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Ag/TiO2纳米材料对烟曲霉的抑制作用及机制
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作者 马一禾 肖小军 +2 位作者 欧阳春艳 陈仕国 刘志刚 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2019年第3期280-284,共5页
目的合成Ag/TiO2纳米材料,对其进行表征测定,并探讨其对烟曲霉的抑制作用及具体机制。方法采用光催化还原法制备Ag/TiO2纳米材料,紫外可见分析和扫描电镜对其进行表征测定;微量液基稀释法检测对烟曲霉的最低抑菌浓度(MIC),以及生物量的... 目的合成Ag/TiO2纳米材料,对其进行表征测定,并探讨其对烟曲霉的抑制作用及具体机制。方法采用光催化还原法制备Ag/TiO2纳米材料,紫外可见分析和扫描电镜对其进行表征测定;微量液基稀释法检测对烟曲霉的最低抑菌浓度(MIC),以及生物量的抑制作用;ELISA试剂盒检测对真菌谷胱甘肽还原酶、总谷胱甘肽、线粒体膜电位的影响,荧光显微镜检测活性氧的产生。结果成功制备Ag/TiO2纳米材料,分布均匀;对烟曲霉的MIC值为0.5μg/mL,能完全抑制烟曲霉生物量,与单独纳米银相比,具有更好的抗菌活性。机制研究发现其主要通过降低烟曲霉体内谷胱甘肽及其还原酶的含量,诱导过量活性氧的产生,最终导致线粒体膜电位降低,使真菌细胞发生凋亡。结论 Ag/TiO2纳米材料可有效阻断烟曲霉等真菌在空气中的传播,具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 Ag/TiO2纳米材料 烟曲霉 表征测定 抗真菌作用 机制研究
小龙虾主要过敏原精氨酸激酶的表达、纯化及免疫原性鉴定
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作者 曹会 龚祥 +2 位作者 肖小军 刘志刚 陈同强 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第2期421-425,共5页
目的对纯化后的原核表达小龙虾主要过敏原蛋白精氨酸激酶进行免疫学鉴定。方法将化学合成的精氨酸激酶基因克隆至pET-28a(+)表达质粒上,转化进入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,使用异丙基硫代半乳糖苷进行目的蛋白的诱导表达,用Ni2+亲和层析... 目的对纯化后的原核表达小龙虾主要过敏原蛋白精氨酸激酶进行免疫学鉴定。方法将化学合成的精氨酸激酶基因克隆至pET-28a(+)表达质粒上,转化进入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,使用异丙基硫代半乳糖苷进行目的蛋白的诱导表达,用Ni2+亲和层析柱对重组过敏原蛋白进行纯化,使用小龙虾过敏病人混合血清对纯化后的蛋白进行免疫印迹鉴定。结果纯化得到了分子量大小约为40 kDa的重组小龙虾精氨酸激酶,并且重组蛋白与过敏病人血清IgE有明显的特异性结合。结论本实验建立了小龙虾精氨酸激酶的原核表达方法,并鉴定了其免疫原性,为小龙虾过敏的基础研究、临床诊断与治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 小龙虾 精氨酸激酶 重组蛋白 过敏原
纳升液相色谱-高分辨串联质谱研究不同分离方法对唾液外泌体蛋白质组的影响 预览
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作者 曾琼兰 吴利 +1 位作者 李水明 王勇 《分析化学》 CSCD 北大核心 2018年第9期1408-1414,共7页
外泌体是一系列胞外囊泡,是生物标志物的来源,但目前尚无灵敏高效的唾液外泌体蛋白质分离方法。本研究采用质谱方法比较唾液外泌体试剂盒(ExoQuick,EQ)方法和超高速离心(Ultracentrifugation,UC)方法分离外泌体的效果以及尿素缓冲液、R... 外泌体是一系列胞外囊泡,是生物标志物的来源,但目前尚无灵敏高效的唾液外泌体蛋白质分离方法。本研究采用质谱方法比较唾液外泌体试剂盒(ExoQuick,EQ)方法和超高速离心(Ultracentrifugation,UC)方法分离外泌体的效果以及尿素缓冲液、RIPA裂解液、SDS裂解液提取外泌体蛋白质的效果。Brodford法和BCA定量测定结果表明,EQ方法分离0.5mL唾液外泌体得到的蛋白质含量高于UC方法分离2mL唾液所得到的蛋白质。进一步的质谱分析表明,前者鉴定到的蛋白质数目亦多于后者;试剂盒分离唾液外泌体与尿素缓冲液提取外泌体蛋白质的方法联用效果最佳,鉴定到194种蛋白质。本方法重现性好、样品用量少、检测结果稳定,可为在唾液外泌体中筛选疾病的标志物提供方法学参考。 展开更多
关键词 纳升液相色谱-高分辨串联质谱 唾液外泌体 外泌体试剂盒 超高速离心法
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Ag/TiO2复合纳米材料对互隔交链孢霉的抗菌作用与机制 预览
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作者 马一禾 肖小军 +2 位作者 袁如意 陈仕国 刘志刚 《南昌大学学报:医学版》 CAS 2018年第5期12-16,共5页
目的合成Ag/TiO2复合纳米材料,探讨其对互隔交链孢霉抗真菌作用及机制。方法 采用光催化还原法制备Ag/TiO2复合纳米材料,并通过扫描电镜对其进行表征测定。通过微量液基稀释法检测Ag/TiO2复合纳米材料对互隔交链孢霉的最低抑菌质量浓度... 目的合成Ag/TiO2复合纳米材料,探讨其对互隔交链孢霉抗真菌作用及机制。方法 采用光催化还原法制备Ag/TiO2复合纳米材料,并通过扫描电镜对其进行表征测定。通过微量液基稀释法检测Ag/TiO2复合纳米材料对互隔交链孢霉的最低抑菌质量浓度,液体振荡培养检测其对真菌生物量的抑制作用,Elisa试剂盒以及荧光显微镜下检测其具体抗真菌作用机制。结果 Ag/TiO2复合纳米材料合成成功,电镜可观察到其分布均匀、大小均一。对互隔交链孢霉具有较强的杀灭作用,最低抑菌质量浓度为16μg·mL-1,且在该最低抑菌质量浓度下可对真菌生物量的抑制作用达到100%。主要通过降低真菌体内谷胱甘肽还原酶和还原型谷胱甘肽等抗氧化物质的含量,从而破坏真菌机体抗氧化防御系统,并诱导体内产生过量活性氧,同时伴随着线粒体膜电位的下降,导致真菌细胞的凋亡。结论 Ag/TiO2复合纳米材料对气传真菌孢子和菌丝在空气传播中的阻断作用具有重要意义。 展开更多
关键词 Ag/TiO2复合纳米材料 互隔交链孢霉 表征测定 抗真菌作用与机制
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部分土壤重金属可见-近红外反射光谱特征及机理研究 预览 被引量:1
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作者 程航 万远 +5 位作者 陈奕云 万其进 石铁柱 申锐莉 郭凯 胡佳蒙 《光谱学与光谱分析》 CSCD 北大核心 2018年第3期771-778,共8页
测量重金属化合物氯化铬(CrCl 3)、氯化铜(CuCl 2)、氯化锌(ZnCl 2)的可见-近红外反射光谱(VNIRS),将重金属反射光谱与重金属元素的核外电子排布式联系起来,观察重金属化合物的反射光谱特征;结合晶体场理论分析重金属的特征反射峰出现... 测量重金属化合物氯化铬(CrCl 3)、氯化铜(CuCl 2)、氯化锌(ZnCl 2)的可见-近红外反射光谱(VNIRS),将重金属反射光谱与重金属元素的核外电子排布式联系起来,观察重金属化合物的反射光谱特征;结合晶体场理论分析重金属的特征反射峰出现的波段位置和原因。以湖北大冶地区土壤样品为例,向土样中添加不同浓度梯度的CrCl 3,CuCl 2和ZnCl 2并测定其可见-近红外反射光谱,研究不同种类不同浓度的重金属对土壤反射光谱的影响。对样本的反射光谱进行不同光谱预处理,探究重金属浓度与土壤反射光谱之间的线性相关关系及显著相关(p<0.05)波段出现的位置和潜在机理。结果表明,重金属化合物CrCl 3,CuCl 2和ZnCl 2在可见光-短波近红外波段范围内的反射光谱特征与重金属元素3d轨道上的电子填充状态有关。添加入土壤中的重金属化合物影响了土壤的可见-近红外反射光谱,其浓度与土壤反射光谱之间整体呈负相关,最大负相关系数分别为-0.788,-0.880和-0.824。样品反射光谱经不同预处理后,重金属浓度与土壤反射光谱之间的线性相关关系有所变化,显著相关波段信息更加丰富。研究表明,重金属的可见-近红外反射光谱与重金属的电子结构紧密相关,可见-近红外反射光谱技术可以检测到土壤中较高浓度重金属的存在,该技术在快速高效、无损低耗地预测土壤重金属元素含量方面拥有巨大潜力。基于部分重金属化合物的可见-近红外反射光谱特征,结合晶体场理论为土壤重金属的定性和定量反射光谱分析提供了理论依据和实验参考。 展开更多
关键词 可见-近红外反射光谱 土壤重金属 预处理 晶体场理论 线性相关关系
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屋尘螨变应原Derp9基因的克隆表达、纯化及反应原性鉴定 预览
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作者 李平 黄娜娜 +4 位作者 常可欣 李诞 杨礼腾 刘志刚 刘晓宇 《南昌大学学报:医学版》 CAS 2018年第6期1-4,10共5页
目的克隆表达及纯化屋尘螨第九组变应原(Derp9)蛋白,并鉴定其反应原性。方法提取屋尘螨总RNA,通过RT-PCR克隆Der P9基因,并连接到pET-32a表达载体上,得到的重组质粒pET-32a-Derp9转化至E.ColiBL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG... 目的克隆表达及纯化屋尘螨第九组变应原(Derp9)蛋白,并鉴定其反应原性。方法提取屋尘螨总RNA,通过RT-PCR克隆Der P9基因,并连接到pET-32a表达载体上,得到的重组质粒pET-32a-Derp9转化至E.ColiBL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白;通过Western blotting等方法检测Derp9重组蛋白的反应原性。结果Derp9基因片段大小约为850bp,其基因片段与Gen Bank公布的Derp9基因(登录号为AAP57077.1)同源性为81.94%;重组Der p9在BL21(DE3)中可高效表达,分子质量约为47kDa,表达后的重组蛋白主要以包涵体的形式存在。Der p9重组蛋白与屋尘螨过敏患者血清呈阳性反应,具有反应原性。结论成功克隆并表达出Der p9,通过纯化获得较强反应原性的Derp9重组蛋白,为尘螨过敏性疾病诊断及免疫治疗奠定理论基础。 展开更多
关键词 屋尘螨 Derp9 表达 纯化 反应原性
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玉米油菜素甾醇生物合成关键酶基因ZmCYP90B1的克隆及其对逆境胁迫的响应 预览 被引量:1
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作者 段方猛 罗秋兰 +3 位作者 鲁雪莉 齐娜伟 刘宪舜 宋雯雯 《作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期343-356,共14页
油菜素甾醇作为一类重要植物激素,在植物生长发育和抵御逆境胁迫等过程中发挥重要作用。CYP90B1基因编码酶是其合成途径中关键限速酶。本研究针对迄今有关玉米CYP90B1基因应答逆境胁迫特征尚未见报道现状,采用RT-PCR结合RACE技术,从玉... 油菜素甾醇作为一类重要植物激素,在植物生长发育和抵御逆境胁迫等过程中发挥重要作用。CYP90B1基因编码酶是其合成途径中关键限速酶。本研究针对迄今有关玉米CYP90B1基因应答逆境胁迫特征尚未见报道现状,采用RT-PCR结合RACE技术,从玉米中克隆了油菜素甾醇生物合成关键基因ZmCYP90B1(GenBank登录号KY242373)。ZmCYP90B1全长2058 bp,开放阅读框为1518 bp,编码506个氨基酸。ZmCYP90B1蛋白预测分子量为57.66 kD,等电点为9.54,含有1个跨膜结构域及1个p450保守结构域。序列比对表明,ZmCYP90B1与其他物种CYP90B1蛋白高度相似,但在单双子叶植物中进化上具有明显差异。实时荧光定量PCR结果表明,非生物胁迫(干旱、高盐、低温和脱落酸)、虫害(甜菜夜蛾取食)和茉莉酸甲酯均诱导ZmCYP90B1表达,表明该基因响应多种非生物胁迫,参与植物对虫害和茉莉酸甲酯的响应。进一步构建过量表达ZmCYP90B1基因的烟草株系并检测表明该烟草株系抗旱性增强,叶片失水率下降,SPAD值增大。此外,干旱胁迫下转基因烟草超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)的活性以及游离脯氨酸(Pro)的积累量均显著高于野生型,丙二醛(MDA)和脱落酸(ABA)含量明显低于野生型。通过检测下游胁迫响应基因表达,表明ZmCYP90B1提高植物抗旱性可能不依赖ABA途径,而与其对抗氧化相关途径相关基因的转录调控有关。 展开更多
关键词 油菜素甾醇 ZmCYP90B1基因 实时荧光定量PCR 逆境胁迫
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粉尘螨组分在过敏性哮喘发生过程中的作用 被引量:3
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作者 王辉 刘晓宇 +1 位作者 李国平 刘志刚 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2018年第1期73-77,共5页
哮喘是一种临床上常见的慢性呼吸道疾病,其特点是病人气道反复阻塞和喘息,过敏性哮喘是其最常见的形式[1].据统计,全世界哮喘的发病率高达5%~16%,在美国全年用于哮喘的治疗费用超过了AIDS和肺结核治疗费用的总和[2].我国约有哮喘患者300... 哮喘是一种临床上常见的慢性呼吸道疾病,其特点是病人气道反复阻塞和喘息,过敏性哮喘是其最常见的形式[1].据统计,全世界哮喘的发病率高达5%~16%,在美国全年用于哮喘的治疗费用超过了AIDS和肺结核治疗费用的总和[2].我国约有哮喘患者3000万人,哮喘已经成为危害我国人民健康的重大疾病~([3,4]).在众多吸入性过敏原中,尘螨是诱发呼吸道过敏最重要的因素,约有80%左右的哮喘患者对尘螨敏感~([5,6]). 展开更多
关键词 过敏性哮喘 粉尘螨 发生过程 慢性呼吸道疾病 组分 AIDS 人民健康 发病率
屋尘螨3类变应原基因的克隆、表达及免疫原性分析 被引量:1
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作者 古霞 欧阳春艳 +3 位作者 袁如意 袁谢芳 李国平 刘志刚 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CSCD 北大核心 2018年第6期627-631,共5页
目的 克隆、表达屋尘螨3类变应原(Der p 3)基因,纯化Der p 3重组蛋白,对其免疫原性及生物信息学特点进行分析。 方法 取实验室纯培养的屋尘螨500只,提取总RNA,逆转录生成cDNA,RT-PCR扩增Der p 3基因。扩增的Der p 3基因经测序正确后,将... 目的 克隆、表达屋尘螨3类变应原(Der p 3)基因,纯化Der p 3重组蛋白,对其免疫原性及生物信息学特点进行分析。 方法 取实验室纯培养的屋尘螨500只,提取总RNA,逆转录生成cDNA,RT-PCR扩增Der p 3基因。扩增的Der p 3基因经测序正确后,将目的条带连接至pMD-32T载体中进行扩增,并利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,酶切后的片段连接至pET-32a表达载体,转化至大肠埃希菌Rosetta中,经1 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后,蛋白质印迹(Western boltting)分析重组蛋白的免疫原性。分别采用BLAST、ProtParam、PSIPRED、SWISS-MODEL对重组蛋白的同源性、理化性质、二级结构、三级结构进行分析;通过BLAST和MEGA构建Der p 3的系统进化树;并利用IEBD和DNA Star对Der p 3重组蛋白的抗原表位进行预测。 结果 RT-PCR扩增屋尘螨Der p 3基因,得到约1 000 bp的片段,经测序为Der p 3目的序列,其开放阅读框为786 bp,编码261个氨基酸。经IPTG诱导后大量表达Der p 3重组蛋白。该蛋白主要以包涵体形式存在,相对分子质量(Mr)约30 000。Western blotting分析结果显示,重组蛋白Der p 3能与10份尘螨过敏性哮喘患者血清IgE抗体特异性结合。BLAST和MEGA分析结果显示,Der p 3基因与粉尘螨3类变应原(Der f 3)的序列一致性较高,约80%。Der p 3蛋白较稳定,二级结构由螺旋、延伸链、随机线圈组成;并预测到6个抗原表位肽序列。 结论 纯化后的Der p 3重组蛋白能与尘螨过敏性哮喘患者血清IgE抗体特异性结合,具有较强免疫原性。 展开更多
关键词 屋尘螨 3类变应原 过敏原 生物信息学
小鼠颅骨视窗及其在光学活体脑成像研究中的应用 预览
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作者 万小芳 吴金波 +5 位作者 翟鹏 应明 周洁 王晓梅 屈军乐 许改霞 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2017年第12期1220-1231,共12页
小鼠颅骨视窗作为一种活体光学脑成像辅助工具,以其原位表征、实时观察、长期活体脑成像等优势,成为脑部疾病及神经元突触生长等研究的重要手段之一。小鼠颅骨视窗不仅可以对颅骨下软脑膜血管及血管内红细胞流速、流态变化进行定量分析... 小鼠颅骨视窗作为一种活体光学脑成像辅助工具,以其原位表征、实时观察、长期活体脑成像等优势,成为脑部疾病及神经元突触生长等研究的重要手段之一。小鼠颅骨视窗不仅可以对颅骨下软脑膜血管及血管内红细胞流速、流态变化进行定量分析,在结合荧光标记物与光学显微镜后,还可以对脑部皮层下组织、神经细胞的变化进行清晰成像。过去数十年,科研人员利用小鼠颅骨视窗深入研究了偏头痛、阿尔兹海默症、神经突触等病理生理过程,并取得了大量突破性进展。同时,随着光学成像工具性能的提升,小鼠颅骨视窗的应用也得到了进一步拓展。本文主要介绍颅骨视窗的发展史、构建方法,结合荧光探针及光学成像方法的研究,全面总结了近年来小鼠颅骨视窗在光学脑成像研究中的应用,包括脑内重要生物分子成像、细胞成像、血管及血流成像、神经环路可塑性及神经功能成像、疾病发生机理及药物开发研究等,最后讨论了小鼠颅骨视窗在实际应用中面临的问题,并对其未来应用进行了展望。 展开更多
关键词 颅骨视窗 活体脑成像 阿尔兹海默症 神经环路
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纳升液相色谱-质谱分析方法的重现性对尿液多肽组分析结果的影响 预览
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作者 王勇 吴利 +3 位作者 徐金玲 李水明 刘宁 姜亮 《分析化学》 CSCD 北大核心 2017年第10期1475-1481,共7页
多肽组学是蛋白质组学技术的延伸和扩展,在医学和生物学研究中的应用日益广泛,但是,多肽组鉴定方法的重现性对实验结果的影响目前尚不清楚。本研究利用纳升液相色谱-高分辨质谱对健康人的尿液多肽组进行了7次平行分析,考察图谱数目、图... 多肽组学是蛋白质组学技术的延伸和扩展,在医学和生物学研究中的应用日益广泛,但是,多肽组鉴定方法的重现性对实验结果的影响目前尚不清楚。本研究利用纳升液相色谱-高分辨质谱对健康人的尿液多肽组进行了7次平行分析,考察图谱数目、图谱利用率、鉴定的肽段数目、蛋白质数目、样品总离子强度和肽段保留时间等指标的变化,以揭示重复实验之间分析结果的可变性和稳定性。7次测定的肽段数目平均值为208,标准偏差为38;7次结果合并后,得到了归属于114个蛋白质的426个肽段,肽段和蛋白质数目均显著增加;而35个蛋白质的109个肽段在所有7次实验中均被检出,表明多肽组的单次分析结果既具有一定的随机性,又具有相对的稳定性。增加平行实验次数会扩大多肽组数据集,但测定3次以上后增加幅度减小。相比于肽段,多肽组的结果在蛋白质水平上更为稳定,提示利用蛋白质为多肽组的生物标志物更为稳健。 展开更多
关键词 多肽组 尿液 重现性 偶然误差
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深圳福田与香港米埔红树林群落分布与景观格局比较 预览 被引量:1
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作者 李真 李瑜 +1 位作者 昝启杰 余世孝 《中山大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2017年第5期12-19,共8页
改革开放前,地处深圳湾两岸的福田保护区和米埔保护区的红树林湿地在景观和物种组成等方面相似,但近30年来深圳城市化高速发展所带来福田红树林湿地的景观破碎化过程,导致两岸红树林群落特征产生了较为明显差异。以World View-2高分辨... 改革开放前,地处深圳湾两岸的福田保护区和米埔保护区的红树林湿地在景观和物种组成等方面相似,但近30年来深圳城市化高速发展所带来福田红树林湿地的景观破碎化过程,导致两岸红树林群落特征产生了较为明显差异。以World View-2高分辨率影像为数据源,采用导数光谱法结合基于面向对象的支持向量机的分类方法对深圳湾湿地的红树林群落进行分类,总体精度达到0.902,Kappa系数为0.859,符合要求。进一步运用景观指数对其进行定量对比分析。结果表明:(1)米埔保护区红树林现存面积为346 hm~2,福田保护区红树林现存面积仅为89 hm~2;秋茄群落是深圳湾两岸湿地的最主要优势景观类型,白骨壤群落和桐花树群落是优势群落;(2)福田保护区红树林的景观破碎化程度比米埔保护区高,尤其是本地种秋茄群落和白骨壤群落的破碎化程度较高;(3)福田保护区景观斑块形状多呈正方形分布的状态,在一定程度上反映了人类活动的作用,而处于米埔保护区的天然红树林则呈现不规则的分布状态。 展开更多
关键词 福田保护区 米埔保护区 红树林 导数光谱法 景观格局
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虾过敏原Troponin C(Pen m6)的克隆表达、免疫学鉴定及生物信息学分析
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作者 梁志林 孙宝清 +5 位作者 叶小英 郭丹 叶佩莹 孙雯阳 刘志刚 陈同强 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第4期1154-1159,共6页
目的对斑节对虾(Penaeus monodon)第6组过敏原(Pen m6),肌钙蛋白C(Troponin C)进行克隆表达、免疫学鉴定并研究其生物学意义。方法提取斑节对虾总RNA;根据Gen Bank:HM034316.1设计引物及构建表达载体PET-24a-Pen m6;转化至大肠杆... 目的对斑节对虾(Penaeus monodon)第6组过敏原(Pen m6),肌钙蛋白C(Troponin C)进行克隆表达、免疫学鉴定并研究其生物学意义。方法提取斑节对虾总RNA;根据Gen Bank:HM034316.1设计引物及构建表达载体PET-24a-Pen m6;转化至大肠杆菌BL21(DE3)进行表达;纯化后的重组Pen m6用Western bolt来鉴定免疫学特性;用生物信息学相关工具对Pen m6进行同源性分析,并预测其蛋白质的结构和功能。结果克隆出斑节对虾Pen m6基因开放阅读框453 bp,编码150个氨基酸。重组Pen m6蛋白呈可溶性,分子量约35kDa,能够与斑节对虾过敏患者血清IgE结合。斑节对虾与凡纳滨对虾亲缘关系比较近,其中斑节对虾Pen m6蛋白与凡纳滨对虾Troponin C1(gb|AET36896.1|)同源性为98%。理化性质预测Pen m6蛋白质不稳定。蛋白质结构预测结果显示Pen m6的结构主要以α螺旋组成。T细胞抗原表位预测得到4个肽序列(15-23、35-43、91-99、112-120)。B细胞抗原表位预测得到4个肽序列(7-16、21-30、28-37、58-67)。结论克隆的重组斑节对虾Pen m6蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究斑节对虾过敏原的结构成分及其理化性质奠定理论基础。 展开更多
关键词 斑节对虾 TROPONIN C(Pen m6) 原核表达 免疫学特性 生物信息学
花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体的制备与应用 被引量:3
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作者 陈献雄 邬玉兰 +2 位作者 吉琼梅 杨平常 刘志刚 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期68-72,共5页
目的 制备与鉴定抗花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体,建立双单抗ELISA法,检测食品中花生过敏原。方法 以花生主要过敏原Ara h1为抗原免疫Balb/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1。半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗... 目的 制备与鉴定抗花生主要过敏原Ara h1单克隆抗体,建立双单抗ELISA法,检测食品中花生过敏原。方法 以花生主要过敏原Ara h1为抗原免疫Balb/c小鼠,融合免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1。半固体培养基法结合有限稀释法筛选稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株后诱生小鼠腹水,采用蛋白A亲和层析法获得纯化抗体。利用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型。间接ELISA法和Western blot鉴定抗体效价和特异性以及与其他过敏源的交叉反应性。建立双单抗夹心ELISA法检测食品中的花生过敏原。结果 共获得抗Ara h1细胞株4株,分别命名为2G9、5G4、5B5、2C7,效价均高于1∶106。经抗体亚型鉴定,4株抗体均为Ig G1型。Western blot的结果表明4株抗体均能识别Ara h1,其中2G9与5G4结合能力较强。在特异性检测实验中,2G9和5G4与其他种类过敏原无交叉反应。通过建立双单克隆抗体夹心ELISA法,发现花生Ara h1蛋白的检出低限为:5 ng/ml,标准曲线在~80 ng/ml范围内线性良好。利用此法检测了10种食品,结果显示在5种含有花生成分的食品中均检测到了花生过敏原。结论 获得高效价抗体4株,建立了高效、高特异性的食品中花生过敏原的检测方法,为食品中花生过敏原的检测提供了依据。 展开更多
关键词 花生Ara h1蛋白 单克隆抗体 特性鉴定 过敏原检测
家蚕过敏原Profilin的表达、纯化、免疫学鉴定及其生物信息学分析 预览
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作者 胡维 梁志林 +2 位作者 王良录 钟慧玲 刘志刚 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期81-84,共4页
目的:克隆表达家蚕(Bombyx mori)Profilin蛋白,鉴定其免疫原性并进行B细胞抗原表位预测和构建分子进化树。方法:从NCBI上获取家蚕Profilin蛋白的基因序列,合成该基因并构建到pet-28a表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21,IPTG诱导... 目的:克隆表达家蚕(Bombyx mori)Profilin蛋白,鉴定其免疫原性并进行B细胞抗原表位预测和构建分子进化树。方法:从NCBI上获取家蚕Profilin蛋白的基因序列,合成该基因并构建到pet-28a表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21,IPTG诱导基因表达,通过亲和层析获取高纯度蛋白;用Western blot方法对重组蛋白进行过敏原性鉴定;通过DNAStar软件分析其潜在的B细胞抗原表位;应用MEGA5.05进行序列比对,并构建分子进化树。结果:成功表达出重组蛋白,且重组蛋白与家蚕过敏患者血清有一定的Ig E结合。结论:成功克隆表达出具有免疫原性的Profilin蛋白,并成功预测出其B细胞抗原表位和构建出分子进化树。 展开更多
关键词 家蚕 Profilin蛋白 过敏原
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蜂毒肽对成熟树突细胞诱导T细胞分化的免疫调节的影响 预览 被引量:1
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作者 熊浪平 贺守第 +5 位作者 关彤 莫丽华 杨平常 刘志刚 吉琼梅 黄胜光 《天然产物研究与开发》 CSCD 北大核心 2017年第11期1813-1817,共5页
通过蜂毒肽(Melittin,MT)干预脂多糖(LipopolyBcclwide,LPS)刺激树突细胞(DendriticCell,DC)与淋巴细胞共培养,以探究MT对TC1/TC2分化的影响。用MTS检测LPS、MT对DC与淋巴细胞共培养活性;流式细胞术检测MT对LPS刺激DC与淋巴细胞共培养中... 通过蜂毒肽(Melittin,MT)干预脂多糖(LipopolyBcclwide,LPS)刺激树突细胞(DendriticCell,DC)与淋巴细胞共培养,以探究MT对TC1/TC2分化的影响。用MTS检测LPS、MT对DC与淋巴细胞共培养活性;流式细胞术检测MT对LPS刺激DC与淋巴细胞共培养中Th1、Th2比例;ELISA检测LPS刺激DC与淋巴细胞共培养中细胞上清液中IL(、INF-浓度。结果显示MT、LPS在一定浓度下刺激DC与淋巴细胞共培养的活性;在成熟的DC诱导下,MT能上调Th1/Th2比例、Th1百分率($<0.05)及IFN-浓度($<0.01);对IL-浓度、Th2百分率无影响($>0.05)。本研究说明MT通过上调Th1细胞比例,IFN-!浓度,促进Th1/Th2细胞向Th1方向分化途径对T细胞起免疫调节作用。 展开更多
关键词 蜂毒肽 树突细胞 T细胞 免疫调节
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口服牛Ⅱ型胶原蛋白诱发类风湿关节炎大鼠模型的建立及评价 预览 被引量:1
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作者 关丽 毋丹丹 +2 位作者 胡东生 刘冬舟 刘志刚 《江西师范大学学报:自然科学版》 北大核心 2017年第5期513-516,共4页
按照动物建模方案分别给不同组大鼠灌胃一定剂量的阿司匹林,再给大鼠灌胃牛II型胶原蛋白诱导其产生类风湿关节炎;建模期间进行踝关节直径的测量及关节炎指数评分;然后ELISA实验检测大鼠血清中特异性抗体(IgE、IgG)和炎症因子(IL-6、T... 按照动物建模方案分别给不同组大鼠灌胃一定剂量的阿司匹林,再给大鼠灌胃牛II型胶原蛋白诱导其产生类风湿关节炎;建模期间进行踝关节直径的测量及关节炎指数评分;然后ELISA实验检测大鼠血清中特异性抗体(IgE、IgG)和炎症因子(IL-6、TNF-α和IFN-γ);再进一步观察大鼠踝关节组织病理改变.结果表明:经过不同剂量阿司匹林(5、10 mg·kg-1)处理的大鼠,用牛II型胶原蛋白灌胃后,大鼠踝关节呈现不同程度的肿胀及关节炎症状;10 mg·kg-1处理的大鼠炎症更明显,其血清中特异性抗体(IgE、IgG)和炎性细胞因子IL-6、TNF-a也显著增加,而细胞因子IFN-r显著降低,同时踝关节组织也发生明显炎症病变.这表明10 mg·kg-1处理的大鼠要比5 mg·kg-1处理大鼠更易用于口服食物抗原牛II型胶原蛋白类风湿关节炎的建成. 展开更多
关键词 类风湿关节炎 食物抗原 口服 II型胶原蛋白 动物模型
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小龙虾钙结合蛋白的免疫学特性鉴定与单克隆抗体的制备 预览 被引量:3
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作者 陈献雄 邬玉兰 +2 位作者 吉琼梅 杨平常 刘志刚 《南昌大学学报:医学版》 CAS 2017年第2期29-33,共5页
目的 克隆、表达、纯化具有免疫原性的重组小龙虾钙结合蛋白(SCP),并制备高效价抗SCP单克隆抗体。方法 用亲和层析法获取小龙虾重组SCP,通过Western Blotting和ELISA法进行免疫学活性鉴定;以重组SCP为免疫原,免疫BALB/c小鼠,再取小鼠... 目的 克隆、表达、纯化具有免疫原性的重组小龙虾钙结合蛋白(SCP),并制备高效价抗SCP单克隆抗体。方法 用亲和层析法获取小龙虾重组SCP,通过Western Blotting和ELISA法进行免疫学活性鉴定;以重组SCP为免疫原,免疫BALB/c小鼠,再取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合;利用ELISA法筛选出能分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,然后利用该杂交瘤细胞株刺激小鼠,取腹水,用蛋白A亲和层析方法纯化获得抗体;通过Ig类/亚类鉴定ELISA试剂盒鉴定该单克隆抗体的Ig亚型;通过Western Blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的交叉性和特异性。结果 经SDS-PAGE鉴定获得了纯度较高的重组SCP,免疫学鉴定结果显示,重组的SCP蛋白具有较好的IgE结合活性,阳性率为40%。通过杂交瘤细胞融合技术,共获得了抗SCP细胞株2株,分别命名为1A12和3H12,效价均高于20万。经抗体亚型鉴定,2株抗体均为IgG1型。Western Blot的结果表明2株抗体能识别重组SCP。在特异性检测实验中,1A12抗体与其他种类食物过敏原无交叉反应,而3H12与鱼粗蛋白过敏原有交叉反应性。结论 SCP是小龙虾的重要过敏原,本实验获得了纯度较高的重组SCP,并制备了2株高效价抗SCP单克隆抗体,为小龙虾SCP、甲壳类食物过敏原的检测及标准化过敏原物质的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 小龙虾 钙结合蛋白 免疫学特性 鉴定 单克隆抗体
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DEHP对3β-羟类固醇脱氢酶表达水平的影响 预览 被引量:1
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作者 王利 彭鹏 +2 位作者 徐新云 袁建辉 龙鼎新 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2017年第6期445-449,共5页
目的 β β 不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L) 间(3、6、12、24、48 h)后,荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞3β-HSD mRNA表达水平,Western blot检测3β-HSD蛋白表达水平.结果:DEHP 0.1~0.8 mmol/L分别染毒细胞... 目的 β β 不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L) 间(3、6、12、24、48 h)后,荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞3β-HSD mRNA表达水平,Western blot检测3β-HSD蛋白表达水平.结果:DEHP 0.1~0.8 mmol/L分别染毒细胞12~48 h,3β-HSD mRNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义( 〈0.01);DEHP 0.05 mmol/L染毒细胞48 h,3β-HSD mRNA表达水平比对照组升高,差异有统计学意义(P〈0.05).DEHP 0.8 mmol/L染毒细胞6~48 h,3β-HSD mRNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P〈0.01).DEHP 0.2~0.8 mmol/L染毒细胞24 h,3β-HSD蛋白表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P〈0.05或P〈0.01).结论:DEHP可引起3β-HSD mRNA和蛋白表达水平升高,推测DEHP可能通过影响类固醇激素合成过程中3β-HSD表达水平的变化,从而产生生殖毒性作用. 展开更多
关键词 邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯 3β-羟基类固醇脱氢酶 基因表达 生殖毒性
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广东内伶仃岛森林群落有害藤本现状调查及分析 预览 被引量:1
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作者 昝欣 韦萍萍 +1 位作者 宋雪 孙延军 《中国园艺文摘》 2017年第5期50-54,共5页
利用踏查、无人机拍摄、航片识别等方式,对内伶仃岛有害藤本进行全面系统的调查。结果表明,内伶仃岛有典型斑块或斑点状分布的有害藤本共12种,其中外来种4种,本地种8种,分布总面积约为51.9万m2,占全岛陆地面积的11%。岛上本地... 利用踏查、无人机拍摄、航片识别等方式,对内伶仃岛有害藤本进行全面系统的调查。结果表明,内伶仃岛有典型斑块或斑点状分布的有害藤本共12种,其中外来种4种,本地种8种,分布总面积约为51.9万m2,占全岛陆地面积的11%。岛上本地有害藤本分布总面积占全岛的7.67%,是外来有害藤本的两倍多,且本地木质藤本刺果藤已经取代薇甘菊成为目前内伶仃岛上危害最严重的藤本植物。 展开更多
关键词 刺果藤 薇甘菊 有害藤本
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