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牛MSTN启动子与MEF2C转录因子相互作用的研究 预览
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作者 杨涛 许厚强 +3 位作者 陈伟 周迪 王圆圆 朱晓锋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1567-1575,共9页
旨在解析牛MSTN启动子与MEF2C之间的相互调控作用,进一步探讨MSTN基因在肉牛肌肉生长发育方面的调控机制。首先,通过PCR扩增关岭牛MSTN启动子序列2 267 bp和MEF2C基因CDS区1 425 bp。其次,构建pGL3-Basic-MSTN和pcDNA3.1(+)-MEF2C双荧... 旨在解析牛MSTN启动子与MEF2C之间的相互调控作用,进一步探讨MSTN基因在肉牛肌肉生长发育方面的调控机制。首先,通过PCR扩增关岭牛MSTN启动子序列2 267 bp和MEF2C基因CDS区1 425 bp。其次,构建pGL3-Basic-MSTN和pcDNA3.1(+)-MEF2C双荧光素酶报告载体,采用脂质体法共转染至小鼠C2C12成肌细胞,24 h后检测其双荧光素酶活性。最后,通过PCR扩增MSTN启动子核心片段MSTN-P1,重新构建以MSTN-P1片段替代(CMV)区的重组表达载体pEGFP-N3-MSTN-P1-MEF2C,将其分别转染至小鼠C2C12成肌细胞和大鼠下颌腺上皮细胞,24 h后观察绿色荧光蛋白发光情况,48 h后提取细胞总RNA,利用qRT-PCR检测MEF2C基因在不同细胞中的表达情况。结果显示,在小鼠C2C12成肌细胞中,共转染pcDNA3.1(+)-MEF2C试验组较pGL3-Basic-MSTN试验组能显著增强MSTN启动子的活性(P<0.05),较pGL3-Basic对照组能极显著增强MSTN启动子的活性(P<0.01);MSTN启动子核心片段MSTN-P1能驱动MEF2C基因在小鼠C2C12成肌细胞中的表达量极显著上调(P<0.01),且能驱动MEF2C基因在大鼠下颌腺上皮细胞中的表达量显著上调(P<0.05)。结果表明,在转录水平,MSTN启动子与MEF2C可能同时参与了牛肌肉生长和分化的调控。 展开更多
关键词 MSTN启动子 MEF2C转录因子 互作
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贵州地方黄牛GH基因多态性及生物信息学分析 预览
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作者 吴雨 宋汝谋 +4 位作者 陈伟 杨忠诚 卢贤君 黄明捷 陈祥 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第8期41-46,共6页
为分析贵州地方黄牛GH基因多态性,筛选出对本地黄牛生长性状有显著影响的SNPs位点,本研究以贵州4个地方牛种(关岭牛、思南牛、威宁牛、黎平牛)为研究对象,采用直接测序法检测贵州地方黄牛GH基因多态性,利用生物信息学软件对贵州黄牛GH... 为分析贵州地方黄牛GH基因多态性,筛选出对本地黄牛生长性状有显著影响的SNPs位点,本研究以贵州4个地方牛种(关岭牛、思南牛、威宁牛、黎平牛)为研究对象,采用直接测序法检测贵州地方黄牛GH基因多态性,利用生物信息学软件对贵州黄牛GH基因进行分析。结果显示:4个地方牛种中共发现2个SNPs,分别为Exon5-G1570C和Exon5-A1720C,Exon5-G1570C为错义突变,Exon5-A1720C为同义突变;其中黎平牛仅存在1个SNPs位点(Exon5-A1720C),其余3个品种均有2个SNPs位点;生物信息学分析表明,牛GH蛋白相对分子质量为27 385.45,理论等电点为6.90,疏水值最大为3.133,亲水值最小为-2.767,属于跨膜蛋白,稳定性较高;突变前后GH基因mRNA二级结构发生改变,Exon5-G1570C位点mRNA自由能升高,稳定性降低;Exon5-A1720C位点mRNA自由能降低,稳定性升高。本实验成功筛选出贵州地方黄牛GH基因的多态位点,可为筛选贵州地方黄牛与生长相关的分子遗传标记奠定理论基础。 展开更多
关键词 贵州 黄牛 GH基因 生物信息学 多态性
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乌蒙凤鸡凤头性状与Hoxc8基因表达及其生长性能的相关研究
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作者 陆静 张勇 +6 位作者 骆科印 白优 张雄 李泽润 王天松 莫先艇 黄明捷 《农业生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1062-1071,共10页
同源盒基因C8 (homeobox gene C8, Hoxc8)对鸡(Gallus gallus)凤头性状有着重要调节作用,且凤头性状对鸡早期生长性能有显著影响。为研究乌蒙凤鸡Hoxc8基因表达量与凤头性状及其生长性能的相关性,本研究以乌蒙凤鸡为研究对象,测定不同... 同源盒基因C8 (homeobox gene C8, Hoxc8)对鸡(Gallus gallus)凤头性状有着重要调节作用,且凤头性状对鸡早期生长性能有显著影响。为研究乌蒙凤鸡Hoxc8基因表达量与凤头性状及其生长性能的相关性,本研究以乌蒙凤鸡为研究对象,测定不同凤头性状乌蒙凤鸡早期生长性能及Hoxc8基因表达量。研究结果显示,Hoxc8基因在成年有凤头乌蒙凤鸡各组织中均有表达,在凤头骨中表达量最高,在睾丸中表达量较高,在肾、胸肌、腿肌、胫骨和大肠中表达量居中,在心、肝、卵巢、脾脏中表达量较低(P<0.01);在24周龄有凤头乌蒙凤鸡头皮和背皮组织中,Hoxc8基因的表达量极显著低于无凤头乌蒙凤鸡(P<0.01);Hoxc8基因在不同性别乌蒙凤鸡各组织中呈差异表达:在24周龄乌蒙凤鸡中,公鸡头皮、背皮组织中表达量极显著高于母鸡(P<0.01);在成年有凤头乌蒙凤鸡中,公鸡胫骨、腿肌组织表达量高于母鸡,母鸡心、肝、下丘脑、垂体组织表达量高于公鸡;凤头性状对乌蒙凤鸡早期生长性能有影响,随着周龄的增长,有凤头乌蒙凤鸡体重、体斜长、胸深、胸宽、胫长指标生长趋势较无凤头乌蒙凤鸡好;有凤头和无凤头乌蒙凤鸡公鸡早期生长性能优于母鸡;出壳重较大的乌蒙凤鸡早期增重较好。上述研究结果表明,乌蒙凤鸡凤头性状与Hoxc8基因头皮、背皮组织特异表达有关,有凤头乌蒙凤鸡早期生长性能较好。本研究结果对乌蒙凤鸡的保种选育有一定指导意义。 展开更多
关键词 乌蒙凤鸡 凤头性状 体重增长 组织表达 Hoxc8
Myf5、Myf6基因在黔北麻羊与努黔F1代不同组织表达差异性的研究 预览
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作者 王鑫 苑洪霞 +2 位作者 骆金红 许厚强 陈祥 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期54-58,共5页
实验旨在探究Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F1代各组织间的相对表达水平。应用实时荧光定量PCR法检测Myf5、Myf6基因在黔北麻羊(3只)和努黔F1代(3只)的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌和臂三头肌等组织间的相对表... 实验旨在探究Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F1代各组织间的相对表达水平。应用实时荧光定量PCR法检测Myf5、Myf6基因在黔北麻羊(3只)和努黔F1代(3只)的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、股二头肌和臂三头肌等组织间的相对表达量。结果表明:各组织Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F1代间表达差异不显著;2种基因在黔北麻羊臂三头肌、股二头肌和背最长肌相对表达量均极显著高于肾脏、肝脏、心脏、脾脏、肺脏(P<0.01),其中Myf5基因在肾脏相对表达量显著高于脾脏和肺脏(P<0.05),Myf6基因在心脏和肝脏相对表达量均显著高于脾脏(P<0.05);2种基因在努黔F1代臂三头肌、股二头肌和背最长肌相对表达量均极显著高于肝脏、肾脏、心脏、脾脏、肺脏(P<0.01),心脏和肝脏相对表达量均显著高于肺脏(P<0.05)。综上,Myf5、Myf6基因在黔北麻羊和努黔F1代8种组织中均有表达且表达量不等,在肌肉组织中的表达量最高。 展开更多
关键词 Myf5基因 Myf6基因 表达差异 黔北麻羊 努黔F1代
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PiggyBac 转座子介导关岭牛 UCP3 基因启动子重组质粒的构建与鉴定
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作者 陈伟 许厚强 +4 位作者 陈祥 杨涛 吴雨 黄明捷 卢贤君 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第15期1-5,175共6页
为了构建以PiggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,含UCP3基因启动子的PiggyBac转座子二元系统PB-513B-UCP3,并验证其转座活性,试验采用PCR技术扩增获得UCP3基因启动子,分别通过T4DNA连接酶与质粒PB-513B-1和pEGFP... 为了构建以PiggyBac(PB)转座子为载体元件,绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,含UCP3基因启动子的PiggyBac转座子二元系统PB-513B-UCP3,并验证其转座活性,试验采用PCR技术扩增获得UCP3基因启动子,分别通过T4DNA连接酶与质粒PB-513B-1和pEGFP-N3连接,构建重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro;用脂质体法将质粒pEGFP-N3、重组质粒pEGFP-N3-UCP3-pro和PB-513B-1-UCP3以及PiggyBac转座子二元系统分别转染至小鼠成肌细胞C2C12中,检测其在小鼠成肌细胞C2C12中的表达情况。结果表明:PCR扩增得到大小为1080bp的单一目的条带;经酶切和测序鉴定,成功构建重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro,PiggyBac转座子二元系统的阳性克隆数明显多于重组质粒PB-513B-1-UCP3和pEGFP-N3-UCP3-pro的克隆数。说明试验成功构建了PiggyBac转座子介导的重组质粒PB-513B-1-UCP3及pEGFP-N3-UCP3-pro,且证实PiggyBac转座子介导的牛UCP3基因启动子在小鼠成肌细胞C2C12中具有较高的转座活性。 展开更多
关键词 关岭牛 PIGGYBAC转座子 pCAG-Pbase UCP3启动子 小鼠成肌细胞C2C12 pEGFP-N3
猪LYRM1基因对脂肪沉积的影响研究 预览
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作者 苑洪霞 骆金红 +1 位作者 冯文武 陈祥 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期677-687,共11页
旨在探究LYRM1对脂肪沉积的影响。本研究采用qRT-PCR法检测LYRM1基因在10月龄白洗猪不同组织中的表达水平;PCR扩增白洗猪LYRM1基因的CDS区,构建pEGFP-N3-LYRM1重组质粒,利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-LYRM1重组质粒进入白洗猪皮下脂肪... 旨在探究LYRM1对脂肪沉积的影响。本研究采用qRT-PCR法检测LYRM1基因在10月龄白洗猪不同组织中的表达水平;PCR扩增白洗猪LYRM1基因的CDS区,构建pEGFP-N3-LYRM1重组质粒,利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-LYRM1重组质粒进入白洗猪皮下脂肪前体细胞,通过检测细胞培养基中三酰甘油浓度,利用血清饥饿法和MTT法检测细胞凋亡水平;qRT-PCR检测LYRM1、PPARγ、ATGL、FAS基因的mRNA表达水平。结果显示,LYRM1基因在白洗猪脂肪组织中表达量最高;成功转染pEGFP-N3-LYRM1重组质粒进入白洗猪皮下脂肪前体细胞,转染试验组培养基中三酰甘油浓度大于空白对照组,试验组与空白对照组的细胞凋亡速率一致,未见显著差异;试验组LYRM1、PPARγ、ATGL、FAS基因的mRNA表达量极显著高于对照组(P<0.01)。综上表明,LYRM1基因超表达可提高三酰甘油的浓度,促进脂肪沉积,提高脂肪沉积相关基因mRNA的表达水平,间接提高脂肪沉积水平。因此认为,LYRM1基因可作为探究影响脂肪沉积的候选基因,为研究脂肪沉积机制提供理论基础。 展开更多
关键词 LYRM1 三酰甘油 细胞凋亡 脂肪沉积
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努比亚山羊同期发情与定时输精方法探究 预览
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作者 骆金红 丁永利 +4 位作者 敖叶 韦仕南 嵇辛勤 阮涌 陈祥 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2019年第5期58-61,共4页
为探究4种同期发情处理方法在努比亚山羊中的应用效果以及不同处理方法在处理结束后的发情集中时间分布,本实验以冬、春两季234只努比亚山羊为研究对象,采用前列腺素(PG)+PG、海绵栓+PG、海绵栓+孕马血清促性腺激素(PMSG)、海绵栓+PMSG+... 为探究4种同期发情处理方法在努比亚山羊中的应用效果以及不同处理方法在处理结束后的发情集中时间分布,本实验以冬、春两季234只努比亚山羊为研究对象,采用前列腺素(PG)+PG、海绵栓+PG、海绵栓+孕马血清促性腺激素(PMSG)、海绵栓+PMSG+PG 4种处理方法对其进行同期发情处理,从同期发情率、21 d返情率、24 h同期率、成本等方面对同期发情效果进行综合分析。结果表明:冬季的4个处理中,PG+PG处理同期发情率(89.58%)、21天返情率(18.60%)均略高于其他3种(P>0.05),成本仅为10元/只;4种处理方法发情时间主要集中在处理结束后25~48 h;海绵栓+PG法的同期发情率在春季高于冬季(92.61%>83.33%),21 d返情率则为春季低于冬季(12.77%<13.33%),24 h内同期率更高(72.22%>62.75%),发情时间主要集中在48~72 h。综上所述,PG+PG法更适用于生产实践,海绵栓+PG法可作为其辅助方法参考,最佳定时输精时间在处理完成后25~48 h(冬季)。 展开更多
关键词 努比亚山羊 同期发情 定时输精 方法筛选
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威宁绵羊SOCS7和GFAP基因组织表达研究 预览
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作者 张继 易鸣 +6 位作者 程朝友 程均华 付正仙 杨德文 吴雪 邱淦远 刘若余 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期1899-1906,共8页
试验旨在检测细胞因子信号传导抑制蛋白7(suppressor of cytokine signaling 7,SOCS7)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因在威宁绵羊不同组织中的表达水平。以6月龄、1周岁和2周岁的威宁绵羊公、母羊为研究... 试验旨在检测细胞因子信号传导抑制蛋白7(suppressor of cytokine signaling 7,SOCS7)和胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)基因在威宁绵羊不同组织中的表达水平。以6月龄、1周岁和2周岁的威宁绵羊公、母羊为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定威宁绵羊不同性别及不同生长阶段心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及脑6个组织中SOCS7和GFAP基因的相对表达量,从mRNA水平上的探究两个基因之间的表达规律。结果显示,SOCS7基因在威宁绵羊不同组织中均有不同程度的表达,其中脾脏中相对表达量最高,其次是肺脏、肾脏、心脏、肝脏和脑组织,随着威宁绵羊年龄的增大,SOCS7基因在组织中的相对表达量呈现小幅度上升的趋势;GFAP基因在威宁绵羊脑组织中相对表达量最高,其余组织中表达量较低,随着年龄增长总体呈现下降趋势。从性别差异来看,威宁绵羊SOCS7基因相对表达量母羊普遍高于公羊,而GFAP基因则是公羊普遍高于母羊,推测SOCS7基因很有可能负向调控GFAP基因的表达。 展开更多
关键词 威宁绵羊 SOCS7基因 GFAP基因 实时荧光定量PCR 组织表达
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细胞基质蛋白3的功能及其参与病毒复制的分子机制
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作者 邓珊珊 段志强 嵇辛勤 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第2期281-288,共8页
基质蛋白3(matrin 3, MATR3)是细胞核基质蛋白重要成员之一,它与细胞的基因转录调节、mRNA前体剪接和稳定性、DNA损伤修复以及细胞增殖等活动密切相关。近年来的研究表明, MATR3在逆转录病毒的复制过程中也有着重要作用。鉴于MATR3参与... 基质蛋白3(matrin 3, MATR3)是细胞核基质蛋白重要成员之一,它与细胞的基因转录调节、mRNA前体剪接和稳定性、DNA损伤修复以及细胞增殖等活动密切相关。近年来的研究表明, MATR3在逆转录病毒的复制过程中也有着重要作用。鉴于MATR3参与病毒复制的作用机制研究少有报道,该文主要从MATR3的结构特征、在细胞核中的功能、参与病毒复制的作用机制等方面进行综述,以期为深入研究MATR3在病毒生活史中的作用提供参考。 展开更多
关键词 基质蛋白3 核基质蛋白 病毒复制
饲料中添加丙氨酰-谷氨酰胺二肽对黄颡鱼幼鱼生长性能、抗氧化能力、免疫应答能力及抗逆能力的影响 预览
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作者 李雪 张木子 +3 位作者 黎明 章倩 王日昕 姜海波 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期3197-3206,共10页
本试验旨在研究饲料中添加丙氨酰-谷氨酰胺二肽(AGD)对黄颡鱼幼鱼生长性能、抗氧化能力、免疫应答能力及抗逆能力的影响。以平均体重为(1.98±0.01)g的黄颡鱼幼鱼为研究对象,随机分成5组,每组3个重复,每个重复30尾鱼,分别投喂添加0... 本试验旨在研究饲料中添加丙氨酰-谷氨酰胺二肽(AGD)对黄颡鱼幼鱼生长性能、抗氧化能力、免疫应答能力及抗逆能力的影响。以平均体重为(1.98±0.01)g的黄颡鱼幼鱼为研究对象,随机分成5组,每组3个重复,每个重复30尾鱼,分别投喂添加0(对照)、0.25%、0.50%、0.75%和1.00%AGD的5种试验饲料,5种试验饲料中AGD含量的实测值依次为0.08%、0.23%、0.56%、0.69%和1.09%。摄食生长试验持续56 d。结果表明:随着饲料中AGD添加量的增加,试验鱼的增重、特定生长率以及血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、补体3和补体4含量与超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽、溶菌酶、碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性均先增加后降低,0.50%和0.75%AGD组均显著高于对照组(P<0.05)。饲料中添加不同水平的AGD均显著提高了试验鱼血清总抗氧化能力(P<0.05),显著降低了丙二醛含量(P<0.05)。氨氮胁迫96h后,对照组试验鱼大脑中氨和谷氨酰胺含量显著高于各AGD添加组(P<0.05),同时累积死亡率也显著高于各AGD添加组(P<0.05)。由此可见,饲料中添加适宜水平的AGD能够提高黄颡鱼幼鱼的生长性能、抗氧化能力、免疫应答能力及抗逆能力;基于特定生长率的二次回归模型拟合,获得黄颡鱼幼鱼饲料中AGD的最适添加量为0.56%;综合考虑生长性能、抗氧化能力、免疫应答能力及抗逆能力,推荐黄颡鱼幼鱼饲料中AGD的添加量为0.50%~0.75%。 展开更多
关键词 丙氨酰-谷氨酰胺二肽 黄颡鱼幼鱼 生长性能 抗氧化能力 免疫应答能力 抗逆能力
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饲养方式对不同体重柯乐猪屠宰性能及胴体品质的影响
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作者 杨蓉 林鹏飞 +7 位作者 吴光松 黄维江 任丽群 李平 顾丽菊 张芸 王鑫 燕志宏 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第13期65-69,共5页
为探究饲养方式对不同体重柯乐猪屠宰性能及胴体品质的影响,试验以柯乐猪为研究对象,将其分为放牧组和圈养组进行饲养,分别选取90 kg、100 kg和110 kg三种体重段的猪进行屠宰,测定屠宰性能和胴体品质,并进行了相关分析。结果表明:放牧... 为探究饲养方式对不同体重柯乐猪屠宰性能及胴体品质的影响,试验以柯乐猪为研究对象,将其分为放牧组和圈养组进行饲养,分别选取90 kg、100 kg和110 kg三种体重段的猪进行屠宰,测定屠宰性能和胴体品质,并进行了相关分析。结果表明:放牧组柯乐猪在90 kg体重段熟肉率与滴水损失极显著低于和高于110 kg和100 kg体重段(P<0.01);90 kg体重段屠宰率和瘦肉率最高,分别为77.79%和45.57%,屠宰率极显著高于100 kg体重段(P<0.01),瘦肉率显著高于110 kg体重段(P<0.05);90 kg体重段脂肪率较低,为33.29%。圈养柯乐猪瘦肉率和脂肪率呈负相关,瘦肉率最高时脂肪率最低,110 kg体重段屠宰率最高,为77.54%,90 kg体重段滴水损失与熟肉率分别为2.02%和68.33%,滴水损失低于同体重段的放牧组,熟肉率高于同体重段的放牧组。综合屠宰率、瘦肉率、脂肪率及滴水损失等指标整体分析,放牧组的屠宰性能与胴体品质优于圈养组,其中90 kg体重组屠宰性能最佳,100 kg体重组胴体品质最佳。 展开更多
关键词 柯乐猪 屠宰性能 胴体品质 放牧饲养 圈养
鸡膜联蛋白A2在DF-1细胞中的表达及亚细胞定位
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作者 龙耀 郭徵力 +5 位作者 陈纯露 邓珊珊 熊建民 袁超 高洪波 段志强 《中国家禽》 北大核心 2019年第8期15-19,共5页
根据GenBank已发表的鸡膜联蛋白A2(ANXA2)基因序列,设计合成一对特异性引物从DF-1细胞总RNA的反转录产物中扩增鸡ANXA2基因开放阅读框,通过酶切、连接等方法将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1,构建重组真核表达载体pEGFP-ANXA2。利用脂... 根据GenBank已发表的鸡膜联蛋白A2(ANXA2)基因序列,设计合成一对特异性引物从DF-1细胞总RNA的反转录产物中扩增鸡ANXA2基因开放阅读框,通过酶切、连接等方法将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1,构建重组真核表达载体pEGFP-ANXA2。利用脂质体转染法将pEGFP-ANXA2转染至DF-1细胞,24 h后分别检测融合蛋白EGFP-ANXA2在细胞中的表达及亚细胞定位情况。结果显示:成功构建了鸡ANXA2基因的重组真核表达载体pEGFP-ANXA2;将其转染DF-1细胞后得到与预期大小相符的EGFP-ANXA2蛋白条带,荧光显微镜观察显示EGFP-ANXA2主要定位在细胞质。研究结果为进一步开展鸡ANXA2在相关家禽病毒复制中的作用研究奠定了基础。 展开更多
关键词 膜联蛋白A2 真核表达 亚细胞定位
GST pull-down验证新城疫病毒基质蛋白与鸡importinβ1蛋白的相互作用 预览
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作者 胡焱 段志强 +4 位作者 嵇辛勤 赵佳福 邓珊珊 李世静 熊建民 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期126-133,共8页
旨在利用GSTpull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDVZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDVM基因和鸡importinβ1基因,将... 旨在利用GSTpull-down技术验证新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)基质(matrix,M)蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外的相互作用。根据NDVZJ1株M基因和鸡importinβ1基因序列设计引物,通过PCR扩增获得NDVM基因和鸡importinβ1基因,将其分别定向插入到原核表达载体pGEX-6p-1和pET-32a(+)构建重组原核表达载体pGEX-6p-M、pET-32a-importinβ1,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况,并对包涵体重组蛋白进行变性和复性处理。然后以GST-M重组蛋白为诱饵蛋白,His-importinβ1重组蛋白为猎物蛋白,利用GSTpull-down技术验证M蛋白与importinβ1蛋白的相互作用。结果表明,成功构建了重组原核表达载体pGEX-6p-M和pET-32a-importinβ1,将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得了正确表达。SDS-PAGE电泳检测显示GST-M重组蛋白主要以包涵体形式存在,而His-importinβ1重组蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在。利用蛋白重折叠试剂盒获得了有活性的GST-M重组蛋白,将其作为诱饵蛋白,可以捕获并检测到His-importinβ1重组蛋白,但是GST标签蛋白不能结合His-importinβ1重组蛋白。利用GSTpull-down技术证实了NDVM蛋白与鸡importinβ1蛋白在体外具有直接的相互作用,这为深入研究importinβ1蛋白在NDVM蛋白细胞核定位的分子机制以及在NDV复制和致病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 新城疫病毒 基质蛋白 importinβ1蛋白 GSTpull-down 蛋白相互作用
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犬IFN-β的克隆及其序列分析
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作者 黄梦秋 嵇辛勤 +7 位作者 段志强 李世静 阮涌 万彪 胡焱 邓珊珊 龙丹丹 田宇杰 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第7期139-142,174共5页
为了分析犬干扰素β( IFN -β)基因分子特征,预测其编码蛋白质的生物学功能,根据GenBank 登录的犬 IFN-β基因序列( FJ194477)设计合成特异性引物,通过 PCR从外周血淋巴细胞总DNA 中扩增 IFN-β基因 CDS 区并克隆,应用生物信息学方法对... 为了分析犬干扰素β( IFN -β)基因分子特征,预测其编码蛋白质的生物学功能,根据GenBank 登录的犬 IFN-β基因序列( FJ194477)设计合成特异性引物,通过 PCR从外周血淋巴细胞总DNA 中扩增 IFN-β基因 CDS 区并克隆,应用生物信息学方法对犬 IFN-β基因进行序列分析,并对其理化性质以及编码蛋白的二级结构、三级结构进行预测,构建分子系统进化树。结果表明:犬 IFN-β基因编码区全长 561 bp,共编码 186 个氨基酸,其分子式可表示为 C1014H1593N263O290 S9,分子质量为22. 40 ku;属于亲水性蛋白,理论等电点为 5. 98;含有丰富的二级结构,以α-螺旋( 76. 88%)和无规则卷曲( 19. 35%)为主,蛋白三级结构呈弯曲螺旋结构;与貉、威德尔海豹、金钱豹、家猫、宽吻海豚、人、鸡和绿头鸭相对应序列核苷酸序列同源性分别为 98. 4%、87. 2%、85. 2%、84. 7%、79. 0%、74. 9%、43. 9%和 43. 3%。说明犬与貉 IFN-β核苷酸同源性最高,亲缘关系最近。 展开更多
关键词 干扰素-Β 扩增 克隆 生物信息学
气候因子对南北方梅花鹿脱盘时间与产茸的影响 预览
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作者 魏小红 毛同辉 +8 位作者 吴光松 燕志宏 张芸 任丽群 李平 黄维江 杨蓉 顾丽菊 林鹏飞 《野生动物学报》 北大核心 2019年第3期610-616,共7页
通过对贵州省和吉林省梅花鹿养殖场的气候因子进行分析,研究不同的温度、湿度、光照对梅花鹿产茸性状的影响。结果表明,温度对梅花鹿的脱盘影响作用要大于湿度和光照;贵州省饲养的梅花鹿脱盘时间比吉林省早15d,梅花鹿脱盘的最适温度为1... 通过对贵州省和吉林省梅花鹿养殖场的气候因子进行分析,研究不同的温度、湿度、光照对梅花鹿产茸性状的影响。结果表明,温度对梅花鹿的脱盘影响作用要大于湿度和光照;贵州省饲养的梅花鹿脱盘时间比吉林省早15d,梅花鹿脱盘的最适温度为15℃左右,适合鹿茸生长的温度10℃—24℃;在环境相对湿度为33%—70%的条件下,梅花鹿既可以完成脱盘也可以使鹿茸正常生长;从头茬茸茸重结果分析,吉林省饲养的梅花鹿头茬茸茸重为(2.48±0.33)kg,贵州饲养的梅花鹿头茬茸茸重(1.82±0.25)kg。因此,需要探讨南方梅花鹿产茸的规律,这对南方养鹿的发展业具有重要的指导意义。 展开更多
关键词 梅花鹿 产茸性能 气候因子
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从江香猪PDK4基因干扰载体的构建与检测 预览 被引量:2
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作者 杨洋 许厚强 +2 位作者 陈伟 徐敏 谌颖莲 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第4期873-880,共8页
为了进一步揭示PDK 4基因在猪肌内前体脂肪细胞中的调控作用,本试验采集5日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶进行消化,分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养及形态学观察;根据克隆得到的PDK 4基因序列,利用在线软件设计合成3对特... 为了进一步揭示PDK 4基因在猪肌内前体脂肪细胞中的调控作用,本试验采集5日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶进行消化,分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养及形态学观察;根据克隆得到的PDK 4基因序列,利用在线软件设计合成3对特异性单链siRNA序列和1对阴性对照序列,经退火后形成双链,连接pLVX-shRNA2-Puro载体,重组质粒采用双酶切及测序进行验证。针对干扰载体转染培养的从江香猪肌内前体脂肪细胞,采用实时荧光定量PCR方法筛选出最有效的干扰序列。结果显示,原代从江香猪肌内前体脂肪细胞约4 h开始贴壁,24 h后细胞形态均一,贴壁牢固,第5天汇合呈单层细胞,基本铺满培养板;重组质粒经双酶切及测序鉴定结果显示,设计合成的4对siRNA干扰序列与载体质粒均连接正确,表明成功构建了PDK 4基因的干扰载体,并可成功转染猪肌内前体脂肪细胞;实时荧光定量PCR方法检测发现,干扰载体可有效减少从江香猪肌内脂肪前体脂肪细胞中PDK 4基因mRNA的表达,最佳干扰效率可达81.90%。本试验成功培养了从江香猪肌内前体脂肪细胞,构建并得到了PDK 4基因的最佳干扰载体,为进一步研究PDK 4基因对脂肪代谢的调控机制奠定基础。 展开更多
关键词 从江香猪 PDK 4基因 肌内前体脂肪细胞 干扰载体 干扰效率
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影响BLM基因表达的miRNAs筛选及抑制效率研究
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作者 谌颖莲 许厚强 +1 位作者 赵佳福 王赛楠 《生物技术》 2018年第1期54-59,6共7页
[目的]筛选调控BLM基因表达的miRNAs并研究其抑制效率。[方法]利用Target Scan Human 6.2、microRNA.org、PicTar以及miRsystem在线软件预测调控BLM基因表达的miRNAs;miRNA通过脂质体转染和特异茎环引物反转录、荧光定量PCR及Pfaffl算... [目的]筛选调控BLM基因表达的miRNAs并研究其抑制效率。[方法]利用Target Scan Human 6.2、microRNA.org、PicTar以及miRsystem在线软件预测调控BLM基因表达的miRNAs;miRNA通过脂质体转染和特异茎环引物反转录、荧光定量PCR及Pfaffl算法检测miRNA对BLM基因表达的影响。[结果]初步筛选出hsa-miR-338-3p为调控BLM基因表达的miRNA;hsa-miR-338-3p抑制效率试验结果表明:当前列腺癌细胞(PC3)转染20μmol/L的hsamiR-338-3p minic时,实验组BLM表达量为对照组的0.44倍,抑制了BLM的表达(P〈0.01);转染40μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时,实验组BLM的表达量为对照组的2.55倍,促进了BLM的表达(P〈0.01);转染60μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时,实验组BLM的表达量为对照组的1.14倍,实验组与对照组差异不显著(P〉0.05)。[结论]转染20μmol/L、40μmol/L和60μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时BLM基因的表达量分别是对照组的0.44倍、2.55倍和1.44倍,转染不同剂量的miRNA对BLM基因的表达情况具有不同的影响。 展开更多
关键词 MIRNAS BLM基因 Hsa-miR-338-3p Pfaffl算法 表达调控
乌蒙凤鸡体重和胫长生长曲线拟合及相关性研究 预览
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作者 白优 张勇 +5 位作者 骆科印 王现科 陆静 莫先艇 黄明捷 何琦 《中国畜牧杂志》 北大核心 2018年第9期35-38,共4页
为了解乌蒙凤鸡的生长发育规律,本研究以Logistic和Gompertz2种非线性生长模型对乌蒙凤鸡体重及胫长进行拟合分析。结果表明:Gompertz模型在估计乌蒙凤鸡母鸡体重生长规律上效果更优,该模型拐点周龄为3.49周,拐点体重为753.84g;Logisti... 为了解乌蒙凤鸡的生长发育规律,本研究以Logistic和Gompertz2种非线性生长模型对乌蒙凤鸡体重及胫长进行拟合分析。结果表明:Gompertz模型在估计乌蒙凤鸡母鸡体重生长规律上效果更优,该模型拐点周龄为3.49周,拐点体重为753.84g;Logistic模型在拟合乌蒙凤鸡胫长方面效果更优,拐点周龄为2.32周,拐点胫长为4.26cm。这说明即使对同一品种的不同性状,其适用的最优模型也存在差别。 展开更多
关键词 乌蒙凤鸡 体重 胫长 生长曲线 相关性
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犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化 预览 被引量:1
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作者 龙丹丹 嵇辛勤 +5 位作者 段志强 阮涌 陈强 雷云 万彪 胡焱 《中国畜牧兽医》 北大核心 2018年第3期643-649,共7页
为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21... 为了研究犬细小病毒(canine parovirus,CPV)VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPVVP2基因插入原核表达载体pET-32a(+)中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900bp左右的载体条带和1 755bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0mmol/L IPTG、诱导5h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。 展开更多
关键词 犬细小病毒(CPV) VP2基因 原核表达 纯化
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配合饲料和血液对菲牛蛭水蛭素活性及抗氧化指标的影响 预览
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作者 熊伟 王雪 +2 位作者 秦国兵 姚俊杰 唐鑫 《山地农业生物学报》 2018年第1期85-89,共5页
为探究配合饲料和血液对菲牛蛭水蛭素活性和抗氧化指标的影响,用配合饲料和鸡血对菲牛蛭进行60d的养殖,测定和分析这两种投喂方式下菲牛蛭水蛭素活性和抗氧化指标的情况。结果显示:配合饲料组水蛭素活性略低于血液组,差异性不显著(P>... 为探究配合饲料和血液对菲牛蛭水蛭素活性和抗氧化指标的影响,用配合饲料和鸡血对菲牛蛭进行60d的养殖,测定和分析这两种投喂方式下菲牛蛭水蛭素活性和抗氧化指标的情况。结果显示:配合饲料组水蛭素活性略低于血液组,差异性不显著(P>0.05)。菲牛蛭肠道SOD和CAT活性较高,而MDA含量较低。嗉囊中SOD和CAT活性较低,而MDA含量较高。配合饲料组肠道超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性显著高于血液组肠道SOD和CAT活性(p<0.05);配合饲料组肠道丙二醛(MDA)含量稍低于血液组,而配合饲料组嗉囊SOD活性显著低于血液组(p<0.05),CAT活性稍低于血液组,而配合饲料组的嗉囊MDA含量显著低于血液组(p<0.05)。研究表明:菲牛蛭嗉囊和肠道组织(SOD和CAT)与MDA活性表现形式相反;配合饲料投喂菲牛蛭,水蛭素活性未受影响,对肠道抗氧化能力有一定的增强作用,MDA含量上达到或超过血液饲养水平。 展开更多
关键词 配合饲料 血液 菲牛蛭 水蛭素活性 抗氧化
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