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前列腺上皮内瘤中微血管密度、DNA倍体、免疫表型与其生物学特性的关系 预览 被引量:1
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作者 侯惠莲 张学斌 +4 位作者 李旭 张冠军 王鸿雁 邓元 王敏 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期 602-604,634,共4页
目的探讨微血管密度(MVD)、DNA倍体、免疫表型与前列腺上皮内瘤(PIN)及其生物学特性的关系。方法应用免疫组织化学SP法和计算机图像分析技术,对24例前列腺增生症(BPH)、23例低级别上皮内瘤(LGPIN)、26例前列腺癌(PC)伴发高级... 目的探讨微血管密度(MVD)、DNA倍体、免疫表型与前列腺上皮内瘤(PIN)及其生物学特性的关系。方法应用免疫组织化学SP法和计算机图像分析技术,对24例前列腺增生症(BPH)、23例低级别上皮内瘤(LGPIN)、26例前列腺癌(PC)伴发高级别上皮内瘤(HGPIN)的石蜡包埋标本进行CD34、34βE12、P63、P504s表达的检测,定量测定其MVD和细胞核DNA倍体。结果不同级别的PIN中MVD和DNA平均倍体均明显高于BPH组,但明显低于PC组(P〈0.01),且随PIN级别的增高,DNA倍体的异多倍体数及MVD值随之升高(P〈0.01)。DNA倍体与MVD呈正相关关系。34βEl2和P63在BPH和LGPIN腺体周围的基底细胞呈连续阳性,在HGPIN中呈断续阳性,在PC中呈阴性。P504s在HGPIN中呈灶状阳性,在PC中呈强阳性,在BPH和LGPIN中呈阴性。结论DNA倍体、MVD与PIN密切相关,是反映其生物学特性的重要参考指标;免疫表型进一步证实PIN特别是HGPIN是PC的癌前病变。 展开更多
关键词 前列腺上皮内瘤 前列腺癌 微血管密度 DNA倍体 免疫组织化学
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P13K抑制剂对食管癌Eca-109细胞株放射增敏作用及机制 预览
2
作者 张晓智 巩会杰 +3 位作者 李洁 侯磊 车少敏 陈葳 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第18期1738-1741,共4页
目的:研究P13K抑制剂对食管癌细胞株Eea-109放射增敏作用及机制.方法:以食管癌细胞株Eta-109为实验对象,MTT法观察P13K抑制剂LY294002对Eta-109细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;RT—PCR检测DNA双链断裂修复基因DNA—... 目的:研究P13K抑制剂对食管癌细胞株Eea-109放射增敏作用及机制.方法:以食管癌细胞株Eta-109为实验对象,MTT法观察P13K抑制剂LY294002对Eta-109细胞增殖抑制;克隆形成实验分析细胞放射敏感性;RT—PCR检测DNA双链断裂修复基因DNA—PKcs mRNA表达;流式细胞技术检测细胞周期.结果:P13K抑制剂LY294002对Eea-109细胞有生长抑制作用,且呈剂量依赖性,在较低浓度(10μmol/L)时即可降低Eea-109细胞的克隆形成率,其放射增敏比为1.58.药物LY294002组DNA—PKcs mRNA表达受抑,但与对照组比较差异无统计学意义;照射组表达较对照组明显升高(P〈0.05);药物LY294002+照射组的表达较照射组下降(P〈0.05).药物LY294002组G2期细胞比例与对照组比较差异无统计学意义,照射组较对照组升高(P〈0.01),药物LY294002+照射组G2期细胞比例较照射组下降(P〈0.05).结论:P13K抑制剂LY294002对Eta-109细胞有放射增敏作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞DNA双链断裂修复基因DNA—PKes及减少G2期细胞阻滞有关. 展开更多
关键词 P13K 放射敏感性 食管肿瘤 DNA—PKcs
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拓扑替康对食管癌细胞株Eca-109的放射增敏作用及机制 预览 被引量:2
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作者 张晓智 李洁 +2 位作者 巩会杰 侯磊 陈葳 《现代肿瘤医学》 CAS 2009年第10期 1850-1853,共4页
目的:研究拓扑替康(topotecan,TPT)对人食管癌细胞株Eca-109的放射增敏作用及机制。方法:MTT法检测TPT对Eca-109细胞增殖抑制作用,克隆形成实验检测TPT对Eca-109的放射增敏效应;单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比。... 目的:研究拓扑替康(topotecan,TPT)对人食管癌细胞株Eca-109的放射增敏作用及机制。方法:MTT法检测TPT对Eca-109细胞增殖抑制作用,克隆形成实验检测TPT对Eca-109的放射增敏效应;单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比。相差显微镜观察肿瘤细胞形态学改变,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率。结果:TPT对Eca-109细胞有增殖抑制作用,且呈时间-剂量依赖性,10、20、40mg/L TPT的放射增敏比分别为1.22、1.29、1.36;增敏组凋亡率、G2/M期细胞比例较对照组增多(P〈0.05)。结论:TPT对食管癌细胞系Eca-109有放射增敏作用,其机制可能与促进细胞凋亡及引起G2/M期阻滞有关。 展开更多
关键词 食管癌 拓扑替康 放射增敏
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用抑制性消减杂交方法筛选人肾癌相关基因 预览 被引量:1
4
作者 王莹 陈葳 李旭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期 89-93,共5页
目的应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌差异表达基因文库并进行差异表达基因筛选。方法以肾癌细胞株RLC-310和肾近曲小管细胞株HK-2互为实验组和对照组,提取mRNA,应用抑制性消减杂交技术进行正反两向消减杂交,获得人肾癌细胞差异表... 目的应用抑制性消减杂交技术构建人肾癌差异表达基因文库并进行差异表达基因筛选。方法以肾癌细胞株RLC-310和肾近曲小管细胞株HK-2互为实验组和对照组,提取mRNA,应用抑制性消减杂交技术进行正反两向消减杂交,获得人肾癌细胞差异表达基因文库,结合反向Northern斑点印迹杂交,筛选差异基因克隆,并进行测序分析。结果正向和反向文库共包含1200多个阳性克隆,经斑点杂交筛选后,对213个差异克隆进行测序并经BLAST分析,得到144个差异表达基因,与肾癌相关的高表达基因67个,低表达基因77个,其中新EST14个,未知功能基因21个;对测序基因进行聚类分析发现与细胞生长、黏附、凋亡等肿瘤细胞生物学行为相关。结论该文库质量可靠,所筛选出的差异基因和新的基因为进一步筛选肾癌特异性相关基凶,绘制肾癌差异基因表达谱,最终阐明肾癌发生、发展、转移机制提供了实验材料和研究靶点. 展开更多
关键词 抑制性消减杂交技术 肾癌 差异表达基因
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人宫颈癌FHIT基因的表达改变与HPV16感染的关系 预览 被引量:2
5
作者 韩瑾 陈葳 李旭 《西安交通大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期 185-188,199,共5页
目的探讨FHIT基因表达改变和HPV16感染与人宫颈癌发生的关系。方法采用反转录-巢式聚合酶链反应方法测定5种人宫颈癌细胞株(SiHa、HeLa、RJC-1、CS1213、C4—1)和58例宫颈癌组织与18例正常宫颈对照中FHIT mRNA的表达;回收7例FHIT基... 目的探讨FHIT基因表达改变和HPV16感染与人宫颈癌发生的关系。方法采用反转录-巢式聚合酶链反应方法测定5种人宫颈癌细胞株(SiHa、HeLa、RJC-1、CS1213、C4—1)和58例宫颈癌组织与18例正常宫颈对照中FHIT mRNA的表达;回收7例FHIT基因不同的转录扩增产物,纯化后进行DNA测序;PCR技术检测组织中HPV16型的感染状况。结果SiHa、HeLa和C4—1宫颈癌细胞中有FHIT基因转录异常;宫颈癌组织中39例(67.2%)存在FHIT基因异常表达,显著高于正常对照组0例(0%)(P〈0.05);37例(63.8%)有HPV16感染,显著高于正常对照组1例(5.0%)(P〈0.05)。宫颈癌组织中有HPV16感染患者的FHIT基因表达异常数(30/37)显著高于HPV16未感染的患者(9/21),二者之间存在相关性(P〈0.01);FHIT基因的异常表达和HPV16的感染与患者的年龄、临床分期、肿瘤直径、病理分级及是否伴淋巴结转移无相关性(P〉0.05)。序列分析发现FHIT基因转录本主要存在不同程度的外显子的缺失,以第5位和第6位外显子的缺失为主,未见未知序列的插入和点突变。结论FHIT基因在人宫颈癌组织中的异常表达率明显增高,且与HPV16的感染有关,这些改变可能在人宫颈鳞癌的发生中起着重要作用。 展开更多
关键词 宫颈癌 FHIT基因 基因缺失 人乳头瘤病毒(HPV)
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实时定量PCR方法检测宫颈癌组织中SNAIL mRNA的表达 预览 被引量:2
6
作者 赵乐 陈葳 李旭 《四川大学学报:医学版》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期 414-417,共4页
目的研究锌指转录抑制因子SNAIL mRNA在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况并探讨其意义。方法采用实时定量PCR方法检测5例宫颈原位癌、55例宫颈浸润癌、14例癌旁组织和3种宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A中SNAIL mRNA的表达,并分析其... 目的研究锌指转录抑制因子SNAIL mRNA在宫颈癌组织和宫颈癌细胞系中的表达情况并探讨其意义。方法采用实时定量PCR方法检测5例宫颈原位癌、55例宫颈浸润癌、14例癌旁组织和3种宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A中SNAIL mRNA的表达,并分析其与宫颈浸润癌各临床病理指标的相关性。结果正常宫颈组织、宫颈原位癌和宫颈浸润癌SNAIL mRNA的相对表达水平分别为0.01±0.01、0.08±0.05、0.09±0.07;宫颈原位癌和浸润癌均高于正常宫颈组织(P〈0.05)。但在不同FIGO分期、病理分级、浸润深度及淋巴结转移情况之间SNAIL mRNA水平无明显变化。3种宫颈癌细胞系中均有SNAIL mRNA的表达,分别为0.06±0.06、0.18±0.05、0.09±0.08,以SiHa细胞系最高(P〈0.05)。结论SNAIL基因在宫颈原位癌和浸润癌中高表达,提示SNAIL可能与宫颈癌的发生和发展有关。 展开更多
关键词 宫颈癌 锌指转录抑制因子SNAIL 实时定量PCR
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陕西地区汉族人群21号染色体3个STR位点的遗传多态性研究 预览
7
作者 王翔 陈葳 +2 位作者 赵乐 周萍 李旭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期 1906-1908,共3页
目的研究21号染色体D21A1442、D21S1413和D31S1809基因座在陕西地区汉族无关个体中的遗传多态性。方法随机抽取160例陕西地区汉族群体无血缘关系个体的静脉血,提取细胞基因组DNA,采用PCR技术扩增上述3个短串联重复序列基因座,以聚丙... 目的研究21号染色体D21A1442、D21S1413和D31S1809基因座在陕西地区汉族无关个体中的遗传多态性。方法随机抽取160例陕西地区汉族群体无血缘关系个体的静脉血,提取细胞基因组DNA,采用PCR技术扩增上述3个短串联重复序列基因座,以聚丙烯酰胺凝胶电泳分型。结果3个基因座在陕西汉族群体中分别发现9、8、7个等位基因,3个基因座的基因型分布符合Hardy—Weinberg平衡(P〉0.05);各基因座的杂合度分别为0.750、0.742、0.694;各基因座间具有相互独立性。结论21号染色体D21A1442、D21S1413和D31S1809基因座具有高度杂合性和多态信息含量,是有应用价值的遗传标记。 展开更多
关键词 短串联重复序列 遗传多态性 Hardy-Weinberg平衡
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急性支气管哮喘患者血小板内游离钙离子的变化与血小板功能的活化 预览 被引量:1
8
作者 王刚 刘红利 王渝 《现代检验医学杂志》 CAS 2007年第6期 91-92,共2页
目的通过对哮喘急性发作期患者血小板内游离钙离子浓度([Ca^2+]3i)及血小板α-颗粒膜蛋白-140(GMP-140)的检测,探讨其与血小板活化功能的关系及其临床意义。方法选择67例哮喘急性发作期患者(其中轻、中、重度分别为18,21,28例... 目的通过对哮喘急性发作期患者血小板内游离钙离子浓度([Ca^2+]3i)及血小板α-颗粒膜蛋白-140(GMP-140)的检测,探讨其与血小板活化功能的关系及其临床意义。方法选择67例哮喘急性发作期患者(其中轻、中、重度分别为18,21,28例)及40例正常对照者。采用Fura-2/AM标记的荧光法测定静息状态及凝血酶刺激后血小板[Ca^2+]i;ELISA法测定血浆GMP-140含量。结果支气管哮喘急性发作期静息状态血小板[Ca^2+]i及血浆口GMP-140水平均高于缓解期患者及健康对照者,其中以中、重度患者差别显著;而哮喘缓解期与正常对照组几乎无差别。经凝血酶刺激后,各组血小板[Ca^2+]i显著高于缓解期患者及正常对照者。结论哮喘急性发作期血小板[Ca^2+]i升高且与血小板功能活化密切相关。哮喘发作程度愈重,血小板活化程度也就越高。提示哮喘发作期特别是重症哮喘,进行血小板功能检测及应用抗血小板活化药物的必要性。 展开更多
关键词 哮喘 血小板内游离钙离子 血小板Α-颗粒膜蛋白 血小板活化
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宫颈癌和子宫内膜癌组织中LIV-1基因mRNA的表达及意义 预览
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作者 赵乐 陈葳 李旭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期 1590-1592,共3页
目的探讨雌激素相关基因LIV-1 mRNA在宫颈癌和子宫内膜癌组织中的表达及其意义。方法采用逆转录PCR方法检测49例宫颈癌、11例正常宫颈组织、24例子宫内膜癌和5例正常子宫内膜中LIV-1基因的mRNA水平,并分析其与各临床病理指标的相关性。... 目的探讨雌激素相关基因LIV-1 mRNA在宫颈癌和子宫内膜癌组织中的表达及其意义。方法采用逆转录PCR方法检测49例宫颈癌、11例正常宫颈组织、24例子宫内膜癌和5例正常子宫内膜中LIV-1基因的mRNA水平,并分析其与各临床病理指标的相关性。结果LIV-1 mRNA在正常宫颈组织、宫颈原位癌和宫颈浸润癌中的表达水平分别为0.20±0.16、0.31±0.13和0.40±0.15,差别具有统计学意义(方差分析P=0.000);但LIV-1 mRNA水平在不同FIGO分期、病理分级、浸润深度和淋巴结转移之间无显著变化(P均〉0.05)。子宫内膜癌和正常子宫内膜LIV-1 mRNA水平的差异无统计学意义(分别为0.62±0.22和0.65±0.18,P〉0.05)。结论LIV-1基因的表达上调具有组织特异性,其可能参与了宫颈癌的发生发展,而与子宫内膜癌的进展无关。 展开更多
关键词 宫颈癌 子宫内膜癌 LIV-1
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转染干扰素-γ的神经前体细胞治疗小鼠脑胶质瘤的实验研究 预览
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作者 张晓智 徐海伟 +1 位作者 陈葳 李旭 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2006年第13期 974-977,共4页
目的:探讨小鼠干扰素-γ(mlFN-γ)基因修饰胚胎干细胞诱导而来的神经前体细胞(NPC)用于脑胶质瘤基因治疗的可行性。方法:小鼠胶质母细胞瘤G422经NPCs/pTracer/mlFN-γ条件培养液培养后,MTT法体外观测其对瘤细胞的抑制效应,TU... 目的:探讨小鼠干扰素-γ(mlFN-γ)基因修饰胚胎干细胞诱导而来的神经前体细胞(NPC)用于脑胶质瘤基因治疗的可行性。方法:小鼠胶质母细胞瘤G422经NPCs/pTracer/mlFN-γ条件培养液培养后,MTT法体外观测其对瘤细胞的抑制效应,TUNEL法观测凋亡。DAPI标记瘤细胞,建立小鼠脑胶质瘤模型,NPCs/pTrac—er/mlFN-γ经立体定向方法注入小鼠颅内,荧光显微镜下观察肿瘤生长情况。结果:NPCs/pTracer/mIFN-γ条件培养液培养的胶质瘤细胞生长受到抑制,与对照组比较差异有统计学意义,x^2=7.21,P=0.032。以50%条件培养液处理24、48和72h后每中倍视野凋亡细胞数分别为2.5±0.9、3.4±1.2和6.6±2.0,显著高于对照组,t值分别为2.37、2.56和2.80,P值分别为0.041、0.034和0.022。将基因修饰的NPC移植到小鼠脑肿瘤模型后,该细胞能向肿瘤细胞方向迁移,与肿瘤浸润范围一致并可追踪远地浸润的瘤细胞。第14天瘤体积测量,对照组和治疗组分别为(62.09±0.55)mm。和(27.54±0.86)mm。,治疗组显著小于对照组,t=4.16,P=0.015。NPC/pTracer/mIFN-γ治疗组平均生存时间为(28.5±0.98)d,较对照组延长,t=3.81,P=0.012。结论:IFN-γ基因修饰胚胎干细胞诱导而来的NPC可稳定表达外源基因,是脑胶质瘤基因治疗的良好栽体。 展开更多
关键词 脑肿瘤/治疗 神经胶质瘤/治疗 干扰素Ⅱ型 疾病模型 动物 细胞移植
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免疫相关基因在同一膀胱癌亚克隆细胞株中的差异表达 被引量:3
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作者 杨玉琮 李旭 陈葳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期 625-627,共3页
目的:筛选和鉴定同一膀胱癌亚克隆细胞株中差异表达的与BCG免疫相关的基因。方法:以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系BLX和BLS-211为材料,采用抑制性削减杂交技术(SSH)筛选差异表达的基因片段。结果:... 目的:筛选和鉴定同一膀胱癌亚克隆细胞株中差异表达的与BCG免疫相关的基因。方法:以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系BLX和BLS-211为材料,采用抑制性削减杂交技术(SSH)筛选差异表达的基因片段。结果:在BLX细胞中获得9个高表达的基因,在BLS-211细胞中获得15个高表达的基因。BLX细胞中有3个基因,即与卡介苗(BCG)免疫治疗相关的基因-BCG诱导的膜蛋白(BIGM103)基因、纤维连接蛋白(FN)基因和补体因子B(BF)基因;BLS-211细胞中有8个基因均为新的表达序列标签(EST),已被GenBank登录(登录号为DY505708-13,DY230447-8)。结论:SSH技术筛选表明,BIGM103等免疫相关基因的不同,可能与不同膀胱癌细胞对BCG免疫治疗的差异性有关;新的EST的获得,为进一步克隆全长、研究基因的功能创造了条件。 展开更多
关键词 膀胱癌 免疫相关基因 抑制性消减杂交 差异表达
人膀胱癌异质性表型相关基因的筛选与鉴定 预览 被引量:4
12
作者 杨玉琮 李旭 陈葳 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期 270-274,共5页
目的 筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因。方法 以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料,采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段,构建cDNA文库;挑取克隆进行筛选,获得差异表达片... 目的 筛选和鉴定膀胱肿瘤异质性生物学表型相关的基因。方法 以已建立的两株同一来源、不同生物学表型的膀胱移行细胞癌细胞系为材料,采用抑制性削减杂交技术筛选差异表达的基因片段,构建cDNA文库;挑取克隆进行筛选,获得差异表达片段,测序并与Genbank比对,Northernblotting验证差异片段在两株细胞系的不同表达。结果 建立了两个消减文库,分别含有168和206个白色克隆,白色克隆含有约200~700bp的插入片段,对这些克隆进行筛选,获得35个差异表达基因片段,其中15个对应于细胞骨架蛋白、细胞代谢酶基因等已知基因,另外19个为未知功能基因,1个为新EST片段,注册Genbank(注册号为DR008207)。结论 抑制性消减杂交技术是筛选、克隆差异表达基因的有效手段;keratin7、Vimentin等细胞骨架蛋白的不同表达,与细胞形态的表型差异有关;DDH等代谢基因的不同。与细胞的药物敏感性差异相关;筛选到的新基因片段为进一步克隆其全长、研究基因功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 膀胱癌 表型 基因 抑制性消减杂交
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细胞遗传学检查与临床疾病研究 预览
13
作者 王翔 周萍 +1 位作者 李旭 陈葳 《中国妇幼健康研究》 2006年第3期 149-151,共3页
目的探讨常见染色体异常的临床意义。方法对1595例有流产史、死胎史、生长发育迟缓、智力低下、小睾丸、原发或继发闭经等患者,进行染色体核型检查分析。结果检出染色体异常183例,异常率11.47%,其中染色体多态性55例,占异常率的30... 目的探讨常见染色体异常的临床意义。方法对1595例有流产史、死胎史、生长发育迟缓、智力低下、小睾丸、原发或继发闭经等患者,进行染色体核型检查分析。结果检出染色体异常183例,异常率11.47%,其中染色体多态性55例,占异常率的30.05%。不良孕产史、智力异常、性分化发育异常与不孕症的患者中,染色体异常检出率分别为5.45%、42.98%、23.84%。46,xx,inv(3)(p13;q29)和46,xx(8;18)(q11;q21)为世界首报核型。结论染色体异常是智力生长发育迟缓、性分化发育异常、不孕及不良孕产史患者常见的重要原因。常规行染色体检查,可为临床诊断和治疗提供科学依据。 展开更多
关键词 细胞遗传学 染色体异常 核型分析 临床疾病
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抗人肝细胞癌单链抗体基因的构建和表达 预览 被引量:1
14
作者 陈葳 李旭 +1 位作者 王莹 张利平 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2005年第14期 1268-1271,共4页
目的:构建抗人肝细胞癌单链抗体基因,并在大肠杆菌中表达.方法:采用RT-PCR法扩增抗体重链和轻链可变区基因,用(Gly4Ser)3肽段连接VH基因和VL基因,构建克隆载体,将测序完全正确的ScFv基因克隆到分泌性表达载体pCANTAB 5E中诱导表达转化的... 目的:构建抗人肝细胞癌单链抗体基因,并在大肠杆菌中表达.方法:采用RT-PCR法扩增抗体重链和轻链可变区基因,用(Gly4Ser)3肽段连接VH基因和VL基因,构建克隆载体,将测序完全正确的ScFv基因克隆到分泌性表达载体pCANTAB 5E中诱导表达转化的TG1和HB 2151细胞.用SDS-PAGE和免疫组化方法分析检测表达产物.结果:DNA测序证实ScFv基因结构正确,可在大肠杆菌中成功表达,游离ScFv相对分子质量大约为30 ku,与HC-108,HepG-2和SMMC-7721肝癌细胞有特异性的结合反应.结论:重组制备的抗人HCD78分子单链抗体在人肝癌的基础和临床研究中具有潜在的应用价值. 展开更多
关键词 肝细胞 单链抗体 碱基序列
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