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As2O3联合γ分泌酶抑制剂MW167对人肝癌HepG2/ADM细胞耐药性的影响 预览
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作者 杨莉 王雪雯 +1 位作者 周明 张帆 《吉林大学学报:医学版》 CSCD 北大核心 2018年第1期1-7,共7页
目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)和γ分泌酶抑制剂MW167单独及联合作用对HepG_2/ADM细胞耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度As_2O_3(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00mg·L-1)和MW167(10、20和40μmol&... 目的:探讨三氧化二砷(As_2O_3)和γ分泌酶抑制剂MW167单独及联合作用对HepG_2/ADM细胞耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法:MTT法检测不同浓度As_2O_3(0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00mg·L-1)和MW167(10、20和40μmol·L-1)处理HepG_2/ADM细胞24、48和72h后细胞的吸光度(A)值,计算细胞增殖抑制率,确定药物作用浓度和时间;将HepG_2/ADM细胞分为空白组、As_2O_3组、MW167组、As_2O_3和MW167联合组;根据MTT结果选取无细胞毒剂量的As_2O_3、MW167干预各组细胞48h后,FCM法检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)、Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达水平。结果:在同一浓度时,As_2O_3和MW167对HepG_2/ADM细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长而升高(P〈0.05或P〈0.01);在同一时间点,As_2O_3和MW167对HepG_2/ADM细胞的增殖抑制率随药物浓度的增加而升高(P〈0.05);确定As_2O_3和MW167的无毒剂量分别为0.25mg·L-1和10μmol·L-1,干预时间为48h。药物干预48h后,与空白组比较,各干预组细胞凋亡率均升高(P〈0.05),其中以联合组升高最为明显(P〈0.01)。与空白组比较,各干预组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)和Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显降低(P〈0.05),其中以联合组降低最为明显(P〈0.01);与空白组比较,各干预组Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高(P〈0.05),其中以联合组升高最为明显(P〈0.01)。结论:As_2O_3可逆转HepG_2/ADM细胞的耐药性,其作用机制可能与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、下调细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1(P-gp)和Bcl-2基因及蛋白表达水平及上调Bax基因和蛋白表达水平有关。 展开更多
关键词 三氧化二砷 肝肿瘤 NOTCH信号通路 多药耐药 细胞凋亡 细胞增殖
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RNA干扰沉默AMPK对前列腺癌细胞生物学行为影响
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作者 哈晓丹 王翠喆 +3 位作者 顾雅娟 吴金秀 张美秀 张君 《中华肿瘤防治杂志》 北大核心 2018年第2期77-82,共6页
目的细胞能量代谢的调控因子腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)与肿瘤的发生、发展和转移密切相关,且在前列腺癌中研究较少。本研究探讨siRNA转染下调AMPK表达对人前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响。方法将合成... 目的细胞能量代谢的调控因子腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)与肿瘤的发生、发展和转移密切相关,且在前列腺癌中研究较少。本研究探讨siRNA转染下调AMPK表达对人前列腺癌细胞PC-3生物学行为的影响。方法将合成AMPK干扰序列转染至人前列腺癌细胞系PC-3作为实验组(AMPK抑制组),并以空白组(未做任何处理)、阴性对照组(转染阴性干扰片段)作为对照,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中AMPK表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞中Ki-67和VEGF-A的mRNA表达情况。用细胞增殖检测试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)法检测细胞的增殖能力,Transwell法检测AMPK对细胞侵袭、迁移能力的影响。结果 AMPK抑制组细胞AMPK的mRNA表达水平为0.083±0.039,与空白组(1.014±0.194)和阴性对照组(0.841±0.302)相比显著降低,差异有统计学意义,F=34.786,P〈0.001;AMPK抑制组细胞AMPK的蛋白表达水平为0.725±0.041,与空白组(2.108±0.400)和阴性对照组(1.461±0.405)相比显著降低,差异有统计学意义,F=13.238,P=0.006。AMPK抑制组细胞Ki-67的mRNA表达水平为0.731±0.045,与空白组(1.034±0.304)和阴性对照组(0.838±0.234)相比,差异无统计学意义,F=1.424,P=0.312;AMPK抑制组细胞VEGF-A的mRNA表达水平为0.542±0.162,与空白组(1.009±0.170)和阴性对照组(1.163±0.546)相比,差异无统计学意义,F=2.662,P=0.149。沉默AMPK基因后,CCK8结果显示,PC-3细胞的增殖能力在48、72和96h显著降低,F值分别为273.206、290.868和90.377,均P〈0.001;AMPK抑制组细胞侵袭数目为36.866±9.226,与空白组(56.333±7.087)和阴性对照组(51.866±5.717)相比显著降低,差异有统计学意义,F=27.843,P〈0.001;AMPK抑制组细胞迁移数目为39.533±9.132,与空白组(64.200±4.901)和阴性对照组(57.266±4.787)相比显著降低,差异有统计学意义,F=55.863,P〈0 展开更多
关键词 前列腺癌细胞 腺苷酸活化蛋白激酶 增殖 侵袭 迁移
钙离子感受蛋白STIM1与Orai1在钙敏感受体介导钙内流及NO生成中的相互作用 预览
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作者 王腊梅 钟华 +3 位作者 唐娜 庞丽娟 张春军 何芳 《中国病理生理杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1773-1780,共8页
目的:研究Ca2+感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道... 目的:研究Ca2+感受蛋白[基质相互作用分子1(STIM1)与钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)]在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)钙敏感受体(Ca SR)介导的钙内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。方法:将Ca SR激动剂精胺[钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活]单用或与ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)+Ca SR负性变构调节剂Calhex 231(激活ROC、阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro 31-8220和PKCα/β1选择性抑制剂Go 6976(激活SOC、阻断ROC)联合孵育HUVECs;利用免疫荧光技术检测HUVECs中STIM1和Orai1的蛋白表达和共定位;免疫共沉淀法检测STIM1和Orai1之间的相互作用;取23代HUVECs随机分为特异性的质粒转染组(sh STIM1+sh Orai1组)、空质粒组(vehicle-STIM1+vehicle-Orai1组)和未转染组(control组),将3组细胞分别加入上述4组不同药物刺激,采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVECs中Ca2+浓度的变化,NO荧光探针DAF-FM DA负载方法同步检测HUVECs中NO生成的变化。结果:STIM1和Orai1蛋白表达共定位于胞浆,与control组相比,加入Calhex 231+TPA、Ro 31-8220和Go 6976刺激后,STIM1和Orai1在胞浆中的定位均减少,且二者的相互作用均减弱;在4种不同处理因素作用下,sh STIM1+sh Orai1组细胞内Ca2+浓度和NO净荧光强度均明显降低(P〈0.05)。结论:STIM1与Orai1以二元复合物的形式共同调节Ca SR,并通过激活SOC和ROC介导钙内流及NO生成。 展开更多
关键词 基质相互作用分子1 钙释放激活钙通道蛋白1 钙敏感受体 一氧化氮
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KLF9和KLF15在维吾尔族网膜脂肪中的表达及其与炎症相关性分析 预览 被引量:1
4
作者 王翠喆 哈晓丹 +3 位作者 谢建新 许彭 李伟 张君 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1653-1656,1660共5页
目的:检测维吾尔族网膜脂肪组织KLF9及KLF15 m RNA表达水平,分析KLF9、KLF15与炎症信号通路关键因子的相关性。方法:选取维吾尔族个体NC组50例、OB组45例,检测一般资料和生化指标。采集网膜脂肪组织,RT-PCR法检测KLF9、KLF15及NF-κB... 目的:检测维吾尔族网膜脂肪组织KLF9及KLF15 m RNA表达水平,分析KLF9、KLF15与炎症信号通路关键因子的相关性。方法:选取维吾尔族个体NC组50例、OB组45例,检测一般资料和生化指标。采集网膜脂肪组织,RT-PCR法检测KLF9、KLF15及NF-κB炎症信号通路关键因子m RNA表达水平。结果:OB组BMI、WC、HC、WHR、TG和LDL显著高于NC组,差异有统计学意义(P〈0.05)。维吾尔族网膜脂肪组织中,OB组NF-κB、TNF-α和IL-6 m RNA表达水平显著高于NC组(P〈0.05),NF-κB m RNA表达与体重和TG显著正相关(P〈0.05),TNF-αm RNA表达与TG和TC显著正相关(P〈0.05),IL-6 m RNA表达与HC、TG和LDL显著正相关(P〈0.05);OB组网膜脂肪组织KLF15 m RNA表达水平显著低于NC组(P〈0.05),与BMI、WC、WHR显著负相关(P〈0.05),与HDL正相关,与TG负相关。KLF9 m RNA表达水平高于NC组,与NF-κB显著正相关(P〈0.01),与IL-6正相关。结论:KLF15可能通过调控脂代谢发挥抗炎作用;肥胖状态下脂代谢紊乱可能间接上调KLF9的表达,而KLF9作为转录激活因子可能通过调控下游炎症因子的转录活性,从而促进炎症因子的表达和释放。 展开更多
关键词 维吾尔族 网膜脂肪组织 KLF9 KLF15 炎症
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KLF4、KLF7在大鼠网膜脂肪组织中的表达与炎症的相关性研究 被引量:4
5
作者 王翠喆 哈晓丹 +5 位作者 李伟 许彭 顾雅娟 王淼 谢建新 张君 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期204-209,共6页
目的检测肥胖大鼠网膜脂肪组织KLF4及KLF7 m RNA表达水平,分析其与炎症的相关性。方法 Wistar健康雄性大鼠高脂喂养,诱导肥胖模型。高脂喂养后第4、10周检测大鼠血脂、血糖水平;ELISA法测定血浆中TNF-α、LPT、APN水平;10周后,q RT-PCR... 目的检测肥胖大鼠网膜脂肪组织KLF4及KLF7 m RNA表达水平,分析其与炎症的相关性。方法 Wistar健康雄性大鼠高脂喂养,诱导肥胖模型。高脂喂养后第4、10周检测大鼠血脂、血糖水平;ELISA法测定血浆中TNF-α、LPT、APN水平;10周后,q RT-PCR法检测网膜脂肪组织KLF4、KLF7及NF-κB炎症信号通路关键因子m RNA表达水平。结果高脂喂养4周后,实验组大鼠体质量开始显著高于对照组,第10周实验组大鼠体质量进入平台期,但仍高于对照组(P〈0.05)。高脂喂养第4及第10周,实验组大鼠血浆FFA、Glu、TG、TC、LDL、TNF-α水平高于对照组,LPT、APN水平低于对照组(P〈0.05)。网膜脂肪组织中,实验组TLR9、KLF4 m RNA表达水平低于对照组,KLF7、SRC和IL-6 m RNA表达水平高于对照组;TLR9与血浆FFA负相关,与KLF4正相关;KLF4与SRC、NF-κB负相关;KLF7与TLR4、SRC、NF-κB和IL-6正相关,与KLF4负相关(P〈0.05)。结论肥胖状态下,高水平的FFA一方面可与TLR4结合上调KLF7表达,促进炎症因子表达,导致释放组织发生炎症;同时,可抑制TLR9水平而下调KLF4表达,减弱KLF4对炎症信号通路关键因子的抑制作用,从而促进炎症反应。 展开更多
关键词 肥胖大鼠 网膜脂肪组织 KLF4 KLF7 炎症
新疆地区汉族高血压患者人巨细胞病毒gB基因型分析
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作者 唐娜 李佳蔚 +6 位作者 钟华 刘永敏 李新芝 魏丽丽 王腊梅 邓峰美 何芳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第12期1061-1067,共7页
目的调查新疆地区汉族人群及高血压患者人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株,研究其糖蛋白B(gB)基因型分布。方法采用病例-对照研究方法,采集300例高血压患者和200例非高血压(对照)中的HCMV活动性感染外周血标本。使用Real-time PCR、PC... 目的调查新疆地区汉族人群及高血压患者人巨细胞病毒(HCMV)感染流行株,研究其糖蛋白B(gB)基因型分布。方法采用病例-对照研究方法,采集300例高血压患者和200例非高血压(对照)中的HCMV活动性感染外周血标本。使用Real-time PCR、PCR限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及测序技术检测HCMV-DNA,鉴别gB基因型并构建进化树。结果 18例HCMV活动性感染患者中高血压患者占77.8%(14/18),健康对照组22.2%(4/18),差异有统计学意义(χ~2=5.556,P〈0.05)。汉族人群中存在4种gB基因型,其中gB1占5.6%(1/18),gB2占50%(9/18),gB1+2占38.9%(7/18),gB2+3占5.6%(1/18),差异有统计学意义(χ~2=11.333,P〈0.05);高血压患者中存在3种gB基因型,其中gB1占7.1%(1/14),gB2占57.1%(8/14),gB1+2占35.7%(5/14),差异无统计学意义(χ~2=4.069,P〉0.05)。男性高血压患者存在两种基因型,其中gB2占87.5%(7/8),混合基因型gB1+2占12.5%(1/8);女性高血压患者存在3种基因型,gB1和gB2各占16.7%(1/6),混合基因型gB1+2占66.7%(4/6)。男、女患者gB基因型分布差异有统计学意义(χ~2=6.725,P〈0.05)。生物信息学分析10例单一gB基因核苷酸序列差异性为0~3.9%,氨基酸序列差异性为0~3.8%。结论新疆地区汉族居民HCMV感染流行株gB基因型存在单一及混合gB基因型,人群以gB2型为主,高血压男性以gB2型为主,高血压女性以gB1+2型为主;尚未发现gB3和gB4型,该人群中单一gB基因序列变异不大。本研究中感染HCMV的高血压患者所占比例高于健康对照组,提示HCMV感染可能为新疆汉族人群高血压易感的诱因之一。 展开更多
关键词 人巨细胞病毒 原发性高血压 gB基因型
维吾尔族腹腔脂肪组织APN、TNF-α和MCP-1基因DNA甲基化及其mRNA表达与T2DM相关 预览
7
作者 王翠喆 哈晓丹 +4 位作者 李伟 许彭 王婷婷 谢建新 张君 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第12期1622-1627,共6页
目的探讨腹部脂肪组织APN、TNF-α和MCP-1基因启动子区DNA甲基化及mRNA表达水平与新疆维吾尔族T2DM发生发展的相关性。方法分别选择维吾尔族正常(NC)、肥胖(Ob)和2型糖尿病(T2DM)个体50例、48例和26例。收集腹部脂肪组织,变性高... 目的探讨腹部脂肪组织APN、TNF-α和MCP-1基因启动子区DNA甲基化及mRNA表达水平与新疆维吾尔族T2DM发生发展的相关性。方法分别选择维吾尔族正常(NC)、肥胖(Ob)和2型糖尿病(T2DM)个体50例、48例和26例。收集腹部脂肪组织,变性高效液相色谱技术(DHPLC)检测上述基因DNA甲基化,实时定量PCR(RT-PCR)检测mRNA表达。结果比较NC、Ob及T2DM组间DNA甲基化阳性率,APN逐渐增加(P〈0.05),TNF-α逐渐降低(P〈0.01);NC组APNmRNA表达显著高于Ob及T2DM组,TNF-α和MCP-1均显著低于Ob及T2DM组(P〈0.05)。APN mRNA表达与BMI、DBP、FPG、TG、LDL显著负相关(P〈0.05)。TNF-αmRNA表达与BMI、FPG和TG显著正相关(P〈0.05);MCP-1mRNA表达与体质量、BMI和腰围显著正相关(P〈0.05)。APN基因DNA甲基化与其mRNA表达显著负相关(P〈0.01),与FPG、TC、TG和LDL显著正相关(P〈0.05);TNF-α基因DNA甲基化与其mRNA表达、BMI、FPG、TC、TG和LDL显著负相关(P〈0.05)。结论APN、TNF-α和MCP-1在腹部脂肪组织差异表达可能是引起新疆维吾尔族人群肥胖和T2DM的原因;糖脂代谢紊乱可通过导致腹部脂肪组织APN和TNF-α甲基化水平变化而影响其mRNA表达水平。 展开更多
关键词 维吾尔族 T2DM 脂肪细胞因子 DNA甲基化
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As2O3联合γ分泌酶抑制剂对HepG2细胞凋亡的诱导作用及其机制 预览 被引量:1
8
作者 周明 王雪雯 +2 位作者 杨莉 宋海林 段晶晶 《吉林大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期470-475,共6页
目的:探讨As2O3通过Notch信号通路对HepG2细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG2细胞分为空白组、As2O3组、MW167组和联合组;采用不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结... 目的:探讨As2O3通过Notch信号通路对HepG2细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法:体外培养的HepG2细胞分为空白组、As2O3组、MW167组和联合组;采用不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞24、48和72h,MTT法检测细胞增殖抑制率。根据MTT结果选取无细胞毒剂量As2O3和MW167(As2O30.25mg·L^-1、MW167 10μmol·L^-1)分组干预HepG2细胞48h;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法检测Notch-1、Bcl-2和Caspase-3mRNA和蛋白表达水平。结果:不同浓度As2O3和MW167处理HepG2细胞均可抑制细胞增殖,呈剂量效应关系;无细胞毒剂量As2O3和MW167处理不同分组HepG2细胞48h后,与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞凋亡率升高(P〈0.05),其中以联合组升高最为明显;与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞中Bcl-2、Notch-1mRNA和蛋白表达水平降低(P〈0.05),其中以联合组降低最为明显;与空白组比较,As2O3组、MW167组和联合组细胞中Caspase-3mRNA和蛋白表达水平升高(P〈0.05),其中以联合组升高最为明显。结论:As2O3可诱导肝癌HepG2细胞凋亡,其作用机制可能与通过Notch信号通路下调细胞中Bcl-2、Notch-1基因和蛋白表达水平以及上调细胞中Caspase-3基因和蛋白表达水平有关联。 展开更多
关键词 HEPG2细胞 γ分泌酶抑制剂 三氧化二砷 细胞凋亡
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肥胖大鼠血浆中脂肪因子和骨代谢因子的相关性研究 被引量:1
9
作者 李伟 王翠喆 +6 位作者 刘宗智 许彭 王婷婷 丁毓磊 王淼 谢建新 张君 《中国妇幼保健》 CAS 2015年第34期6108-6111,共4页
目的 探讨高脂诱导肥胖大鼠血脂、血糖及血浆中脂肪细胞因子水平与骨代谢因子的相关性。方法 5-6周龄Wistar健康雄性大鼠,随机分为普通饲料(对照组)和高脂饲料(实验组),连续喂养14周,诱导大鼠肥胖模型。分别于第0、4、6、8、10周每... 目的 探讨高脂诱导肥胖大鼠血脂、血糖及血浆中脂肪细胞因子水平与骨代谢因子的相关性。方法 5-6周龄Wistar健康雄性大鼠,随机分为普通饲料(对照组)和高脂饲料(实验组),连续喂养14周,诱导大鼠肥胖模型。分别于第0、4、6、8、10周每组选取8只,空腹麻醉后眼底静脉取血并分离血浆,测定血浆甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、游离脂肪酸(FFA)、葡萄糖(Glu)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)水平;酶联免疫法测定血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、核因子NF-κB受体活化因子配体(RANKL)、核因子κB受体活化因子(RANK)、瘦素(LPT)及脂联素(APN)水平。结果 喂养4周后,2组大鼠体重差异开始有统计学意义(P〈0.05),实验组显著高于对照组。至第10周,2组大鼠体重均进入平台期,体重不再增加,但2组差异仍有统计学意义(P〈0.01),实验组仍高于对照组。实验组大鼠血浆中Glu、FFA、TG、TC、LDL、TNF-α、RANKL、RANK、LPT水平始终高于对照组大鼠,而APN水平低于正常大鼠,差异有统计学意义(P〈0.05);大鼠血浆中骨代谢因子RANKL与TNF-α、FFA、TG显著正相关(r值分别为0.412、0.270、0.321,P值均〈0.05),RANK与TNF-α、FFA、TG及LPT显著正相关(r值分别为0.392、0.270、0.326,0.271,P值均〈0.05)。结论 肥胖状态下大鼠血脂代谢紊乱可通过影响脂肪细胞因子APN及LPT水平始动炎症发生,而炎症状态下高水平TNF-α通过影响RANKL及RANK导致骨代谢异常。 展开更多
关键词 肥胖 血脂 血糖 脂肪细胞因子 骨代谢因子
小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制 预览 被引量:1
10
作者 钟华 龚艳 +5 位作者 吴玲玲 赵慧 王静 孙志萍 邓峰美 何芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期577-583,共7页
目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2~3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因... 目的:研究小凹蛋白-1(Cav-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流的作用机制。方法:取2~3代HUVECs,采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基-β-环糊精(MβCD)及Cav-1基因沉默,配合CaR激动剂精胺(spermine)和负性变构调节剂Calhex 231。Fura-2/AM负载检测细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)。Western blotting检测HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达,免疫共沉淀技术检测Cav-1和CaR相互作用。用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae,Western blotting检测caveolae的标志蛋白Cav-1和浮舰蛋白1(flotillin-1)及CaR表达。同时检测胞膜、胞浆和高尔基体标志蛋白:转铁蛋白受体(TfR)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-外被体蛋白(β-COP)。检测富含Cav-1膜(CEM)区、非caveolae I区(NCF I)和II区(NCF II)的Cav-1和CaR表达。结果:(1)细胞外液为含钙液时,Calhex 231完全阻断精胺刺激引起的[Ca2+]i升高(P〈0.05),MβCD可加强精胺升高[Ca2+]i的作用(P〈0.05)。不同浓度MβCD处理后各组Cav-1和CaR相互作用的差异无统计学意义(P〉0.05);(2)免疫共沉淀结果显示,各组Cav-1和CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P〉0.05);(3)与control组比较,spermine+Ca2+组、filipin+spermine+Ca2+组和MβCD+spermine+Ca2+组CEM区的Cav-1和CaR蛋白表达均降低(P〈0.05),NCF I区的Cav-1和CaR蛋白表达增加(P〈0.05),NCF II区Cav-1蛋白表达增加(P〈0.05),而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:在HUVECs中,Cav-1和CaR共定位于同一caveolae区,同时Cav-1对CaR介导的Ca2+内流有下调作用,其机制可能与Cav-1抑制CaR膜定位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关。 展开更多
关键词 小凹蛋白-1 人脐静脉内皮细胞 受体 钙敏感 钙信号
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解耦连蛋白在2型糖尿病及其并发症中作用 被引量:5
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作者 冯晓朋(综述) 谢建新(审校) 《中华实用诊断与治疗杂志》 2013年第6期526-527,共2页
解耦连蛋白2是线粒体内膜上一种阴离子载体蛋白,在体内分布广泛,有抑制氧应激、负调节β细胞分泌胰岛素、促进脂肪酸代谢的作用。解耦连蛋白2-866G/A基因多态性影响胰岛β细胞分泌功能,与2型糖尿病发病相关。本文对解耦连蛋白2在2... 解耦连蛋白2是线粒体内膜上一种阴离子载体蛋白,在体内分布广泛,有抑制氧应激、负调节β细胞分泌胰岛素、促进脂肪酸代谢的作用。解耦连蛋白2-866G/A基因多态性影响胰岛β细胞分泌功能,与2型糖尿病发病相关。本文对解耦连蛋白2在2型糖尿病及其并发症中的作用作一综述。 展开更多
关键词 2型糖尿病 解耦连蛋白2 DNA多态性 糖尿病周围神经病变 糖尿病视网膜病变
吸烟与肥胖及胰岛素抵抗相关性的研究进展 预览 被引量:3
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作者 陆环 张君 +2 位作者 徐文静 褚志华 谢建新 《农垦医学》 2009年第3期 253-255,共3页
少量尼古丁可以增加能量消耗并且抑制食欲,致使体重下降。相反,过量吸烟者因饮食结构不合理或体力活动较少,而导致体重增加。此外,吸烟与向心性肥胖密切相关,从而使胰岛素抵抗的发生率升高,同时增加了发生代谢综合症和糖尿病的几... 少量尼古丁可以增加能量消耗并且抑制食欲,致使体重下降。相反,过量吸烟者因饮食结构不合理或体力活动较少,而导致体重增加。此外,吸烟与向心性肥胖密切相关,从而使胰岛素抵抗的发生率升高,同时增加了发生代谢综合症和糖尿病的几率。本文就吸烟与肥胖及胰岛素抵抗相关性的研究进展加以综述。 展开更多
关键词 吸烟 肥胖 胰岛素抵抗
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肥胖、2型糖尿病过程中大鼠肝脏形态结构变化的比较 被引量:4
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作者 张君 褚志华 +4 位作者 陆环 徐文静 丁毓磊 杨丽 谢建新 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第12期2246-2248,F0003共4页
目的:探讨在肥胖、糖尿病过程中大鼠肝脏形态结构的变化。方法:Wistar雄性大鼠,随机分为:普通饮食组,高脂饮食组,高脂饮食+链脲佐菌素组。第0周随机抽取6只大鼠处死后取肝脏进行石蜡包埋,HE染色,制成切片。在饲养过程中选取不... 目的:探讨在肥胖、糖尿病过程中大鼠肝脏形态结构的变化。方法:Wistar雄性大鼠,随机分为:普通饮食组,高脂饮食组,高脂饮食+链脲佐菌素组。第0周随机抽取6只大鼠处死后取肝脏进行石蜡包埋,HE染色,制成切片。在饲养过程中选取不同时间点,各组随机处死2只大鼠,取肝脏进行石蜡包埋,HE染色,切片,镜下观察,比较各组差异。结果:与对照组相比,肥胖组大鼠肝脏组织中脂肪细胞数目增多、体积变大,随肥胖程度的增加而加剧,导致肝发生中、重度脂肪变性。肝细胞肿胀,肝窦间隙变窄,可见炎性细胞浸润增多,凋亡细胞增多。糖尿病组大鼠,肝脏组织中脂滴形成,出现大的脂囊。肝细胞出现细胞核固缩,凋亡细胞增多,有炎性细胞浸润,以淋巴细胞为主,未见巨噬细胞增多。血管壁硬化、玻璃样变性。结论:在肥胖/糖尿病发生、发展过中,大鼠肝脏中有脂肪的异位储存(肝脂肪样变性),并伴随有炎性细胞的浸润。 展开更多
关键词 肥胖/糖尿病 肝脏 结构变化
钙敏感受体介导的人脐静脉内皮细胞钙内流及一氧化氮生成过程中TRPCI与STIM1的相互作用
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作者 王腊梅 钟华 +3 位作者 唐娜 庞丽娟 张春军 何芳 《中华心血管病杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期978-984,共7页
目的探讨经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)与基质相互作用分子1(STIM1)在钙敏感受体(CaR)介导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙离子(Ca2+)内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。 方法取华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产... 目的探讨经典瞬时受体电位通道1(TRPC1)与基质相互作用分子1(STIM1)在钙敏感受体(CaR)介导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙离子(Ca2+)内流和一氧化氮(NO)生成中的相互作用。 方法取华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科健康孕产妇剖宫产新生儿的新鲜脐带,原代培养HUVEC并传代。将所得HUVEC分别与CaR激动剂精胺[激活钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)]、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231(阻断SOC阻、激活ROC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(激活SOC、阻断ROC)共孵育。采用免疫荧光技术检测HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达,免疫共沉淀法检测TRPC1与STIM1之间的相互作用。取2~3代HUVEC进行分组,将构建的TRPC1、STIM1干扰质粒(shTRPC1、shSTIM1)联合转染HUVEC即shTRPC1+shSTIM1组 (实验组)、vehicle-shTRPC1+vehicle-shSTIM1组 (空质粒组)和对照组,将3组细胞分别加入上述4种不同的药物进行干预。采用荧光探针Fura-2/AM检测HUVEC细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化,NO荧光探针DAF-FM负载方法同步检测HUVEC中NO生成的变化。 结果(1) HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达:激光共聚焦显微镜下观察,正常对照组HUVEC中TRPC1和STIM1蛋白的表达呈阳性,二者共定位于胞浆。Calhex231+TPA+精胺+Ca2+组、Ro31-8220+精胺+Ca2+组和Go6976+精胺+Ca2+组HUVEC中定位于胞浆中的TRPC1、STIM1均减少,二者结合也减少。(2) HUVEC中TRPC1与STIM1的相互作用:Calhex231+TPA+精胺+Ca2+组、Ro31-8220+精胺+Ca2+组和Go6976+精胺+Ca2+组STIM1/TRPC1和TRPC1/STIM1的相对比值的百分数分别为(25.98±2.17)%和(44.10±4.01)%、(20.85±1.01)%和(46.31±3.47)%、(23.88±2.05)%和(39.65±2.91)%� 展开更多
关键词 内皮细胞 脐静脉 细胞内钙离子感觉蛋白质类 受体 钙敏感 一氧化氮
Orai2参与了HUVEC外钙敏感受体介导的Ca^2+内流和NO生成 预览 被引量:2
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作者 王腊梅 钟华 +4 位作者 赵慧 王静 庞丽娟 孙志萍 何芳 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2014年第5期595-601,共7页
目的 研究钙释放激活的钙调素2(Orai2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用.方法 1)用转染技术将构建的Orai2干扰质粒(Orai2shRNA)转染人HUVEC,用实时定量RT-PCR和Weste... 目的 研究钙释放激活的钙调素2(Orai2)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导Ca2+内流和一氧化氮(NO)生成中的作用.方法 1)用转染技术将构建的Orai2干扰质粒(Orai2shRNA)转染人HUVEC,用实时定量RT-PCR和Western blot检测Orai2 mRNA和蛋白的表达.2)取2~5代HUVEC,分别以精胺激活CaR(钙池操纵性钙通道(SOC)和受体操纵性钙通道(ROC)均激活)、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醋酸酯-13(TPA) +CaR负性变构调节剂Calhex231(激活ROC及阻断SOC)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220、经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(阻断ROC及激活SOC)为细胞模型.实验分为3组:特异性质粒转染组(Orai2shRNA组),未转染组(空白对照组),空质粒组(vehicle组),用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO的生成.结果 1)与control组相比,shOrai2-71干扰后,Orai2 mRNA和蛋白的表达均明显降低,抑制率分别为75.75%和70.58% (P <0.05).2)与对照组和空质粒组相比,在4种不同处理因素作用下,Orai2shRNA转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05).结论 Orai2参与了HUVEC中CaR经SOC和ROC激活介导的Ca2+内流和NO生成. 展开更多
关键词 Orai2 一氧化氮 钙离子 人脐静脉内皮细胞
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TNF-α基因308位点的SNP与新疆维吾尔族2型糖尿病的易感性的关系 被引量:2
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作者 褚志华 张君 +4 位作者 田世坤 袁红玲 徐文静 陆环 谢建新 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第6期1098-1100,1091共4页
目的:研究TNF-α基因单核苷酸多态性(SNP)308G—A位点与新疆地区维吾尔族人2型糖尿病之间的关系。方法:以聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)技术,对120例2型糖尿病患者和120例正常对照者TNF-α基因308位点SNP多... 目的:研究TNF-α基因单核苷酸多态性(SNP)308G—A位点与新疆地区维吾尔族人2型糖尿病之间的关系。方法:以聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性(PCR-RFLP)技术,对120例2型糖尿病患者和120例正常对照者TNF-α基因308位点SNP多态性进行基因分型。采用酶联免疫法测定T2DM患者105例及正常对照98例血清TNF-α水平,利用统计学方法分析其影响因素。结果:SNP308多态性位点的基因型和等位基因频率在病例组和正常对照组中的分布存在差异,差异有统计学意义(P〈0.05);正常对照组血清TNF-α水平为(26.30±15.54)pg/ml较汉族人群低,病例组为(29.89±t4.48)pg/ml,病例组与对照组TNF-α水平无差异(p〉0.05)。病例组血清TNF-α与FPG、TC、FINS、LDL—C、HOMA-IR呈显著负相关。结论:(1)TNF—α基因SNP308多态性位点与新疆地区维吾尔族人群2型糖尿病有明显相关性;(2)TNF-α水平在新疆维吾尔族糖尿病组与正常对照组之间差异无统计学意义。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子α 2型糖尿病 新疆维吾尔族
油酸对子宫内膜癌细胞Ishikawa生物学行为的影响及机制初探 预览
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作者 吴金秀 王翠喆 +4 位作者 张美秀 顾雅娟 哈晓丹 冯家乐 张君 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 北大核心 2018年第5期575-580,共6页
目的游离脂肪酸与肿瘤的发生发展密切相关,但在子宫内膜癌中的作用研究较少,本研究探讨不饱和脂肪酸油酸对人子宫内膜癌细胞Ishikawa生物学行为的影响及可能机制。方法将不同浓度OA刺激Ishikawa细胞作为实验组(OA作用组),并以空白组(未... 目的游离脂肪酸与肿瘤的发生发展密切相关,但在子宫内膜癌中的作用研究较少,本研究探讨不饱和脂肪酸油酸对人子宫内膜癌细胞Ishikawa生物学行为的影响及可能机制。方法将不同浓度OA刺激Ishikawa细胞作为实验组(OA作用组),并以空白组(未做任何处理)作为对照,用Cell Counting Kit (CCK-8)法检测OA对细胞毒性和增殖能力的影响,Transwell检测OA对细胞迁移、侵袭能力的影响。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测Bcl2、Ki67、MMP1、MMP9的mRNA表达水平。结果(1)不同浓度OA作用于Ishikawa细胞后,CCK8结果显示,50μmol/L、200μmol/L作用组细胞的活性在48 h显著高于空白对照组,差异有统计学意义(F48h=2.504,P<0.05);500、1000、1500μmol/L刺激组细胞的活性在不同时间点均显著低于空白对照组,差异有统计学意义(F24h=3.625,P<0.05;F48h=9.318,P<0.01;F72h=36.630,P<0.01;F96h=47.871,P<0.01),对细胞具有毒性作用。(2)50μmol/L及200μmol/L OA作用Ishikawa细胞48 h后,细胞的增殖能力显著高于空白对照组,差异有统计学意义(F48h=2.504,P<0.05),细胞的迁移及侵袭能力均显著高于空内对照组,差异有统计学意义(F迁移=8.993,P<0.01;F侵袭=6.560,P<0.01)。(3)200μmol/L OA作用于Ishikawa 24 h后,Bcl2、Ki67、MMP9的mRNA表达水平显著高于空白对照组,差异有统计学意义(FBcl2=7.232,P<0.05;FKi67=6.245,P<0.05;FMMP9=3.837,P<0.05),MMP1的mRNA表达水平高于空白对照组。结论不饱和脂肪酸OA可能通过上调Bcl2、Ki67、MMP9等基因的表达,促进子宫内膜癌细胞Ishikawa的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 油酸 子宫内膜癌细胞 侵袭 迁移
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大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞诱导分化及破骨细胞培养方法的建立 预览 被引量:2
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作者 李伟 王翠喆 +5 位作者 许彭 哈小丹 刘宗智 王婷婷 谢建新 张君 《石河子大学学报:自然科学版》 CAS 2016年第2期181-186,共6页
为建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞诱导分化及破骨细胞培养的方法,为后续细胞共培养奠定实验基础。采用通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞的方法,进行形态学观察,并应用流式细胞术检测BMSC... 为建立稳定的大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞诱导分化及破骨细胞培养的方法,为后续细胞共培养奠定实验基础。采用通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞的方法,进行形态学观察,并应用流式细胞术检测BMSCs免疫学表型,对其进行鉴定;将获得的第三代BMSCs向脂肪细胞和成骨细胞方向进行诱导分化,诱导21 d后的脂肪细胞应用油红O染色进行鉴定,成骨细胞应用茜素红染色进行鉴定;将获取的骨髓细胞液按照造血系单核干细胞诱导培养法向破骨细胞方向进行诱导分化,于28 d后进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色进行鉴定。结果显示,BMSCs体外培养14 d具有独特的细胞免疫学表型,流式细胞术检测,CD29+、CD44+表达量分别为97.92%和89.32%;在脂肪培养基诱导下,油红O染色阳性。在成骨培养基诱导下,茜素红染色阳性;骨髓细胞液在破骨培养基诱导下,抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性。由此可知,建立了稳定的大鼠骨髓间充质干细胞向脂肪细胞、成骨细胞诱导分化及破骨细胞诱导分化的培养方法。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 细胞培养 脂肪细胞 成骨分化 破骨细胞
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抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)淀粉分支酶SBEⅡa和SBEⅡb基因多态性分析 预览 被引量:1
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作者 王昊龙 韩俊杰 +1 位作者 李卫华 刘伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期981-987,共7页
【目的】克隆抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)中淀粉合成酶关键基因SBEⅡa和SBEⅡb进行多态性分析,从分子水平阐述不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。【方法】根据Gene Bank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)和SBEⅡb(AY7... 【目的】克隆抗性淀粉含量不同的小麦品种(系)中淀粉合成酶关键基因SBEⅡa和SBEⅡb进行多态性分析,从分子水平阐述不同小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。【方法】根据Gene Bank中公布的小麦SBEⅡa(AF286319.1)和SBEⅡb(AY740401.1)基因序列设计特异性引物,利用RT-PCR技术克隆SBEⅡa和SBEⅡb基因序列,利用Clustal.W进行测序结果的比对分析,NCBI Conserved domain和inte Pro在线网站对SBEⅡa和SBEⅡb氨基酸序列进行结构域预测,寻找影响抗性淀粉含量的主效基因位点。【结果】克隆了SBEⅡa(2 471 bp)、SBEⅡb(2 510 bp)基因ORF(open reading frame,ORF)全长。序列分析表明:SBEⅡa、SBEⅡb基因与公布的序列同源性分别为98.64%和99.07%。【结论】SBEⅡa基因ORF的三个结构域中未发现影响籽粒抗性淀粉含量的候选差异位点。在SBEⅡb基因编码区羧基C-末端的3个候选差异位点和α-淀粉催化酶结构域的1个候选差异位点可能是造成小麦品种(系)间抗性淀粉含量差异的原因。SBEⅡa、SBEⅡb氨基N-末端前面序列中共计10个单碱基变异作为潜在差异位点,也可能参与SBE基因的表达。 展开更多
关键词 小麦 抗性淀粉 SBEⅡa SBEⅡb 多态性分析
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Jagged1基因甲基化与乳腺癌发生发展相关性探讨 被引量:4
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作者 李怡晓 李锋 +5 位作者 张娜 杜小明 王留花 李玉聪 陈晓文 曹玉文 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2015年第11期846-850,共5页
目的探讨Jagged1基因异常甲基化在乳腺癌发生发展过程中的意义。方法采用MALDI-TOF MS法检测2004-01-16-2009-06-25石河子大学第一附属医院63例乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)、20例导管原位癌(ductal carcinoma i... 目的探讨Jagged1基因异常甲基化在乳腺癌发生发展过程中的意义。方法采用MALDI-TOF MS法检测2004-01-16-2009-06-25石河子大学第一附属医院63例乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)、20例导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)、20例非典型导管增生(atypical ductal hyperplasia,ADH)和20例普通型导管增生(usual ductal hyperplasia,UDH)组织中Jagged1基因甲基化水平,免疫组织化学方法检测4组乳腺组织中Jagged1蛋白表达状况,在IDC组中进一步分析Jagged1甲基化和表达与临床病理特征的相关性。结果 Jagged1基因总甲基化率在IDC(0.127 6±0.067 5)、DCIS(0.138 9±0.093 1)、ADH(0.168 0±0.014 6)和UDH(0.223 3±0.060 9)中逐渐升高,并且IDC组甲基化率分别与ADH(P=0.015)和UDH(P〈0.001)组比较,差异有统计学意义。CpG-2、CpG-6、CpG-13、CpG-20.21.22、CpG-23.24.25、CpG-26位点的甲基化率在IDC组最低,差异有统计学意义,P值均〈0.05。Jagged1蛋白在IDC(58.7%,37/63)、DCIS(45.0%,9/20)、ADH(40.0%,8/20)和UDH(25.0%,4/20)组中阳性表达率逐渐降低,其中IDC组的阳性率显著高于UDH组,P=0.003。Jagged1蛋白高表达与DNA低甲基化在IDC(P〈0.001)、DCIS(P=0.003)、ADH(P=0.004)和UDH组(P=0.007)均有相关性。Jagged1基因低甲基化和蛋白高表达与临床分期(P〈0.001;P=0.019)和组织学分级(P=0.003;P=0.025)均有相关性。结论 Jagged1基因低甲基化和CpG位点低甲基化,可能参与乳腺癌的发生,并且Jagged1基因低甲基化可能是调控蛋白高表达的方式之一,进而促进乳腺的癌变和进展。 展开更多
关键词 乳腺癌 JAGGED1 甲基化 基因表达
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