光LED光照10h效果最佳,生物量和胞外多糖产量分别为15.16g·L^-1和3.102g·L^-1,比黑暗处理提高了45.91%和109.74%。光照对灵芝细胞生长和胞外多糖合成具有调控作用,为灵芝液体发酵合成胞外多糖的高效定向生产提供指导。 展开更多
关键词 灵芝 光照 生物量 胞外多糖 蓝光
发酵饲料对仔鸡肠道微生物群落多样性影响
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作者 张孟阳 毕付提 +3 位作者 李洁 郭宏 马鑫 王德培 《中国家禽》 北大核心 2019年第13期30-36,共7页
试验旨在研究发酵饲料对仔鸡十二指肠、空肠、回肠和盲肠中微生物菌群结构和多样性的影响,分析发酵饲料对仔鸡生长和健康的作用机理。选取1日龄海兰褐蛋仔鸡360只,随机分为3个处理组,每组6个重复,三组分别饲喂基础日粮、基础日粮+抗生... 试验旨在研究发酵饲料对仔鸡十二指肠、空肠、回肠和盲肠中微生物菌群结构和多样性的影响,分析发酵饲料对仔鸡生长和健康的作用机理。选取1日龄海兰褐蛋仔鸡360只,随机分为3个处理组,每组6个重复,三组分别饲喂基础日粮、基础日粮+抗生素、基础日粮+发酵饲料,饲养56d,采用Illumina MiSeq测序技术测定各组蛋仔鸡肠道微生物群落结构和分布。结果显示:Chao1指数和Shannon指数表明,非发酵饲料组中微生物丰度和多样性均显著高于发酵饲料组,各组十二指肠、空肠、回肠的菌群丰度和多样性均显著高于盲肠;饲喂发酵饲料能显著增加乳杆菌丰度,同时降低肠道中脱硫弧菌属、螺杆菌等致病菌的数目,也间接证明乳杆菌可以抑制脱硫弧菌增殖,预防肠道疾病;饲喂发酵饲料能增加厚壁菌门丰度,显著降低拟杆菌门/厚壁菌门的比例,促进仔鸡的生长。 展开更多
关键词 蛋仔鸡 发酵饲料 肠道菌群 16S rDNA 宏基因组学
多形拟杆菌肝素酶I的SUMO融合表达及酶学特性分析
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作者 张川 张悦 +3 位作者 丁啸虎 李中媛 宋亚囝 罗学刚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1318-1330,共13页
【目的】克隆多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron) Heparinase I基因,在大肠杆菌(Escherichiac。")中进行基因工程表达获得重组酶SUMO-Bt-HepI和Bt-HepI,并研究其酶学特性。【方法】对B.thetaiotaomicron肝素酶I (Bt-HepI)... 【目的】克隆多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron) Heparinase I基因,在大肠杆菌(Escherichiac。")中进行基因工程表达获得重组酶SUMO-Bt-HepI和Bt-HepI,并研究其酶学特性。【方法】对B.thetaiotaomicron肝素酶I (Bt-HepI)的基因序列进行密码子优化,PCR扩增得到目的基因,构建表达载体pET-28a-Bt-HepI和pE-SUMO-Bt-HepI,并转化至E. colt Rosetta (DE3)进行表达,分别得到重组产物Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI,以肝素钠为底物研究两者的酶学性质。【结果】SDS-PAGE检测显示Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI的分子量大小分别约为42.5 kDa和55 kDa。与Bt-HepI相比,融合SUMO-Tag后的肝素酶I比酶活提高了 48.9%。酶学性质表明:Bt-HepI和SUMO-Bt-HepI的最适pH和温度均为pH 9、45℃,二者在pH 5-9都具有很好的稳定性,但pH<5时,SUMO-Bt-HepI的耐酸性明显高于Bt-HepI0同时,在温度低于50 ℃时,SUMO-Bt-HepI的比酶活高于Bt-Hepl。此外,Ca^2+和Mg^2+对重组肝素酶I具有明显的促进作用,而CU^2+、Mr^2+、Zt^2+则表现出一定的抑制作用,提示在多形拟杆菌肝素酶I的结构中除了存在已知的Ca2+结合位点外,可能还存在Mg2+的结合位点。【结论】本研究首次将多形拟杆菌来源的肝素酶I和SUMO-Tag进行了融合表达,使其比酶活得到了显著的提高,为其生产应用奠定了基础。 展开更多
关键词 多形拟杆菌 肝素酶I SUMO-Tag 融合表达 酶学性质
生物素及膜偶联间歇透析发酵对黄色短杆菌生产L-亮氨酸的影响 预览
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作者 张玉富 熊海波 +1 位作者 徐庆阳 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期15-20,共6页
生物素作为微生物的生长因子,对生长速率、细胞膜通透性、代谢产物的生成等方面具有重要作用。为提高黄色短杆菌产L-亮氨酸产量,降低副产物生成,在30L发酵罐水平研究了在培养基中添加20、50、80、120μg/L 四种不同质量浓度生物素,对黄... 生物素作为微生物的生长因子,对生长速率、细胞膜通透性、代谢产物的生成等方面具有重要作用。为提高黄色短杆菌产L-亮氨酸产量,降低副产物生成,在30L发酵罐水平研究了在培养基中添加20、50、80、120μg/L 四种不同质量浓度生物素,对黄色短杆菌产L-亮氨酸的影响。结果表明:培养基中添加50μg/L生物素,黄色短杆菌发酵44h, L-亮氨酸的产量最高,达到60g/L,糖酸转化率为22%,副产物L-丙氨酸的质量浓度为8g/L。在最适生物素浓度下,发酵36h后,采用膜偶联间歇透析发酵工艺,发酵周期延长至56h,L-亮氨酸的糖酸转化率为25%,较普通发酵工艺约提高13.6%,副产物L-丙氨酸的浓度降低约71.3%,L-亮氨酸的总产量提高了16.7%。研究结果对提高糖利用率、降低副产物、提高生产效率等方面具有重要意义。 展开更多
关键词 生物素 黄色短杆菌 L-亮氨酸 膜偶联间歇透析发酵
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淀粉样β蛋白质构象转换及其抑制的分子动力学模拟 预览
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作者 李丽 刘夫锋 《生物加工过程》 CAS 2019年第1期44-52,共9页
阿尔茨海默病(AD)是多发于老年人的神经退行性疾病。淀粉样β蛋白质(Aβ)的错误折叠和聚集与AD的发生与发展密切相关。以Aβ的错误折叠和聚集为靶标进行AD防治药物研究已成为近年来AD研究领域的热点之一。从初始的α螺旋结构或无规卷曲... 阿尔茨海默病(AD)是多发于老年人的神经退行性疾病。淀粉样β蛋白质(Aβ)的错误折叠和聚集与AD的发生与发展密切相关。以Aβ的错误折叠和聚集为靶标进行AD防治药物研究已成为近年来AD研究领域的热点之一。从初始的α螺旋结构或无规卷曲构象转换形成富含β折叠结构是Aβ聚集的关键步骤。本文中,笔者综述利用分子动力学(MD)模拟研究Aβ构象转换的分子机制,介绍MD模拟在小分子和多肽抑制剂抑制Aβ构象转换中的应用。 展开更多
关键词 淀粉样β蛋白质 构象转换 分子动力学 肽抑制剂 神经退行性疾病
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黑曲霉内切β-1,4-半乳聚糖酶AghA的分子克隆与特征解析 预览
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作者 蔡可 王太康 +5 位作者 王君 董自星 田康明 金鹏 刘晓光 王正祥 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期29-35,共7页
利用内切β-1,4-半乳聚糖酶(endo-β-1,4-galactanase,EC3.2.1.89)水解土豆浆制备低聚半乳糖,有望解决产品回收率低的问题。为此,该研究通过分子克隆技术,将黑曲霉β-1,4-半乳聚糖酶基因aghA在毕赤酵母中进行克隆表达,构建获得了重组菌G... 利用内切β-1,4-半乳聚糖酶(endo-β-1,4-galactanase,EC3.2.1.89)水解土豆浆制备低聚半乳糖,有望解决产品回收率低的问题。为此,该研究通过分子克隆技术,将黑曲霉β-1,4-半乳聚糖酶基因aghA在毕赤酵母中进行克隆表达,构建获得了重组菌GS115(pPIC-aghA)。摇瓶培养条件下,重组酶AghA的酶活为130U/mL,高于大多数已报道的半乳聚糖酶的酶活。酶学性质的研究表明,该酶的最适反应pH值和温度分别为4.5和45℃,且在pH4.0~6.0或30~50℃具有较好稳定性。大部分金属离子和EDTA对重组酶AghA的酶活没有显著影响;Fe^3+对其活性有强烈的抑制作用;而Hg^2+则可使AghA几乎完全失活。该酶对半乳聚糖的最大反应速率Vmax和米氏常数Km分别为400mg/(mL·min)和0.08mg/mL。此外,重组酶AghA还可以水解土豆浆,产生半乳二糖、半乳三糖和少量半乳四糖等低聚半乳糖。 展开更多
关键词 内切β-1 4-半乳聚糖酶 低聚半乳糖 黑曲霉 分子克隆 酶学性质
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增加雷斯青霉15α-羟化酶基因拷贝数提高甾体转化效率 预览
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作者 李雪龙 李改 +4 位作者 谢东奇 金鹏 毛淑红 王正祥 刘晓光 《天津科技大学学报》 CAS 2019年第4期16-21,29共7页
孕二烯酮是第三代高效避孕药的主要成分.雷斯青霉(Penicillium raistrickii)ATCC10490催化甾体左旋乙基甾烯双酮的C15α–羟基化反应合成孕二烯酮的重要中间体C15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.为了提高现有生产菌种的转化效率,本文研究了... 孕二烯酮是第三代高效避孕药的主要成分.雷斯青霉(Penicillium raistrickii)ATCC10490催化甾体左旋乙基甾烯双酮的C15α–羟基化反应合成孕二烯酮的重要中间体C15α–羟基左旋乙基甾烯双酮.为了提高现有生产菌种的转化效率,本文研究了在雷斯青霉ATCC10490中增加甾体C15α–羟化酶基因(PRH)拷贝数对转化效率的影响.分别构建了PRH基因的诱导型和组成型过表达载体pPZP-p800-PRH和pPZP-TrpC-PRH,并通过同源重组的方法定点整合到雷斯青霉基因组.转化实验表明,在出发菌株中增加一个PRH基因拷贝显著提高了甾体左旋乙基甾烯双酮转化效率,重组菌PRH-P800和PRH-TrpC的摩尔转化率分别提高了13%和20%,同时转化时间均缩短了12h. 展开更多
关键词 雷斯青霉 孕二烯酮 15α–羟化酶 左旋乙基甾烯双酮
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枯草芽孢杆菌MB8儿茶酚型铁载体的合成与结构分析 预览
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作者 张茜茜 朱慧明 +5 位作者 杨肖静 黄志伟 龚梦馨 张志强 牛津徽 杨洪江 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期1259-1266,共8页
【目的】对枯草芽孢杆菌MB8合成铁载体的条件及铁载体结构进行了研究。【方法】通过正交实验设计分析了铁载体合成的条件,采用质谱分析等技术对铁载体的结构进行分析。【结果】当甘油浓度为4%(mL/L),精氨酸浓度为1.5g/L,接种量为7%时,... 【目的】对枯草芽孢杆菌MB8合成铁载体的条件及铁载体结构进行了研究。【方法】通过正交实验设计分析了铁载体合成的条件,采用质谱分析等技术对铁载体的结构进行分析。【结果】当甘油浓度为4%(mL/L),精氨酸浓度为1.5g/L,接种量为7%时,铁载体产量达到最大(SU=92.58%)。培养基中游离Fe^3+浓度的增加,铁载体产量逐渐下降;当Al^3+浓度为100μmol/L时,能够显著提高铁载体的合成。菌株MB8分泌的铁载体能够促进不溶性针铁矿的溶解,溶解速率比对照提高了6倍。最后,采用质谱分析等技术对菌株MB8分泌的铁载体结构进行了分析,结果显示MB8合成的铁载体与已知铁载体Bacillibactin结构相似。【结论】枯草芽孢杆菌MB8分泌的铁载体具有良好的抑菌作用、清除DPPH自由基的抗氧化能力和加速不溶性针铁矿溶解的能力。枯草芽孢杆菌MB8在多种领域可能具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 铁载体 枯草芽孢杆菌 不溶性针铁矿 Bacillibactin
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基于核酸适配体的胶体金分光光度法检测赭曲霉毒素A
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作者 李敏 陈美榕 +1 位作者 张梦薇 张健 《分析试验室》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期261-265,共5页
基于核酸适配体对靶标的特异性和胶体金分光光度法的灵敏性,建立了检测赭曲霉毒素A(OTA)的方法。利用核酸适配体能够抑制胶体金在高盐溶液中的聚集,当OTA存在时,其与适配体特异性结合,使胶体金发生聚集,胶体金的颜色发生变化。对NaCl浓... 基于核酸适配体对靶标的特异性和胶体金分光光度法的灵敏性,建立了检测赭曲霉毒素A(OTA)的方法。利用核酸适配体能够抑制胶体金在高盐溶液中的聚集,当OTA存在时,其与适配体特异性结合,使胶体金发生聚集,胶体金的颜色发生变化。对NaCl浓度、核酸适配体浓度、反应时间等条件进行了优化。在最优的条件下,吸光度的比值(A656 nm/A520 nm)与OTA质量浓度在0~300 ng/mL的范围内呈良好的线性关系,其线性回归方程为y=0. 001x+0. 2264,相关系数R2为0. 9962,加标回收率为99. 2%~103. 1%,相对标准偏差为4. 4%。方法可作为OTA的快速检测方法。 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A 适配体 胶体金 分光光度法
抗体亲和肽配基的高通量筛选和理性设计 预览
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作者 刘夫锋 李丽 《天津科技大学学报》 CAS 2019年第1期1-11,共11页
抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白,在疾病治疗和检测方面应用前景广阔.目前抗体的分离纯化是其生产的瓶颈.高选择性的亲和色谱技术在抗体纯化过程中发挥着越来越重要的作用,而配基的高通量筛选和设计是亲和色谱技术应用的关键... 抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白,在疾病治疗和检测方面应用前景广阔.目前抗体的分离纯化是其生产的瓶颈.高选择性的亲和色谱技术在抗体纯化过程中发挥着越来越重要的作用,而配基的高通量筛选和设计是亲和色谱技术应用的关键因素.短肽是一种常见的亲和配基类型.本文根据近年来国内外抗体亲和肽配基的研究情况,综述了抗体亲和肽配基的高通量筛选和理性设计方法,重点介绍其作用机理、发展现状以及目前存在的主要问题.最后展望了短肽配基仿生设计技术. 展开更多
关键词 抗体 亲和色谱 肽配基 高通量筛选 理性设计
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主题研讨模式在“合成生物学导论”课程中的应用 预览
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作者 于爱群 马立娟 +2 位作者 郭学武 董健 肖冬光 《高校生物学教学研究(电子版)》 2019年第1期30-34,共5页
合成生物学是生命科学领域一门新兴的综合性交叉学科。由于其应用前景和发展潜力巨大,所以引起了人们的广泛关注。与传统的由教师向学生传授知识的灌输式教学法相比,主题研讨式教学是一种全新的教学模式。主题研讨式教学法具有能够增进... 合成生物学是生命科学领域一门新兴的综合性交叉学科。由于其应用前景和发展潜力巨大,所以引起了人们的广泛关注。与传统的由教师向学生传授知识的灌输式教学法相比,主题研讨式教学是一种全新的教学模式。主题研讨式教学法具有能够增进学生和教师之间的交流、激发学生学习的积极性和主动性、有效提升学习效率等优点。因此,我们尝试将主题研讨模式运用到“合成生物学导论”的教学实践当中,并取得了较好的实际教学效果。 展开更多
关键词 主题研讨 合成生物学 教学 教学法
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高产L-精氨酸谷氨酸棒状杆菌的构建 预览
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作者 王婷 蔡柠匀 +3 位作者 张德志 赵桂红 徐庆阳 陈宁 《中国酿造》 CAS 北大核心 2019年第5期169-173,共5页
以产L-精氨酸诱变菌株谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)AJC为出发菌株,采用基因组编辑技术对其进行改造。首先,敲除阻遏蛋白ArgR和FarR,解除反馈阻遏作用;然后,敲除乳酸脱氢酶编码基因ldh和整合鸟氨酸乙酰转移酶编码基因argJ... 以产L-精氨酸诱变菌株谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)AJC为出发菌株,采用基因组编辑技术对其进行改造。首先,敲除阻遏蛋白ArgR和FarR,解除反馈阻遏作用;然后,敲除乳酸脱氢酶编码基因ldh和整合鸟氨酸乙酰转移酶编码基因argJ,阻断乳酸合成途径和增加前体物;最后,敲除谷氨酸分泌蛋白编码基因NCgl1221和整合乙酰谷氨酸激酶基因argB,减弱L-谷氨酸的胞外分泌,筛选一株L-精氨酸高产菌株。结果表明,获得一株高产L-精氨酸菌株AJC-4(C. glutamicum AJCΔargRΔfarRΔldh::PtufargJ ΔNCgl1221::PsodargB),该菌株在5 L发酵罐中发酵64 h后,L-精氨酸产量和糖酸转化率分别为78.0 g/L和0.38 g/g,较出发菌株AJC分别提高21.9%、18.8%;副产物乳酸和L-谷氨酸积累量分别为0.11 g/L、0.16 g/L,较出发菌株AJC分别降低96.8%、96.1%。 展开更多
关键词 L-精氨酸 谷氨酸棒状杆菌 代谢工程 发酵
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L-2-氨基丁酸大肠杆菌生产菌株的构建 预览
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作者 王婷 韩超 +5 位作者 毛倩 张德志 蔡柠匀 刘宏亮 李燕军 陈宁 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期56-63,共8页
L-2-氨基丁酸作为新型药物的关键手性前体,在化工和制药行业应用广泛。该文以1株生产L-苏氨酸的大肠杆菌(Escherichia coli)THRD为出发菌株,逐步延伸代谢途径,构建了L-2-氨基丁酸高产菌株。首先,分别把苏氨酸脱水酶编码基因ilvA2和ilvA4... L-2-氨基丁酸作为新型药物的关键手性前体,在化工和制药行业应用广泛。该文以1株生产L-苏氨酸的大肠杆菌(Escherichia coli)THRD为出发菌株,逐步延伸代谢途径,构建了L-2-氨基丁酸高产菌株。首先,分别把苏氨酸脱水酶编码基因ilvA2和ilvA4在THRD中过表达,菌株THRD/pTrc99a-ilvA2在5 L发酵罐中分批补料发酵,2-酮基丁酸积累量达到18 g/L。然后,分别与ilvA2串联表达酪氨酸转氨酶、谷氨酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶编码基因tyrB、gdh和bcd BS,将L-2-酮基丁酸转化为L-2-氨基丁酸,菌株THRD/pTrc99a-bcd BS-ilvA2的L-2-氨基丁酸产量达到19 g/L。最后,研究了阻断L-苏氨酸输出途径对发酵的影响,菌株THRDΔrhtC/pTrc99a-bcd BS-ilvA2的L-2-氨基丁酸产量提升至22 g/L。因此,通过代谢途径延伸可以有效地将L-苏氨酸生产菌株转变为L-2-氨基丁酸生产菌株。该研究为L-2-氨基丁酸高产菌株的构建奠定了基础,且对其他延伸代谢途径获得新产品的代谢工程研究提供了参考。 展开更多
关键词 大肠杆菌 L-苏氨酸 L-2-酮基丁酸 L-2-氨基丁酸 转运途径
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米曲霉酸性蛋白酶基因在毕赤酵母中的异源表达及酶学性质
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作者 岳晓平 陈朋 +5 位作者 朱玥明 曾艳 刘汉民 刘红彦 王敏 孙媛霞 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期415-424,共10页
酸性蛋白酶作为一类重要的天冬氨酸蛋白酶,被广泛应用于食品、医药和皮革等领域。为推动酸性蛋白酶的研究及应用,通过对发酵豆制品样品进行宏基因组测序,从中获得米曲霉酸性蛋白酶基因pepA,在毕赤酵母GS115中进行异源表达,并对重组酶Pep... 酸性蛋白酶作为一类重要的天冬氨酸蛋白酶,被广泛应用于食品、医药和皮革等领域。为推动酸性蛋白酶的研究及应用,通过对发酵豆制品样品进行宏基因组测序,从中获得米曲霉酸性蛋白酶基因pepA,在毕赤酵母GS115中进行异源表达,并对重组酶PepA进行酶学性质分析。结果显示毕赤酵母发酵上清液中酸性蛋白酶的活性为50.62 U/mL。SDS-PAGE验证PepA的分子量约为50 kDa,且发酵上清液几乎无杂蛋白。PepA的最适pH值为4.5,最适温度为50℃,Mn2+和Cu2+对其具有激活作用,而Fe3+、Fe2+与Ca2+则具有抑制作用。上述研究结果可为米曲霉酸性蛋白酶的异源表达及其相关工业应用提供指导。 展开更多
关键词 米曲霉 酸性蛋白酶 毕赤酵母 异源表达 酶学性质
葡萄汁酵母和植物乳杆菌混合发酵对葡萄酒发酵的影响 预览
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作者 李凭 李彤 +1 位作者 高莹莹 张翠英 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期138-142,共5页
在酒精发酵不同时间接入植物乳杆菌,使葡萄汁酵母和植物乳杆菌混合发酵,平衡酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵的作用。结果表明,于酒精发酵第1天接入植物乳杆菌,在发酵第15天,L-苹果酸含量即可由最初的5.40g/L降为1.30g/L左右,加快了发酵速率... 在酒精发酵不同时间接入植物乳杆菌,使葡萄汁酵母和植物乳杆菌混合发酵,平衡酒精发酵和苹果酸-乳酸发酵的作用。结果表明,于酒精发酵第1天接入植物乳杆菌,在发酵第15天,L-苹果酸含量即可由最初的5.40g/L降为1.30g/L左右,加快了发酵速率,缩短了发酵周期,且发酵后葡萄酒酸度和高级醇含量降低,酯含量明显提高,尤其是乳酸乙酯含量可以达到24.313mg/L,提高了葡萄酒的风味质量。 展开更多
关键词 葡萄汁酵母 植物乳杆菌 混合发酵
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蛴螬酶法制备抗氧化活性肽 预览
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作者 张海英 李秀梅 +4 位作者 潘方方 杨培龙 俞晓亭 石冬冬 马文建 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2019年第8期152-158,共7页
建立蛴螬多肽的制备工艺,探究多肽的抗氧化活性。采用酶法将蛴螬制备成蛴螬蛋白水解肽,以蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力为衡量指标,通过单因素试验确定了酶种类、酶虫比、底物浓度、水解体系pH值、酶解温度和时间对蛴螬多肽提取率及... 建立蛴螬多肽的制备工艺,探究多肽的抗氧化活性。采用酶法将蛴螬制备成蛴螬蛋白水解肽,以蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力为衡量指标,通过单因素试验确定了酶种类、酶虫比、底物浓度、水解体系pH值、酶解温度和时间对蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力的影响。通过正交试验优化蛴螬多肽提取率及其总抗氧化能力,获得最佳酶解工艺,即底物浓度5%、水解体系p H 7、酶解温度40℃。在此试验条件下,蛴螬多肽的提取率为14.21%,总抗氧化能力为0.752 mmol/L。 展开更多
关键词 蛴螬 抗氧化肽 酶解 正交试验 制备
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5株乳酸菌对MUC2的转录调节机制研究
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作者 郝冉 俞晓亭 +3 位作者 贾玮 王楠 张同存 罗学刚 《食品科技》 CAS 北大核心 2019年第2期1-5,共5页
通过构建人MUC2启动子荧光素酶报告基因表达质粒,研究5株乳酸菌对MUC2启动子转录活性的影响。采用RT-PCR及ELISA方法分别在mRNA和蛋白质水平上就乳酸菌对SW480结肠细胞内源性MUC2转录表达的影响情况进行了分析。结果显示,5株乳酸菌的发... 通过构建人MUC2启动子荧光素酶报告基因表达质粒,研究5株乳酸菌对MUC2启动子转录活性的影响。采用RT-PCR及ELISA方法分别在mRNA和蛋白质水平上就乳酸菌对SW480结肠细胞内源性MUC2转录表达的影响情况进行了分析。结果显示,5株乳酸菌的发酵上清液(SN)和菌体裂解液(CL)均能明显增强MUC2基因启动子的转录活性,并上调肠道细胞MUC2转录及表达水平,其中L. acidophilus 1.2686菌体裂解液的作用最为显著。进一步研究显示:TGF-β抑制剂可阻断L. acidophilus 1.2686对MUC2的转录激活作用,TGF-β激动剂协同性增强该作用,说明TGF-β信号通路很可能在乳酸菌增强肠道细胞MUC2基因转录表达过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 乳酸菌 分泌性黏蛋白MUC2 TGF-Β
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