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肝细胞Notch1基因敲除小鼠模型的建立
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作者 陈朝 杨娜 +4 位作者 吴进燕 褚培培 夏园 姚海娜 曾令宇 《江苏医药》 CAS 2015年第15期1737-1739,共3页
目的繁育和鉴定Notch 1基因敲除小鼠。方法用B6.Notch 1flox/flox和B6.Alb-Cre转基因小鼠进行饲养和杂交;将繁育出的第1代小鼠再进行相互交配,得到第2代小鼠。通过PCR鉴定出基因型为B6.Notch 1flox/flox.Alb-Cre的第2代小鼠。采用Wester... 目的繁育和鉴定Notch 1基因敲除小鼠。方法用B6.Notch 1flox/flox和B6.Alb-Cre转基因小鼠进行饲养和杂交;将繁育出的第1代小鼠再进行相互交配,得到第2代小鼠。通过PCR鉴定出基因型为B6.Notch 1flox/flox.Alb-Cre的第2代小鼠。采用Western blot法检测Notch 1蛋白在肝脏中有无表达。结果两种转基因小鼠繁殖产生的第2代小鼠基因型符合孟德尔遗传定律,可通过该方法获得较多的B6.Notch 1flox/flox.Alb-Cre小鼠。该基因型小鼠肝脏中不表达Notch 1蛋白。结论应用Cre-loxp系统可以成功地敲除小鼠Notch 1基因。 展开更多
关键词 Cre-loxp系统 NOTCH 1 基因敲除
人NANOGP8基因原核表达及融合蛋白纯化
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作者 周俊 曹江 +5 位作者 孟凡静 冯浩 吴庆运 陈翀 牛铭山 徐开林 《江苏医药》 CAS 北大核心 2014年第22期2676-2679,共4页
目的构建人NANOGP8基因原核表达载体,并纯化其融合蛋白。方法从plvxNANOGP8重组质粒中扩增出NANOGP8基因,插入pGEX-4T-1载体中构建pGEX-4T-1-NANOGP8重组载体,并转化大肠杆菌BL21,优化其表达条件,分别以可溶及包涵体形式得到了融合蛋白... 目的构建人NANOGP8基因原核表达载体,并纯化其融合蛋白。方法从plvxNANOGP8重组质粒中扩增出NANOGP8基因,插入pGEX-4T-1载体中构建pGEX-4T-1-NANOGP8重组载体,并转化大肠杆菌BL21,优化其表达条件,分别以可溶及包涵体形式得到了融合蛋白并进行纯化,采用Western blot检测其抗原性。结果成功构建了重组表达载体pGEX-4T-1-NANOGP8,经37℃诱导6h获得主要以包涵体形式存在的融合蛋白;而经16℃过夜诱导可获得可溶性融合蛋白,并分别成功对两种形式融合蛋白进行纯化且经Western blot检测显示其抗原性良好。结论成功获得NANOGP8纯化蛋白,可用于进一步研究NANOGP8基因在肿瘤中的作用。 展开更多
关键词 NANOG假基因8 原核表达 融合蛋白
Evi1基因特异性siRNA对HEL细胞生长周期的影响
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作者 张璞 徐开林 +1 位作者 潘秀英 杜冰 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第14期1620-1622,共3页
目的研究Evi1基因特异性小干扰RNA(siRNA)对人红白细胞白血病(HEL)细胞增殖及生长周期的影响。方法将HEL细胞分为三组:Evi1基因siRNA组(A组)、siRNA-co对照组(B组)、细胞空白对照组(C组)。转染48 h后,台盼蓝染色实验检测细... 目的研究Evi1基因特异性小干扰RNA(siRNA)对人红白细胞白血病(HEL)细胞增殖及生长周期的影响。方法将HEL细胞分为三组:Evi1基因siRNA组(A组)、siRNA-co对照组(B组)、细胞空白对照组(C组)。转染48 h后,台盼蓝染色实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期和凋亡率。结果与B、C组相比,A组HEL细胞活性下降[(97.13±1.58)%、(99.20±2.27)%vs.(26.05±2.49)%],细胞周期阻滞在G0/G1期[(39.61±1.32)%、(35.77±1.31)%vs.(79.07±1.43)%],S期细胞减少[(57.74±1.08)%(、57.36±1.38)%vs.(9.51±0.75)%],凋亡率增高[(9.78±1.14)%(、8.67±1.89)%vs.(49.94±1.75)%](P均〈0.05);而B组和C组间各观察指标比较差异无统计学意义(P〉0.05)。结论 Evi1基因特异性siRNA可抑制HEL细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 小干扰RNA Evil基因 人红白细胞白血病细胞
Akt信号通路介导脑缺氧缺血后丰富环境对幼鼠海马神经元的影响 被引量:4
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作者 宋远见 刘红芝 +4 位作者 裴冬生 孙亚峰 张璞 张芳 蔡绍京 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期299-301,共3页
目的观察丰富环境(EE)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)Akt信号通路及大鼠海马神经元的影响。方法 健康7日龄SD大鼠90只,随机均分为3组:正常对照(A)组,不建立模型,不给刺激;缺氧缺血非刺激(B)组,采用Sale法建立HIBD模型,但不给... 目的观察丰富环境(EE)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)Akt信号通路及大鼠海马神经元的影响。方法 健康7日龄SD大鼠90只,随机均分为3组:正常对照(A)组,不建立模型,不给刺激;缺氧缺血非刺激(B)组,采用Sale法建立HIBD模型,但不给丰富环境刺激;丰富环境刺激(C)组,建立HIBD模型,术后给予EE刺激,2h/次,1次/d,共20d。分别在缺氧缺血后第3天和第20天各组随机选10只,断头取脑,分别采用免疫印迹和焦油紫染色的方法检测大鼠脑缺氧缺血后海马CA1区Akt和Bad(ser136)的磷酸化及神经元凋亡情况。结果与A组比较,B组第3天脑组织中Akt和Bad(ser136)的磷酸化程度显著降低(P〈0.05),第20天海马神经元损伤非常严重(P〈0.05)。C组Akt和Bad(ser136)的磷酸化程度显著高于B组(P〈0.05),海马神经元损伤明显减轻(P〈0.05)。结论EE刺激可以促进HIBD恢复,减少海马CA1区神经元损伤;Akt和Bad(ser136)磷酸化程度升高可能是其机制之一。 展开更多
关键词 缺氧缺血性腩损伤 丰富环境刺激 海马 AKT Bad(ser136)
B7-1与GM-CSF双顺反子慢病毒转染骨髓基质细胞的研究 预览
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作者 杜冰 徐开林 +3 位作者 鹿群先 程海 闫冬梅 潘秀英 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期 370-373,F0002,共5页
目的研究B7-1和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)双基因共表达慢病毒载体是否可介导目的基因在人骨髓基质细胞(MSCs)有效表达。方法采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒、包膜蛋白质粒和含目的基因的转移质粒共转染293T包装细胞,收... 目的研究B7-1和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)双基因共表达慢病毒载体是否可介导目的基因在人骨髓基质细胞(MSCs)有效表达。方法采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒、包膜蛋白质粒和含目的基因的转移质粒共转染293T包装细胞,收集的病毒上清感染密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养的MSCs,用荧光显微镜和流式细胞术(FCM)分析转导细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达,RT-PCR分析目的基因在转导细胞的表达。结果密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离培养第三代的MSCs,CD90表达阳性率达到93.62%,包装好的慢病毒颗粒可成功感染293T包装细胞和MSCs,用荧光显微镜和FCM均可检测到转染细胞中GFP表达,阳性率分别为77.66%和43.97%,RT-PCR方法可扩增出转染细胞表达B7-1和GM-CSF基因片段。结论B7-1和GM-CSF双基因共表达慢病毒载体可高效转移目的基因至骨髓基质细胞并获得有效表达。 展开更多
关键词 B7-1 粒-巨噬细胞集落刺激因子 慢病毒
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PIG-A基因逆转录病毒表达载体及包装细胞系的建立 预览
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作者 邱婷婷 徐开林 +3 位作者 李振宇 潘秀英 孙海英 杜冰 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期 261-263,共3页
目的构建含磷脂酰肌醇聚糖A类基因(PIG-A)的逆转录病毒载体并对其进行包装,获得稳定的产毒细胞系。方法采用PCR方法从质粒pEBPIG-A中扩增PIG-A基因片断,BarnHI及XhoI双酶切后连接至逆转录病毒载体pLEGFP-C1,用限制性内切酶和DNA序... 目的构建含磷脂酰肌醇聚糖A类基因(PIG-A)的逆转录病毒载体并对其进行包装,获得稳定的产毒细胞系。方法采用PCR方法从质粒pEBPIG-A中扩增PIG-A基因片断,BarnHI及XhoI双酶切后连接至逆转录病毒载体pLEGFP-C1,用限制性内切酶和DNA序列测定的方法对重组质粒进行鉴定。脂质体法转染PA317包装细胞,荧光显微镜下观察EGFP瞬时表达,G418筛选抗性克隆,收集病毒上清后感染NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果酶切证实PIG-A基因克隆至逆转录病毒载体,测序结果和原始序列相同。重组逆转录病毒载体转染PA317包装细胞,24~48h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白的表达。经CAl8筛选得到6个稳定抗性克隆,病毒滴度最高达1.6×10^5CFU/ml。结论构建了含PIG-A基因的逆转录病毒载体,获得了稳定的产毒细胞系。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 含磷脂酰肌醇聚糖A类基因 增强型绿色荧光蛋自
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慢病毒载体介导不同内部启动子驱动绿色荧光蛋白表达效率 预览 被引量:3
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作者 李振宇 徐开林 +3 位作者 潘秀英 鹿群先 何徐彭 孙海英 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期 448-450,i0003,共4页
目的在人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)慢病毒载体中引入三种不同的内部启动子来驱动绿色荧光蛋白基因(GFP)的表达,初步比较内部启动子的效率。方法慢病毒载体三质粒系统中,转移质粒的构建采用限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接方法... 目的在人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)慢病毒载体中引入三种不同的内部启动子来驱动绿色荧光蛋白基因(GFP)的表达,初步比较内部启动子的效率。方法慢病毒载体三质粒系统中,转移质粒的构建采用限制性内切酶酶切、T4DNA连接酶连接方法和内切酶酶切鉴定。磷酸钙沉淀法将三质粒共转染293T包装细胞。病毒滴度的测定采用6孔板培养感染细胞,荧光显微镜计数GFP阳性细胞。通过荧光显微镜观察绿色荧光的表达情况判断启动子的效率。结果构建了含PPT元件和含不同内部启动子和GFP的质粒。转染293T细胞后均观察到较强的绿色荧光。表达荧光的293T细胞数以巨细胞病毒(CMV)启动子最多,肝细胞特异性启动子(LSP)较少,泛醌启动子(PUB)介于两者之间。CMV为内部启动子的慢病毒载体滴度5×10^6IU/ml,其他二种启动子的滴度(1~2)×10^5IU/ml。结论在所选择的三种内部启动子中,CMV启动子的效率最高,LSP较强,PUB介于两者之间。 展开更多
关键词 慢病毒载体 内部启动子 绿色荧光蛋白
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移植预处理后组织的冰冻切片制作方法 被引量:1
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作者 化静 房婷 +1 位作者 刘迷迷 曾令宇 《江苏医药》 CAS 北大核心 2013年第3期269-271,F0002共4页
目的介绍一种移植预处理后组织的冰冻切片制作方法。方法予BALB/c小鼠清髓剂量(60 Co 7.5Gy全身照射)照射后4h内输入体外培养的含有绿色荧光蛋白(GFP)内皮祖细胞(EPC),分别于移植后6、12、24、36、48、72及96h取受鼠内脏组织制作... 目的介绍一种移植预处理后组织的冰冻切片制作方法。方法予BALB/c小鼠清髓剂量(60 Co 7.5Gy全身照射)照射后4h内输入体外培养的含有绿色荧光蛋白(GFP)内皮祖细胞(EPC),分别于移植后6、12、24、36、48、72及96h取受鼠内脏组织制作冰冻切片,用免疫荧光观察组织内GFP阳性细胞分布。结果荧光显微镜下可见肝、肺中GFP、大鼠抗小鼠泛内皮细胞单克隆抗体(MECA-32)阳性细胞,脾中见GFP、CD68阳性细胞;小肠中未发现明显GFP阳性、MECA-32阳性细胞。结论对移植预处理的组织进行及时恰当的处理后,荧光显微镜下可清晰地观察到组织形态结构变化及GFP阳性细胞分布。 展开更多
关键词 移植预处理 内皮祖细胞 冰冻切片
移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法
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作者 于红丽 齐昆明 +4 位作者 宋国梁 闫志凌 陈翀 董红燕 曾令宇 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第13期1489-1490,共2页
目的介绍一种移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法。方法将30只C57BL/6小鼠随机均分为A组(60Co 7.5 Gy致死量照射)、B组(60Co 5.0 Gy减低剂量照射)和C组(正常对照),通过透射电镜定期观察肝脏内皮变化。结果透射电镜下可见:A组肝... 目的介绍一种移植预处理后肝脏内皮的电镜制作方法。方法将30只C57BL/6小鼠随机均分为A组(60Co 7.5 Gy致死量照射)、B组(60Co 5.0 Gy减低剂量照射)和C组(正常对照),通过透射电镜定期观察肝脏内皮变化。结果透射电镜下可见:A组肝脏内皮细胞核碎裂、内皮破坏严重;B组染色质边集,内皮无明显损伤;C组未见明显异常。结论对肝脏组织进行恰当的处理后,透射电镜下能清楚地观察到内皮细胞表面结构和内壁损伤的形态改变。 展开更多
关键词 移植预处理 肝脏内皮 透射电镜
急性白血病患者血清IL-11及可溶性gp130的测定及意义 预览 被引量:3
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作者 张秋荣 苗瞄 +4 位作者 吴德沛 李彩霞 吴小津 陈令松 曹若男 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期 979-980,共2页
目的探讨白细胞介素11(IL-11)及可溶性糖蛋白130(sgp130)在初诊急性白血病(AL)诱导缓解过程中的变化及临床意义。方法采用ELISA法分别对36例初诊AL患者治疗前及获完全缓解后的血清IL-11及sgp130含量进行动态观测,同时观察患者外... 目的探讨白细胞介素11(IL-11)及可溶性糖蛋白130(sgp130)在初诊急性白血病(AL)诱导缓解过程中的变化及临床意义。方法采用ELISA法分别对36例初诊AL患者治疗前及获完全缓解后的血清IL-11及sgp130含量进行动态观测,同时观察患者外周血白细胞和血小板数量的变化。结果AL患者的血清IL-11水平明显低于正常人(P〈0.05),经过诱导化疗获完全缓解后明显升高并接近正常水平,且与外周血血小板数呈正相关;而发病时sgp130水平明显高于正常人(P〈0.05),获完全缓解后又明显下降且与外周血白细胞数呈正相关。结论检测患者血清IL-11及sgp130水平可作为AL辅助诊断、治疗估价和判断预后的有意义的指标。 展开更多
关键词 白细胞介素11 可溶性糖蛋白130 急性白血病
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人工计数血小板在观察TTP疗效中的重要性 预览
11
作者 郭玉琳 张家强 张庆国 《浙江临床医学》 2013年第10期1497-1498,共2页
免疫性血小板减少性紫癜(ITP)是临床常见的由于免疫因素致血小板破坏过多、骨髓巨核细胞增多伴成熟障碍而引起的一种出血性疾病,计数血小板对该病治疗效果监测非常重要,准确与否直接关系到对患者疾病病情的正确判断和治疗措施的调... 免疫性血小板减少性紫癜(ITP)是临床常见的由于免疫因素致血小板破坏过多、骨髓巨核细胞增多伴成熟障碍而引起的一种出血性疾病,计数血小板对该病治疗效果监测非常重要,准确与否直接关系到对患者疾病病情的正确判断和治疗措施的调整。目前血小板检查普遍采用机测法,简便迅速,但在ITP治疗中,血细胞分析仪计数血小板结果与人工计数存在一定差异,使得对治疗效果的判断出现偏差。本文对11例ITP患者二种血小板计数结果作一比较,旨在提示ITP治疗中人工计数血小板的重要性。 展开更多
关键词 血小板破坏过多 治疗效果 人工计数 免疫性血小板减少性紫癜 TTP 血小板计数结果 出血性疾病 巨核细胞增多
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原发性血小板减少性紫癜患者治疗前后CD4+、CD25+调节性T细胞水平变化 预览 被引量:1
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作者 张庆国 朱锋 +2 位作者 张鲁勤 朱伟 顾卫军 《浙江临床医学》 2012年第4期 390-392,共3页
目的 检测原发性血小板减少性紫癜(ITP )患者药物治疗前后CD4+、CD25 +调节性T细胞水平的变化,分析其对治疗效果的影响.方法 应用流式细胞仪检测ITP 患者药物治疗前后CD4+、CD25 +调节性T细胞表达水平.结果 ITP 患者CD4+、CD25 ... 目的 检测原发性血小板减少性紫癜(ITP )患者药物治疗前后CD4+、CD25 +调节性T细胞水平的变化,分析其对治疗效果的影响.方法 应用流式细胞仪检测ITP 患者药物治疗前后CD4+、CD25 +调节性T细胞表达水平.结果 ITP 患者CD4+、CD25 +调节性T细胞表达低于正常人对照组,且药物治疗有效的ITP 患者CD4+、CD25 +调节性T细胞表达较治疗前明显升高.CD4+、CD25 +调节性T细胞在治疗显效组表达明显高于良效组、进步组和无效组,良效组和进步组与治疗无效组比较差异也有统计学意义.结论 ITP 患者CD4+、CD25 +调节性T细胞表达较正常人对照组低,随药物治疗的疗效逐渐升高. 展开更多
关键词 原发性血小板减少性紫癜 CD4+、CD25 +调节性T细胞 疗效
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