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miR-382-5p通过靶基因PTEN阻滞NB4细胞分化
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作者 刘冬冬 刘北忠 +9 位作者 袁桢 姚娟娟 钟鹏强 刘俊梅 姚仕菲 赵毅 刘路 陈敏 李连文 钟梁 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第1期63-71,共9页
该文主要研究在急性早幼粒细胞白血病NB4细胞中, miR-382-5p通过调控靶基因PTEN(phosphatase and tensin homologue)抑制了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导的急性早幼粒细胞分化。我们运用ATRA(1μmol/L)诱导细胞分化;... 该文主要研究在急性早幼粒细胞白血病NB4细胞中, miR-382-5p通过调控靶基因PTEN(phosphatase and tensin homologue)抑制了全反式维甲酸(all-trans retinoic acid, ATRA)诱导的急性早幼粒细胞分化。我们运用ATRA(1μmol/L)诱导细胞分化;Western blot检测PTEN及髓系分化标志物CD11b的蛋白质水平;实时荧光定量PCR检测miR-382-5p的表达水平;过表达PTEN的慢病毒载体分别感染NB4细胞和HL-60、THP-1细胞;脂质体转染miR-382-5p的模拟剂(mimics)和特异性抑制剂(inhibitors)NB4细胞。结果显示, PTEN促进ATRA诱导的NB4细胞分化,而在HL-60和THP-1细胞中并无明显促分化效应。NB4细胞中,脂质体转染miR-382-5p mimics在mRNA和蛋白水平均抑制了PTEN的表达,并且抑制了ATRA诱导的分化;转染miR-382-5p inhibitors则恢复了PTEN表达,同时促进了ATRA诱导的急性早幼粒细胞NB4细胞的分化。该文结果提示, miR-382-5p靶向抑制了PTEN的表达从而抑制ATRA诱导的NB4细胞分化。 展开更多
关键词 PTEN miR-382-5p 急性早幼粒细胞白血病 全反式维甲酸 分化
沉默CXCL1基因抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移、侵袭的研究
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作者 杨诚诚 陶凯 +3 位作者 喻浩宸 蹇磊 柳满然 刘胜春 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期455-460,共6页
为探讨CXCL1基因对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移、侵袭作用的影响,该研究设计针对CXCL1基因的小干扰RNA,用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附测定试验分别在RNA和蛋白质水平上检测干扰效率;采用流式细胞术学技术检测细胞的周期和凋亡... 为探讨CXCL1基因对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移、侵袭作用的影响,该研究设计针对CXCL1基因的小干扰RNA,用实时荧光定量PCR和酶联免疫吸附测定试验分别在RNA和蛋白质水平上检测干扰效率;采用流式细胞术学技术检测细胞的周期和凋亡情况;采用transwell迁移和侵袭试验分别检测细胞的迁移及侵袭能力。结果显示,与siRNA-NC组细胞相比,siCXCL1-1、siCXCL1-2、siCXCL1-3细胞中CXCL1基因的mRNA和蛋白表达均下调,且si CXCL1-3干扰效率最高,mRNA及蛋白表达水平分别降低了75%(p<0.01)和46%(p<0.01)。细胞凋亡试验和细胞周期试验结果显示,沉默CXCL1基因后对三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的凋亡和周期无明显影响,差异无统计学意义(p>0.05)。transwell小室迁移和侵袭试验显示,沉默CXCL1基因能够显著抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的迁移和侵袭能力(p<0.01)。研究成果为临床乳腺癌中以CXCL1基因为靶点的分子治疗提供了理论依据。 展开更多
关键词 小干扰RNA CXCL1 MDA-MB-231 迁移和侵袭
基于生物信息学分析的卵巢癌微小RNA调控网络的初步构建 预览
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作者 李丹丹 丁世家 陈维贤 《国际检验医学杂志》 CAS 2019年第2期132-135,共4页
目的在生物信息学分析基础上初步构建卵巢癌微小RNA(miRNA)及长链非编码RNA(lncRNA)调控网络,探讨miRNA在卵巢癌细胞中的分子调控机制。方法通过miRwalk 2.0及HMDD v2.0精准查询与卵巢癌相关且功能明确的miRNA,根据miRwalk 2.0软件出现... 目的在生物信息学分析基础上初步构建卵巢癌微小RNA(miRNA)及长链非编码RNA(lncRNA)调控网络,探讨miRNA在卵巢癌细胞中的分子调控机制。方法通过miRwalk 2.0及HMDD v2.0精准查询与卵巢癌相关且功能明确的miRNA,根据miRwalk 2.0软件出现频次进行筛选,明确其对应靶基因表达情况。在lncRNA疾病数据库中查询与卵巢癌相关的lncRNA,运用starBase v2.0对所得到的miRNA和lncRNA进行综合分析,筛选出与上述miRNA相互作用的且与卵巢癌相关的lncRNA。通过Cytoscape软件绘制miRNA在卵巢癌中的分子调控网络。结果hsa-let-7a、hsa-mir-21、hsa-miR-16、hsa-mir-17、hsa-mir-19b、hsa-mir-29a、hsa-mir-92a是介导卵巢癌调控的高频miRNA,成功获取了有关miRNA在卵巢癌中的分子调控网络;初步明确了高频miRNA。lncRNA与miRNA匹配分析发现,lncRNA X(染色体)失活特异性转录物(XIST)作为核心调控因子与高频miRNA相互作用介导卵巢癌基因调控。结论利用生物信息学分析技术成功描绘了一张与卵巢癌相关的miRNA分子调控网络,miRwalk、HMDD、starBase等数据库可有效地用于miRNA与疾病关系的研究。 展开更多
关键词 微小RNA 卵巢癌 长链非编码RNA 数据库
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基于链置换和催化发夹组装策略用于miRNA高灵敏生物传感检测
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作者 文博 赵敏 +3 位作者 周晓燕 程伟 丁小娟 丁世家 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第9期1168-1173,共6页
目的:基于链置换扩增(strand displacement amplification,SDA)和催化发夹组装(catalytic hairpin assembly,CHA)级联放大策略构建电化学生物传感器用于micro RNA(miRNA)高灵敏检测。方法:靶标miR-21引发SDA获得大量与靶标miR-2... 目的:基于链置换扩增(strand displacement amplification,SDA)和催化发夹组装(catalytic hairpin assembly,CHA)级联放大策略构建电化学生物传感器用于micro RNA(miRNA)高灵敏检测。方法:靶标miR-21引发SDA获得大量与靶标miR-21相关的触发DNA,继而引发CHA,得到大量生物素标记的双链DNA。然后,所获得的双链DNA与修饰在电极表面的辅助探针杂交,再利用生物素与链霉亲和素的特异性识别作用,将含链霉亲和素的碱性磷酸酶(streptavidin-alkaline phosphatase,STAP)修饰在电极表面上,在底物α-萘酚磷酸酯(α-naphthyl phosphate,α-NPP)存在下,ST-AP催化α-NPP水解,在电极表面原位产生具有电化学活性的α-萘酚(α-naphthol,α-NP),获得电化学信号,从而实现对靶标miR-21的高灵敏检测。结果:在最优实验条件下,所制备的miR-21生物传感器的线性范围为0.1 pmol/L至10 nmol/L,最低检测限为60 fmol/L。结论:所设计的miR-21生物传感器展现出高的灵敏度和强的特异性,将为临床上miR-21的检测提供新思路和新平台。 展开更多
关键词 电化学生物传感器 MIRNA 链置换扩增 催化发夹组装
便携式血糖仪对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的灵敏检测方法研究 预览
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作者 方杰 余文 +5 位作者 陶一一 代涛 袁长婧 杨宇君 唐兰 谢国明 《分析仪器》 CAS 2018年第1期80-85,共6页
本实验利用血糖仪构建了一种基于蔗糖酶修饰的纳米金功能化树状大分子对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的灵敏检测新方法。当靶基因存在时,其与捕获核酸探针特异性结合,释放出带蔗糖酶的信号分子复合物,经磁分离后,上清液中的蔗糖酶... 本实验利用血糖仪构建了一种基于蔗糖酶修饰的纳米金功能化树状大分子对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因的灵敏检测新方法。当靶基因存在时,其与捕获核酸探针特异性结合,释放出带蔗糖酶的信号分子复合物,经磁分离后,上清液中的蔗糖酶催化底物蔗糖,产生可检测的葡萄糖信号,从而实现血糖仪对mecA基因的定量检测。该检测方法的线性范围是0.5pM到1nM,检测限为0.26pM,优于一般的基因检测方法。结果表明,该方法在疾病诊断方面具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌 MECA基因 蔗糖酶 纳米金功能化树状大分子 血糖仪
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PKM2在白血病NB4细胞系的分布及对c-Myc蛋白的影响
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作者 单志灵 刘北忠 +6 位作者 淦柳根 肖春兰 徐婷 杨蓉 宋浩 李浏 钟梁 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期456-460,共5页
探讨PKM2在白血病NB4细胞中的分布情况及对c-Myc蛋白的影响。免疫荧光技术检测PKM2在NB4细胞中的分布情况。将含靶点序列的GV248载体、包装质粒Helper1.0和Helper2.0共转染293T细胞,包装慢病毒。收集病毒上清,浓缩纯化后感染NB4细... 探讨PKM2在白血病NB4细胞中的分布情况及对c-Myc蛋白的影响。免疫荧光技术检测PKM2在NB4细胞中的分布情况。将含靶点序列的GV248载体、包装质粒Helper1.0和Helper2.0共转染293T细胞,包装慢病毒。收集病毒上清,浓缩纯化后感染NB4细胞,荧光显微镜观察感染效率,Western blotting检测PKM2和c-Myc蛋白的表达变化。CCK-8实验检测细胞增殖情况。结果显示,PKM2在NB4细胞核及细胞质中均有表达,细胞核中比例较大。成功构建LV-PKM2-RNAi病毒,感染的细胞PKM2和c-Myc表达下调(p〈0.05),细胞增殖能力降低(p〈0.05)。这些结果表明PKM2主要分布在NB4细胞核,抑制PKM2表达可明显抑制NB4细胞增殖,并抑制c-Myc蛋白表达。 展开更多
关键词 PKM2 NB4细胞 定位 c—Myc
基于多孔铂纳米球的白细胞介素-8超灵敏检测电化学免疫传感方法研究 预览
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作者 李丽娜 蒲勤丽 +3 位作者 何荣 李俊龙 谢国明 石继飞 《分析仪器》 CAS 2017年第6期76-83,共8页
超灵敏检测白细胞介素-8(IL-8)有助于口腔癌的早期诊断。本实验采用多孔铂取代天然的辣根过氧化物酶,催化双氧水(H2O2)实现信号转化与放大,构建了一种超灵敏的IL-8无酶电化学免疫传感器。采用透射电镜(TEM)和紫外可见吸收光谱(UV... 超灵敏检测白细胞介素-8(IL-8)有助于口腔癌的早期诊断。本实验采用多孔铂取代天然的辣根过氧化物酶,催化双氧水(H2O2)实现信号转化与放大,构建了一种超灵敏的IL-8无酶电化学免疫传感器。采用透射电镜(TEM)和紫外可见吸收光谱(UV-Vis)对合成的多孔铂纳米酶进行形态和性能验证,利用交流阻抗法(EIS)、循环伏安法(CV)和方波伏安法(SWV)进行电化学性能表征。在最优的条件下,该方法的检测范围是100~5000fg/mL,检出限为85fg/mL(S/N=3)。将IL-8标准加入唾液中进行检测仍得到很好的结果,该方法对辅助口腔癌的早期诊断和治疗有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 白细胞介素-8 口腔癌 多孔铂纳米球 类过氧化物酶 电化学免疫传感器
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肿瘤相关成纤维细胞中GPER介导HMGB1外分泌促进乳腺癌MCF-7细胞自噬及增殖 被引量:2
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作者 郭林英 余腾骅 +3 位作者 张光君 尹恒 柳满然 涂刚 《肿瘤》 CSCD 北大核心 2017年第5期448-456,共9页
目的:探讨小分子化合物G1活化微环境肿瘤相关成纤维细胞(cancerassociated fibroblast,CAF)中G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对外分泌细胞因子高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protei... 目的:探讨小分子化合物G1活化微环境肿瘤相关成纤维细胞(cancerassociated fibroblast,CAF)中G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)对外分泌细胞因子高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)的影响,以及对乳腺癌MCF-7细胞自噬和增殖能力的影响。方法:构建靶向干扰GPER基因的GPER-shRNA慢病毒,稳定转染至CAF中;分别采用实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测阴性对照慢病毒感染组(CAF-shNC组)与GPER-shRNA慢病毒感染组(CAFshGPER组)中GPER mRNA和蛋白的表达情况。利用GPER特异性激动剂G1(1μmol/L)处理以上2组细胞后,分别得到G1+CAF-shNC组与G1+CAF-shGPER组细胞;应用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法及ELISA法检测上述4组细胞中细胞因子HMGB1 mRNA和蛋白的表达水平,以及条件培养液中HMGB1的分泌量。收集以上各组细胞的条件培养液处理MCF-7细胞后,应用蛋白质印迹法检测肿瘤细胞自噬蛋白标志物Beclin1、p62及LC3的表达情况,CCK-8法检测对MCF-7细胞增殖能力的影响。结果:携带有GPER-shRNA的慢病毒稳定转入CAF后,GPER mRNA及蛋白的表达水平被明显抑制(P值均〈0.01)。GPER特异性激动剂G1可明显上调CAF-shNC组细胞中细胞因子HMGB mRNA及蛋白的表达水平,进一步上调条件培养液中HMGB1蛋白的分泌量(P值均〈0.05)。在G1+CAF-shGPER组,中以上效应则被明显抑制。外分泌至条件培养液中的HMGB1可通过上调Beclin1和LC3蛋白以及降低p62蛋白的表达水平增强乳腺癌MCF-7细胞的自噬水平及其增殖能力(P值均〈0.01)。结论:小分子化合物G1通过活化微环境CAF中GPER,增加细胞因子HMGB1的分泌量,进而诱导乳腺癌MCF-7细胞发生自噬,保护MCF-7细胞并促进其生长。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 G蛋白偶联雌激素受体 HMGB1蛋白 细胞自噬 细胞增殖
白介素17对急性肺损伤时肺水肿液清除的影响 预览
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作者 赵燕 程黎 +4 位作者 宋志新 邓欣雨 何婧 邓旺 王导新 《南方医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期494-498,共5页
目的探讨白介素17(IL-17)对急性肺损伤(ALI)小鼠肺水清除的影响及可能机制。方法 IL-17基因敲除鼠和野生型C57BL/6鼠各16只,随机各等分为两组(一共4组,每组8只),分别经气道给与磷酸缓冲盐溶液和脂多糖(LPS)干预,给药48 h后处死。比较各... 目的探讨白介素17(IL-17)对急性肺损伤(ALI)小鼠肺水清除的影响及可能机制。方法 IL-17基因敲除鼠和野生型C57BL/6鼠各16只,随机各等分为两组(一共4组,每组8只),分别经气道给与磷酸缓冲盐溶液和脂多糖(LPS)干预,给药48 h后处死。比较各组肺湿干质量比(W/D)、支气管肺泡灌洗液中白介素8(IL-8)水平和肺组织钠通道(ENa C)蛋白表达情况。并采用HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化法了解肝激酶B1(LKB1)表达差异。结果与接受LPS干预的野生型鼠比较,IL-17敲除型鼠在接受LPS处理后W/D由9.739±3.3降至5.351±0.56,IL-8由67.50±7.33 pg/m L降至41.00±3.16 pg/m L,差异有统计学意义。病检结果提示IL-17敲除型鼠肺泡腔内水肿液聚集减少,肺损伤评分显著降低。Western blotting和免疫组化结果示接受LPS刺激的IL-17敲除型鼠ENa C表达更多,LKB1丢失相对较少。结论敲除IL-17不仅可以减轻ALI小鼠肺组织炎症程度,还可以减少ENa C蛋白丢失,促进肺水清除,其保护作用可能与LKB1有关。 展开更多
关键词 急性肺损伤 白介素17 肺水清除 钠通道 肝激酶B1
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基于DNA-AuNPs信号放大的肠出血性大肠埃希菌快速检测电化学生物传感器 预览
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作者 陈中平 李俊龙 +4 位作者 余文 王箭 邹正渝 汪婷 谢国明 《分析仪器》 CAS 2017年第1期48-54,共7页
快速检测肠出血性大肠埃希菌(EHEC)有利于疾病的早期诊断,为医生合理使用药物提供指导。本实验基于DNA修饰的金纳米粒子(DNA-AuNPs)与亚甲蓝(MB)结合进行信号放大构建了一种灵敏的电化学生物传感器。采用透射电镜(TEM)和紫外... 快速检测肠出血性大肠埃希菌(EHEC)有利于疾病的早期诊断,为医生合理使用药物提供指导。本实验基于DNA修饰的金纳米粒子(DNA-AuNPs)与亚甲蓝(MB)结合进行信号放大构建了一种灵敏的电化学生物传感器。采用透射电镜(TEM)和紫外可见吸收光谱(Uv_vis)对该生物传感器的修饰进行表征,利用交流阻抗法(EIS)、循环伏安法(CV)和差分脉冲伏安法(DPV)进行电化学性能检测。该方法的检测范围是100pM到50nM,检测限为75pM(S/N=3)。与传统细菌分离培养方法相比,该方法具有快速、灵敏等优点,对EHEC的早期诊断有着巨大潜力。 展开更多
关键词 肠出血性大肠埃希菌 16S rRNA基因 电化学生物传感器 DNA-AuNPs扩增部件
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重组慢病毒LV5-NE的构建及NE促进NB4细胞增殖 预览 被引量:1
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作者 杨蓉 钟梁 +4 位作者 刘北忠 阳小群 蒋开玲 李浏 宋浩 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第1期35-40,共6页
目的构建重组慢病毒LV5-NE筛选纯NB4/LV5-NE细胞株,探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖的影响,为研究NE致白血病的可能机制奠定基础。方法以质粒p CMV-myc-NE为模板得到PCR产物NE,将NE基因连接到穿... 目的构建重组慢病毒LV5-NE筛选纯NB4/LV5-NE细胞株,探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖的影响,为研究NE致白血病的可能机制奠定基础。方法以质粒p CMV-myc-NE为模板得到PCR产物NE,将NE基因连接到穿梭载体pGLV10/U6/GFP/Puro后酶切验证,将序列正确的质粒与包装质粒pGag/Pol、pRev、pVSV-G共转染293T细胞。测定病毒滴度。实验分为空白组、LV5-NC组和LV5-NE组,病毒感染NB4细胞72 h后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞。用Western blot检测NE在NB4细胞中的蛋白表达以及其切割作用;CCK-8法观察NB4细胞增殖能力;流式细胞术测定NB4细胞周期和凋亡;Western blot检测pAkt和Akt以及Bax和Bcl-2蛋白表达。结果成功构建表达NE的慢病毒LV5-NE,筛选得到纯NB4/LV5-NE细胞株,NE对NB4细胞的增殖有明显促进作用(P〈0.05)结论 NE在NB4细胞株中稳定表达后中可促进NB4细胞的增殖,其增殖作用可能通过激活PI3K/Akt通路调节。 展开更多
关键词 中性粒细胞弹性蛋白酶 慢病毒构建 增殖 凋亡 NB4细胞
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NLS-RARα通过激活AKT调节白血病NB4细胞的增殖 预览 被引量:1
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作者 宋浩 李浏 +4 位作者 钟梁 蒋开玲 阳小群 杨蓉 刘北忠 《基础医学与临床》 CSCD 2016年第1期41-46,共6页
目的构建携带NLS-RARα的重组慢病毒,感染白血病NB4细胞并观察其对NB4细胞增殖和AKT蛋白的影响。方法以质粒p CMV-HA-NLS-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,将其亚克隆到慢病毒表达载体质粒LV5中,经DNA测序鉴定重组载体,用4质粒系统共... 目的构建携带NLS-RARα的重组慢病毒,感染白血病NB4细胞并观察其对NB4细胞增殖和AKT蛋白的影响。方法以质粒p CMV-HA-NLS-RARα为模板,PCR扩增NLS-RARα基因,将其亚克隆到慢病毒表达载体质粒LV5中,经DNA测序鉴定重组载体,用4质粒系统共转染293T细胞,收集病毒上清,浓缩鉴定,测定重组慢病毒的滴度;重组慢病毒感染NB4细胞,经过嘌呤霉素筛选获得稳定转染NLS-RARα的NB4细胞株;CCK-8法检测NLSRARα对NB4细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期和感染效率;Western blot分别检测NLS-RARα、t-AKT和p-AKT的表达。结果 NLS-RARα克隆入LV5的多克隆位点,慢病毒浓缩后滴度为2×10^8Tu/mL;感染效率为86.54%;NLS-RARα能够明显促进细胞增殖,S期细胞增多,G1和G2期细胞减少;NLS-RARα基因在NB4细胞中稳定的表达,同时p-AKT明显增高,用PI3K抑制剂LY294002处理后p-AKT明显降低。结论 NLS-RARα通过激活AKT促进白血病NB4细胞的增殖。 展开更多
关键词 NLS-RARα 急性早幼粒细胞白血病 增殖 AKT
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NLS-RARα对人白血病细胞NB4分化抑制及其机制的研究
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作者 肖春兰 刘北忠 +6 位作者 徐婷 单志灵 淦柳根 宋浩 杨蓉 李浏 钟梁 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第7期794-801,共8页
该文旨在探讨带核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal retinoic acid receptor alpha,NLS-RARα)对人急性早幼粒白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞株NB4分化的影响及其机制。免疫印迹实验检测全反式... 该文旨在探讨带核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal retinoic acid receptor alpha,NLS-RARα)对人急性早幼粒白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞株NB4分化的影响及其机制。免疫印迹实验检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)诱导的NB4细胞分化标志物C/EBPβ、CD11b和p38α蛋白质水平;利用慢病毒介导的NLS-RARα基因过表达,进一步用免疫印迹实验验证过表达效率并检测NLS-RARα对NB4细胞分化标志物C/EBPβ、CD11b和p38α蛋白质水平的影响;间接免疫荧光实验分析NLS-RARα与p38α的空间共定位;免疫共沉淀实验分析NLS-RARα与p38α的相互作用。结果显示,生理浓度和药理浓度的ATRA促进NB4细胞分化的同时也激活了p38α,且p38α的活性变化与髓系分化标志物C/EBPβ变化一致;髓系分化表面标志物CD11b表达量在药理浓度ATRA(1μmol/L)处理下达到最高;NLS-RARα抑制NB4细胞的分化,且只有在ATRA存在的条件下,NLS-RARα抑制NB4细胞的分化与下调p38α活性相关;NLSRARα与p38α存在空间共定位且NLS-RARα与p38α直接相互作用。该研究结果提示,当存在ATRA诱导时,NLS-RARα与p38α直接相互作用后下调p38α的活性进而抑制NB4细胞的分化。 展开更多
关键词 人急性早幼粒白血病 NLS-RARα NB4细胞 ATRA p38α
一种具有CaPi矿化外壳的新型肺炎链球菌减毒活疫苗的构建
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作者 崔晶晶 吴凯峰 +5 位作者 孙潇雨 王继超 张心愿 邱喻兰 莫云钧 胥文春 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期241-247,共7页
为构建肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1矿化菌,并进一步探究其自身稳定性、热稳定性等生物学特性的改变,本研究以肺炎链球菌D39基因组DNA为模板设计合成构建突变体lyt A基因所需引物,采用插入失活的方法构建SPY1-△lyt A突变株,并以缺陷菌的... 为构建肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1矿化菌,并进一步探究其自身稳定性、热稳定性等生物学特性的改变,本研究以肺炎链球菌D39基因组DNA为模板设计合成构建突变体lyt A基因所需引物,采用插入失活的方法构建SPY1-△lyt A突变株,并以缺陷菌的生长特性以及PCR的方法进行鉴定;将SPY1-△lyt A突变株于富钙环境中培养,用不同浓度的磷酸盐进行滴定,使其形成磷酸钙矿化壳,通过扫描电镜以及直接荧光反应来检测疫苗菌株矿化情况;并将矿化菌株与未矿化菌株同时置于37℃不同时间后通过比较其存活率来评价矿化菌的热稳定性。PCR结果以及细菌长时间不溶解的生长特性表明成功构建了SPY1-△lyt A突变株;扫描电镜以及直接荧光反应结果显示细菌表面形成Ca Pi矿化外壳,并且SPY1-△lyt A-Ca Pi矿化菌具有较好的热稳定性。本研究为肺炎链球菌活菌疫苗的进一步研发奠定了基础。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 减毒活疫苗 插入失活 生物矿化 热稳定性
PepO通过上调腹腔巨噬细胞中MircroRNA-155的表达来抑制IL-6的产生
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作者 姚华 张红 +2 位作者 吴静雯 王晓芳 张雪梅 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期1024-1030,共7页
探索microRNA-155在细胞炎症反应调控中的作用机制。采用重组PepO蛋白刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PEMs)诱导的microRNA-155(miR-155)及其对IL-6的调节。PepO刺激腹腔巨噬细胞诱导miRNA-155呈剂量和时间依赖性表达;Mimic和inhibitor转染... 探索microRNA-155在细胞炎症反应调控中的作用机制。采用重组PepO蛋白刺激小鼠腹腔巨噬细胞(PEMs)诱导的microRNA-155(miR-155)及其对IL-6的调节。PepO刺激腹腔巨噬细胞诱导miRNA-155呈剂量和时间依赖性表达;Mimic和inhibitor转染实验显示过表达mi R-155可抑制IL-6及My D88的表达;IL-6及MyD88与PepO也呈剂量依赖性;且IL-6与MyD88存在PepO处理时间的相关性。这些结果提示,PepO刺激腹腔巨噬细胞诱导miRNA-155可能通过靶向myD88通路信号从而抑制IL-6的表达,避免宿主不至于过度炎症反应导致炎症损伤。 展开更多
关键词 PepO MircroRNA-155 MYD88 IL-6
骨形态发生蛋白9促成骨的分子机制 预览 被引量:4
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作者 罗进勇 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第9期1153-1155,1162共4页
骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)属于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的成员,因其具有诱导骨形成的能力而得名。在人类中,BMPs家族至少包括15个以上的成员,其中具有促成骨作用的(... 骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)属于转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族的成员,因其具有诱导骨形成的能力而得名。在人类中,BMPs家族至少包括15个以上的成员,其中具有促成骨作用的(成骨性BMPs)包括BMP2、BMP4、BMP6和BMP7,而BMP2和BMP7已经在临床用于促进脊柱融合。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白 成骨作用 脊柱融合 SMAD 转化生长因子 morphogenetic 细胞定向分化 超家族 信号转导 间充质干细胞
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低氧诱导乳腺癌癌相关成纤维细胞能量代谢重塑细胞模型的构建 预览 被引量:1
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作者 唐石伏 周明莉 +13 位作者 孙一帆 王林春 刘春明 杨丽 唐曦 张海龙 高超 黄光明 渠海洋 杜燕娥 徐丽云 文思阳 郎磊 柳满然 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1084-1089,共6页
目的:构建低氧诱导的乳腺癌癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)能量代谢重塑(energy metabolism reprogramming,EMR)细胞模型,为其后续分子机制和生物学功能研究奠定基础。方法:以成对的永生化的乳腺癌癌旁组... 目的:构建低氧诱导的乳腺癌癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAF)能量代谢重塑(energy metabolism reprogramming,EMR)细胞模型,为其后续分子机制和生物学功能研究奠定基础。方法:以成对的永生化的乳腺癌癌旁组织来源正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NF)和CAF为处理对象,根据[O2]不同,NF和CAF细胞各分为常氧处理组和低氧处理组。不同氧浓度分别处理NF和CAF细胞0、1、3、6、12 h和24 h。葡萄糖消耗实验和乳酸生成实验检测细胞糖酵解水平;线粒体活性检测实验评估细胞氧化磷酸化(oxidative phosphorylation,OP)活性;Western blot实验检测细胞能量代谢相关蛋白包括单羧酸转运子4(monocarboxylate transporters 4,MCT4)、细胞色素氧化酶Ⅳ亚基(cytochrome oxidaseⅣsubunit,COXⅣ)和低氧诱导因子1α亚基(hypoxia inducible factor 1αsubunit,HIF1α)的蛋白表达量。结果:低氧与CAF细胞EMR呈剂量效应和时间效应关系,1%[O2]作用24 h为最佳低氧处理条件。与NF常氧组相比,低氧处理(1%[O2]作用24 h)使CAF葡萄糖吸收和乳酸产生能力分别增强2倍和3.1倍,明显抑制其氧化磷酸化活性,使CAF细胞中MCT4和HIF1α蛋白表达量分别上升3.1倍和3.9倍及COXⅣ下调90%。结论:低氧(1%[O2]作用24 h)使CAF具有典型的EMR表型。本研究成功构建低氧诱导的乳腺癌CAF细胞EMR模型。 展开更多
关键词 乳腺癌 癌相关成纤维细胞 低氧 能量代谢重塑 细胞模型
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中性粒细胞弹性蛋白酶的过表达促进K562细胞增殖并抑制其凋亡 被引量:2
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作者 蒋开玲 马鹏鹏 +4 位作者 阳小群 钟梁 王慧 朱新瑜 刘北忠 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期159-162,167共5页
目的利用AdEasy系统构建携带人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)基因的重组腺病毒表达质粒,并感染K562细胞,观察其对K562细胞增殖和凋亡的影响。方法以急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60的RNA为模板,经反转录PCR得到NE基因的编码区... 目的利用AdEasy系统构建携带人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)基因的重组腺病毒表达质粒,并感染K562细胞,观察其对K562细胞增殖和凋亡的影响。方法以急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60的RNA为模板,经反转录PCR得到NE基因的编码区并克隆入穿梭载体pAdTrack-CMV,得到pAd-NE,经HindⅢ、EcoRⅤ酶切鉴定和测序正确后,将其转化入pAdEasy-1-BJ5183进行同源重组,得到重组子Ad-NE,经PacⅠ酶切线性化后转染AD293细胞进行包装。14d之后收获原代病毒,经5轮扩增后,测定病毒滴度,进行PCR鉴定。感染K562细胞后,荧光显微镜初步观察感染效率,同时用流式细胞术检测感染效率;Western blot法进一步鉴定NE是否表达上调;CCK-8法测定细胞增殖情况;流式细胞术测定细胞凋亡和细胞周期变化。结果酶切鉴定及测序结果表明重组穿梭质粒pAd—NE构建成功;酶切鉴定显示同源重组成功,得到重组子Ad—NE;荧光显微镜表明病毒包装成功;经过5轮扩增后,病毒滴度达到1.64×10^12pfu/mL;感染K562细胞后,荧光显微镜观察感染效率达80%左右;Western blot法检测到NE表达上调;CCK 8实验显示NE表达上调后K562细胞增殖能力增强;流式细胞术显示S期细胞明显增多并且细胞凋亡减少。结论过表达NE可促进K562细胞增殖并抑制其凋亡。 展开更多
关键词 中性粒细胞弹性蛋白酶 重组腺病毒 增殖 凋亡 K562细胞
急性早幼粒细胞白血病患者血肿瘤细胞NLS-RARα蛋白的表达与定位 被引量:1
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作者 王慧 刘北忠 +4 位作者 阳小群 朱新瑜 马鹏鹏 蒋开玲 钟梁 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期241-247,共7页
目的验证急性早幼粒细胞白血病(APL)患者血肿瘤细胞中带核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal-retinoic acid receptor alpha,NLS-RARα)蛋白的存在及定位。方法采用蛋白质印迹法验证患者血肿瘤细胞中性粒细胞弹... 目的验证急性早幼粒细胞白血病(APL)患者血肿瘤细胞中带核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal-retinoic acid receptor alpha,NLS-RARα)蛋白的存在及定位。方法采用蛋白质印迹法验证患者血肿瘤细胞中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的存在;提取患者血肿瘤细胞核蛋白,蛋白质印迹法检测细胞核中NLS-RARα蛋白的表达;FITC/DAPI双染色免疫荧光法检测患者血肿瘤细胞中NLS-RARα的表达及定位;FITC/PI双染色激光共聚焦法检测患者血肿瘤细胞中NLS-RARα的表达及定位。以重组腺病毒Ad-NE感染的NB4细胞中NLS-RARα蛋白的表达及定位作阳性对照,以正常人血中性粒细胞中野生型RARα的表达和定位作阴性对照。结果阳性对照组设置成功。APL患者血肿瘤细胞中存在NE且有NLS-RARα蛋白表达。细胞免疫荧光法、激光共聚焦法检测结果提示APL患者血肿瘤细胞NLSRARα蛋白的表达主要位于胞核。结论成功用3种方法检测出APL患者血肿瘤细胞中NLS-RARα蛋白的存在并推测其定位,为进一步研究APL的早期诊断及复发监测提供了新思路。 展开更多
关键词 维甲酸受体Α 核定位信号 中性粒细胞 急性早幼粒细胞白血病
肺炎链球菌三磷酸甘油醛脱氢酶GAPDH与热休克蛋白DnaJ的相互作用
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作者 马峰 王建敏 +6 位作者 王丽滨 宋志新 徐红梅 邢燕 粟玉凤 张雪梅 孟江萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期1629-1635,共7页
目的 验证肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)糖酵解关键酶三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和热休克蛋白DnaJ的相互作用。方法 PCR扩增S.pn D39 GAPDH蛋白编码基因gap全长,将其克隆至p... 目的 验证肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)糖酵解关键酶三磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)和热休克蛋白DnaJ的相互作用。方法 PCR扩增S.pn D39 GAPDH蛋白编码基因gap全长,将其克隆至pET-28a(+),重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导GAPDH-6His的表达,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,用SDS-PAGE鉴定其纯度。重组GAPDH蛋白经腹部皮下免疫昆明小鼠获得多克隆抗体。用western blot鉴定GAPDH的保守性。采用大肠杆菌双杂交系统、直接结合实验、生物膜层干涉技术(Bio-layer Interferometry,BLI)验证GAPDH和DnaJ的相互作用。结果 获得了纯度达90%的GAPDH重组蛋白,并获得了效价达10^7的抗GAPDH多克隆抗体,Western blot显示在7株不同血清型S.pn的全菌裂解液和培养上清中均存在和抗GAPDH抗体反应的特异性条带。大肠杆菌双杂交系统显示GAPDH和DnaJ共转化菌株能够在3-AT平板及双选择培养平板上生长,提示二者在细菌胞内有相互作用。直接结合实验和BLI显示随着加入GAPDH蛋白浓度的增加,二者的结合量也增加,提示GAPDH和DnaJ的结合具有浓度依赖性。BLI实验也显示GAPDH和DnaJ的亲和常数为1.12×10^-7mol/L。结论 糖酵解关键酶GAPDH在肺炎链球菌中保守表达,且为分泌性蛋白;该蛋白和热休克蛋白DnaJ在细胞内存在相互作用,且为直接相互作用,且为直接相互作用。 展开更多
关键词 肺炎链球菌 三磷酸甘油醛脱氢酶 热休克蛋白DnaJ 蛋白相互作用
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