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脑心肌炎病毒VP2基因真核表达质粒的构建
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作者 张海霞 王兴陇 +8 位作者 王丹 李倩 韩玉梅 赵克学 梁浩勤 邓盈盈 李向茸 李琼毅 冯若飞 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期139-143,共5页
目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检... 目的构建脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)VP2基因真核表达质粒,并于CHO细胞中表达。方法 RT-PCR法扩增EMCV VP2目的基因,克隆至载体pcDNA3. 1中,构建重组质粒pcDNA3. 1-VP2,脂质体法转染CHO细胞。转染48 h后,RT-PCR法检测EMCV VP2基因mRNA的转录情况,免疫组化法及Western blot法检测EMCV VP2蛋白的表达情况。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒pcDNA3. 1-VP2构建正确。EMCV VP2基因m RNA及蛋白可在CHO细胞中正常转录及表达,且EMCV VP2蛋白可与兔抗EMCV阳性血清发生特异性结合,主要分布于CHO细胞膜上。结论成功构建了重组质粒pcDNA3. 1-VP2,并有效地在CHO细胞中进行了表达,为EMCV VP2基因体外表达及其功能的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 VP2基因 基因重组 真核表达 CHO细胞
脑心肌炎病毒衣壳蛋白VP3真核表达载体pCMV-HA-VP3的构建及融合表达
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作者 李倩 李向茸 +3 位作者 马瑞仙 李生军 王兴陇 冯若飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期226-233,共8页
为构建脑心肌炎病毒(EMCV)衣壳蛋白VP3的真核表达载体pCMV-HA-VP3,以期实现其在HEK293、BHK21及HeLa这三种不同细胞中的表达。提取脑心肌炎病毒RNA,通过RT-PCR、酶切与连接等方法构建重组质粒pCMV-HA-VP3,将表达载体转染进HEK293、BHK21... 为构建脑心肌炎病毒(EMCV)衣壳蛋白VP3的真核表达载体pCMV-HA-VP3,以期实现其在HEK293、BHK21及HeLa这三种不同细胞中的表达。提取脑心肌炎病毒RNA,通过RT-PCR、酶切与连接等方法构建重组质粒pCMV-HA-VP3,将表达载体转染进HEK293、BHK21及HeLa这三种不同细胞中,利用RT-PCR进行基因表达情况检测,采用Western-blotting和IFA对融合蛋白在这三种不同细胞中的表达及定位情况进行分析。结果显示,成功构建了衣壳蛋白VP3的真核表达载体pCMV-HA-VP3,并且实现了VP3和HA标签在三种细胞中的融合表达,其在HEK293细胞中表达量最高,其次为BHK21细胞,表达量最低的是HeLa细胞。结果表明,表达的VP3蛋白具有抗原性,且在细胞膜、细胞浆和细胞核中均有分布,为深入研究衣壳蛋白VP3的功能及在EMCV感染过程中筛选与宿主细胞互作的蛋白夯实了基础。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 VP3基因 真核表达载体 HA标签
泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
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作者 邓盈盈 谢晶莹 +5 位作者 韩玉梅 张海霞 李向茸 李琼毅 魏锁成 冯若飞 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期355-362,共8页
为建立一种泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为泛素基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中公布的泛素基因序列设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测泛素基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法... 为建立一种泛素基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为泛素基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中公布的泛素基因序列设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测泛素基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法进行条件优化与评价。结果显示,建立的实时荧光定量PCR方法的线性关系好,以质粒标准品构建的标准曲线的相关系数r~2为0.999;灵敏性、特异性及重复性均较高;应用建立的方法对多种种属来源细胞进行检测,能检测出不同类型细胞中泛素的含量。结果表明,成功建立了一种快速、准确检测泛素TaqMan实时荧光定量PCR方法。 展开更多
关键词 泛素 实时荧光定量PCR TAQMAN探针
动物疫病病毒样颗粒疫苗的研究进展 预览
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作者 刘萍 郭富城 +3 位作者 李林杰 李凌浩 马晓霞 马忠仁 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期102-107,共6页
病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是由病毒结构蛋白组成的空心颗粒,具有天然病毒粒子形态和空间结构,但不含有病毒核酸,无感染能力,也不能自主复制[1-2]。许多病毒的结构蛋白在异源系统内重组表达即可自装配形成VLPs,这些VLPs的... 病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)是由病毒结构蛋白组成的空心颗粒,具有天然病毒粒子形态和空间结构,但不含有病毒核酸,无感染能力,也不能自主复制[1-2]。许多病毒的结构蛋白在异源系统内重组表达即可自装配形成VLPs,这些VLPs的形态和结构与真正的病毒粒子相似,大小介于15 nm~400 nm,具有天然病毒粒子的空间构象和与天然病毒相似的免疫原性。 展开更多
关键词 疫苗免疫 哺乳动物细胞 表达系统 结构蛋白 动物疫病 中和抗体 重组杆状病毒 病毒粒子 病毒样颗粒 研究进展
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LGP2参与抗病毒天然免疫应答的研究进展
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作者 李倩 李向茸 冯若飞 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期313-317,共5页
RIG‐Ⅰ样受体(RIG‐Ⅰ like receptors,RLRs)是天然免疫系统中一类重要模式识别受体,在细胞天然免疫应答中发挥重要的作用,LGP2 是RLRs 家族成员之一,对RLRs 信号转导有正向和负向调控的双重作用。LGP2 依据感染病毒种类的不同发挥着... RIG‐Ⅰ样受体(RIG‐Ⅰ like receptors,RLRs)是天然免疫系统中一类重要模式识别受体,在细胞天然免疫应答中发挥重要的作用,LGP2 是RLRs 家族成员之一,对RLRs 信号转导有正向和负向调控的双重作用。LGP2 依据感染病毒种类的不同发挥着不同的调控作用,但详细作用机制不明确。随着研究的深入,LGP2 在天然免疫应答中的作用愈发重要。本文就近年来对LGP2 参与RLRs 介导的抗病毒天然免疫应答的调控及在不同病毒感染宿主中所起的作用作一综述,以期为LGP2 深入研究提供参考。 展开更多
关键词 RIG‐Ⅰ样受体 LGP2 抗病毒天然免疫应答
禽流感病毒H9N2与新城疫病毒在鸡成纤维细胞中共感染对病毒复制的影响 预览
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作者 谢军 孙英杰 +3 位作者 周昌娈 朱善元 丁铲 柏家林 《畜牧兽医学报》 CSCD 北大核心 2018年第11期2521-2528,共8页
临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病... 临床上禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)与新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)共同感染情况经常发生。为研究AIV与NDV在鸡成纤维细胞DF-1中的共感染对病毒复制的相互影响,首先对NDV和H9N2亚型AIV单独感染DF-1细胞时病毒的复制情况进行了分析,设定以NDV和AIV共感染细胞后12和24h作为样品采集点,通过Western blot、间接免疫荧光和实时荧光定量PCR检测了两种病毒共感染与单独感染对病毒NP蛋白表达的相互影响。结果显示:Western blot分析表明共感染12和24h,NDV NP蛋白的表达分别下调了70.6%(P〈0.001)和45.7%(P〈0.001),AIV NP蛋白的表达分别下调了61.5%(P〈0.001)和82.8%(P〈0.001);免疫荧光分析显示共感染组细胞中NDV和AIV的NP蛋白丰度在感染12h时间点分别下调81.1%(P〈0.001)和65.5%(P〈0.001),24h时则分别下调41.2%(P〈0.05)和47.4%(P〈0.001);qPCR结果也证实共感染12和24h组NDV NP的mRNA表达水平分别下调了64.3%(P〈0.001)和64.4%(P〈0.05),AIV NP的mRNA表达水平分别下调了61.5%(P〈0.001)和63.0%(P〈0.001)。本研究证明AIV与NDV共感染在细胞水平上可引起病毒复制的相互抑制,为研究NDV和AIV共感染机制在细胞水平上奠定了基础。 展开更多
关键词 禽流感病毒 新城疫病毒 鸡成纤维细胞DF-1 共感染 病毒复制
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胰蛋白酶在两种载体上的固定化效果比较 预览
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作者 何云富 张邵博 +2 位作者 程浩 兰海鸥 李明生 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第4期16-23,共8页
以片状载体和偶联DEAE的纤维素微球作为固定化载体,以戊二醛作为交联剂,制备固定化胰蛋白酶,研究交联剂浓度、时间、交联温度等条件对交联效果的影响,并对固定化后的胰蛋白酶的效果进行探究.结果显示,在片状载体和纤维素微球上,固定化... 以片状载体和偶联DEAE的纤维素微球作为固定化载体,以戊二醛作为交联剂,制备固定化胰蛋白酶,研究交联剂浓度、时间、交联温度等条件对交联效果的影响,并对固定化后的胰蛋白酶的效果进行探究.结果显示,在片状载体和纤维素微球上,固定化最适条件大致相同,最适交联剂浓度为2%,胰蛋白酶浓度为3%,最佳交联时间为10h,交联温度和固定化温度均为10℃.纤维素微球和片状载体在相同条件下酶固载量分别达到145mg/g和112.6mg/g,活力回收率分别为17.3%和14%.两种载体相比,纤维素微球作为固定胰蛋白酶的载体效果更佳. 展开更多
关键词 固定化酶 胰蛋白酶 片状载体 纤维素微球
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TMEM43基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 预览
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作者 张海霞 赵克学 +5 位作者 邓盈盈 梁浩勤 李倩 韩玉梅 马忠仁 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第4期9-15,共7页
根据Genbank中登录的TMEM43基因序列设计并合成引物,建立了TMEM43 SYBR GreenⅠreal-time PCR方法.利用该方法构建标准曲线,并对灵敏性及重复性进行验证.最后对随机选取的几种人源细胞及不同物种细胞进行检测.结果显示,建立的TMEM43 SYB... 根据Genbank中登录的TMEM43基因序列设计并合成引物,建立了TMEM43 SYBR GreenⅠreal-time PCR方法.利用该方法构建标准曲线,并对灵敏性及重复性进行验证.最后对随机选取的几种人源细胞及不同物种细胞进行检测.结果显示,建立的TMEM43 SYBR GreenⅠreal-time PCR方法线性关系好,以标准品构建的标准曲线相关系数R2=1;灵敏性比普通PCR高10倍,能成功检出不同细胞中TMEM43表达量.表明建立的TMEM43 SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法可用于TMEM43基因表达的检测及定量分析,可为临床TMEM43相关疾病的检测及分析提供实验依据. 展开更多
关键词 跨膜蛋白43 SYBR GreenⅠ实时荧光定量聚合酶链反应 检测方法建立
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酶解大豆蛋白的制备工艺研究及其在细胞培养中的应用研究 预览
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作者 郑荣 何云富 +7 位作者 张邵博 李倬 冶眩青 程浩 丁功涛 冯玉萍 马忠仁 李明生 《天然产物研究与开发》 CSCD 北大核心 2018年第9期1627-1633,1654共8页
采用两种非动物源性蛋白酶水解大豆蛋白,以水解度为指标,对不同比例4种酶两两组合测试其水解度,选出水解最佳用酶;在单因素试验基础上,采用正交试验对酶解大豆蛋白的工艺条件进行优化,并将产物进行动物细胞的生长进行检测。结果表明:复... 采用两种非动物源性蛋白酶水解大豆蛋白,以水解度为指标,对不同比例4种酶两两组合测试其水解度,选出水解最佳用酶;在单因素试验基础上,采用正交试验对酶解大豆蛋白的工艺条件进行优化,并将产物进行动物细胞的生长进行检测。结果表明:复合蛋白酶与碱性蛋白酶以等比例进行混合,其水解效果最佳;水解最佳工艺为:温度60℃、pH值7.0和酶/底物(E/S)=1∶4(质量比),水解时间为4h,其水解度为43.7%。将酶解产物培养BHK-21细胞,并与Hypep1510进行对比,细胞生长状态良好,其细胞密度在120h时最大,为3.96×105cells/mL,与Hypep1510相比,最大细胞密度并无明显差异,其倍增时间为26.2h,高于阴性对照组与阳性对照组,且细胞形态基本未发生改变,表明酶解大豆蛋白所的产物能够缩短细胞倍增的时间,且具有一定的促细胞生长作用,为其在动物细胞大规模培养中的应用提供了理论依据。 展开更多
关键词 酶解 非动物源性 大豆蛋白 细胞培养
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人源跨膜蛋白43(TMEM43)的检测、细胞内定位及体外真核表达
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作者 张海霞 李倩 +9 位作者 王丹 赵克学 韩玉梅 王兴陇 梁浩勤 邓盈盈 佟春微 李向茸 马忠仁 冯若飞 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2018年第12期2002-2009,共8页
为探究人源跨膜蛋白43(TMEM43)基因含量、定位分布及体外真核表达情况,利用RT-PCR及Western blot方法分别检测内源MRC-5和HEK293细胞内TMEM43基因及其蛋白表达情况,采用间接免疫荧光实验进一步分析其在MRC-5细胞内的分布;构建重组表达载... 为探究人源跨膜蛋白43(TMEM43)基因含量、定位分布及体外真核表达情况,利用RT-PCR及Western blot方法分别检测内源MRC-5和HEK293细胞内TMEM43基因及其蛋白表达情况,采用间接免疫荧光实验进一步分析其在MRC-5细胞内的分布;构建重组表达载体pcDNA3.1-EGFP-TMEM43,转染至HEK293细胞内检测外源TMEM43在HEK293细胞内的基因和蛋白表达情况。结果显示,基因水平TMEM43在MRC-5细胞内的表达明显高于HEK293细胞,蛋白水平仅能检测到MRC-5细胞内TMEM43的表达。重组表达质粒pcDNA3.1-EGFP-TMEM43转染HEK293细胞后,基因水平TMEM43表达显著升高, Western blot可检测到转染后细胞内TMEM43蛋白成功表达。结果表明,不同细胞表达TMEM43含量存在差异,肺来源细胞内TMEM43的表达明显高于肾来源的细胞;构建的重组载体pcDNA3.1-EGFP-TMEM43可成功转染HEK293细胞并表达。该研究为TMEM43结构及功能、与疾病相关机理的进一步探究提供了实验依据。 展开更多
关键词 跨膜蛋白43 真核表达载体 间接免疫荧光实验
Zbtb1基因促进小鼠淋巴细胞发育并抑制髓系细胞产生
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作者 薛宇佳 曹欣 +7 位作者 杜江龙 王晨 许强 王波波 马晓霞 周雪雁 马忠仁 蔡葵蒸 《免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2018年第1期10-18,共9页
目的 探讨Zbtb1基因促进淋巴细胞发育的机制和对髓系细胞产生的影响。方法 采用逆转录病毒在造血干细胞中过表达特定基因,并于OP9/OP-DL1系统中进行体外分化。结果 Zbtb1野生型造血干细胞在OP9/OP-DL1系统中可分化为B/T细胞,Zbtb1突变体... 目的 探讨Zbtb1基因促进淋巴细胞发育的机制和对髓系细胞产生的影响。方法 采用逆转录病毒在造血干细胞中过表达特定基因,并于OP9/OP-DL1系统中进行体外分化。结果 Zbtb1野生型造血干细胞在OP9/OP-DL1系统中可分化为B/T细胞,Zbtb1突变体(Scan T)造血干细胞在上述系统中淋巴细胞分化受阻,在淋巴细胞分化条件下均发育为髓系细胞。在Scan T突变体的造血干细胞中过表达抗凋亡基因Bcl2仅能部分恢复T细胞的早期发育,却不能改变其髓系细胞发育倾向。此外,在野生型的造血干细胞中过表达Zbtb1基因可在体外髓系诱导条件下抑制髓系细胞的发育。结论 Zbtb1基因可能通过抑制凋亡促进淋巴细胞发育,同时通过调控Csf1r的转录水平抑制髓系细胞分化。 展开更多
关键词 Zbtb1基因 淋巴细胞 髓系细胞 Csf1r
流产衣原体CPAF基因的克隆序列分析及原核表达 预览
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作者 刘萍 马晓霞 +5 位作者 周小凯 马鹏 常秋燕 李林杰 李凌浩 马忠仁 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第3期86-91,共6页
为了研究流产衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的免疫原性,建立快速有效的流产衣原体抗体检测方法,根据Gen Bank中公布的流产衣原体基因组序列,设计并合成了流产衣原体CPAF蛋白编码基因的特异性引物,以流产衣原体标准菌株基因组为模板,经... 为了研究流产衣原体蛋白酶样活性因子(CPAF)的免疫原性,建立快速有效的流产衣原体抗体检测方法,根据Gen Bank中公布的流产衣原体基因组序列,设计并合成了流产衣原体CPAF蛋白编码基因的特异性引物,以流产衣原体标准菌株基因组为模板,经PCR扩增获得长度为1 809 bp目的基因片段;对获得的目的基因进行测序,并用生物信息学软件进行预测分析;再将该片段插入原核表达载体p ET-30a中,经双酶切、测序鉴定;构建成功的表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG对目的蛋白进行诱导表达,通过对诱导条件的优化,确定诱导表达的最佳条件,表达产物用SDS-PAGE和Western Blot检测。结果显示,成功克隆流产衣原体CPAF蛋白的编码基因,该编码产物可能是定位于宿主细胞质中的一种衣原体分泌性蛋白酶,分子内具有多个可能的抗原表位;重组表达质粒经IPTG诱导后,表达分子质量为67.6 ku的CPAF蛋白,该重组蛋白能与抗His-tag单克隆抗体以及流产衣原体阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。结果表明,以大肠杆菌表达系统重组表达的流产衣原体CPAF蛋白具有良好的免疫原性,可作为动物流产衣原体病的血清学诊断及亚单位疫苗研究的候选抗原。 展开更多
关键词 流产衣原体 CPAF 克隆 序列分析 原核表达
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人源化IGF-Ⅰ基因的人工合成、重组与表达 预览
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作者 李向茸 王兴陇 +4 位作者 李倩 邓盈盈 梁浩勤 周飚 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第1期20-25,共6页
为了实现人源化胰岛素样生长因子Ⅰ(human insulin-like growth factors-Ⅰ,hIGF-Ⅰ)基因在大肠杆菌中的高效表达,了解IGF-Ⅰ基因结构与功能的关系,探索人工制备的hIGF-Ⅰ在临床治疗疾病上的应用,实验参照GenBank中人IGF-Ⅰ氨基酸序... 为了实现人源化胰岛素样生长因子Ⅰ(human insulin-like growth factors-Ⅰ,hIGF-Ⅰ)基因在大肠杆菌中的高效表达,了解IGF-Ⅰ基因结构与功能的关系,探索人工制备的hIGF-Ⅰ在临床治疗疾病上的应用,实验参照GenBank中人IGF-Ⅰ氨基酸序列并进行密码子优化,然后人工合成这条基因并将克隆至pUC57载体上.构建重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,转化大肠杆菌BL21菌株,进行不同诱导条件的优化,SDS-PAGE电泳确定最佳诱导条件,并利用建立hIGF-Ⅰ的间接ELISA检测方法分析表达产物活性.结果表明,获得重组表达载体pGEX-6P-1-hIGF-Ⅰ,并在大肠杆菌中实现与GST蛋白的融合可溶性表达.最佳诱导条件OD600值为0.8、IPTG浓度为0.5 mmol/L,表达蛋白的浓度为2.811 mg/mL,且产物具有抗原活性.说明人工制备的hIGF-Ⅰ与天然的hIGF-Ⅰ生物活性有部分相同,在基础研究和药物开发方面可作为替代物进行研究. 展开更多
关键词 人源化胰岛素样生长因子基因Ⅰ(hIGF-Ⅰ) 重组质粒 克隆 表达 诱导 ELISA检测
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小核糖核酸病毒科病毒细胞受体研究进展 预览
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作者 王兴陇 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第1期26-32,共7页
小核糖核酸病毒是重要的人畜共患病原体,它会导致人和动物出现亚临床感染或从轻度发热到心脏、肝脏和中枢神经系统的严重疾病.近年来,该科病毒的感染机制、受体等逐渐成为学术界研究的热点.文章针对小核糖核酸病毒的分类、病毒受体的研... 小核糖核酸病毒是重要的人畜共患病原体,它会导致人和动物出现亚临床感染或从轻度发热到心脏、肝脏和中枢神经系统的严重疾病.近年来,该科病毒的感染机制、受体等逐渐成为学术界研究的热点.文章针对小核糖核酸病毒的分类、病毒受体的研究方法及研究现状作以综述,为今后相关研究提供理论依据. 展开更多
关键词 小核糖核酸病毒科 病毒受体 研究方法
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鼠源VCAM-1真核表达载体构建及在同源细胞中过表达研究 预览
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作者 王兴陇 李向茸 +6 位作者 李倩 马瑞仙 李生军 李琼毅 张海霞 马忠仁 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第3期20-24,共5页
构建鼠源VCAM-1基因的真核表达载体,并使其在C2C12细胞中过表达,为相关病毒受体研究奠定基础.采用RT-PCR方法扩增鼠源VCAM-1基因,构建重组载体pcDNA3.1-VCAM-1.通过脂质体法转染至C2C12细胞内;采用实时荧光定量PCR和Western-blot分别检... 构建鼠源VCAM-1基因的真核表达载体,并使其在C2C12细胞中过表达,为相关病毒受体研究奠定基础.采用RT-PCR方法扩增鼠源VCAM-1基因,构建重组载体pcDNA3.1-VCAM-1.通过脂质体法转染至C2C12细胞内;采用实时荧光定量PCR和Western-blot分别检测目的基因和蛋白的过表达情况.应用间接免疫荧光实验分析VCAM-1在细胞中的定位.构建的重组质粒pcDNA3.1-VCAM-1转染C2C12细胞后,实验组VCAM-1基因和蛋白表达均显著高于对照组细胞(P<0.01),且主要表达定位于胞浆中.结果表明,实验成功地构建了鼠源VCAM-1真核表达载体,并在同源细胞中实现过表达. 展开更多
关键词 VCAM-1 C2C12细胞 过表达
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牛轮状病毒VP4、VP6、VP7基因分子生物学研究进展 预览
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作者 梁浩勤 李琼毅 +4 位作者 赵克学 邓盈盈 赖露菊 魏锁成 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第3期33-39,共7页
轮状病毒是引起幼龄动物急性胃肠炎和腹泻的主要病因.犊牛感染轮转病毒会对集中饲养的牛群造成严重的经济损失,制约养牛产业的发展.轮状病毒的11个节段基因分别编码了6种结构蛋白(VP1-VP4,VP6,VP7)和6种非结构蛋白(NSP1-NSP6),其中VP4和... 轮状病毒是引起幼龄动物急性胃肠炎和腹泻的主要病因.犊牛感染轮转病毒会对集中饲养的牛群造成严重的经济损失,制约养牛产业的发展.轮状病毒的11个节段基因分别编码了6种结构蛋白(VP1-VP4,VP6,VP7)和6种非结构蛋白(NSP1-NSP6),其中VP4和VP7与病毒的毒力密切相关,分别决定了病毒的P型和G型.VP6是病毒的特异性抗原,也是决定轮状病毒分组的重要蛋白.通过综述VP4、VP6、VP7的分子特征及研究进展,对目前开发的疫苗产品进行了简述. 展开更多
关键词 牛轮状病毒 VP4 VP6 VP7 疫苗
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ICAM-1在NF-κB通路中表达的研究进展 预览 被引量:1
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作者 韩玉梅 谢晶莹 +1 位作者 邓盈盈 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第3期40-45,共6页
细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1),属于免疫球蛋白超家族中的一员,其主要功能是参与白细胞的迁移,来作为T淋巴细胞活化信号和调节炎性因子的表达.因此,ICAM-1表达量的变化与机体多种疾病相关.ICAM-1启动子区... 细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1),属于免疫球蛋白超家族中的一员,其主要功能是参与白细胞的迁移,来作为T淋巴细胞活化信号和调节炎性因子的表达.因此,ICAM-1表达量的变化与机体多种疾病相关.ICAM-1启动子区域含有大量能与转录因子及协同刺激物结合的基因位点,因而多种信号通路及转录因子参与调节ICAM-1的转录表达.NF-κB通路作为重要的炎症信号通路,同样也是调控ICAM-1表达的一条关键性转录通路.在炎症、病毒及肿瘤等疾病条件下,多种细胞因子能够通过激活NF-κB通路,从而改变ICAM-1的基因及蛋白表达水平.同时,ICAM-1作为疾病治疗中重要的靶点,为疾病的治疗开辟了新的道路. 展开更多
关键词 ICAM-1 NF-ΚB通路 炎症 调节 治疗
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脑心肌炎病毒pCMV-HA-VP2表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达 预览
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作者 李倩 李向茸 +3 位作者 王兴陇 马瑞仙 李生军 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第3期46-51,共6页
目的:构建脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis Virus,EMCV)衣壳蛋白VP2基因的真核表达载体pCMV-HA-VP2,并在HEK293细胞中表达.方法:提取EMCV的总RNA,RT-PCR扩增VP2基因,酶切后构建带HA标签的真核表达质粒pCMV-HA-VP2,运用脂质体介导法... 目的:构建脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis Virus,EMCV)衣壳蛋白VP2基因的真核表达载体pCMV-HA-VP2,并在HEK293细胞中表达.方法:提取EMCV的总RNA,RT-PCR扩增VP2基因,酶切后构建带HA标签的真核表达质粒pCMV-HA-VP2,运用脂质体介导法将其转染至HEK293细胞中,分别进行过表达检测、Western-blotting分析及IFA检测来验证VP2基因的转录及表达情况.结果:重组表达载体pCMV-HA-VP2构建成功,转染至HEK293细胞中,VP2蛋白和HA标签融合表达成功.结论:EMCV衣壳蛋白VP2基因的真核表达载体pCMV-HA-VP2在HEK293细胞中的成功表达,为EMCV衣壳蛋白的功能研究提供理想的实验材料,同时也为EMCV感染机制及其受体研究奠定基础. 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 VP2基因 真核表达载体 HEK293细胞
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乳腺生物反应器在生物制药领域的研究进展 预览
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作者 谢晶莹 张勇 冯若飞 《西北民族大学学报:自然科学版》 2018年第2期57-62,共6页
乳腺生物反应器是利用转基因动物生产功能蛋白质的技术.这项技术开创了基因工程制药的新途径.而其具有的低成本、高质量,稳定的生物学活性、较短的生产周期、较高的经济效益等一系列研发特点,使得这一生产方式成为医药产业的主要手段.
关键词 乳腺生物反应器 转基因动物 生物制药
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鼠源VCAM-1基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 王兴陇 包晓婧 +2 位作者 张海霞 李向茸 冯若飞 《中国兽医科学》 CSCD 北大核心 2018年第1期27-33,共7页
为建立一种鼠源VCAM-1基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为鼠源VCAM-1基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中登录的鼠源VCAM-1基因序列,设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测鼠源VCAM-1基因的实时荧光定... 为建立一种鼠源VCAM-1基因TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,以期为鼠源VCAM-1基因的动态检测提供有效的试验手段。根据GenBank中登录的鼠源VCAM-1基因序列,设计1对荧光定量PCR引物及1条探针,建立一种快速检测鼠源VCAM-1基因的实时荧光定量PCR方法,并对建立的方法进行条件优化与评价。结果显示,建立的实时荧光定量PCR方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数r2为0.998;灵敏性、重复性及特异性均较高。可用于鼠源细胞中VCAM-1基因的定性鉴别和含量测定。结果表明,成功建立了一种快速准确检测鼠源VCAM-1基因的TaqMan实时荧光定量PCR法。 展开更多
关键词 VCAM-1基因 TAQMAN探针 实时荧光定量PCR 检测
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