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复合抗菌肽在毕赤酵母中的表达及其活性研究 预览
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作者 杨桂茂 陶元勇 +1 位作者 孙万里 张旭光 《国际检验医学杂志》 CAS 2018年第12期1439-1442,1447共5页
目的构建天蚕素A-死亡素复合基因工程抗菌肽基因CA(1-7)-T(4-19),并在毕赤酵母中表达。方法采用重叠区基因扩增法(SOE)人工合成复合肽基因,同载体pPICZαA连接后转化毕赤酵母受体菌X-33,通过博莱霉素抗性筛选得到的阳性克隆用甲... 目的构建天蚕素A-死亡素复合基因工程抗菌肽基因CA(1-7)-T(4-19),并在毕赤酵母中表达。方法采用重叠区基因扩增法(SOE)人工合成复合肽基因,同载体pPICZαA连接后转化毕赤酵母受体菌X-33,通过博莱霉素抗性筛选得到的阳性克隆用甲醇诱导表达,并对产物进行抗菌活性检测,建立抗菌谱。结果复合肽基因CA(1-7)-T(4-19)成功克隆到载体pPICZαA上,鉴定结果与预先设计的基因序列一致,在甲醇诱导下复合肽基因得到表达,并得到临床分离的76株革兰阴性和革兰阳性耐药致病菌的最小抑菌浓度,最小抑菌浓度可达到5μg/mL。结论成功获得了具有抑菌活性的复合基因工程抗菌肽,且该复合肽对临床常见多重耐药菌株均有明显的抑杀作用。 展开更多
关键词 复合抗菌肽 天蚕素A 死亡素 毕赤酵母表达系统 抑菌活性
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let-7c与其靶基因细胞因子在肺结核痰液中的表达及其功能分析 预览 被引量:1
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作者 伊正君 付玉荣 +1 位作者 吴晓燕 许福亮 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期385-388,411共5页
目的检测microRNAlet7c及其靶基因细胞因子在肺结核患者痰液中的含量变化,并用生物信息学技术和软件对let-7c的功能进行预测分析,为进一步阐明let-7c在结核感染中的作用奠定基础。方法用核酸杂交和定量PCR检测健康对照和活动性肺结核... 目的检测microRNAlet7c及其靶基因细胞因子在肺结核患者痰液中的含量变化,并用生物信息学技术和软件对let-7c的功能进行预测分析,为进一步阐明let-7c在结核感染中的作用奠定基础。方法用核酸杂交和定量PCR检测健康对照和活动性肺结核病人的痰液中let-7c的含量;用TargetScan与PicTar预测let-7c的靶基因,用DAVID数据库和Cyto—scape的BINGO插件对let-7c的预测靶基因进行G0注释分析和生物通路分析;用EI。ISA法检测let-7c靶基因细胞因子IL10与IL-6在痰液中的水平变化。结果杂交和PCR结果表明:1et-7c在活动性肺结核患者痰液中的含量均比健康对照组显著降低(P〈o.05)。let-7c预测靶基因的G0注释结果富集在负性调节细胞间通讯等生物学过程及胞外基质构成等分子功能方面(P〈O.05);在KEGG通路数据库中let-7c预测靶基因主要富集于MAPK、钙离子信号通路与TGF—beta信号通路等方面(P〈O.05)。痰液中let-7c的靶基因细胞因子IL-10的含量显著增高。结论let-7c在活动性肺结核感染病人痰液中的含量明显降低,let-7c靶基因细胞因子IL-10明显增高,let-7c的靶基因主要参与细胞信号通讯、刺激反应、信号转导等生物学过程。这些结果为进一步深入研究let-7c在结核感染中调控功能奠定了基础。 展开更多
关键词 肺结核 let-7c 靶基因 IL-10 生物信息学
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结核分枝杆菌与宿主作用相关蛋白研究进展 预览 被引量:4
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作者 李瑞芳 管志玉 +1 位作者 付玉荣 伊正君 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期306-309,共4页
结核分枝杆菌(MTB)是第二大致死性感染性疾病的病原体,以呼吸道感染为主要途径,一旦侵入宿主体内即很难被清除。本文主要阐述了结核分枝杆菌侵入人体后有些蛋白可以调节宿主免疫机制、抵御宿主的清除作用,从而与宿主长期共存;其... 结核分枝杆菌(MTB)是第二大致死性感染性疾病的病原体,以呼吸道感染为主要途径,一旦侵入宿主体内即很难被清除。本文主要阐述了结核分枝杆菌侵入人体后有些蛋白可以调节宿主免疫机制、抵御宿主的清除作用,从而与宿主长期共存;其蛋白作用机制包括阻止吞噬溶酶体的形成和酸化、抑制自噬体的形成、抗氧化应激、抑制细胞凋亡等。如何打破两者的“共存”现象还需要继续研究。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 蛋白 自噬 氧化应激 凋亡
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TLR7在结核分枝杆菌感染中的作用研究 预览 被引量:2
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作者 李瑞芳 管志玉 +1 位作者 付玉荣 伊正君 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1223-1226,共4页
目的将TLR7激活基序ssRNA加入结核分枝杆菌感染的小鼠巨噬细胞,研究TLR7被激活后在结核分枝杆菌感染中的作用。方法结核分枝杆菌感染RAW264.7细胞,感染后加入化学合成的TLR7激活基序ssRNA,RT-PCR法检测感染不同时间之后细胞对细菌的吞噬... 目的将TLR7激活基序ssRNA加入结核分枝杆菌感染的小鼠巨噬细胞,研究TLR7被激活后在结核分枝杆菌感染中的作用。方法结核分枝杆菌感染RAW264.7细胞,感染后加入化学合成的TLR7激活基序ssRNA,RT-PCR法检测感染不同时间之后细胞对细菌的吞噬率;无菌TritonX-100裂解细胞,罗氏培养基培养计数活细菌;电镜观察细胞内自噬小体;ELISA检测细胞上清中IL-12、TNF-α与IL-4的含量。结果感染3h后RAW264.7细胞吞噬率最高(P〉0.05);处理3h后电镜观察,ssRNA组细胞状态明显好于对照组;36h后ssRNA组IL-12(P〈0.05)、IL-4(P〈0.05)水平高于对照组,细胞内活菌数量ssRNA组低于对照组(P〈0.05),48h后IL-4(P〈0.05)水平下降,TNF-α的含量上升(P〈0.05)。结论TLR7能通过诱导细胞自噬、调节细胞因子产生等机制增强细胞杀结核分枝杆菌的能力,TLR7激活基序ssRNA可以用于治疗结核分枝杆菌感染。 展开更多
关键词 TLR7 ssRNA 小鼠巨噬细胞 结核分枝杆菌
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降钙素原在结核病诊断的价值 预览 被引量:13
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作者 伊正君 裴景亮 +1 位作者 李瑞芳 付玉荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期792-794,共3页
目的探讨血清降钙素原在结核病的鉴别诊断及疗效观察的价值。方法收集结核患者和健康对照者的血清,采用ELISA法定量检测血清中的降钙素原浓度,绘制受试者工作特征曲线判断降钙素原在结核病的诊断和疗效价值。结果结果显示,活动性肺结核... 目的探讨血清降钙素原在结核病的鉴别诊断及疗效观察的价值。方法收集结核患者和健康对照者的血清,采用ELISA法定量检测血清中的降钙素原浓度,绘制受试者工作特征曲线判断降钙素原在结核病的诊断和疗效价值。结果结果显示,活动性肺结核组降钙素原浓度高于其他结核组和健康对照组(P〈0.05),肺外结核组高于非活动性肺结核组和健康对照组(P〈0.05)。受试者工作特征曲线分析确定降钙素原诊断活动性肺结核的临界值为0.15ng/mL,以此为诊断临界值其敏感度、特异性分别为76.9%和81.2%。活动性肺结核患者经有效治疗后,血清降钙素原含量明显降低。结论降钙素原可作为活动性肺结核辅助诊断和治疗效果的判断指标。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 活动性肺结核 降钙素原
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