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甘露聚糖结合凝集素对白假丝酵母菌感染鼠体内Treg/Th17细胞免疫平衡的调节作用
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作者 王艳 张卫斌 +6 位作者 杨泳慧 陈晨 杨婧文 雷一鸣 张伟 王凡平 王明永 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期57-65,共9页
目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节。方法MBL基因敲除型(MBL^-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×10^7CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射... 目的研究甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)对白假丝酵母菌感染鼠体内Th17、Treg细胞分化的调节。方法MBL基因敲除型(MBL^-/-)和野生型(WT)C57BL/6小鼠分4组,2×10^7CFU白假丝酵母菌(C.albicans)对感染组小鼠腹腔注射;感染3d后取小鼠肝脏和肾脏病理切片,HE染色和PAS染色观察小鼠病理组织学变化;7d后摘除小鼠眼球取静脉血流式细胞术分析小鼠体内Treg和Th17细胞;静脉抗凝血ELISA检测小鼠体内细胞因子IL-10和IL-17A的含量;颈椎脱臼处死小鼠后取脾脏细胞MACS磁性分选获得CD4^+T细胞,提取总RNA,qRT-PCR检测其体内Foxp3、RORγtmRNA的表达;取小鼠脾脏CD4^+T细胞,提取总蛋白,Western blot检测Foxp3、RORγt蛋白表达水平。结果成功建立了C.albicans感染鼠模型,和WT感染组相比较:流式分析显示MBL^-/-感染组小鼠体内Th17细胞亚型数目比例增高,Treg细胞亚型数目比例降低;ELISA结果显示MBL^-/-感染组小鼠体内IL-17A水平明显增高,IL-10水平降低;qRT-PCR结果显示MBL^-/-感染组小鼠体内转录因子RORγtmRNA表达升高,转录因子Foxp3mRNA表达降低;Western blot印迹结果表明MBL^-/-感染组小鼠体内RORγt蛋白表达量明显增多,而Foxp3蛋白表达量减少。结论在C.albicans感染中,MBL促进了CD4^+T细胞向Treg细胞亚型诱导分化,抑制了CD4^+T细胞向Th17细胞亚型的诱导分化,从而调节了C.albicans感染鼠体内Treg/Th17细胞的免疫平衡。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素(MBL) MBL基因敲除小鼠(MBL^-/-) 白假丝酵母菌(C. albicans) THL7细胞 Treg细胞
红细胞分布宽度与D-二聚体联合检测对急性胰腺炎严重程度的评估价值 预览
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作者 刘慧晶 李若梅 +2 位作者 李悦 杨硕 贺志安 《新乡医学院学报》 CAS 2019年第9期842-846,共5页
目的探讨联合检测红细胞分布宽度(RDW)及D-二聚体(D-dimer)对急性胰腺炎(AP)严重程度的评估价值。方法回顾性分析2016年1月至2018年9月新乡医学院第一附属医院收治的209例AP患者为研究对象,根据修订后的亚特兰大分类标准将患者分为轻症... 目的探讨联合检测红细胞分布宽度(RDW)及D-二聚体(D-dimer)对急性胰腺炎(AP)严重程度的评估价值。方法回顾性分析2016年1月至2018年9月新乡医学院第一附属医院收治的209例AP患者为研究对象,根据修订后的亚特兰大分类标准将患者分为轻症急性胰腺炎(MAP)组(n=95)、中度重症急性胰腺炎(MSAP)组(n=73)和重症急性胰腺炎(SAP)组(n=41);依据是否出现多器官功能障碍综合征(MODS)分为MODS组(n=35)和非MODS组(n=174),另收集同期健康体检者60例作为对照组。收集受试者RDW、D-dimer、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、血清Ca^2+、急性生理学和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)评分等资料,采用受试者工作特征曲线及曲线下面积(AUC)分析各参数对AP患者病情严重程度的评估价值。结果SAP组患者RDW、D-dimer、PT、APTT、FIB、APACHEⅡ评分高于对照组、MAP组和MSAP组(P<0.05),血清Ca^2+水平低于对照组、MAP组和MSAP组(P<0.05);MSAP组患者RDW、D-dimer、PT、APTT、FIB、APACHEⅡ评分高于对照组和MAP组(P<0.05),血清Ca^2+水平低于对照组和MAP组(P<0.05);MAP组与对照组患者RDW、D-dimer、PT、APTT、FIB比较差异无统计学意义(P>0.05),MAP组患者血清Ca^2+水平低于对照组(P<0.05)。MODS组患者RDW、D-dimer、PT、APTT、FIB、APACHEⅡ评分高于非MODS组(P<0.05),血清Ca^2+水平低于非MODS组(P<0.05)。入院时RDW诊断SAP及MODS的最佳截断值分别为16.40%(AUC为0.895,95%可信区间为0.843~0.948,P<0.05)和15.39%(AUC为0.816,95%可信区间为0.737~0.895,P<0.05);D-dimer诊断SAP及MODS的最佳截断值分别为1.35mg·L^-1(AUC为0.907,95%可信区间为0.862~0.953,P<0.05)和1.48mg·L^-1(AUC为0.835,95%可信区间:0.726~0.943,P<0.05);RDW联合D-dimer检测诊断SAP及MODS的AUC分别为0.932和0.847。结论联合检测RDW及D-dimer可作为评估早期AP严重程度的实验室指标。 展开更多
关键词 红细胞分布宽度 D-DIMER 凝血功能 急性胰腺炎 严重程度评估
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拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的作用及机制 预览
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作者 豆巧华 郭晓芳 +2 位作者 朱小飞 张月月 杨帆 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2019年第9期766-772,共7页
目的探讨拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的体外活性及其作用机制。方法MTT法检测拉帕替尼、顺铂单独及二者联合对食管鳞癌细胞的增殖抑制作用,并计算两药联合作用指数。碘化丙啶(PI)染色或AnnexinV-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞周期... 目的探讨拉帕替尼联合顺铂抗食管鳞癌的体外活性及其作用机制。方法MTT法检测拉帕替尼、顺铂单独及二者联合对食管鳞癌细胞的增殖抑制作用,并计算两药联合作用指数。碘化丙啶(PI)染色或AnnexinV-FITC/PI双染结合流式细胞术检测细胞周期进程及凋亡,Westernblot法检测两药单独及联合处理后食管鳞癌细胞EGFR和HER2的磷酸化及下游信号分子的表达变化。结果拉帕替尼联合顺铂可协同抑制食管鳞癌细胞的增殖,二者之间的联合作用指数小于1。拉帕替尼联合顺铂可使食管鳞癌细胞阻滞于G2/M期,并可显著诱导细胞凋亡。联合用药可显著抑制EGFR和HER2的磷酸化,并进而抑制两个主要的下游信号分子ERK和AKT的活化。结论拉帕替尼联合顺铂在体外具有协同抗食管鳞癌活性,对EGFR和HER2过表达食管鳞癌是一种有前景的治疗策略。 展开更多
关键词 拉帕替尼 顺铂 食管鳞癌 表皮生长因子受体 人表皮生长因子受体2
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脑室周围白质软化大鼠脑组织Toll样受体4表达变化与细胞凋亡的关系
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作者 张玉 王向鹏 +3 位作者 刘佳 唐成和 可秋萍 王桂芳 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2019年第16期1254-1258,共5页
目的探讨脑室周围白质软化(PVL)大鼠脑组织中Toll样受体4(TLR4)的表达变化规律与细胞凋亡的关系。方法140只3日龄SD大鼠,采用随机数字表法分为实验组(缺氧缺血组)和对照组(假手术组),通过结扎大鼠右侧颈总动脉,吸入60 mL/L氧气和940 mL/... 目的探讨脑室周围白质软化(PVL)大鼠脑组织中Toll样受体4(TLR4)的表达变化规律与细胞凋亡的关系。方法140只3日龄SD大鼠,采用随机数字表法分为实验组(缺氧缺血组)和对照组(假手术组),通过结扎大鼠右侧颈总动脉,吸入60 mL/L氧气和940 mL/L氮气混合气体建立缺氧模型,制模成功后6 h、12 h、24 h、3 d、7 d处死动物,留取其脑组织。用HE染色检测病理变化,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导三磷酸脱氧尿甘缺口末端标记法(Tunel法)检测细胞凋亡,免疫组织化学和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4的表达。应用SPSS 19.0软件对结果进行统计学分析。结果PVL大鼠脑组织TLR4在缺氧缺血后6 h蛋白、mRNA表达量开始增加(分别为0.541±0.069,0.166±0.058),3 d达高峰(分别为1.932±0.161,0.300±0.039),7 d后开始下降(分别为1.242±0.109,0.220±0.025),与对照组比较,在6 h、12 h、24 h、3 d、7 d差异均有统计学意义(均P<0.05);脑组织细胞凋亡在缺氧缺血后6 h开始增加(21.33±3.50),3 d达高峰(35.97±4.20),7 d后开始下降(31.02±4.22),与对照组比较,在6 h、12 h、24 h、3 d、7 d差异均有统计学意义(均P<0.05)。TLR4表达与细胞凋亡呈正相关(r=0.774、0.575,均P<0.05)。结论在缺氧缺血导致的大鼠PVL模型中,TLR4有可能通过细胞凋亡发挥神经细胞的损伤作用。 展开更多
关键词 脑室周围白质软化 TOLL样受体4 细胞凋亡 缺氧缺血
高效液相色谱-串联质谱方法测定血清中氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰、文拉法辛及O-去甲文拉法辛浓度
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作者 郭庆合 任方龙 《中国医院药学杂志》 CAS 北大核心 2019年第13期1347-1352,共6页
目的:建立人血清中氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰、文拉法辛及O-去甲文拉法辛浓度同时测定的LC-MS/MS方法,实现临床样本的血药浓度监测。方法:以去甲基氨磺必利和D,L-N,N-二去甲文拉法辛为内标,甲醇-乙腈溶剂沉淀蛋白;使用ES So... 目的:建立人血清中氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰、文拉法辛及O-去甲文拉法辛浓度同时测定的LC-MS/MS方法,实现临床样本的血药浓度监测。方法:以去甲基氨磺必利和D,L-N,N-二去甲文拉法辛为内标,甲醇-乙腈溶剂沉淀蛋白;使用ES Sonoma C18(2)色谱柱(50 mm×2.1 mm,3μm)以甲醇和6 mmol·L^-1乙酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱;使用三重四级杆进行检测,采用电喷雾的离子源,在正离子模式下以MRM的扫描模式进行定量分析。结果:方法经验证,空白基质的干扰小,注射完高浓度样品后在空白样品中的残留符合要求,高浓度样品可以稀释2倍后进行分析,基质因子变异系数RSD小于15%,处理后的样品12 h内分析稳定、未处理样本4℃冰箱存放1周稳定,氨磺必利在15.53~497.00 ng·mL^-1、舒必利在18.03~577.00 ng·mL^-1、米那普仑在7.91~253.05 ng·mL^-1、西酞普兰在9.71~310.62 ng·mL^-1、文拉法辛在8.62~275.83 ng·mL^-1、O-去甲文拉法辛在9.19~293.92 ng·mL^-1范围内均具有良好的线性关系(R2>0.99),方法的准确度高、精密度好。结论:该方法的样本处理简单,样本分析时间短,可以实现大量临床样本的快速分析,已成功应用于临床服用氨磺必利、舒必利、米那普仑、西酞普兰或文拉法辛的患者的血药浓度监测。 展开更多
关键词 氨磺必利 舒必利 米那普仑 西酞普兰 文拉法辛 高效液相-串联质谱 血药浓度监测
T淋巴细胞对高脂饮食引起的肠道炎症的影响 预览
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作者 余璐 刘世博 +1 位作者 董莉君 王辉(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期534-538,共5页
目的:探讨T淋巴细胞在高脂饮食导致的肠道炎症中所起的作用。方法:采用了T淋巴细胞缺失(CD3ε敲除)的小鼠模型,C57BL/6J野生型小鼠作对照,高脂喂养16周。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠组织中的炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染... 目的:探讨T淋巴细胞在高脂饮食导致的肠道炎症中所起的作用。方法:采用了T淋巴细胞缺失(CD3ε敲除)的小鼠模型,C57BL/6J野生型小鼠作对照,高脂喂养16周。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠组织中的炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染色直接观察肠道形态,检测肠道肌层厚度,同时通过免疫组织化学技术(IHC)观察肠道组织中免疫细胞的浸润情况。结果:高脂饮食饲喂小鼠16周后,小鼠体重明显增加。qRT-PCR检测显示,与正常饮食的野生型小鼠组相比,高脂饮食的野生型小鼠结肠组织中IL-1β(P<0.01)、IL-5(P<0.05)、TNF-α(P<0.05)、IFN-γ(P<0.05)以及IL-6(P<0.05)表达水平明显上调;HE染色显示高脂饮食组结肠肌层明显变薄,同时免疫组化的结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润增强。以高脂饮食野生型小鼠为对照,高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠的结肠组织中IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.05)、IFN-γ(P<0.05)、IL-5(P<0.05)以及TNF-α(P<0.01)基因水平下调;HE染色显示高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠结肠肌层增厚,同时免疫组化结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润减少。结论:T淋巴细胞对高脂饮食导致的肠道炎症有促进作用。 展开更多
关键词 高脂饮食 肥胖 肠道 炎症 CD3ε T淋巴细胞
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IFI16在HTLV-1阳性T细胞中对病毒蛋白和促炎因子表达的影响
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作者 崔钰晗 关宇鹤 +7 位作者 刘月 张葛 陈凡 陈蒙蒙 孙静靓 任晓文 杨波 王洁 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期668-673,共6页
目的探讨DNA识别受体干扰素诱导蛋白16(IFI16)在成人T淋巴细胞白血病1型病毒(HTLV-1)阳性T细胞中对HTLV-1病毒蛋白和促炎因子表达的影响。方法在不同的HTLV-1阳性T细胞系中,采用免疫印迹试验检测IFI16在HTLV-1阳性T细胞中的表达变化;构... 目的探讨DNA识别受体干扰素诱导蛋白16(IFI16)在成人T淋巴细胞白血病1型病毒(HTLV-1)阳性T细胞中对HTLV-1病毒蛋白和促炎因子表达的影响。方法在不同的HTLV-1阳性T细胞系中,采用免疫印迹试验检测IFI16在HTLV-1阳性T细胞中的表达变化;构建IFI16基因沉默siRNA并用免疫印迹检测其IFI16敲低表达的效率;用siRNA在HTLV-1阳性T细胞系中敲低IFI16表达后,通过real-time PCR和采用免疫印迹分别检测HTLV-1病毒蛋白Tax在mRNA和蛋白质水平上的表达量;并通过real-time PCR检测干扰素(IFN)-α、IFN-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和HTLV-1病毒基因Tax以及Env的表达量。结果与HTLV-1病毒阴性T细胞Jurkat相比,IFI16在HTLV-1阳性T细胞MT2、MT4以及C8166中表达均增高;在MT2和MT4细胞中用siRNA敲低IFI16表达后,HTLV-1病毒蛋白Tax表达量上升,IFN-α、IFN-γ以及TNF-α的表达量下降。结论在HTLV-1病毒稳定感染的MT2和MT4细胞中,IFI16表达量上升,从而促进干扰素和促炎因子的产生,进而抑制HTLV-1病毒蛋白的表达。 展开更多
关键词 IFI16 成人T淋巴细胞白血病病毒1型 干扰素 T淋巴细胞 肿瘤坏死因子-α
cGAS识别HTLV-1反转中间体并诱导STING依赖性的固有免疫应答 被引量:1
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作者 刘月 崔钰晗 +5 位作者 宋迪 关宇鹤 陈凡 陈蒙蒙 杨波 王洁 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期168-173,共6页
目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染过程中对病毒反转中间体的识别以及诱导的下游信号通路。方法将生物素标记的HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫共沉淀试验检... 目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)在成人T淋巴细胞白血病病毒1型(HTLV-1)感染过程中对病毒反转中间体的识别以及诱导的下游信号通路。方法将生物素标记的HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫共沉淀试验检测cGAS与ssDNA90的相互作用;将HeLa细胞与HTLV-1阳性细胞系MT2共培养,采用免疫共沉淀的方法检测cGAS与干扰素基因刺激蛋白(STING)的相互作用;采用siRNA的方法在HeLa细胞中敲减STING,24 h后再转染入cGAS表达质粒,24 h后与MT2细胞共培养24 h,real-time PCR实验检测HeLa细胞中干扰素(IFN)-β、调节活化正常T细胞表达和趋化因子(RANTES)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、HTLV-1病毒蛋白Tax、p19以及HBZ的表达,免疫印迹检测HeLa细胞中干扰素调节因子3(IRF3)和p65的磷酸化水平。结果cGAS与ssDNA90存在相互作用;cGAS与STING存在相互作用,且作用部位在胞质中;在敲减STING的HeLa细胞中,cGAS过表达对IFN-β、RANTES和TNF-α的表达量无明显影响,对HTLV-1病毒蛋白Tax、p19和HBZ的表达量无明显影响,对IRF3和p65的磷酸化水平无明显影响。结论cGAS可结合HTLV-1的反转中间体ssDNA90并通过STING激活固有免疫应答。 展开更多
关键词 环鸟苷酸-腺苷酸合成酶 成人T淋巴细胞白血病病毒1型 干扰素基因刺激蛋白 DNA识别受体 反转中间体
三磷腺苷合酶抑制因子1基因敲除对小鼠巨噬细胞线粒体功能和三磷腺苷水平的影响 预览
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作者 于晓晴 钟根深 +4 位作者 熊熙文 梁银明 王辉 章小英 叶建平 《新乡医学院学报》 CAS 2019年第6期501-505,共5页
目的探讨三磷腺苷合酶抑制因子1(ATPIF1)基因敲除对小鼠巨噬细胞内三磷腺苷(ATP)水平及线粒体功能的影响。方法选取5只野生型C57BL/6小鼠为WT组,5只ATPIF1基因敲除小鼠为KO组。处死小鼠后,提取小鼠骨髓细胞进行培养,并诱导其分化成熟为... 目的探讨三磷腺苷合酶抑制因子1(ATPIF1)基因敲除对小鼠巨噬细胞内三磷腺苷(ATP)水平及线粒体功能的影响。方法选取5只野生型C57BL/6小鼠为WT组,5只ATPIF1基因敲除小鼠为KO组。处死小鼠后,提取小鼠骨髓细胞进行培养,并诱导其分化成熟为骨髓来源巨噬细胞(BMDM)。在未加脂多糖(LPS)的基础状态及LPS刺激2、4h后收集细胞,应用ATP检测试剂盒检测细胞内ATP水平,应用细胞能量代谢分析仪检测细胞氧消耗率,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内三羧酸循环中关键酶丙酮酸激酶(PKm)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、柠檬酸合酶(CS)、α-酮戊二酸脱氢酶(OGDC)mRNA相对表达量。结果与WT组比较,在基础状态下KO组小鼠BMDM内ATP水平、基础氧耗量、用于ATP合成的氧耗量、最大氧耗量及PKm、IDH、CS、OGDCmRNA相对表达量显著增加(P<0.05,P<0.01);LPS刺激2、4h后,KO组小鼠BMDM内ATP水平、基础氧耗量、用于ATP合成的氧耗量和最大氧耗量及CS、OGDCmRNA相对表达量均显著增加(P<0.05)。结论ATPIF1基因敲除可增加小鼠BMDM内ATP水平,并提高三羧酸循环相关酶mRNA表达和线粒体氧化磷酸化水平。 展开更多
关键词 ATP合酶抑制因子1 巨噬细胞 线粒体 三羧酸循环 氧耗量
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多巴胺D2受体基因敲除导致体重减轻以及棕色脂肪PRDM16、UCP1、FAS和ACC的表达变化
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作者 张毅敏 连辉 +2 位作者 付升旗 宋海岩 毛康 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第3期278-281,286共5页
目的以多巴胺D2受体基因敲除(D2KO)小鼠为动物模型,研究D2KO小鼠体重减轻后,棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)重量,白色脂肪重量,BAT中含PR结构域蛋白16(PRD1-BF1-RIZ1 homologous domain containing 16,PRDM16)、解偶联蛋白1(un... 目的以多巴胺D2受体基因敲除(D2KO)小鼠为动物模型,研究D2KO小鼠体重减轻后,棕色脂肪组织(brown adipose tissue,BAT)重量,白色脂肪重量,BAT中含PR结构域蛋白16(PRD1-BF1-RIZ1 homologous domain containing 16,PRDM16)、解偶联蛋白1(uncoupling protein 1,UCP1)、脂肪酸合酶(fatty acid synthase,FAS)以及乙酰辅酶A羧化酶(acetyl Coenzyme A carboxylase,ACC)的mRNA和蛋白表达变化,以期为肥胖机制研究提供线索。方法 8周龄野生型小鼠组(wild type,WT)和D2KO小鼠组各10只。分别称量各小鼠体重及其白色脂肪、棕色脂肪重量。Real-time quantitative RT-PCR方法检测棕色脂肪中PRDM16、UCP1、FAS、ACC的m RNA表达水平,Western blotting方法检测棕色脂肪中PRDM16、UCP1、FAS、ACC的蛋白表达水平。结果 WT组动物体重为(23.78±0.54)g,D2KO组动物体重为(20.54±1.15)g,P<0.05。WT组动物附睾脂肪(epididymal adipose tissue,eAT)重量为(1.083±0.02)g,D2KO组动物e AT重量为(0.978±0.03)g,P<0.05。WT组动物皮下脂肪(subcutaneous adipose tissue,sAT)重量为(1.85±0.05)g,D2KO组动物sAT重量为(1.72±0.03)g,P<0.05。WT组动物BAT重量为(31.38±4.22)mg,D2KO组动物BAT重量为(42.44±2.47)mg,P<0.05。半定量PCR与Western blotting检测结果显示,相对于WT组,D2KO组小鼠棕色脂肪中PRDM16、FAS、ACC的mRNA与蛋白的表达均显著增加,UCP1的mRNA与蛋白表达显著减少。结论 D2KO小鼠的体重减轻与棕色脂肪中的PRDM16、UCP1、FAS以及ACC存在一定关联。 展开更多
关键词 D2受体敲除 体重减轻 棕色脂肪
不同方向内含子对重组CHO细胞中神经生长因子表达的影响(英文)
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作者 董卫华 李翠萍 +2 位作者 杨赟 王天云 王芳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1071-1078,共8页
为了研究不同方向的嵌合体内含子对重组神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)基因表达的影响,以人β-珠蛋白第一内含子5’端剪接序列和人免疫球蛋白重链可变区内含子3’端剪接序列组合而成的嵌合体内含子作为研究对象,在NGF基因5’端... 为了研究不同方向的嵌合体内含子对重组神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)基因表达的影响,以人β-珠蛋白第一内含子5’端剪接序列和人免疫球蛋白重链可变区内含子3’端剪接序列组合而成的嵌合体内含子作为研究对象,在NGF基因5’端插入不同方向的嵌合体内含子,构建含不同方向内含子的NGF基因表达载体。转染至CHO细胞后,G418筛选稳定转染的细胞,荧光定量PCR、ELISA和Western blotting检测不同载体NGF基因的表达情况。结果显示内含子可以大幅度提高NGF基因的表达,且正向内含子对NGF基因表达的增强作用无论是在mRNA水平还是在蛋白水平都要高于反向内含子。所以内含子能够提高外源NGF基因的表达,且内含子调控转基因表达具有方向性。 展开更多
关键词 CHO细胞 基因表达 内含子 神经生长因子
4℃保存全血对血小板形态及功能的影响 预览
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作者 刘奂弟 李莎 +5 位作者 代雪霞 李冬晨 何思贤 郭帅锋 王藏雪 牛玉娜 《新乡医学院学报》 CAS 2019年第9期837-841,共5页
目的探讨全血保存温度对血小板(PLT)形态及功能的影响。方法选择30名健康志愿者为研究对象,采集空腹肘静脉血于含乙二胺四乙酸二钾抗凝剂的真空管,充分抗凝,采血即刻(对照组)及4℃(4℃组)、室温保存(室温组)4、8、24h制备血涂片,进行瑞... 目的探讨全血保存温度对血小板(PLT)形态及功能的影响。方法选择30名健康志愿者为研究对象,采集空腹肘静脉血于含乙二胺四乙酸二钾抗凝剂的真空管,充分抗凝,采血即刻(对照组)及4℃(4℃组)、室温保存(室温组)4、8、24h制备血涂片,进行瑞氏-姬姆萨复合染色液染色,显微镜下观察血小板的形态、结构;并使用血细胞分析仪检测对照组及4℃组、室温组4、8、24h的PLT数量、大血小板比例(P-LCR)、平均血小板体积(MPV)和血小板分布宽度(PDW);流式细胞术检测对照组及4℃组、室温组4、24hPLT表面活化标志物CD62P的表达;全波长扫描式多功能读数仪检测对照组及4℃组、室温组4、24hPLT内Ca^2+浓度。结果随着保存时间的延长,4℃组和室温组PLT体积增大,且室温组PLT体积增大更加明显,并出现空泡现象,PLT结构较疏松。与对照组比较,室温组和4℃组保存4、8、24h的P-LCR、MPV、PDW均显著增加(P<0.05)。室温组保存4、8、24h的P-LCR、MPV和PDW两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。4℃组保存8、24h的P-LCR和MPV与4h比较显著增大(P<0.05);4℃组保存24h的P-LCR和MPV与8h时比较差异无统计学意义(P>0.05)。4℃组保存4、8h的PDW比较差异无统计学意义(P>0.05),保存24h的PDW与4、8h时比较显著增大(P<0.05)。与室温组相同时间点比较,4℃组保存4、8h的P-LCR、MPV和PDW显著降低(P<0.05)。4℃组与室温组保存24h的P-LCR、MPV和PDW比较差异无统计学意义(P>0.05)。对照组、室温保存4、8、24h组和4℃保存4、8、24h组各组之间的PLT计数两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,室温组保存4、24h及4℃组保存4、24h的血小板表面CD62P表达水平均显著升高(P<0.05)。与室温组同时间点比较,4℃组保存4、24h的血小板表面CD62P表达水平显著降低(P<0.05)。室温组保存24h时的血小板表面CD62P表达水平与4h时比较差异无统计学意义(P>0.05)。4℃� 展开更多
关键词 血小板形态 血小板体积 血小板活化功能 血小板释放功能
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人血清中拉莫三嗪浓度快速测定的高效液相色谱法 预览
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作者 李悦 贺志安 +2 位作者 任方龙 马淑君 任明芬 《新乡医学院学报》 CAS 2018年第10期865-868,共4页
目的建立简便快速测定人血清中拉莫三嗪(LTG)浓度的高效液相色谱法(HPLC)。方法采用甲醇和乙酸铅沉淀蛋白法处理LTG血清样本,以苯代三聚氰胺为内标,波长为207 nm的二极管阵列检测器检测LTG的响应度,采用ES Industries Sonoma C18(... 目的建立简便快速测定人血清中拉莫三嗪(LTG)浓度的高效液相色谱法(HPLC)。方法采用甲醇和乙酸铅沉淀蛋白法处理LTG血清样本,以苯代三聚氰胺为内标,波长为207 nm的二极管阵列检测器检测LTG的响应度,采用ES Industries Sonoma C18(2)色谱柱(50.0 mm×2.1 mm,3μm)分离化合物,流动相A相为超纯水,B相为纯甲醇,体积分数20%甲醇洗脱,流速为0.6 mL·min^-1,进样量20μL,柱温40℃,建立检测LTG最适的液相条件及预处理方法,并依据《中国药典》2015年版通则中"生物样品定量分析方法验证指导原则"对所建方法的选择性、标准曲线、精密度与准确度、残留及稳定性进行验证。结果 LTG在1.18-37.75 mg·L^-1范围内线性关系良好(r=0.999),在定量下限(1.18 mg·L^-1)、低浓度(2.36 mg·L^-1)、中浓度(18.88 mg·L^-1)、高浓度(28.31 mg·L^-1)LTG的批内与批间精密度的相对标准偏差均小于13.2%,准确度符合要求。经甲醇和乙酸铅沉淀蛋白法预处理过的LTG血清样本室温放置24 h后测定结果稳定,未经处理的血清样本于2-8℃冰箱存放1周后测定结果稳定。结论建立了分析速度快、操作简便、选择性好、灵敏度高、符合生物样品分析要求的测定LTG临床血药浓度的HPLC分析方法。 展开更多
关键词 高效液相色谱法 拉莫三嗪 血药浓度监测
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HMGB1及TLR4与Ⅱ型糖尿病及肥胖症的相关性研究 预览
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作者 刘帅 王献春 +3 位作者 杨灿 刘国燕 丁宇 宋向凤 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第7期1044-1049,共6页
目的:检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及Toll样受体-4(TLR4)在Ⅱ型糖尿病(T2DM)和肥胖症(OB)患者体内的表达水平,分析HMGB1及TLR4与T2DM和OB的相关性。方法:选取2017年1月至8月内分泌科住院的患者以及同期健康体检中心体检人员... 目的:检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及Toll样受体-4(TLR4)在Ⅱ型糖尿病(T2DM)和肥胖症(OB)患者体内的表达水平,分析HMGB1及TLR4与T2DM和OB的相关性。方法:选取2017年1月至8月内分泌科住院的患者以及同期健康体检中心体检人员共80例为研究对象,根据T2DM诊断标准和口服葡萄糖耐量试验(OGTT)判断标准以及OB诊断标准,将研究对象分为T2DM-OB组、T2DM-非肥胖(NOB)组、正常糖耐量(NGT)-OB组、NGT-NOB组,共4组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清中HMGB1的浓度,同时运用实时定量聚合酶链反应(q PCR)技术检测外周血单个核细胞TLR4mRNA的表达水平,利用日立7600-020全自动生化分析仪检测相关生化指标浓度,所有数据运用统计学方法分析。结果:T2DM-OB组HMGB1浓度高于T2DM-NOB组(P〈0.05);NGT-OB组HMGB1浓度高于NGT-NOB组(P〈0.05);T2DM-OB组HMGB1浓度明显高于NGT-OB组(P〈0.001);T2DM-NOB组HMGB1浓度明显高于NGT-NOB组(P〈0.001)。T2DM-OB组TLR4表达水平明显高于T2DM-NOB组(P〈0.001);NGT-OB组TLR4表达水平明显高于NGT-NOB组(P〈0.001);T2DM-OB组TLR4表达水平明显高于NGT-OB组(P〈0.001);T2DM-NOB组TLR4表达水平明显高于NGT-NOB组(P〈0.001)。相关性分析结果显示,HMGB1和TLR4、TG、FPG、体重指数(BMI)均呈正相关(P值均〈0.001);HMGB1和HDL呈负相关(P〈0.05)。通过回归分析显示,FPG和TG两指标对HMGB1有预测作用(P〈0.05)。结论:T2DM及OB体内HMGB1、TLR4的表达水平明显增高,并且HMGB1水平与糖脂代谢紊乱存在相关性,HMGB1与TLR4结合后通过相应的途径参与T2DM及OB的病理生理发展过程。 展开更多
关键词 肥胖 Ⅱ型糖尿病 TOLL样受体4 高迁移率族蛋白B1
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帕尼单抗中二硫键异构体的鉴定及生物活性分析
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作者 杨赟 郭睿 +6 位作者 黄娟 柳鹏 张子恒 张朋飞 王帆 吕新彦 刘友勋 《中国药学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第5期335-339,共5页
目的 帕尼单抗是一种Ig G2亚类抗体,已用于转移性结肠癌的临床治疗。然而尚没有研究对帕尼单抗中二硫键异构体的构成和活性进行分析鉴定。本实验将建立对帕尼单抗二硫键异构体鉴定并富集的方法,进一步分析异构体间的生物学活性差异。方... 目的 帕尼单抗是一种Ig G2亚类抗体,已用于转移性结肠癌的临床治疗。然而尚没有研究对帕尼单抗中二硫键异构体的构成和活性进行分析鉴定。本实验将建立对帕尼单抗二硫键异构体鉴定并富集的方法,进一步分析异构体间的生物学活性差异。方法 利用反相色谱分析帕尼单抗中二硫键异构体的构成;通过氧化还原处理富集A型和B型,并利用分子筛色谱对分离得到的异构体进行分析鉴定;进一步利用细胞杀伤实验对异构体的生物学活性进行评估。结果 反相色谱结果表明,帕尼单抗中A型、B型和A/B型比例分别为38%、32%及30%;分子筛色谱结果显示A型的分子半径较之B型更大;细胞杀伤实验表明帕尼单抗的A型具有较B型更强的抑制肿瘤生长效能。结论 本实验建立了对帕尼单抗二硫键异构体进行鉴定、富集及分析的方法,有助于进一步增进对Ig G2亚类二硫键异构体结构和功能的理解,为Ig G2亚类治疗性抗体的生产工艺优化和质量控制提供有益参考。 展开更多
关键词 IG G2亚类抗体 帕尼单抗 二硫键异构体 生物学活性
Ku70对HTLV-1阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响 预览
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作者 宋迪 马玲玲 +5 位作者 郭志祥 刘月 崔钰晗 关宇鹤 杨波 王洁 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2018年第12期2261-2266,共6页
目的:探讨Ku70对人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响。方法:Western blot实验检测不同的HTLV-1阳性T细胞系中Ku70的表达水平;构建Ku70基因沉默siRNA并通过Western blot实验检测其敲减Ku70表达的效率;采用si... 目的:探讨Ku70对人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响。方法:Western blot实验检测不同的HTLV-1阳性T细胞系中Ku70的表达水平;构建Ku70基因沉默siRNA并通过Western blot实验检测其敲减Ku70表达的效率;采用siRNA在HTLV-1阳性的T细胞中敲减Ku70表达后,通过real-time PCR和Western blot实验分别检测HTLV-1病毒蛋白在mRNA和蛋白水平上的表达量,并通过real-time PCR实验检测干扰素和促炎因子的表达量。结果:HTLV-1阳性T细胞系MT2、MT4及C8166中的Ku70均呈高表达;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中的HTLV-1病毒蛋白表达量上升;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中干扰素α、干扰素γ及肿瘤坏死因子α的表达下降。结论:Ku70在HTLV-1阳性T细胞中高表达;在HTLV-1阳性T细胞中,Ku70促进干扰素和促炎因子的表达,抑制HTLV-1病毒蛋白的表达。 展开更多
关键词 Ku70蛋白 人嗜T淋巴细胞病毒1 干扰素 肿瘤坏死因子Α
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p11对神经细胞自噬的影响及其作用机制
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作者 冯来鹏 郭继强 +2 位作者 杨婷婷 沈颖 王辉 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第1期82-88,共7页
该研究主要探讨p11(又称为S100A10)蛋白质对神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)和小鼠海马细胞自噬的影响及其作用机制。该文利用p11过表达质粒pcDNA3.0-p11和p11基因敲低质粒Si-p11分别转染至SH-SY5Y内,24 h后提取其蛋白质和总RNA测其自... 该研究主要探讨p11(又称为S100A10)蛋白质对神经母细胞瘤细胞系(SH-SY5Y)和小鼠海马细胞自噬的影响及其作用机制。该文利用p11过表达质粒pcDNA3.0-p11和p11基因敲低质粒Si-p11分别转染至SH-SY5Y内,24 h后提取其蛋白质和总RNA测其自噬相关基因的mRNA和蛋白质水平;利用C57BL/6J小鼠腹腔注射丙咪嗪,来上调小鼠海马p11的表达水平,然后提取其海马组织的蛋白质和总RNA测其自噬相关基因的表达情况。该研究结果显示,p11基因过表达对神经细胞自噬发挥下调作用,p11敲低后对自噬发挥上调作用;p11基因敲除小鼠的海马细胞的自噬是上调的,海马细胞p11高表达后自噬是下调的。因此认为,p11对于神经细胞自噬有可能发挥下调作用。 展开更多
关键词 基因敲低 转染 基因敲除 丙咪嗪 C57BL/6J
三磷腺苷合酶抑制因子1基因敲除对小鼠成纤维细胞中三磷腺苷水平及脂肪细胞分化的影响 预览 被引量:1
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作者 关丫丫 梁银明 +1 位作者 王辉 叶建平 《新乡医学院学报》 CAS 2018年第8期658-661,共4页
目的探讨三磷腺苷合酶抑制因子1(ATPIF1)基因敲除对小鼠成纤维细胞中三磷腺苷(ATP)水平及脂肪细胞分化的影响。方法取5只ATPIF1基因敲除小鼠作为观察组,另取5只C57BL/6小鼠作为对照组。取各组小鼠耳组织,采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白... 目的探讨三磷腺苷合酶抑制因子1(ATPIF1)基因敲除对小鼠成纤维细胞中三磷腺苷(ATP)水平及脂肪细胞分化的影响。方法取5只ATPIF1基因敲除小鼠作为观察组,另取5只C57BL/6小鼠作为对照组。取各组小鼠耳组织,采用Ⅰ型胶原酶和中性蛋白酶Ⅱ的消化作用制备成纤维细胞并用高糖培养基培养,传代1~2次后,待细胞长满且接触抑制3 d后,更换含白色脂肪细胞诱导剂Ⅰ的细胞培养基诱导4 d,再更换含白色脂肪细胞诱导剂Ⅱ的细胞培养基诱导4 d。在诱导前及诱导4、8 d分别采用ATP检测试剂盒和三酰甘油(TG)检测试剂盒检测成纤维细胞中ATP和TG水平。结果诱导前,对照组小鼠原代成纤维细胞中ATP水平明显低于观察组(P〈0.05);诱导4、8 d,对照组与观察组小鼠原代成纤维细胞中ATP水平比较差异无统计学意义(P〉0.05)。诱导4、8 d,对照组小鼠原代成纤维细胞中TG水平低于观察组(P〈0.05)。结论 ATPIF1基因敲除可增加小鼠成纤维细胞中ATP水平,促进成纤维细胞向白色脂肪细胞分化,提高成熟白色脂肪细胞储存TG的能力。 展开更多
关键词 ATP合酶抑制因子1 脂肪细胞分化 三磷腺苷 三酰甘油
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大肠杆菌肠毒素基因突变体在乳酸菌中的表达与免疫学鉴定 被引量:1
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作者 王琛 尹光辉 +3 位作者 余飞燕 李健 张荣光 段广才 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第5期513-515,519共4页
目的构建表达大肠杆菌肠毒素基因突变体mlt63的乳酸菌工程菌株,为黏膜免疫佐剂研究建立重要基础。方法从前期构建的质粒p BV-mlt63中经PCR扩增mlt63基因,经双酶切将mlt63与质粒载体p NZ8110连接。用连接产物转化大肠杆菌MC1061菌株,从... 目的构建表达大肠杆菌肠毒素基因突变体mlt63的乳酸菌工程菌株,为黏膜免疫佐剂研究建立重要基础。方法从前期构建的质粒p BV-mlt63中经PCR扩增mlt63基因,经双酶切将mlt63与质粒载体p NZ8110连接。用连接产物转化大肠杆菌MC1061菌株,从重组菌株中提取p NZ8110-mlt63,用于电转化Lactococcus lactis NZ3900菌株;经质粒双酶切和测序,鉴定重组菌株L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63。采用nisin诱导重组乳酸菌表达m LT63,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果 mlt63 PCR扩增产物长度与预期相符;重组菌株鉴定结果显示L.lactis NZ3900/p NZ8110-mlt63构建正确;Western blot分析在重组菌株中检出2条mlt63表达的蛋白带,分子量分别为10 k D和40 k D。结论本研究首次将mlt63基因克隆至乳酸乳球菌中,并表达出具有抗原活性的蛋白,鉴于目前亟需安全有效的黏膜免疫佐剂,本研究发现将对该领域研究产生重要影响,对胃肠感染性疾病口服疫苗研究具有促进作用。 展开更多
关键词 乳酸乳球菌 大肠杆菌 肠毒素 基因重组 免疫佐剂
低氧诱导因子对缺氧缺糖诱导的心肌细胞损伤模型中自噬的调控作用 被引量:1
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作者 宋海岩 连辉 +1 位作者 张毅敏 付升旗 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第4期419-422,共4页
目的探讨在缺血缺氧模型中低氧诱导因子(HIF-1α)对自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的影响及其对自噬的调节作用。方法建立缺血缺氧细胞模型,利用western blot检测HIF-1αsi RNA的干预效果;利用CCK-8实验检测HIF-1αsi RNA对心肌细胞... 目的探讨在缺血缺氧模型中低氧诱导因子(HIF-1α)对自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的影响及其对自噬的调节作用。方法建立缺血缺氧细胞模型,利用western blot检测HIF-1αsi RNA的干预效果;利用CCK-8实验检测HIF-1αsi RNA对心肌细胞活性的影响;利用RT-q PCR与western blot检测HIF-1αsi RNA对自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的影响。结果 Western blot结果显示HIF-1αsi RNA可有效敲低模型心肌细胞中HIF-1α的表达;CCK-8实验结果显示,HIF-1αsi RNA可降低缺血缺氧细胞模型中心肌细胞的活性;RT-q PCR与western blot结果均提示HIF-1αsi RNA可降低模型细胞中自噬相关基因Beclin1,LC3I,LC3II的表达,降低LC3II/LC3I的比率。结论 HIF-1αsi RNA敲低缺血缺氧细胞模型中的HIF-1α表达后,导致心肌细胞的活性进一步降低,细胞中Beclin1表达降低,LC3II/LC3I的比率降低,HIF-1α正调控缺血缺氧诱导的自噬而发挥心肌保护作用。 展开更多
关键词 缺血 缺氧 自噬 低氧诱导因子 心肌损伤
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