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两个成骨不全家系的COL1A1基因突变筛查及临床特征分析 认领
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作者 冯丙岂 刘旭阳 +4 位作者 何芬 李丹丽 张达人 赵林 樊宁 《眼科》 CAS 2019年第4期273-279,共7页
目的分析2个成骨不全(osteogenesis imperfecta,OI)家系的临床特征和分子遗传学特点。设计回顾性病例系列。研究对象2个分别位于四川和广东的汉族成骨不全家系成员共45人,其中家系1本课题组曾在GMR杂志报道,作者对其进行了5年的追踪观... 目的分析2个成骨不全(osteogenesis imperfecta,OI)家系的临床特征和分子遗传学特点。设计回顾性病例系列。研究对象2个分别位于四川和广东的汉族成骨不全家系成员共45人,其中家系1本课题组曾在GMR杂志报道,作者对其进行了5年的追踪观察。方法收集家系成员的详细临床资料并进行眼部和全身检查,采集家系患者和正常成员的外周血进行基因组DNA提取,筛选疾病相关基因序列改变,在家系成员和正常个体中进行验证分析,确定致病基因和突变位点,分析其与患者临床特征的关系,并对两个家系进行对比分析。主要指标既往病史、视力、角膜厚度、眼前节和眼后节检查、听力检测、X线检查以及基因测序结果。结果2个家系分别诊断为Ⅰ型和Ⅳ型,均符合常染色体显性遗传模式,临床表现的共同特征是巩膜为蓝色、角膜厚度薄、反复非强力骨折、听力下降、脊柱畸形,不同之处在于家系2患者还合并身材矮小、牙本质发育不全,全身骨骼畸形更为明显。分子遗传学分析发现,家系1为COL1A1基因第33号外显子杂合突变(c.2329delG),引起第777位密码子移码突变(p.Ala777Profs*330),造成COL1A1蛋白合成缺陷;家系2为COL1A1基因第10号外显子杂合突变(c.725G>T),引起第242位氨基酸由甘氨酸(Gly)突变为缬氨酸(Val)(p.Gly242Val);家系1突变为本课题组发现的突变并已经报道,家系2为COL1A1基因新突变。结论本研究中2个OI家系分别是由于COL1A1基因c.2329delG和c.725G>T突变导致,本研究结果丰富了COL1A1基因突变谱,有助于OI基因型与临床表型关系的研究。 展开更多
关键词 成骨不全 7基因 I型胶原蛋白 分子遗传学
NLRP7基因在母源印记中的研究进展 认领 被引量:1
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作者 李广栋 崔炜 +3 位作者 田秀芝 吕东颖 姬鹏云 刘国世 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第4期1002-1008,共7页
NOD样受体(nucleotide binding oligomerization domain-like receptors,NLRs)家族在先天性免疫系统中行使着重要功能,与Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家族相类似,该家族十分保守,不仅在植物中存在,也在哺乳动物体内表达。NLRs... NOD样受体(nucleotide binding oligomerization domain-like receptors,NLRs)家族在先天性免疫系统中行使着重要功能,与Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)家族相类似,该家族十分保守,不仅在植物中存在,也在哺乳动物体内表达。NLRs家族中有许多亚家族,其中,NLRP7(NACHT,LRR and PYD domains-containing protein 7)是NLRP亚家族中的一员,其在多种免疫细胞及免疫器官中表达,可参与细胞生长、增殖和分化过程,在细胞凋亡、炎症反应等生理过程中发挥作用。NLRP7除了在免疫系统中表达外,还在哺乳动物的睾丸、卵巢等生殖系统及早期胚胎中表达,NLRP7的突变通常会导致人类家族复发性葡萄胎疾病的发生,最终导致妊娠失败。近期研究发现,NLRP7是一种母源印记基因,NLRP7异常的印记状态导致了异常的胚胎发育。在猪、牛、羊等大动物中虽然尚未发现葡萄胎疾病,但许多不明原因的流产、死胎等均可能与NLRP7的突变有关。由于进化过程中NLRP7在小鼠等啮齿动物中发生了退化,因此目前有关NLRP7的研究以灵长类为主。作者就近年来NLRP 7基因与动物生殖相关的研究进展进行了综述,以期为哺乳动物繁殖障碍等疾病的研究提供参考。 展开更多
关键词 母源印记基因 NLRP 7基因 生殖
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天山雪莲再生体系的优化及转sikPIP2;7基因的研究 认领 被引量:1
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作者 刘逸泠 黎玉顺 +2 位作者 张丽 王爱英 祝建波 《西北农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第4期143-150,共8页
以天山雪莲幼苗叶片为外植体进行再生体系的优化,经农杆菌介导法转化获得转正义sikPIP2;7雪莲植株,对转基因雪莲苗进行低温处理并进行抗逆分析。结果表明,诱导不定芽最佳植物激素组合为MS+0.5mg/L ZT+1.0mg/L NAA;生根阶段活性炭最佳... 以天山雪莲幼苗叶片为外植体进行再生体系的优化,经农杆菌介导法转化获得转正义sikPIP2;7雪莲植株,对转基因雪莲苗进行低温处理并进行抗逆分析。结果表明,诱导不定芽最佳植物激素组合为MS+0.5mg/L ZT+1.0mg/L NAA;生根阶段活性炭最佳添加量为0.5g/L,蔗糖最佳添加量为20g/L。RTPCR分析表明,在0℃胁迫下转基因植株sikPIP2;7表达量增加;低温胁迫下转基因植株丙二醛(MDA)质量摩尔浓度、相对电导率(REC)、过氧化氢(H2O2)清除速率和超氧化物岐化酶(SOD)活性显著优于对照植株,说明sikPIP2;7过表达提高转基因雪莲抗低温胁迫的能力。 展开更多
关键词 天山雪莲 再生体系 sikPIP2 7基因 过表达 低温胁迫
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麦氏安瘿蜂体内侵染Wolbachia的WO噬菌体的检测及其orf7基因序列分析 认领
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作者 苏成元 杨筱慧 朱道弘 《生命科学研究》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期227-231,共5页
Wolbachia为节肢动物等的细胞质共生细菌,能对宿主的繁殖模式进行调控,包括诱导胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化及雄性致死。WO噬菌体是一类侵染节肢动物体内Wolbachia的细菌病毒。为检测麦氏安瘿蜂Wolbachia是否被WO噬菌体侵染,本研究使... Wolbachia为节肢动物等的细胞质共生细菌,能对宿主的繁殖模式进行调控,包括诱导胞质不亲和、孤雌生殖、雌性化及雄性致死。WO噬菌体是一类侵染节肢动物体内Wolbachia的细菌病毒。为检测麦氏安瘿蜂Wolbachia是否被WO噬菌体侵染,本研究使用WO噬菌体的orf 7基因引物,对信阳、六安及长沙3种群的WO噬菌体进行了PCR检测。结果显示,3种群的雌、雄虫体内的Wolbachia均有WO噬菌体的侵染,感染率为100%。获得的3种群麦氏安瘿蜂Wolbachia的WO噬菌体orf 7基因序列均为371 bp,序列完全一致。其序列与粉斑螟Ephestia cautella的wECau B3-1和wCauA5-1株系、反颚茧蜂Asobara tabida的wAtabA3-3株系的一致性最高,在NJ和ML系统树中,均聚合在同一分支,属于WO噬菌体的第Ⅲ大群。 展开更多
关键词 麦氏安瘿蜂 WOLBACHIA WO噬菌体 ORF 7基因 系统发育关系
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糖耐康对转化生长因子-β_1诱导人肾小管上皮细胞Smad 2、3、7mRNA表达的影响 认领 被引量:1
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作者 李芳 杨丽霞 +3 位作者 舒畅 刘铜华 吴丽丽 孙文 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2013年第11期37-39,共3页
目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad2、3、7mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK一2细胞用含10%胎牛血清的βMEM/F12(1:1)培养基培养;实验分为空... 目的观察糖耐康药物血清干预转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)Smad2、3、7mRNA的表达,探讨其在防治肾间质纤维化方面的作用。方法将HK一2细胞用含10%胎牛血清的βMEM/F12(1:1)培养基培养;实验分为空白对照组、单纯-β1诱导组(TGF-β110ng/mL)、空白血清对照组(TGF—β110ng/mL+10%空白血清)、干预1组(TGF—β110ng/mL+5%糖耐康药物血清)、干预2组(TGF—β-10ng/mL+10%糖耐康药物血清)、干预3组(TGF—β110ng/mL+20%糖耐康药物血清)。药物干预24h后,荧光定量PCR检测Smad2、3、7mRNA的表达。结果HK一2细胞经-β1诱导后,Smad2、3mRNA的表达显著上升,而Smad7的表达减弱,与空白对照组比较差异有统计学意义(P〈0.05),经糖耐康药物血清干预后,Smad2、3mRIqA的表达逐步下降,而Smad7mRNA的表达逐步上升,与单纯TGF-β1诱导组比较差异有统计学意义(P〈O.05)。结论糖耐康在一定程度上能够抑制TGF—βt诱导的人肾小管上皮细胞纤维化,其机制可能与调节纤维化信号通路Smad2、3、7mRNA表达有关。 展开更多
关键词 糖耐康 转化生长因子-Β1 人肾小管上皮细胞 SMAD 2基因 SMAD 3基因 SMAD 7基因
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农杆菌介导轮状病毒抗原蛋白基因VP7转化紫花苜蓿的研究 认领 被引量:2
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作者 曲静 王丕武 +1 位作者 关淑艳 范玉广 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2011年第5期 21-25,共5页
以公农1号紫花苜蓿5~7日龄无菌苗子叶为材料,通过农杆菌介导法将轮状病毒抗原蛋白基因VP7转入紫花苜蓿子叶中,并用卡那霉素进行筛选获得抗性植株。提取转化抗性植株叶片DNA作模板,用VP7基因特异引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分... 以公农1号紫花苜蓿5~7日龄无菌苗子叶为材料,通过农杆菌介导法将轮状病毒抗原蛋白基因VP7转入紫花苜蓿子叶中,并用卡那霉素进行筛选获得抗性植株。提取转化抗性植株叶片DNA作模板,用VP7基因特异引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳分析表明有7株扩增出了960bp的特异条带。对7株PCR阳性植株进行PCR—Southern杂交和Southern杂交分析,有4株出现阳性杂交信号,表明目的基因已经整合到紫花苜蓿基因组中,并且是1~2个拷贝。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 子叶 VP 7基因 转化
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汉坦病毒S0.7基因新型重组腺病毒的构建及鉴定 认领
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作者 李凯 李璞媛 +4 位作者 白文涛 胡刚 吴兴安 徐志凯 张芳琳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期 420-422,430,共4页
目的:构建含汉坦病毒核蛋白(NP)氨基端编码基因S0.7,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒。方法:依据GenBank序列,分别合成CAG序列及WPRE序列,插入S0.7-pShuttle中,构建含S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的转移... 目的:构建含汉坦病毒核蛋白(NP)氨基端编码基因S0.7,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒。方法:依据GenBank序列,分别合成CAG序列及WPRE序列,插入S0.7-pShuttle中,构建含S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的转移载体pShuttle-S0.7-CAG-WPRE。采用PI-SceI和I-CeuI限制性内切酶将该片段克隆入腺病毒DNA,得到重组腺病毒DNAAdeno-S0.7-CAG-WPRE,使用PacI线性化后转染HEK293细胞,包装重组腺病毒。感染HEK293细胞后用免疫荧光法检测表达产物。结果:转移载体pShuttle-S0.7-CAG-WPRE通过测序证明构建正确,纯化重组腺病毒滴度达1013pfu/L。免疫荧光结果表明,重组腺病毒感染的HEK293细胞被抗汉坦病毒NP的特异性mAb1A8所识别。结论:成功地构建了含汉坦病毒S0.7基因,CAG启动子及WPRE转录后调节元件的新型重组腺病毒,本实验为进一步研制汉坦病毒基因疫苗奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 汉坦病毒 S0.7基因 CAG启动子 WPRE 腺病毒
腺病毒介导mda-7联合阿霉素对肝癌移植瘤生长的影响 认领
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作者 胡回忆 薛新波 +6 位作者 陈堃 王从俊 李雁 郑建伟 于愿 吉文伟 吴在德 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期461-462,共2页
研究发现mda-7基因能阻滞多种癌细胞增殖、促进细胞凋亡,对肿瘤具有选择性杀伤作用,而对正常细胞不起不良反应,且对肺癌的生长抑制作用与血管生成的减少相关。本实验应用重组腺病毒载体介导mda-7并在裸鼠体内表达,观察其抗肿瘤效果... 研究发现mda-7基因能阻滞多种癌细胞增殖、促进细胞凋亡,对肿瘤具有选择性杀伤作用,而对正常细胞不起不良反应,且对肺癌的生长抑制作用与血管生成的减少相关。本实验应用重组腺病毒载体介导mda-7并在裸鼠体内表达,观察其抗肿瘤效果,为探索肝细胞癌(肝癌)的基因治疗联合化疗提供理论和实验依据。 展开更多
关键词 肝细胞 基因疗法 肿瘤转移 MDA 7基因 阿霉素
茨城病毒VP7蛋白基因的克隆表达及间接ELISA方法的建立 认领 被引量:1
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作者 张文龙 刘光亮 +1 位作者 王君伟 吴东来 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期 960-963,共4页
采用RT-PCR方法扩增出了茨城病毒(IBAV)No.2株编码VP7蛋白的S7全长基因,并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BI.21中表达。经Western-blot检测,表达的重组VP7蛋白具有良好的反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原... 采用RT-PCR方法扩增出了茨城病毒(IBAV)No.2株编码VP7蛋白的S7全长基因,并克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,在E.coli BI.21中表达。经Western-blot检测,表达的重组VP7蛋白具有良好的反应原性。以纯化的重组蛋白作为包被抗原,初步建立了检测IBAV血清抗体的间接ELISA方法。 展开更多
关键词 茨城病毒 S7基因 表达 纯化 间接ELISA
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蓝舌病毒血清5型毒株S7基因编码区的分子克隆与序列分析 认领 被引量:7
10
作者 李文超 吕茂民 +4 位作者 杨姝 尹惠琼 史利军 马玉媛 章金刚 《生物技术通讯》 CAS 2007年第3期 384-387,共4页
目的:对蓝舌病毒(BTV)血清5型毒株(BTV-5)的S7基因编码区(ORF)进行克隆和序列分析。方法:用TRIzol LS试剂提取病毒总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)扩增BTV-5型毒株S7基因的编码区,将扩增片段克隆到pGEM—T Easy载体... 目的:对蓝舌病毒(BTV)血清5型毒株(BTV-5)的S7基因编码区(ORF)进行克隆和序列分析。方法:用TRIzol LS试剂提取病毒总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT—PCR)扩增BTV-5型毒株S7基因的编码区,将扩增片段克隆到pGEM—T Easy载体上,对阳性克隆进行核苷酸序列测定;采用DNAStar和DNASIS v2.5软件对环状病毒属不同种群的S7基因ORF序列及其推导的氨基酸序列进行同源性及系统进化树分析。结果:克隆的基因片段长1050bp,为S7基因开放性读码框的全长序列,编码349个氨基酸残基;与环状病毒属不同血清型毒株比较,核酸序列同源性范围为42.2%~96.6%,推导的氨基酸序列同源性范围为40.4%~99.7%。结论:蓝舌病毒与非洲马瘟病毒、鹿流行性出血热病毒分属于不同种群,群内不同血清型的S7基因ORF序列及其推导的氨基酸序列显示出很高的同源性,而不同种群之间的同源性很低。 展开更多
关键词 蓝舌病毒 S7基因 分子克隆 序列分析
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美洲大蠊Per a7基因的克隆、表达及免疫学鉴定 认领 被引量:4
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作者 刘志刚 何毅华 +1 位作者 吴海强 朱永峰 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期 330-334,共5页
根据原肌球蛋白基因序列设计引物,以我国南方地区美洲大蠊Periplaneta americana RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出852bp的全长编码片段,经序列分析发现该基因与NCBI公布的Pera7有3个核苷酸发生改变。将目的片段克隆到pET24a(+)表达... 根据原肌球蛋白基因序列设计引物,以我国南方地区美洲大蠊Periplaneta americana RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出852bp的全长编码片段,经序列分析发现该基因与NCBI公布的Pera7有3个核苷酸发生改变。将目的片段克隆到pET24a(+)表达载体中,在大肠杆菌BL21Star获得表达,融合蛋白的分子量约为33kD。利用蟑螂过敏性患者血清对表达产物进行Western blotting检测,出现明显的识别条带,说明表达产物具有IgE结合活性。 展开更多
关键词 美洲大蠊 变应原 原肌球蛋白 PER a7基因 免疫鉴定
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辐射诱导Egr-1调控腺病毒介导Smad 7基因对Lewis肺癌生物学行为影响的在体研究 认领
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作者 王丽 冯炎 +1 位作者 傅小龙 蔡旭伟 《中华放射肿瘤学杂志》 CSCD 北大核心 2005年第5期439-442,共4页
目的研究射线诱导下Egr-1基因启动子调控腺病毒介导的Smad 7基因在C57BL/6J小鼠Lewis肺癌原发病灶内表达后,对原发灶及远处肺转移发生的影响。方法将Egr-1基因启动子的辐射敏感元件和Smad 7 cDNA包装到复制缺陷型腺病毒内,制备成AD.Egr-... 目的研究射线诱导下Egr-1基因启动子调控腺病毒介导的Smad 7基因在C57BL/6J小鼠Lewis肺癌原发病灶内表达后,对原发灶及远处肺转移发生的影响。方法将Egr-1基因启动子的辐射敏感元件和Smad 7 cDNA包装到复制缺陷型腺病毒内,制备成AD.Egr-Smad 7。接种Lewis肺癌细胞于小鼠右后肢外侧,建立荷瘤小鼠模型,肿瘤直径达0.8~1.0 cm时进行实验。小鼠被随机分入空白对照、生理盐水(NS)对照、AD.Egr-Smad 7对照、单纯照射、NS+照射、AD.Egr-Smad 7+照射组(6只/组),分别进行如下研究:(1)隔日记录肿瘤长径及短径,观察肿瘤生长曲线、生长延迟时间及小鼠生存时间;(2)观察肿瘤照射2周时肺转移发生情况;(3)观察肿瘤生长至照射时4倍体积时肺转移发生情况。结果放射线诱导Egr-1基因启动子调控腺病毒介导的Smad 7基因在C57BL小鼠Lewis肺癌原发病灶内表达后,有抑制原发肿瘤生长及延长小鼠生存时间的作用(P<0.05),对肿瘤远处肺转移的发生无明显影响(P>0.05)。结论放射线诱导AD.Egr-Smad 7无促进小鼠Lewis肺癌肿瘤局部病灶发展及远处脏器转移的危险性,并且有抑制原发肿瘤生长及延长生存时间的作用。将AD.Egr-Smad 7用于阻断TGF-β信号传导通路,靶向性基因治疗放射性肺纤维化具有一定的安全性。 展开更多
关键词 肺肿瘤 Egr-1基因启动子 SMAD 7基因 小鼠 LEWIS肺癌细胞 SMAD7基因 基因启动子 EGR-1 腺病毒介导
蓝舌病毒HbC3株S7基因5’非编码区序列分析 认领 被引量:3
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作者 桂亦瑞 董长垣 +2 位作者 陈晓 张蔚英 刘军 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期206-210,共5页
根据已发表的蓝舌病毒(bluetonguevirus,BTV)10型标准株S7基因设计合成一对与其5′ NCR(non codingregion)序列同源的引物,经反转录 聚合酶链反应(RT PCR)扩增出HbC3株和10型标准株长度分别为277bp和290bp的S7基因5′非编码区cDNA片段,... 根据已发表的蓝舌病毒(bluetonguevirus,BTV)10型标准株S7基因设计合成一对与其5′ NCR(non codingregion)序列同源的引物,经反转录 聚合酶链反应(RT PCR)扩增出HbC3株和10型标准株长度分别为277bp和290bp的S7基因5′非编码区cDNA片段,以建立起dsRNA体外扩增系统.将扩增的BTV HbC3毒株的S7基因5′非编码区片段通过粘端连接克隆到pUCm T载体中,用PCR技术和限制性内切酶分析鉴定,表明获得重组质粒pUCm T BTV HbC3 S7.通过核苷酸序列分析方法分别将2个毒株的S7基因5′非编码区与呼肠孤病毒 3(reovirus 3)型比对,发现BTV HbC3株与呼肠孤病毒 3L2基因5′非编码区基因具有完全的同源性.将BTV HbC3毒株接种在不同细胞系如猴肾传代细胞(Vero)、人肝癌细胞(Hep 3B)和小鼠成纤维细胞(L929)等细胞株上,比较BTV HbC3在不同种系细胞上的增殖特征,并且用双向免疫扩散试验证实BTV HbC3和BTV 10型之间的血清学关系.结合本实验室的研究结果提示BTV HbC3株可能是蓝舌病毒的一个新的基因型. 展开更多
关键词 蓝舌病毒 S7基因 克隆 基因 非编码区 序列分析 呼肠孤病毒科
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基于Smad7基因为靶序列的RNA干涉作用研究 认领
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作者 王菊萍 王莹 +3 位作者 霍艳英 郭蔼光 徐勤枝 张开泰 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2004年第12期13-17,共5页
 为了探讨小干涉RNA(siRNA)对靶基因Smad7mRNA表达的阻断作用,采用体外转录方法制备Smad7基因的小干涉RNAs(siRNAs),用脂质体介导瞬时转染BERP35T 2肺癌细胞系,并采用Northernblot杂交检测靶基因mRNA的表达丰度。结果表明,根据Smad7编...  为了探讨小干涉RNA(siRNA)对靶基因Smad7mRNA表达的阻断作用,采用体外转录方法制备Smad7基因的小干涉RNAs(siRNAs),用脂质体介导瞬时转染BERP35T 2肺癌细胞系,并采用Northernblot杂交检测靶基因mRNA的表达丰度。结果表明,根据Smad7编码区序列在体外成功地制备了针对2个不同靶序列的siRNAs;Northernblot杂交显示,在转染siRNA的BERP35T 2细胞中,不管是内源性的还是外源性的,Smad7mRNA的表达丰度均明显下降。说明Smad7基因编码区中542563bp及701722bp2个区域均是siRNA作用的有效靶序列,本研究设计并制备的siRNAs能有效抑制Smad7基因的表达。 展开更多
关键词 小干涉RNA Smad 7基因 体外转录 瞬时转染 靶序列
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脆壁克鲁维酵母KFade5,7基因的克隆及其5′非编码区结构与功能研究 认领
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作者 单敬轩 霍克克 李育阳 《高技术通讯》 CAS CSCD 2003年第6期37-42,共6页
通过补偿乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)KlADE5,7基因突变,从脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)基因组文库中克隆了KfADE5,7基因。该基因全长4975bp,编码793个氨基酸,氨基酸序列与已知的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)... 通过补偿乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)KlADE5,7基因突变,从脆壁克鲁维酵母(Kluyveromyces fragilis)基因组文库中克隆了KfADE5,7基因。该基因全长4975bp,编码793个氨基酸,氨基酸序列与已知的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)ScADE5,7基因编码区有68.3%的同源度。利用KfADE5,7-lacZ融合基因,对5’非编码区进行缺失分析,发现了具有完整启动子功能的区域,在启动子上游还发现了两个增强转录和两个减弱转录的区域。 展开更多
关键词 脆壁克鲁维酵母 基因突变 乳酸克鲁维酵母 “KlADE5 7基因 腺嘌呤核苷 氨基酸 酿酒酵母 启动子 转录
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过表达FOXF2对人宫颈癌SiHa细胞迁移及增殖影响机制探讨 认领
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作者 刘丽敏 黄紫宇 +2 位作者 胡海燕 何芳 刘植华 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2021年第2期117-122,共6页
目的探讨过表达叉头框转录因子F2(FOXF2)调控HPV早期基因区6(early region,E6)和早期基因区7(early region,E7)抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移、增殖的影响及其作用机制。方法构建慢病毒转染SiHa细胞,实验分为对照组和实验组,qRT-PCR和蛋白... 目的探讨过表达叉头框转录因子F2(FOXF2)调控HPV早期基因区6(early region,E6)和早期基因区7(early region,E7)抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移、增殖的影响及其作用机制。方法构建慢病毒转染SiHa细胞,实验分为对照组和实验组,qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达慢病毒对照组及实验组中FOXF2、E6、E7、p53、pRB/RB、E2F1mRNA和(或)蛋白表达变化;划痕试验和平板克隆形成试验分别检测细胞迁移和增殖能力。SPSS 20.0对数据进行统计学分析。结果 SiHa细胞内FOXF2过表达后,过表达慢病毒实验组FOXF2mRNA表达水平为20.07±0.63,高于对照组的1.05±0.08,差异有统计学意义,F=272.883,P<0.001;实验组p53mRNA表达水平为1.46±0.07,高于对照组的0.95±0.16,差异有统计学意义,F=25.775,P=0.007;实验组E2F1mRNA表达水平为0.77±0.06,低于对照组的1.00±0.02,差异有统计学意义,F=39.74,P=0.003;实验组RB mRNA表达水平为1.22±0.09,高于对照组的1.00±0.04,差异有统计学意义,F=14.738,P=0.018。过表达慢病毒实验组FOXF2蛋白表达水平为0.41±0.05,高于对照组的0.21±0.06,差异有统计学意义,F=34.192,P<0.001;RB蛋白表达水平为0.68±0.06,高于对照组的0.40±0.03,差异有统计学意义,F=71.468,P=0.001;pRB蛋白表达水平为0.45±0.06,低于对照组的0.75±0.09,差异有统计学意义,F=25.480,P=0.007;E2F1蛋白表达水平为0.32±0.03,低于对照组的0.57±0.06,差异有统计学意义,F=43.872,P=0.003;p53蛋白表达水平为0.22±0.03,高于与对照组的0.11±0.01,差异有统计学意义,F=36.327,P=0.004;E6蛋白表达水平为0.21±0.03,低于对照组的0.40±0.09,差异有统计学意义,F=12.36,P=0.025;E7蛋白表达水平为0.21±0.03,低于对照组的0.36±0.08,差异有统计学意义,F=9.093,P=0.039。实验组细胞迁移率为(0.36±0.06)%,低于对照组的(0.74±0.06)%,差异有统计学意义,F=60.945,P=0.001。实验组细胞克隆形成率为(0.34±0.04)%,低于对照组的(0.67±0.07)%,差异有统计学意义, 展开更多
关键词 宫颈癌 叉头框转录因子F2 高危型人乳头瘤病毒 E6基因 E7基因 细胞迁移 细胞增殖
荆州地区HPV-52型E7基因多态性分析和T细胞表位预测 认领
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作者 李烁 叶梦霞 梅冰 《分子诊断与治疗杂志》 2021年第2期211-215,共5页
目的研究湖北荆州地区人乳头瘤病毒52型(HPV-52)E7基因变异特征以及预测T细胞表位。方法扩增HPV-52阳性样本E7基因,测序并与GenBank参考序列比对,分析序列变异性,构建E7基因系统发育树,估算基因选择压力以及预测E7蛋白T细胞表位。结果 H... 目的研究湖北荆州地区人乳头瘤病毒52型(HPV-52)E7基因变异特征以及预测T细胞表位。方法扩增HPV-52阳性样本E7基因,测序并与GenBank参考序列比对,分析序列变异性,构建E7基因系统发育树,估算基因选择压力以及预测E7蛋白T细胞表位。结果 HPV-52 E7基因突变序列中检测到19个单核苷酸突变,包括10个非同义突变和9个同义突变。常见的单核苷酸突变为751C>T和801A>G,突变率分别为96.51%和98.84%。3个非同义突变发生在编码E7蛋白β折叠区域内。系统进化分析表明荆州地区HPV-52 E7基因变异序列主要分布在B谱系。对于HLA-A*02:01,MLLGTLQVV(84-92)表位亲和力最强,对于HLA-DQA1*01:01/DQB1*02:01,ATIKDYILDLQPETT(6-20)表位亲和力最强。结论湖北荆州地区HPV-52 E7基因序列具有多态性,单核苷酸突变的发现以及T细胞表位预测可为HPV治疗性疫苗的研究提供科学依据。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒52型 E7基因 多态性 T细胞表位
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苏淮猪BMP7基因3′-UTR多态性分析 认领
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作者 尹杭 杜星 +3 位作者 潘增祥 李强 刘红林 李齐发 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期346-352,共7页
[目的]本研究旨在了解苏淮猪骨形态发生蛋白7(BMP7)基因3′-UTR序列特征,以及突变位点多态性与繁殖性状、3′-UTR活性的关系,为解析猪BMP7基因3′-UTR的调控机制提供参考。[方法]采用PCR扩增和测序等技术获得苏淮猪BMP7基因3′-UTR序列... [目的]本研究旨在了解苏淮猪骨形态发生蛋白7(BMP7)基因3′-UTR序列特征,以及突变位点多态性与繁殖性状、3′-UTR活性的关系,为解析猪BMP7基因3′-UTR的调控机制提供参考。[方法]采用PCR扩增和测序等技术获得苏淮猪BMP7基因3′-UTR序列,利用生物信息学方法分析其序列特征;池DNA测序筛选苏淮猪BMP7基因3′-UTR上的突变位点,直接测序法对突变位点进行基因分型,采用线性模型分析突变位点多态性与繁殖性状的关系;构建突变位点不同等位型BMP7基因3′-UTR报告载体,用双荧光素酶报告基因系统分析突变位点对BMP7基因3′-UTR活性的影响。[结果]获得639 bp的苏淮猪BMP7基因3′-UTR序列,与其他猪种序列的同源性较高;序列中含有AU-富集元件(ARE)和miRNA应答元件(MRE)等经典的顺式作用元件。在苏淮猪BMP7基因3′-UTR序列的273 nt处发现1个A>G突变,命名为c.*273A>G突变。在苏淮猪群体中BMP7基因c.*273A>G位点有3种基因型,其中AA型为优势基因型,A为优势等位基因。关联分析发现该突变位点多态性与初产产仔数显著关联,其中AG型母猪比GG型每胎高0.83头。荧光素酶活性分析发现A等位型3′-UTR报告载体的荧光素酶活性高于G等位型,但差异不显著。[结论]BMP7是苏淮猪繁殖性状的候选基因。 展开更多
关键词 苏淮猪 BMP7基因 3′-UTR 多态性 繁殖性状
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云南香猪PRRSV分离株ORF7基因遗传变异分析 认领
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作者 郑龙龙 朱玲云 +5 位作者 刘萍丹 赵德育 刘佳 毕峻龙 杨贵树 舒相华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期13-19,共7页
为了解2014年云南省香猪群体中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特征,将疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病例肺脏和淋巴结研磨处理后接种Marc-145细胞进行盲传,传至第2代48 h时出现2株病毒致Marc-145细胞聚集融合、巨细胞等病毒致细... 为了解2014年云南省香猪群体中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特征,将疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病例肺脏和淋巴结研磨处理后接种Marc-145细胞进行盲传,传至第2代48 h时出现2株病毒致Marc-145细胞聚集融合、巨细胞等病毒致细胞病变(CPE)效应现象,将其命名为YN-2XZ1和YN-3XZ2。细胞冻融3次后,使用Reed-Muench法计算病毒的半数感染力(TCID50)分别为106.75,106.05TCID50/100μL。对ORF7基因进行序列测定、分析及N蛋白的免疫印迹(WB)检测,并与美洲经典毒株VR-2332、国内2001-2014年部分序列进行比对结果显示,本次获得的2株PRRSV之间核苷酸同源性为100%,与国内流行的变异毒株进化同步,说明目前云南香猪群中PRRSV以变异毒株为主,可能不具有高暴发性和高致病力,不会引起重大经济损失和社会恐慌,但仍需对此加以关注。通过磷酸化分析得出,暴发HP-PRRSV前N蛋白35位丝氨酸磷酸化概率67.4%~99.8%,暴发HP-PRRSV后N蛋白35位丝氨酸磷酸化概率低于50%,提示该位点氨基酸不易于磷酸化可能与NSP-2蛋白基因缺失从而引起HP-RRSV有关,需进一步研究验证。 展开更多
关键词 香猪 PRRSV CPE ORF7基因 N蛋白
三例CHARGE综合征患儿的临床表型和CHD7基因变异分析 认领
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作者 陶枳言 陆方 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2021年第1期42-46,共5页
目的对3例CHARGE综合征患者进行基因变异检测,明确其可能的遗传学病因。方法先证者及父母进行全外显子测序检测相关致病基因,对检出致病变异进行Sanger测序验证。结果3例患儿均有程度不同的眼部病变,包括小眼球、小角膜、虹膜缺损、晶... 目的对3例CHARGE综合征患者进行基因变异检测,明确其可能的遗传学病因。方法先证者及父母进行全外显子测序检测相关致病基因,对检出致病变异进行Sanger测序验证。结果3例患儿均有程度不同的眼部病变,包括小眼球、小角膜、虹膜缺损、晶状体混浊、视神经视网膜脉络膜缺损等。测序结果示例1的CHD7基因第2外显子存在c.1447delG(p.Val483Leufs*12)杂合移码变异;例2的CHD7基因第36外显子存在c.7957C>T(p.Arg2653*)杂合无义变异;例3的CHD7基因第2外显子存在c.1021_1048delAATCAGTCCGTACCAAGATACCCCAATG(p.Asn341Leufs*2)杂合移码变异,其中c.1447delG(p.Val483Leufs*12)和c.1021_1048delAATCAGTCCGTACCAAGATACCCCAATG(p.Asn341Leufs*2)变异未见报道,根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传变异分类标准与指南,这两个均判定为致病性变异(PVS1+PM2+PM6);c.7957C>T(p.Arg2653*)变异为已报道的可能致病性变异(PVS1+PM2+PP4)。Sanger测序结果验证例1和例3的变异为新发变异(de novo),例2的变异为可疑新发变异。结论CHD7基因变异可能为3例CHARGE综合征患者的致病原因。 展开更多
关键词 CHARGE综合征 全外显子测序 CHD7基因 眼部表现
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