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Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制 预览 被引量:3
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作者 周俊 曹江 +2 位作者 孟凡静 冯浩 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期627-632,共6页
目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分... 目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;Annexin V/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化。结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01)μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11)μmol/L。0.5μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,Annexin V/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)%,48 h细胞凋亡率为(22.53±4.67)%,均高于对照组的(1.35±0.34)%(P〈0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P〈0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)%和(10.07±1.24)%,均高于对照组的(1.32±0.31)%(P〈0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P〈0.05)。流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)%,高于对照组的(9.64±0.91)%(P〈0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)%,高于对照组的(5.75±1.28)%(P〈0.05)。荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P〈0.05)。结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关。 展开更多
关键词 MK2206 白血病 U937细胞 RS4 11细胞 细胞凋亡
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竞争抑制0610009E02Rik长链非编码RNA重组腺病毒穿梭载体的构建与鉴定 被引量:1
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作者 杨娜 陈翀 +7 位作者 秘红岭 李小莉 陈朝 褚培培 夏园 姚海娜 徐开林 曾令宇 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2015年第3期192-199,共8页
目的 构建可竞争抑制肝细胞内0610009E02Rik长链非编码RNA(lncRNA)的重组腺病毒穿梭载体,为探索0610009E02Rik/Notch1在肝静脉闭塞病(HVOD)肝细胞损伤修复中的作用提供有效实验方法.方法 采用基因组DNA提取试剂盒对截取的C57BL/6小... 目的 构建可竞争抑制肝细胞内0610009E02Rik长链非编码RNA(lncRNA)的重组腺病毒穿梭载体,为探索0610009E02Rik/Notch1在肝静脉闭塞病(HVOD)肝细胞损伤修复中的作用提供有效实验方法.方法 采用基因组DNA提取试剂盒对截取的C57BL/6小鼠尾进行基因组DNA的提取,通过PCR扩增出0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠的1 000 bp基因序列,并连接入经BamHⅠ/Nhe Ⅰ双酶切后的腺病毒穿梭载体GV359;竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与辅助包装质粒pBHG共转染HEK293细胞,并对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒进行包装、扩增,采用氯化铯(CsCl)不连续密度梯度离心与连续密度梯度离心2个步骤对重组腺病毒进行浓缩纯化,并对重组腺病毒滴度进行测定;测定不同感染复数(MOI)竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35的感染效率,并采用实时聚合酶链反应(RT-PCR)与Western blotting对竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒感染肝细胞株H2.35与同步培养的对照肝细胞中竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段、Notch1 mRNA及0610009E02Rik lncRNA相对表达水平及其蛋白表达水平,并进行统计学分析.结果 ①经基因序列比对分析发现0610009E02Rik与Notch1的第34个外显子存在分子量为1 000 bp的重叠序列,依据0610009E02Rik与Notch1基因序列设计含BamH Ⅰ/Nhe Ⅰ酶切位点特异性引物,通过PCR扩增出片段长度为1 000 bp的0610009E02Rik与Notch1基因第34个外显子重叠序列的竞争抑制0610009E02Rik lncRNA片段,DNA测序结果显示竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体与理论预期序列构建成功.②将竞争抑制0610009E02Rik lncRNA重组腺病毒穿梭载体转染HEK293细胞后第12天,约90%细胞出现细胞病变(CPE),收集细胞获取病毒液.浓缩纯化病毒液经梯度稀释在感染HEK293细胞后第10天,于显微镜下观察稀释梯度1∶ (10~1010)均出现 展开更多
关键词 RNA 长链非编码 受体 Notch1 腺病毒 DNA 重组 肝细胞
混合谱系白血病基因部分串联重复在急性髓细胞白血病中的研究进展 被引量:1
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作者 卞梅茹 陈伟 +1 位作者 吴庆运 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2015年第3期236-239,共4页
混合谱系白血病(MLL)基因位于第11号染色体长臂2区3带(11q23),其编码产物为具有3 969个氨基酸残基的核蛋白.MLL蛋白最具特征性的功能为通过调节Hox基因表达水平决定细胞存活.急性白血病可发生MLL基因重排,其中MLL基因部分串联重复(... 混合谱系白血病(MLL)基因位于第11号染色体长臂2区3带(11q23),其编码产物为具有3 969个氨基酸残基的核蛋白.MLL蛋白最具特征性的功能为通过调节Hox基因表达水平决定细胞存活.急性白血病可发生MLL基因重排,其中MLL基因部分串联重复(MLL-PTD)为MLL基因重排中最为常见的形式之一,主要存在于核型正常及具有第11号染色体三体的急性髓细胞白血病(AML)中.作者拟就MLL基因结构、功能、MLL-PTD在AML发生、发展中的作用机制,及其可作为AML潜在治疗靶点等方面进行综述. 展开更多
关键词 混合谱系白血病蛋白质 串联重复序列 白血病 髓样 急性
CUE结构域包含蛋白2在白血病及实体肿瘤发生、发展中作用机制的研究进展
4
作者 刘洋 齐昆明 +1 位作者 吴庆运 徐开林 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2015年第3期240-243,共4页
CUE结构域包含蛋白2(CUEDC2)是新近发现的含CUE结构域的泛素结合蛋白,在细胞周期调控、肿瘤形成、炎症及应激反应中均起着重要作用.研究表明,CUEDC2可介导蛋白质泛素化降解,与白血病及实体肿瘤的发生、发展和耐药密切相关.CUEDC2可促... CUE结构域包含蛋白2(CUEDC2)是新近发现的含CUE结构域的泛素结合蛋白,在细胞周期调控、肿瘤形成、炎症及应激反应中均起着重要作用.研究表明,CUEDC2可介导蛋白质泛素化降解,与白血病及实体肿瘤的发生、发展和耐药密切相关.CUEDC2可促进纺锤体检查点(SAC)失活,导致有丝分裂过程中染色体不稳定,进而参与白血病和实体肿瘤发病进程.然而,CUEDC2在白血病及实体肿瘤发生、发展中,是具有抑制作用还是促进作用,尚存在争议.笔者拟就近年来CUEDC2在白血病与实体肿瘤发生、发展中作用机制的研究进展进行综述. 展开更多
关键词 CUE结构域包含蛋白2 白血病 核转录因子-ΚB JANUS激酶 细胞因子信号转导蛋白抑制因子
NLRP1在血液疾病中作用的研究进展 预览 被引量:1
5
作者 吴进燕 曾令宇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1476-1479,共4页
炎性复合体是存在于胞浆中的一组多蛋白复合体,它能够活化胱天蛋白酶(caspase)-1,后者介导IL(interleukin)-1β、IL-18和IL-33等促炎因子的成熟与释放.NALP1(NACHT leucine-rich-repeat protein 1)也称NLRP1,是最早被鉴定出来的... 炎性复合体是存在于胞浆中的一组多蛋白复合体,它能够活化胱天蛋白酶(caspase)-1,后者介导IL(interleukin)-1β、IL-18和IL-33等促炎因子的成熟与释放.NALP1(NACHT leucine-rich-repeat protein 1)也称NLRP1,是最早被鉴定出来的具有明确配体的炎性复合体之一,它参与多种炎症反应和细胞凋亡的调节作用.此外,还有研究发现NLRP1在急性白血病的发生发展及诱导骨髓造血干细胞凋亡等血液系统疾病中也发挥着重要作用.本文将对NLRP1的结构、活化机制、调控及在造血系统中的作用进行综述. 展开更多
关键词 NLRP1 炎性复合体 血液病 固有免疫
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携带人OCT4A基因的慢病毒载体的构建及其稳定转染K562白血病细胞株的建立 预览 被引量:1
6
作者 孟凡静 曹江 +3 位作者 周俊 吴庆运 陈翀 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1514-1520,共7页
本研究旨在构建共表达人OCT4A与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体pLVX-OCT4A-ZsGreen1,并通过感染获得稳定表达重组质粒的白血病K562细胞系,观察OCT4A在其中的表达。根据Gen Bank数据库提供的OCT4A mRNA序列,合成编码mRNA基因的特异性引... 本研究旨在构建共表达人OCT4A与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体pLVX-OCT4A-ZsGreen1,并通过感染获得稳定表达重组质粒的白血病K562细胞系,观察OCT4A在其中的表达。根据Gen Bank数据库提供的OCT4A mRNA序列,合成编码mRNA基因的特异性引物序列,通过RT-PCR技术扩增出OCT4A全长片段,克隆至pCR-Blunt载体。将OCT4A DNA片段酶切回收后克隆至经EcoR1酶切线性化的慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1,构建pLVX-OCT4A-ZsGreen1慢病毒重组质粒,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确。经三质粒包装系统包装后获得高滴度慢病毒颗粒并感染人白血病细胞系K562,通过流式细胞仪分选获得稳定表达的白血病细胞系,应用Real-time PCR和Western blot方法分别检测稳定转染细胞系的OCT4A mRNA和OCT4A蛋白表达。应用CCK-8法和平板细胞克隆形成试验测定OCT4A对K562细胞增殖能力的影响。结果表明,经限制性内切酶检测及基因测序证实成功构建了携带OCT4A基因的重组慢病毒;包装病毒颗粒超速离心后病毒滴度达(1.43±0.25)×10^8U/ml;病毒感染K562细胞后经流式细胞仪分选获得GFP+细胞,实时定量PCR及Western blot证实病毒感染后OCT4A基因及蛋白的表达可有效上调;CCK-8法及平板集落形成试验显示病毒感染的K562细胞体外增殖活性明显升高,与对照组相比均有统计学差异(P〈0.05)。结论:成功构建了表达OCT4A基因的慢病毒载体,并且获得可稳定上调OCT4A表达的K562细胞株。 展开更多
关键词 OCT4A基因 慢病毒载体 白血病 载体构建 K562细胞
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肝静脉闭塞病及其他疾病中肝细胞损伤机制的研究进展
7
作者 杨娜 曾令宇 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2014年第4期377-380,共4页
肝脏是人体重要的解毒器官,当机体受到外界因素影响时,肝脏即发挥其解毒功能,当超出其解毒能力时,则可导致肝脏结构及功能损伤。肝静脉闭塞病(HVOD)是造血干细胞移植(HSCT)后常见并发症之一,移植预处理方案所致的肝窦内皮细胞... 肝脏是人体重要的解毒器官,当机体受到外界因素影响时,肝脏即发挥其解毒功能,当超出其解毒能力时,则可导致肝脏结构及功能损伤。肝静脉闭塞病(HVOD)是造血干细胞移植(HSCT)后常见并发症之一,移植预处理方案所致的肝窦内皮细胞及肝细胞损伤是HVOD的始发因素,其中肝细胞损伤程度决定HVOD患者的肝功能恢复情况。另外,其他多种疾病,如药物性肝病、病毒性肝炎、爆发性肝炎等,也严重影响肝脏正常生理结构及功能。笔者主要从自由基的产生及脂质过氧化反应、线粒体损伤、炎性细胞浸润及炎性细胞因子的产生3个方面总结不同肝脏疾病中肝细胞损伤机制,为临床HVOD及其他疾病的肝细胞损伤的治疗和预防提供新的策略。 展开更多
关键词 肝细胞 损伤 肝炎 肝静脉闭塞性疾病
溴结构域蛋白4抑制剂GSK525762A对急性B淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的影响及可能机制 被引量:3
8
作者 王缦 陈翀 +5 位作者 徐杰 王力 宋旭光 张焕新 曾令宇 徐开林 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期528-532,共5页
目的 探究溴结构域蛋白4(BRD4)抑制剂对急性B淋巴细胞白血病细胞生物学行为的影响及可能机制.方法 用BRD4抑制剂GSK525762A抑制急性B淋巴细胞白血病细胞株RS4; 11细胞BRD4活性,并以急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞作对照.采用CC... 目的 探究溴结构域蛋白4(BRD4)抑制剂对急性B淋巴细胞白血病细胞生物学行为的影响及可能机制.方法 用BRD4抑制剂GSK525762A抑制急性B淋巴细胞白血病细胞株RS4; 11细胞BRD4活性,并以急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞作对照.采用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;用Annexin Ⅴ/7-AAD标记,流式细胞术检测细胞凋亡;荧光定量PCR检测抗凋亡基因c-myc、Bcl-2、CDK6和促凋亡基因Bad、Bak、Bax的转录水平;Western blot检测Bcl-2及Bak蛋白的表达.结果 不同浓度GSK525762A对RS4; 11细胞增殖均有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,作用48、72 h其半数抑制率分别为6.174和1.996 μmol/L.与DMSO处理组比较,GSK525762A处理后RS4; 11细胞c-myc、Bcl-2、CDK6mRNA转录水平降低,而Bad、Bak、Bax mRNA转录水平升高,且Bcl-2蛋白表达水平下调,Bak蛋白表达水平上调.而GSK525762A对Jurkat细胞的增殖抑制作用并不明显.结论 GSK525762A可抑制RS4; 11细胞的增殖,并促进其凋亡;该作用可能通过下调Bcl-2表达,诱导白血病细胞凋亡而实现的. 展开更多
关键词 溴结构域蛋白4抑制剂 RS4 11细胞 细胞增殖
含caspase募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶1的免疫调节作用
9
作者 王莹(综述) 桑威 徐开林(审校) 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2014年第1期82-85,共4页
含caspase募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶1(CARMAl)作为膜相关的鸟苷酸激酶(MAGUK)家族成员之一,在淋巴细胞中特异性表达。近年来的研究表明,CARMAl对T、B和NK淋巴细胞的发育有重要作用,并参与固有及适应性免疫应答。此外,已证实... 含caspase募集结构域的膜相关鸟苷酸激酶1(CARMAl)作为膜相关的鸟苷酸激酶(MAGUK)家族成员之一,在淋巴细胞中特异性表达。近年来的研究表明,CARMAl对T、B和NK淋巴细胞的发育有重要作用,并参与固有及适应性免疫应答。此外,已证实CARMAl参与人类一些免疫性疾病的发生。 展开更多
关键词 CARMAl T淋巴细胞 CBM复合物 NF—KB JNK2
异基因骨髓移植并发移植物抗宿主病小鼠体内IL-22的细胞来源 预览 被引量:1
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作者 赵恺 黄栋 +6 位作者 赵冬梅 陈翀 吴庆运 潘彬 曾令宇 李振宇 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1526-1529,共4页
本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病(GVHD)时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL/6和BALB/c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组(normal)、单纯... 本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病(GVHD)时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL/6和BALB/c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组(normal)、单纯照射组(TBI)、骨髓移植组(BMT)和骨髓联合脾细胞诱导GVHD组(BS)。ELISA法检测小鼠血浆中IL-22的水平;流式细胞术检测IL-22的细胞来源及所属亚群情况。结果表明,Bs组小鼠血浆中IL-22水平最高,与正常小鼠相比差异有统计学意义(P〈0.01);BS组小鼠脾、淋巴结和外周血中淋巴细胞均可产生IL-22,且IL-22+CD4+T细胞百分率高于IL-22+CD8+T细胞;除Th22细胞外,Th1细胞和Th17细胞也是GVHD小鼠体内IL-22的细胞来源,但以Th22细胞分泌IL-22为主。结论:GVHD小鼠体内可产生高水平的IL-22,其主要来源于IFN-γ-IL-17-IL-22+的Th22细胞。 展开更多
关键词 骨髓移植 移植物抗宿主病 T细胞 白介素-22
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白血病干细胞的新型标志蛋白IL1RAP杂交瘤细胞的制备及其分泌单克隆抗体的检测 预览 被引量:2
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作者 赵恺 尹玲玲 +6 位作者 赵冬梅 吴庆运 陈翀 潘彬 曾令宇 姚瑶 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1390-1393,共4页
本研究旨在制备针对白血病干细胞表面标志蛋白IL1RAP(IL-1receptoraccessoryprotein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。用重组人IL1RAP作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0细胞经PEG融合,筛... 本研究旨在制备针对白血病干细胞表面标志蛋白IL1RAP(IL-1receptoraccessoryprotein)的特异性单克隆抗体并对其进行鉴定。用重组人IL1RAP作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过常规杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0细胞经PEG融合,筛选阳性杂交瘤细胞株。分别应用EusA和Westernblot法对杂交瘤细胞上清中分泌抗体进行抗体类型、滴度和敏感性检测。分离人外周单个核细胞,检测所得抗体对细胞内源性抗原的特异性。结果表明,获得了8株可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别为3H6E10、486A6、8G1185、9E9F2、10D8A7、1C7H7、1D7G11和2D3D3;抗体类型鉴定为IgG1/K型;分泌的单克隆抗体能特异性识别单个核细胞表达的IL1RAP。结论:本实验成功制备了可稳定分泌IL1RAP单克隆抗体的杂交瘤细胞及其特异性的IL1RAP单克隆抗体,为将来有效清除体内白血病干细胞提供了新途径。 展开更多
关键词 IL1RAP杂交瘤 单克隆抗体 白血病干细胞
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靶向AATF基因shRNA表达载体的构建及其稳定表达的白血病U937细胞系的建立 预览 被引量:1
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作者 吕超 曹江 +8 位作者 孟凡静 曾令宇 潘彬 陈翀 吴庆运 宋旭光 李振宇 潘秀英 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期567-570,共4页
本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系。根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228~249、303~324、443~464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并... 本研究旨在构建靶向AATF基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的人白血病U937细胞系。根据GenBank数据库提供的AATF mRNA序列,以228~249、303~324、443~464位序列作为RNA干扰位点,排除同源可能,合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆至经BamHⅠ、HindⅢ双酶切线性化的pSilencer 3.1人H1启动子干扰载体中,利用测序鉴定所构建的重组载体是否正确,经电穿孔将3个重组载体(pSA-1、pSA-2、pSA-3)转染人白血病U937细胞系,G418(500 mg/L)有限稀释法持续筛选8周后,扩增获得稳定表达的细胞系;RT-PCR、Western blot分别检测稳定转染细胞系的AATF mRNA和AATF蛋白表达。结果表明,AATF干扰序列及读码框完全正确。稳定转染细胞AATF mRNA表达下调,AATF蛋白表达量下降(P〈0.05)。结论:成功地构建AATF shRNA真核表达载体及AATF表达稳定抑制的白血病U937细胞系,为以AATF基因为靶点的人白血病进一步研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 AATF 短发夹RNA 白血病 基因表达 载体构建
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不同治疗方案对原发免疫性血小板减少症患者外周血调节性T细胞水平的影响 被引量:11
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作者 李振宇 李德鹏 +6 位作者 闫志凌 邢伟伟 刘凯歌 曹江 何徐彭 潘秀英 徐开林 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期478-481,共4页
目的观察原发免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前后外周血调节性T细胞(Treg)水平变化,初步探讨Treg细胞在ITP发病中的作用。方法选取138例新诊断ITP患者,男57例、女81例,中位年龄40(18~70)岁。按治疗方案随机分为①泼尼松组... 目的观察原发免疫性血小板减少症(ITP)患者治疗前后外周血调节性T细胞(Treg)水平变化,初步探讨Treg细胞在ITP发病中的作用。方法选取138例新诊断ITP患者,男57例、女81例,中位年龄40(18~70)岁。按治疗方案随机分为①泼尼松组(49例):泼尼松1.5mg·kg^-1·d-1口服;②地塞米松组(45例):地塞米松40mg/d第1—4天口服;③地塞米松+小剂量利妥昔单抗组(44例):地塞米松40mg/d第1~4天口服,利妥昔单抗100mg第7、14、21、28天静脉滴注。各组患者于治疗前、治疗后14d和28d分别采取外周静脉血,采用流式细胞术检测CD4+CD25^highCD127low细胞(Treg)水平。以30名健康体检者为正常对照组。结果治疗后第28天,泼尼松组、地塞米松组、地塞米松+小剂量利妥昔单抗组的总有效率分别为69.4%、66.7%、79.5%,差异无统计学意义;随访12个月,地塞米松+小剂量利妥昔单抗组持续有效率(66.7%)高于泼尼松组(37.8%)和地塞米松组(22.7%),差异有统计学意义(P〈0.05),泼尼松与地塞米松组之间差异无统计学意义。138例ITP患者治疗前外周血CD4+CD25highCD127low细胞表达水平低于健康对照组[(1.67±0.70)%对(4.02±0.39)%,P〈0.05];地塞米松+/J,N量利妥昔单抗组治疗后14、28dCD4+CD25highCD127low细胞水平[(4.28±1.09)%、(4.44±0.63)%]均高于治疗前[(1.68±0.68)%],差异有统计学意义(P值均〈0.05);泼尼松组、地塞米松组患者治疗后14dCD4+CD25highCD127low细胞水平均高于治疗前[(3.47±0.77)%对(1.69±0.73)%、(3.23±0.78)%对(1.70±0.75)%,P值均〈0.05];治疗后28d,泼尼松组、地塞米松组患者CD4’CD25highCD127low细胞水平[(2.69±0.64)%、(2.59±0.67)%]与治疗前比较差异无统计学意义。结论新诊� 展开更多
关键词 血小板减少症 免疫性 单克隆抗体 CD20 糖皮质激素 调节性T细胞
AMPK激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸对U937细胞增殖、分化和凋亡的影响 被引量:2
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作者 吕超 曹江 +4 位作者 孟凡静 曾令宇 陈翀 吴庆运 徐开林 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期153-156,共4页
目的探讨单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(AICAR)对急性单核细胞白血病细胞系U937细胞增殖、分化和凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法用不同浓度AICAR处理U937细胞24、48h,用CCK-8法绘制... 目的探讨单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)激动剂5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(AICAR)对急性单核细胞白血病细胞系U937细胞增殖、分化和凋亡的影响,并分析其可能的作用机制。方法用不同浓度AICAR处理U937细胞24、48h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;以细胞形态学、AnnexinV/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记等分析细胞凋亡情况;用流式细胞术检测细胞表面分化抗原CDllb表达。用实时定量PCR检测Bcl—xL、Bax、Bim、caspase-3mRNA表达的变化。结果AICAR对U937细胞增殖具有显著抑制作用,且作用呈时间和剂量依赖性,24、48h的半数抑制浓度(IC50)值分别为1.1和0.9mmoL/L。1.0mmol/LAICAR作用U937细胞24h,流式细胞术检测结果显示CDllb阳性细胞率无明显变化(P〉0.05),但细胞形态学出现典型的凋亡特征;AnnexinV/7-AAD标记的阳性细胞升高,细胞凋亡率为(6.81±1.16)%,高于对照组的(2.744-0.32)%(P〈0.05)。1.0mmol/LAICAR诱导U937细胞凋亡过程中Bcl—xL、Bax表达无明显变化,Bim、caspase-3表达显著增加(P〈0.05)。结论AICAR能有效抑制U937细胞增殖及促进细胞凋亡,但对U937细胞向髓系分化无明显影响,其促凋亡机制与上调Bim与caspase-3基因表达有关。 展开更多
关键词 氨基咪唑类 白血病 细胞凋亡 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶 U937细胞
RNA干扰血管内皮钙黏蛋白表达对Ph+急性淋巴细胞白血病细胞株Sup—B15甲磺酸伊马替尼敏感性的影响 被引量:1
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作者 张焕新 闫志凌 +6 位作者 宋旭光 吕超 曹江 李振宇 曾令宇 陈翀 徐开林 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期522-526,共5页
目的探讨下调Ph+急性淋巴细胞白血病细胞血管内皮钙黏蛋白(CD144)表达对甲磺酸伊马替尼敏感性的影响及可能的机制。方法通过慢病毒载体介导的RNA干扰(RNAi)沉默急性淋巴细胞白血病株Sup—B15细胞的CD144表达,建立CD144表达稳定下... 目的探讨下调Ph+急性淋巴细胞白血病细胞血管内皮钙黏蛋白(CD144)表达对甲磺酸伊马替尼敏感性的影响及可能的机制。方法通过慢病毒载体介导的RNA干扰(RNAi)沉默急性淋巴细胞白血病株Sup—B15细胞的CD144表达,建立CD144表达稳定下调的细胞株Sup—B15/shVEC。用CCK-8法检测甲磺酸伊马替尼对细胞增殖的影响;用AnnexinV/7一AAD标记,流式细胞术检测细胞凋亡;用流式细胞术检测CD34+CD38-细胞比例变化;荧光定量PCR检测细胞ALDHImRNA水平;Westernb1ot法检测细胞CD144、CD133、Bcr—ab1、B—catenin表达水平。结果不同浓度甲磺酸伊马替尼对Sup—B15、Sup—B15/shVEC细胞均有增殖抑制作用,其半数抑制浓度(IC50值)分别为25.1、18.7txmo1/L,两组细胞相比差异有统计学意义(P〈0.05)。20txmo1/L甲磺酸伊马替尼作用48h,Sup—B15及Sup—B15/shVEC细胞凋亡率分别为(3.03±0.72)%、(13.52±2.06)%,两组细胞相比差异有统计学意义(P〈0.05)。流式细胞术检测结果显示Sup—B15细胞CD34+CD38-细胞率明显高于Sup—B15/shVEC细胞[(2.39±0.28)%对(0.96±0.07)%],两组相比差异有统计学意义(P〈0.05)。Sup—B15/shVEC细胞与Sup—B15细胞相比,ALDH1转录水平明显下降(0.043±0.008对0.016±0.003),CD133蛋白、B—catenin总蛋白及核蛋白表达水平也明显下降,而bcr—ab1融合蛋白表达水平无明显变化。结论Sup—B15细胞CD144表达稳定下调后其对甲磺酸伊马替尼敏感性明显增高,该作用可能是通过降低p—catenin蛋白稳定性、减少p—catenin蛋白核转位实现的。 展开更多
关键词 RNA干扰 Sup—B15细胞 伊马替尼 钙黏蛋白 药物敏感性
p38MAPK抑制剂对小鼠急性移植物抗宿主病的发生及小肠损伤的影响 被引量:1
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作者 张翠平 李小翠 +3 位作者 汤仁仙 李向阳 郑葵阳 曾令宇 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期673-678,共6页
目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580对小鼠异基因骨髓造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生及小肠损伤的影响。方法用60只BALB/c小鼠作为受鼠,分为正常对照组、单纯照射组、模型组和干预组,每... 目的探讨p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)抑制剂SB203580对小鼠异基因骨髓造血干细胞移植后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的发生及小肠损伤的影响。方法用60只BALB/c小鼠作为受鼠,分为正常对照组、单纯照射组、模型组和干预组,每组15只。单纯照射组、模型组和干预组小鼠均接受7.5Gyy射线全身照射。C57BL/6小鼠作为供鼠,取其骨髓细胞及脾细胞经尾静脉输注给接受照射后的受鼠,建立小鼠aGVHD模型。干预组为aGVHD模型小鼠给予SB203580干预,末次给药48h后处死。模型组小鼠为aGVHD模型仅给予等量二甲基亚砜。移植后观察小鼠的一般状态和生存情况。移植后10d取各组小鼠小肠组织,采用RT-PCR、Westernblot及免疫组化方法检测磷酸化p38MAPK、Fas、FasL的表达。结果干预组小鼠的体重下降程度为(13.00±0.50)%,轻于模型组的(25.00±0.75)%,差异有统计学意义(P〈0.05);干预组小鼠的aGVHD的临床评分(3.33±0.82)低于模型组(6.33±1.36),差异有统计学意义(P〈0.05);干预组小鼠的小肠组织中磷酸化p38MAPK、Fas、FasL的相对表达水平分别为1.43±0.02、0.81±0.03、0.97±0.03,均显著低于模型组的1.76±0.05、1.52±0.04、1.48±0.04。结论SB203580可抑制aGVHD小鼠小肠组织中p38MAPK通路的活化,减少Fas和FasL信号通路所引起的细胞凋亡,有效减轻aGVHD的发生及靶器官小肠的损害。 展开更多
关键词 移植物抗宿主病 p38丝裂原活化蛋白激酶类抑制剂 小肠 Fas FAS配体
微小RNA与免疫耐受的研究进展 被引量:1
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作者 张聪综述 桑威(审校) 徐开林(审校) 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2013年第6期562-564,共3页
微小RNA(miRNA)是一类长约21~25个核苷酸的小分子RNA,能与特定的mRNA靶向结合,在转录后水平调控基因表达。越来越多的研究表明,miRNA广泛参与了免疫应答的调控,可以通过靶向免疫系统中关键信号转导分子的表达,在多个环节上参与... 微小RNA(miRNA)是一类长约21~25个核苷酸的小分子RNA,能与特定的mRNA靶向结合,在转录后水平调控基因表达。越来越多的研究表明,miRNA广泛参与了免疫应答的调控,可以通过靶向免疫系统中关键信号转导分子的表达,在多个环节上参与调控免疫耐受。 展开更多
关键词 MICRORNA 免疫耐受
白细胞介素-1,-18在移植物抗宿主病中的研究进展
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作者 李小莉(综述) 曾令宇(审校) 徐开林(审校) 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2013年第6期501-503,共3页
急性移植物抗宿主病(aGVHD)是同种异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)后主要的并发症及死亡原因之一。细胞因子在GVHD的病理生理过程中起重要作用。细胞因子白细胞介素-1(IL-1),-18同属于IL-1家族,均参与了该过程。为此,笔者拟... 急性移植物抗宿主病(aGVHD)是同种异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)后主要的并发症及死亡原因之一。细胞因子在GVHD的病理生理过程中起重要作用。细胞因子白细胞介素-1(IL-1),-18同属于IL-1家族,均参与了该过程。为此,笔者拟从IL-1,-18的基因多态性与GVHD的关系;IL-1,-18对GVHD的干预作用;IL-1,-18作为GVHD的生物学标记等三方面阐述IL-1,-18在GVHD中的作用。 展开更多
关键词 移植物抗宿主病 白细胞介素-1 白介素细胞18
慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响 预览 被引量:2
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作者 付成娟 李振宇 +6 位作者 李德鹏 闫志凌 陈伟 陈翀 吴庆运 潘秀英 徐开林 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1546-1551,共6页
本研究通过构建β-连环蛋白(β-catenin)特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(MSC)生物学行为的影响。设计3对针对β-cateninmRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB... 本研究通过构建β-连环蛋白(β-catenin)特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(MSC)生物学行为的影响。设计3对针对β-cateninmRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB中,构建PLB-β-catenin/shRNAl,PLB-β-catenin/shRNA2和PLB-β-catenin/shR-NA3;将重组质粒与慢病毒包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293FT细胞,收获病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度,感染Msc细胞,并应用流式细胞术分选GFP阳性细胞,Westernblot和RT-PCR验证其对细胞内β-catenin基因表达的抑制效果,筛选干扰效率最高质粒;CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V/7-AAD法检测干扰后细胞凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测MSC迁移能力。结果表明:构建的特异性慢病毒siRNA干扰组(PLB-β-catenin/shRNA2)能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达,并抑制细胞的增殖;而空载体对照组(PLBgroup)和正常对照组(controlgroup)细胞增殖无明显变化,两组之间无显著的统计学差异(P〉0.05);流式细胞术检测结果显示,采用血清饥饿法处理后,干扰组细胞的凋亡率明显增加,但两对照组之间无统计学差异(P〉0.05);细胞划痕和Tran-swell实验显示,干扰组MSC的迁移能力明显降低,对照组细胞迁移能力无明显变化。结论:构建的特异RNAi慢病毒能够有效抑制β-catenin基因的表达,减少细胞内目的基因mRNA和蛋白的水平,从而对MSC细胞的增殖、凋亡和迁移能力产生重要影响。 展开更多
关键词 RNA干扰 慢病毒载体 WNT信号 Β-CATENIN 间充质干细胞 生物学行为
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内皮祖细胞对异基因造血干细胞移植小鼠造血重建的影响 被引量:4
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作者 化静 房婷 +5 位作者 刘迷迷 黄玉金 付金玉 吴进燕 徐开林 曾令宇 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期516-521,共6页
目的探讨内皮祖细胞(EPC)输注对异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)小鼠造血重建的影响。方法白消安(BU)/环磷酰胺(CY)预处理后建立C57BL/6供BABL/c小鼠allo—HSCT模型。受鼠随机分为4组:未处理组、BU/CY预处理组、单纯移... 目的探讨内皮祖细胞(EPC)输注对异基因造血干细胞移植(allo—HSCT)小鼠造血重建的影响。方法白消安(BU)/环磷酰胺(CY)预处理后建立C57BL/6供BABL/c小鼠allo—HSCT模型。受鼠随机分为4组:未处理组、BU/CY预处理组、单纯移植组和EPC联合移植组。移植后动态观察受鼠骨髓病理变化,MECA32抗体免疫组化染色观察骨髓窦内皮和微血管的变化;流式细胞术分析骨髓内干、祖细胞比例及血清细胞因子;并行外周血血细胞计数。结果①联合EPC输注组小鼠骨髓中造血组织、骨髓窦内皮及微血管的损伤较单纯移植组轻。②予EPC输注后,受鼠骨髓中造血干细胞比例在移植后21天(+21d)内明显增高,联合移植组小鼠HSC于+14d达高峰,明显高于单纯移植组(0.1743对0.0787)(P〈0.05),骨髓造血祖细胞移植后持续增高,+21d时联合EPC组显著高于单纯移植组(0.4550对0.3905)(P〈0.05)。③联合移植组外周血白细胞计数早期始终高于单纯移植组,+14d达到高值,(0.74×10^9/L对0.47×10^9/L)(P〈0.05),外周血血小板计数于+14d升至最高,联合EPC移植组显著高于单纯移植组(1228.9×10^9/L对977.12×10^9/L)(P〈0.05)。结论allo—HSCT联合EPC输注可促进小鼠移植后的造血重建。 展开更多
关键词 内皮祖细胞 造血干细胞移植 造血重建
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