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番木瓜ERF家族与果实成熟相关成员的分析
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作者 陈永萍 高峰 +3 位作者 申艳红 赵湾湾 陈桂信 王平 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期252-264,共13页
通过比较分析番木瓜ERF家族成员的系统进化关系、基本理化性质、保守基序、启动子顺式元件,结合分析番木瓜在乙烯利和乙烯抑制剂1–甲基环丙烯(1-MCP)处理下以及不同成熟期果肉的RNA-seq数据,筛选出22个ERF家族成员进行表达差异分析,最... 通过比较分析番木瓜ERF家族成员的系统进化关系、基本理化性质、保守基序、启动子顺式元件,结合分析番木瓜在乙烯利和乙烯抑制剂1–甲基环丙烯(1-MCP)处理下以及不同成熟期果肉的RNA-seq数据,筛选出22个ERF家族成员进行表达差异分析,最终比较得出两个处理数据中显著差异表达基因有18个,推测这些基因可能在番木瓜果实成熟过程中起重要作用。 展开更多
关键词 番木瓜 ERF 果实 成熟 转录因子
乙烯处理水仙催多花技术和机理的研究
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作者 申艳红 姜涛 +5 位作者 赵湾湾 阮蔚华 张寒 周斌 陈红梅 陈晓静 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1003-1015,共13页
花葶数量是衡量水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)商品鳞茎品质的重要指标之一。传统的水仙鳞茎熏蒸方法由于不能严格控制乙烯浓度,导致花芽诱导效果不佳。本实验研发了乙烯处理水仙催多花技术,采用200 μL/L乙烯气体在密闭容器... 花葶数量是衡量水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)商品鳞茎品质的重要指标之一。传统的水仙鳞茎熏蒸方法由于不能严格控制乙烯浓度,导致花芽诱导效果不佳。本实验研发了乙烯处理水仙催多花技术,采用200 μL/L乙烯气体在密闭容器中熏蒸水仙三年生鳞茎两次,可使花葶和小花数量提高1倍。为探讨乙烯催多花的原因,测定了不同处理的生理生化指标,并将处理后1 d的样品分别进行了转录组测序。外源乙烯增加了可溶性糖与蛋白质含量,提高了过氧化物酶(peroxidase, POD)活性、吲哚乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)和玉米素(zeatin, ZA)水平。对水仙鳞茎转录组测序,共获得了65 898个unigenes,其中对照55 793个unigene、1-甲基环丙烯(1-methylcyclopropene, 1-MCP)处理57 321个unigene、乙烯处理64 350个unigene。基因本体(Gene Ontology, GO)分析显示,外源乙烯处理提高了水仙鳞茎的活性,促进了GO term中大部分基因的上调表达。通过比较不同处理间基因的差异表达,筛选了62个候选基因,包含4个淀粉与蔗糖代谢途径基因、9个多胺合成与转运基因、11个木质素合成与转运基因、31个成花相关基因和7个其他调控基因。12个基因的qRT-PCR结果验证了RNA-Seq的正确性。这些差异表达基因在水仙花芽分化过程中可能具有重要作用。本研究在生理生化和分子水平对乙烯处理促进水仙鳞茎花芽分化机制进行了探讨,为进一步阐明水仙花芽分化分子机制和指导水仙提供了理论依据。 展开更多
关键词 水仙 花芽分化 转录组测序 乙烯
番木瓜果实软化相关CpEXPA2基因的克隆与表达分析 预览
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作者 赵湾湾 冯力 +7 位作者 胡绍彬 代亚兰 李春侠 赵秋月 郑小华 吴迪 王平 申艳红 《果树学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期785-793,共9页
【目的】克隆一个与番木瓜果实软化相关的扩展蛋白基因,分析其功能,明确其在不同组织器官和不同成熟时期果实的表达模式。【方法】基于对番木瓜果实转录组学的研究,筛选并克隆了一个与果实软化相关的扩展蛋白基因Cp EXPA2。采用同源序... 【目的】克隆一个与番木瓜果实软化相关的扩展蛋白基因,分析其功能,明确其在不同组织器官和不同成熟时期果实的表达模式。【方法】基于对番木瓜果实转录组学的研究,筛选并克隆了一个与果实软化相关的扩展蛋白基因Cp EXPA2。采用同源序列对比和系统进化树分析对该基因进行序列分析;运用生物信息学的方法对该基因编码的蛋白进行结构分析;使用RT-q PCR方法分析Cp EXPA2基因在不同组织器官、不同成熟时期果实中的表达量;采用GY-4硬度计测定不同成熟时期番木瓜果实的硬度。【结果】Cp EXPA2基因的开放阅读框(ORF)为780 bp(Gene Bank登录号为MF662209),编码259个氨基酸。该基因编码的氨基酸序列具有典型的扩展蛋白保守结构:N端富含8个半胱氨酸、C端富含4个色氨酸和中间1个组氨酸功能域(His-Phe-Asp,HFD)。同源序列比对分析发现该扩展蛋白与山木瓜(ABF48653.1)、番茄(AAC64201.1)、草莓(AAF21101.1)、拟南芥(AAB38073.1)等扩展蛋白氨基酸序列有较高的同源性,分别为66.15%、64.86%、66.80%、65.00%。进化树分析表明,Cp EXPA2蛋白与拟南芥At EXPA6(U30480)、At EXPA16(NM_115407)关系最近。Cp EXPA2在不同组织器官中的表达量依次为成熟果实〉叶〉花〉茎〉根;在不同发育时期的果实中,Cp EXPA2在果皮的表达量相对高于果肉,且随着果实成熟软化程度提高,其表达量也相应提高。番木瓜果实的硬度随着果实的成熟呈逐渐下降趋势,在破色期开始硬度急剧下降,果实迅速软化。【结论】Cp EXPA2基因的扩展蛋白家族高度保守,且该基因编码的蛋白与山木瓜、番茄、草莓、拟南芥等扩展蛋白的氨基酸序列有较高的同源性。系统进化树分析发现番木瓜Cp EXPA2与拟南芥At EXPA6和At EXPA16亲缘关系较近。Cp EXPA2受乙烯诱导,且与果实发育进程有关,因此推测该基因可能在番木瓜果实成� 展开更多
关键词 番木瓜 扩展蛋白 表达模式 果实成熟软化
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‘云香’水仙ACC氧化酶基因的克隆表达分析及其遗传转化与鉴定 预览
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作者 孙申申 温秀萍 陈晓静 《西北植物学报》 CSCD 北大核心 2017年第9期1685-1692,共8页
利用RT-PCR技术,从‘云香’水仙中克隆了1个新的ACO(ACC氧化酶)基因(NtACOY2)。NtACOY2基因全长975bp,开放阅读框(ORF)936bp,编码311个氨基酸残基,蛋白分子量为35.83kD。蛋白结构预测发现,该蛋白含有典型的ACO家族保守的DIOX_N和2... 利用RT-PCR技术,从‘云香’水仙中克隆了1个新的ACO(ACC氧化酶)基因(NtACOY2)。NtACOY2基因全长975bp,开放阅读框(ORF)936bp,编码311个氨基酸残基,蛋白分子量为35.83kD。蛋白结构预测发现,该蛋白含有典型的ACO家族保守的DIOX_N和20G-FeⅡ_Oxy结构域。进化分析表明,NtACOY2编码的氨基酸序列高度保守。实时荧光定量PCR表明,NtACOY2在花瓣和副冠中的表达均随着‘云香’水仙花的衰老而逐渐上升,并且各个时期花瓣中的表达量均高于副冠,在花蕾期的花瓣中表达量达到最高,表明NtACOY2基因可能参与‘云香’水仙花的发育,并且与其花衰老密切相关。通过PCR和酶切反应鉴定,成功构建了NtACOY2基因的正反义植物表达载体,将正义载体经农杆菌介导转化烟草,PCR检测显示共有15株转化植株扩增出了与阳性对照大小相同的片段,进一步用RT-PCR鉴定阳性转化植株,最终获得了12株转基因烟草。随机选取2株转基因植株(Z1、Z2)与野生型(WT)完全相同条件下移栽温室培养,结果 Z1、Z2分别比WT提前8和7d开花,且转基因烟草花朵开放数量均多于野生型,表明NtACOY2在转录水平能够正常表达。实验结果为进一步研究NtACOY2基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 水仙 ACC氧化酶 克隆 表达分析
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番木瓜诱导型基因CpPGIP2启动子的克隆与分析 预览 被引量:1
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作者 申艳红 陈晓静 戴志林 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期156-163,共8页
【目的】获得诱导型基因CpPGIP2启动子,并分析该启动子的功能。【方法】以番木瓜cpPG伊2基因cDNA序列(HQ660394)搜索番木瓜基因组DNA序列,获得一段约2000bp的5’端上游DNA序列(ABIM01005077),参照该序列设计PCR特异引物,以番木... 【目的】获得诱导型基因CpPGIP2启动子,并分析该启动子的功能。【方法】以番木瓜cpPG伊2基因cDNA序列(HQ660394)搜索番木瓜基因组DNA序列,获得一段约2000bp的5’端上游DNA序列(ABIM01005077),参照该序列设计PCR特异引物,以番木瓜叶片DNA为模板克隆该启动子,并进行生物信息学分析。将3个启动子片段替换pCAM-BIA1301载体中的CaMV35S启动子,构建缺失启动子表达载体,以GUS瞬时表达检测缺失启动子表达活性。【结果】获得了CpPGIP2起始密码子上游长为1981bp的调控序列,经分析该序列含有真菌、脱落酸、赤霉素、光照等多种响应元件,为诱导型启动子。构建了1个启动子全长表达载体和2个5’端缺失启动子表达载体,分别命名为pD0—1981、pD1—1204和pD2-261。启动子在番木瓜果肉中的瞬时表达显示,长度为1204bp的启动子表达活性最强。并且,该启动子在根、茎、叶、果肉和愈伤组织中均有不同程度的表达,在近外果皮的果肉处和根部表达最明显。【结论】本研究获得了CpPGIP2启动子序列,确定了表达活性最强的启动子长度,初步分析了启动子的表达模式和顺式作用元件,为进一步深入研究CpPGIP2基因功能以及将该启动子应用于植物基因工程育种奠定了基础。 展开更多
关键词 番木瓜 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白 启动子 调控元件 载体构建
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多花水仙花瓣抑制消减杂交cDNA文库的构建及分析 预览 被引量:2
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作者 何炎森 何玮毅 陈晓静 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2013年第3期289-296,共8页
采用抑制消减杂交(SSH)技术,以多花水仙的栽培品种‘黄花水仙2号’黄色花瓣和‘金盏银台’白色花瓣的eDNA分别作为测试子和驱动子,建立正、反向抑制消减杂交cDNA文库.随机挑选正、反向文库各216个阳性克隆测序,对已知功能的uniEST... 采用抑制消减杂交(SSH)技术,以多花水仙的栽培品种‘黄花水仙2号’黄色花瓣和‘金盏银台’白色花瓣的eDNA分别作为测试子和驱动子,建立正、反向抑制消减杂交cDNA文库.随机挑选正、反向文库各216个阳性克隆测序,对已知功能的uniESTs进行基因本体论(GO)分类分析,荧光定量PCR检测部分可能参与色素形成的uniESTs.结果表明:水仙花色差异表达正、反向消减文库经检验质量可靠,为分离花色形成相关基因奠定了基础;GO功能分类分析显示,水仙花色差异可能受到多个代谢途径的影响;经初步筛选得到11个与水仙花色形成相关的uniEST8,为进一步克隆基因全长和功能验证提供参考. 展开更多
关键词 多花水仙 花色 抑制消减杂交
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番木瓜GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶基因的克隆及分析 预览 被引量:1
7
作者 申艳红 陈晓静 +1 位作者 卢秉国 何玮毅 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2011年第2期 172-177,共6页
采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果实GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因的cDNA全长序列,将其命名为CpGMP,GenBank登录号为FJ489652.然后,根据拼接序列设计开放性阅读框上、下游引物,扩增得到了CpGMP基因的开放性阅读框序... 采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果实GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶(GMP)基因的cDNA全长序列,将其命名为CpGMP,GenBank登录号为FJ489652.然后,根据拼接序列设计开放性阅读框上、下游引物,扩增得到了CpGMP基因的开放性阅读框序列和DNA序列.ORF序列编码361个氨基酸,DNA序列包含4个外显子和3个内含子.序列分析表明,番木瓜GMP与大果黄褥花、桃、番茄、拟南芥、水稻GMP的同源性分别为90.30%、89.47%、88.92%、88.09%、85.87%.半定量RT.PCR分析表明,Gp伽P基因随着番木瓜果实的成熟表达量逐渐增加,软化时又逐渐降低. 展开更多
关键词 番木瓜 GDP-D-甘露糖焦磷酸化酶 CDNA末端快速扩增 半定量RT-PCR
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番木瓜肌动蛋白CpActin基因的克隆及其在果肉中的表达 预览 被引量:7
8
作者 申艳红 陈晓静 +1 位作者 何玮毅 卢秉国 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期924-929,共6页
以番木瓜果肉为试材,提取总RNA,反转录为双链cDNA。采用cDNA末端快速扩增方法(RACE),获得了番木瓜果肉Aetin基因的全长cDNA序列,将其命名为CpActin,Genbank登录号为FJ696416。CpActln全长cDNA为1533 bp,含有一个1134bp的开放阅读框,编... 以番木瓜果肉为试材,提取总RNA,反转录为双链cDNA。采用cDNA末端快速扩增方法(RACE),获得了番木瓜果肉Aetin基因的全长cDNA序列,将其命名为CpActin,Genbank登录号为FJ696416。CpActln全长cDNA为1533 bp,含有一个1134bp的开放阅读框,编码377个氨基酸,与毛白杨、葡萄、水稻、拟南芥的Actin同源性分别为98.94%、98.67%、96.29%、94.69%。利用邻接法构建了部分高等植物、哺乳动物和真菌的Actin系统进化树,结果表明番木瓜与葡萄的Actin进化距离最小。采用半定量RT-PCR技术分析CpActin基因在不同成熟度番木瓜果实中的表达情况,发现该基因的表达水平没有明显差异,表明CpActln基因可以作为内参,进行番木瓜其他果实基因差异表达的研究。 展开更多
关键词 番木瓜 肌动蛋白 克隆 表达分析
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番木瓜PL和β-Gal基因双价反义表达载体的构建 预览 被引量:1
9
作者 申艳红 陈晓静 何玮毅 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2010年第2期 159-163,共5页
在已报道的番木瓜果胶裂解酶(PL)和β-半乳糖苷酶(β-Gal)基因序列的基础上,设计特异引物,分别扩增保守区序列,将其分别反向插入植物表达载体pCAMB IA1301-35S-GUS-Nos的CaMV35S启动子和Nos终止子之间,构建反义表达载体pCP和pCG.然... 在已报道的番木瓜果胶裂解酶(PL)和β-半乳糖苷酶(β-Gal)基因序列的基础上,设计特异引物,分别扩增保守区序列,将其分别反向插入植物表达载体pCAMB IA1301-35S-GUS-Nos的CaMV35S启动子和Nos终止子之间,构建反义表达载体pCP和pCG.然后用2种不同的方法将带有完整启动子和终止子的PL和-βGal基因引入pCAMB IA2301中,获得PL和β-Gal基因的双价植物反义表达载体pCPG,并对2种方法进行比较. 展开更多
关键词 番木瓜 果胶裂解酶 Β-半乳糖苷酶 反义表达载体
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番木瓜酪氨酸氨基转移酶基因CpTAT的分离与分析 预览
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作者 申艳红 陈永萍 +1 位作者 杨菲颖 鲁娜 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1141-1146,共6页
番木瓜酪氨酸氨基转移酶(Tyrosine aminotransferase,TAT)是维生素E合成途径中的一个关键酶。在已有番木瓜果实成熟差异基因片段序列的基础上,采用RACE技术克隆了TAT基因的全长c DNA序列,命名为Cp TAT。该基因全长包含5′非编码区98 b... 番木瓜酪氨酸氨基转移酶(Tyrosine aminotransferase,TAT)是维生素E合成途径中的一个关键酶。在已有番木瓜果实成熟差异基因片段序列的基础上,采用RACE技术克隆了TAT基因的全长c DNA序列,命名为Cp TAT。该基因全长包含5′非编码区98 bp,3′非编码区232 bp,开放性阅读框1 266 bp,编码421个氨基酸。序列分析表明,该基因为谷草转氨酶超家族成员,催化活性位点为第253位的赖氨酸,编码蛋白与毛果杨、野草莓、桃、拟南芥和水稻的TAT蛋白同源性分别为83.69%、81.09%、80.76%、78.87%、54.67%。荧光定量分析表明,Cp TAT基因在根中的表达量最高,在茎和果实中的表达较低,在叶中的表达量最低。与对照相比,外源乙烯处理能诱导番木瓜果实中Cp TAT基因表达量升高,而1-MCP处理则抑制了该基因表达,在果实衰老期表达量升高,该基因可能在番木瓜果实成熟衰老中起作用。 展开更多
关键词 番木瓜 酪氨酸氨基转移酶 基因克隆 RACE 维生素E
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多花水仙花期类胡萝卜素物质和类黄酮物质的含量变化 预览 被引量:5
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作者 何炎森 杨碧云 +1 位作者 李科 陈晓静 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2013年第3期504-510,共7页
为了解多花水仙在开花过程中色素物质含量的变化.以多花水仙‘金盏银台’和‘黄花水仙2号’4个花期副冠和花被为材料.采用高效液相色谱法(HPLC)测定2种类胡萝卜素物质和11种类黄酮物质的含量。结果表明:多花水仙在花蕾期已经有大... 为了解多花水仙在开花过程中色素物质含量的变化.以多花水仙‘金盏银台’和‘黄花水仙2号’4个花期副冠和花被为材料.采用高效液相色谱法(HPLC)测定2种类胡萝卜素物质和11种类黄酮物质的含量。结果表明:多花水仙在花蕾期已经有大量色素物质积累;黄花水仙2号主要色素物质是芦丁和叶黄素,金盏银台的主要色素物质是芦丁、柚皮苷、阿魏酸和叶黄素;花期2个品种副冠和花被中芦丁、柚皮苷和阿魏酸的含量变化趋势基本一致.均表现为花蕾期含量最高,始花期、盛花期有所降低,衰败期又升高的趋势,而叶黄素含量变化不尽相同:经t测验分析.花期不同品种同一部位中芦丁、柚皮苷、阿魏酸和叶黄素的含量差异显著,同一品种不同部位中叶黄素和阿魏酸的含量差异显著,芦丁、柚皮苷的含量差异不显著。 展开更多
关键词 多花水仙 花色 类胡萝卜素 类黄酮 高效液相色谱法
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紫竹梅的减数分裂与核型分析 预览 被引量:1
12
作者 申艳红 蔡丽娟 陈晓静 《生物学通报》 2013年第8期49-51,共3页
以紫竹梅根尖和花药为材料,分析鸭跖草科紫竹梅的染色体组型,并观察花粉母细胞减数分裂过程中的染色体行为。紫竹梅体细胞染色体数目为24,由12对中着丝粒染色体组成,核型公式为2n=2x=24m。花粉母细胞减数分裂正常,在第一次分裂中... 以紫竹梅根尖和花药为材料,分析鸭跖草科紫竹梅的染色体组型,并观察花粉母细胞减数分裂过程中的染色体行为。紫竹梅体细胞染色体数目为24,由12对中着丝粒染色体组成,核型公式为2n=2x=24m。花粉母细胞减数分裂正常,在第一次分裂中期观察到12个二价体,与观察到的体细胞染色体数目互相印证。 展开更多
关键词 紫竹梅 染色体 核型分析 花粉母细胞 减数分裂
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番木瓜果肉果胶裂解酶基因克隆及反义植物表达载体的构建 预览 被引量:1
13
作者 申艳红 陈晓静 +1 位作者 何玮毅 卢秉国 《热带作物学报》 CSCD 2009年第1期,共5页
采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果肉果胶裂解酶(Pectate lyase,PL)基因的完整3′端和部分5′端序列。然后,根据本实验室已经获得的PL基因5′端DNA序列及笔者得到的3′端序列设计上、下游引物,以番木瓜基因组DNA为模板扩增得到P... 采用cDNA末端快速扩增方法,获得了番木瓜果肉果胶裂解酶(Pectate lyase,PL)基因的完整3′端和部分5′端序列。然后,根据本实验室已经获得的PL基因5′端DNA序列及笔者得到的3′端序列设计上、下游引物,以番木瓜基因组DNA为模板扩增得到PL基因的开放性阅读框。该序列编码385个氨基酸,与草莓、桃、芒果、拟南芥氨基酸序列的同源性分别为83.38%、75.76%、73.68%、65.96%。根据PL基因设计特异引物,扩增其保守区片段,将其反向插入pBI 121的CaMV 35 S启动子和Nos终止子之间,成功构建反义植物表达载体pBP,并导入到根癌农杆菌EHA 105中。 展开更多
关键词 番木瓜 果胶裂解酶 RACE 反义表达载体
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‘云香’水仙花香成分分析 被引量:5
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作者 李科 张游南 +1 位作者 李欢 陈晓静 《农业科技与信息:现代园林》 2015年第4期297-298,共2页
‘云香’水仙是福建农林大学园艺遗传育种研究所选育的多花水仙新品种,2012年4月1日通过福建省农作物品种审定委员会认定。‘云香’水仙花朵大、花朵数量多、花期长、香气浓,不仅具有优良的观赏性状,而且可作为提取香料的原料。本试验... ‘云香’水仙是福建农林大学园艺遗传育种研究所选育的多花水仙新品种,2012年4月1日通过福建省农作物品种审定委员会认定。‘云香’水仙花朵大、花朵数量多、花期长、香气浓,不仅具有优良的观赏性状,而且可作为提取香料的原料。本试验利用气相色谱质谱联用仪(GC-MS)分别对‘云香’水仙花蕾期、初花期、盛花期、衰败期的花朵样品进行了花香成分分析。以期为进一步研究花香成分的生物合成途径,指导花香育种奠定基础。试验采用Tenax管吸附剂吸附法采集‘云香’水仙花香成分。将采样瓶、活化后的Tenax吸附管、大气采样仪,相互之间用硅胶管连接。然后在采样瓶中装入水仙花样品用橡胶塞密封好,打开大气采样仪进行采样。采样完成后取下Tenax管,用1m L的色谱纯正己烷洗脱。取1μL洗脱的样品,用美国Varian Saturn3900/2100T气相色谱质谱联用仪进行分析。色谱条件:色谱柱为DB-5MS(内径0.25mm,柱长30m,液膜0.25μm);载气为氦气(纯度〉99.999%);流速1m L·min-1;进样口温度250℃;分流比1/2;起始70℃,保留3min;以10℃/min升到90℃保留2min;以5℃/min升到180℃保留1min;以8℃/min升到190℃保留2min。质谱条件:电离方式EI;电子能量70Ev;阱温220℃;传输线温度280℃;采集方式为全扫描;质量扫描范围为40~650amu。通过自带的软件Saturn GC/MS Workstation Version 5.52和谱库wiley7、nist98m、nist05m数据库进行图谱分析,得出可能的成分鉴定结果。以面积归一化法根据各组分的峰面积值换算样品中不同物质的相对含量。分析结果表明:‘云香’水仙花蕾期和初花期分别检测出25种成分,其中含量最高的5种是反式罗勒烯、乙酸苄酯、苯甲酸、3,4-二羟基苯乙二醇和茴香醚。盛花期检测出的成分上升至29种,其中含量最高的5种成分略有差别,分别是反式罗勒烯,其次是乙酸苄酯、茴香醚、顺式� 展开更多
关键词 多花水仙 '云香’ 香气 分析
番木瓜半胱氨酸蛋白酶基因CpCP的分离及表达分析 被引量:3
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作者 申艳红 陈晓静 +3 位作者 蔡雪玲 叶一江 耿姣姣 杨菲颖 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1789-1797,共9页
采用cDNA-AFLP技术分离了一个与番木瓜果实成熟衰老相关的差异片段,经生物信息学分析证实该片段属于半胱氨酸蛋白酶(Cysteine Protease,CP)基因。将差异片段序列在NCBI中的番木瓜基因组序列中搜索,获得了半胱氨酸蛋白酶基因DNA序列。... 采用cDNA-AFLP技术分离了一个与番木瓜果实成熟衰老相关的差异片段,经生物信息学分析证实该片段属于半胱氨酸蛋白酶(Cysteine Protease,CP)基因。将差异片段序列在NCBI中的番木瓜基因组序列中搜索,获得了半胱氨酸蛋白酶基因DNA序列。设计开放型阅读框上、下游引物,以木瓜果肉RNA逆转录的cDNA为模板扩增该基因全长cDNA序列,命名为CpCP(登录号:JN689334)。该基因属于C1肽酶家族中的C1A亚家族,编码471个氨基酸,含有家族特有的催化三联体:Cys166-His302-Asn322。Real-time PCR结果显示CpCP在果实中大量表达,是根、茎、叶、花中表达量的几十倍;CpCP受乙烯处理诱导,受1-MCP处理抑制,表达模式与番木瓜果实成熟衰老进程一致,说明CpCP参与了番木瓜果实成熟衰老进程。 展开更多
关键词 番木瓜 半胱氨酸蛋白酶 基因克隆 CDNA-AFLP 荧光定量PCR
多花水仙HMGS基因的克隆 预览 被引量:1
16
作者 李科 何炎森 陈晓静 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2014年第3期289-294,共6页
以多花水仙花瓣抑制消减杂交文库获得的羟甲基戊二酰辅酶A合酶(HMGS)基因片段为基础,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从黄花水仙2号和金盏银台中各克隆一条HMGS基因,两基因均含有一个1413bp的开放阅读框,编码470个氨基酸,但存在... 以多花水仙花瓣抑制消减杂交文库获得的羟甲基戊二酰辅酶A合酶(HMGS)基因片段为基础,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术从黄花水仙2号和金盏银台中各克隆一条HMGS基因,两基因均含有一个1413bp的开放阅读框,编码470个氨基酸,但存在2个氨基酸差异.氨基酸序列分析表明:黄花水仙2号与葡萄、大豆、蓖麻和玉米HMGS基因的氨基酸相似系数分别为83%、82%、82%和81%.以水仙Actin基因为内参基因,采用荧光定量PCR方法分析HMGS基因在两品种的表达水平,结果表明:两品种HMGS基因的表达水平差异并不明显. 展开更多
关键词 多花水仙 羟甲基戊二酰辅酶A合酶(HMGS) 克隆
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2个番木瓜多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因的克隆与分析 预览 被引量:1
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作者 申艳红 陈晓静 +2 位作者 李荣荣 卢秉国 何玮毅 《热带作物学报》 CSCD 2011年第5期 861-865,共5页
采用RT—PCR扩增获得了2个番木瓜果实多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因eDNA和DNA全长序列,将其命名为CpPGIP21和CpPGIP2。CpPGIP21基因全长为984bp,编码325个氨基酸;CpPGIP2基因全长为1025bp.编码326个氨基酸。2基因均没有内... 采用RT—PCR扩增获得了2个番木瓜果实多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP)基因eDNA和DNA全长序列,将其命名为CpPGIP21和CpPGIP2。CpPGIP21基因全长为984bp,编码325个氨基酸;CpPGIP2基因全长为1025bp.编码326个氨基酸。2基因均没有内含子序列,核苷酸序列有66.54%的相似性。氨基酸序列有63.53%的相似性。2基因均含有植物PGIP基因编码蛋白特有的亮氨酸重复保守序列LXXLXXLXXLXLXXNXLXGXIPXX。对粥伊基因在不同成熟度番木瓜果实表达量分析发现,2基因4个时期均有表达,而且基本呈现同一表达趋势,绿色期表达量最高,随着果实成熟表达量逐渐降低。 展开更多
关键词 番木瓜 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白(PGIP) 基因克隆 半定量RT—PCR
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番木瓜果实成熟相关基因的cDNA-AFLP分析及克隆 被引量:8
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作者 申艳红 陈晓静 +1 位作者 卢秉国 何玮毅 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1081-1088,共8页
为了探讨番木瓜果实成熟机理,利用cDNA-AFLP技术对破色期和半黄期的番木瓜果实进行基因差异表达分析,获得了50个与果实成熟相关的差异基因片段,其中28个与GenBank数据库中的功能基因同源,分别参与了果实成熟过程中基因表达调控,DNA与蛋... 为了探讨番木瓜果实成熟机理,利用cDNA-AFLP技术对破色期和半黄期的番木瓜果实进行基因差异表达分析,获得了50个与果实成熟相关的差异基因片段,其中28个与GenBank数据库中的功能基因同源,分别参与了果实成熟过程中基因表达调控,DNA与蛋白质合成及运输,蛋白质降解,能量代谢,营养物质代谢和逆境胁迫反应等过程。在差异片段序列基础上设计特异引物,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆了4条差异基因cDNA全长,分别命名为CpGMP、CpPAA1、CpPOD和CpMYB。半定量RT-PCR分析结果表明,随着果实的成熟衰老,4个基因的表达量相应变化,说明其可能参与果实的成熟过程。 展开更多
关键词 番木瓜 果实 成熟 CDNA-AFLP 差异表达 RACE
非洲菊的组培快繁 预览 被引量:8
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作者 陈晓静 李梅婷 林馨 《福建农林大学学报:自然科学版》 CSCD 北大核心 2006年第2期 169-172,共4页
以非洲菊红花黄芯品系F1幼苗的带芽短缩茎、无芽短缩茎、叶片和盆花的花托作外植体,进行组培快繁研究.结果表明:诱导愈伤组织及芽的增殖培养基均以MS+3.0mg·L^-1 BA+0.1mg·L^-1 NAA为佳,生根培养基以1/2MS+0.2mg... 以非洲菊红花黄芯品系F1幼苗的带芽短缩茎、无芽短缩茎、叶片和盆花的花托作外植体,进行组培快繁研究.结果表明:诱导愈伤组织及芽的增殖培养基均以MS+3.0mg·L^-1 BA+0.1mg·L^-1 NAA为佳,生根培养基以1/2MS+0.2mg·L^-1 2,4-D为好;带芽短缩茎作外植体与无芽短缩茎、嫩叶和花托相比,明显缩短了愈伤组织诱导期和芽苗的诱导分化期. 展开更多
关键词 非洲菊 组织培养 快速繁殖
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