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低血清培养PK-15细胞系对TGEV增殖规律的研究 认领
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作者 杨雁婷 杨定勇 +2 位作者 龚双燕 李小璟 朱玲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期98-104,共7页
为降低疫苗生产综合成本,本研究探讨了以低血清培养基(M08011)替代常规细胞培养基(DMEM)的可行性。本研究依次采用含100、80、50、30、20、10、0mL/L血清的低血清培养基(M08011)驯化PK-15细胞,并考察猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在低血清... 为降低疫苗生产综合成本,本研究探讨了以低血清培养基(M08011)替代常规细胞培养基(DMEM)的可行性。本研究依次采用含100、80、50、30、20、10、0mL/L血清的低血清培养基(M08011)驯化PK-15细胞,并考察猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在低血清培养的PK-15细胞系中的增殖规律。结果显示,驯化后的PK-15细胞在含100、80、50、30、20 mL/L的低血清培养基中生长状态良好,与常规培养基所培养的PK-15细胞无差异。低血清培养体系培养PK-15细胞时,血清最低添加量为20 mL/L。用该体系培养的PK-15细胞接种TGEV后,TGEV的TCID50为10^-4.97/100μL,与常规条件培养的TGEV的TCID50为104.88/100μL相比,差别不明显。TGEV接种PK-15细胞,低血清培养基中血清浓度降低至20 mL/L,毒价未受到影响。结果表明,本研究建立的PK-15细胞及TGEV低血清培养体系可初步应用于TGEV的增殖培养,为相关疫苗研发奠定了基础。 展开更多
关键词 PK-15细胞 低血清培养基 猪传染性胃肠炎病毒
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仔猪肺、肠组织离体感染模型的建立及应用 认领
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作者 黄石磊 谢录异 +4 位作者 余秋寒 冉玲 杨洋 王凯 宋振辉 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1325-1333,共9页
目前,病毒的研究多局限于细胞水平,精密组织切片(Precision-cut tissue slices,PCTS)与细胞水平相比不仅能够比较完整的保存正常组织结构、细胞间的联系及细胞极性,而且也能保证切片的生存能力,使其能够最大限度地模拟在体状态,为病毒... 目前,病毒的研究多局限于细胞水平,精密组织切片(Precision-cut tissue slices,PCTS)与细胞水平相比不仅能够比较完整的保存正常组织结构、细胞间的联系及细胞极性,而且也能保证切片的生存能力,使其能够最大限度地模拟在体状态,为病毒的深入研究带来福音。本研究通过制备仔猪肺、肠的离体感染模型,并对离体模型的可行性进行验证,采用ATP检测试剂盒验证切片活性,并对其感染猪流行腹泻病毒(porcine epidemic diahorrea virus,PEDV) CV777和猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)GFP,进行RT-PCR检测和免疫荧光分析,结果显示小肠精密切片活性较好,维持在48 h左右,且能成功感染PEDV CV777和TGEV GFP,通过将肺脏气道内填充1.5%的低熔点琼脂糖,然后转移至切片机制作仔猪肺精密切片,观察气道上皮细胞纤毛活力,同时感染猪呼吸道冠状病毒(porcine respiratory coronavirus,PRCoV)后,进行RT-PCR检测和免疫荧光分析,结果显示肺精密切片生存力能够维持5 d左右,PRCoV成功感染肺精密切片且分布于气道上皮细胞周围,且病毒感染组纤毛活力比正常组下降快,结果表明,肺切片纤毛活性可作为病毒感染的重要评价指标。该研究可为模拟体内感染试验的离体模型提供理论依据,也为防制PEDV、TGEV、PRCoV提供新方法。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪呼吸道冠状病毒 精密组织切片
猪传染性胃肠炎病毒qRT-PCR检测方法的建立 认领
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作者 原冬伟 颜子涵 +2 位作者 申贵男 王一 李明月 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1913-1917,共5页
猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染引起猪以腹泻、呕吐、脱水为主要特征的一种高度接触性肠道传染病,可造成极高的仔猪死亡率,且临床剖检很难与其他病毒性腹泻区别。本试验参考TGEV JS2012株N基因保守序列设计引物,... 猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染引起猪以腹泻、呕吐、脱水为主要特征的一种高度接触性肠道传染病,可造成极高的仔猪死亡率,且临床剖检很难与其他病毒性腹泻区别。本试验参考TGEV JS2012株N基因保守序列设计引物,构建阳性标准品,建立qRT-PCR检测方法。将阳性标准品10倍倍比稀释构建标准曲线,结果显示,在6.06×10^2~6.06×10^8拷贝/μL扩增具有良好的线性关系。同时对临床生产中常见的腹泻病毒:轮状病毒、猪德尔塔冠状病毒、猪流行性腹泻病毒核酸进行扩增,结果均为阴性,无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。通过与传统PCR检测方法对比,本试验建立的检测方法具有更高的灵敏性,为临床检测TGEV的早期感染和预防提供技术支持。 展开更多
关键词 QRT-PCR 猪传染性胃肠炎病毒 N基因
猪传染性胃肠炎病毒ORF7蛋白在ST细胞中定位及其对病毒复制影响的研究 认领
4
作者 何雷 董玲娟 +6 位作者 张彦明 宋嘉兴 郁川 余祖华 张春杰 丁轲 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期543-548,共6页
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP... 为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ORF7蛋白的亚细胞定位及其在TGEV复制中的作用。本研究通过RT-PCR扩增TGEV ORF7基因,将其与真核表达载体pEGFP-C1和pEGFP-N1相连接,构建表达载体pGFP-ORF7(GFP融合在TGEV ORF7的-NH2端)和pORF7-GFP(GFP融合在ORF7的-COOH端)。分别将这两个质粒转染至ST细胞,western blot检测融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP的表达。通过生物信息学分析和激光共聚焦确定TGEV ORF7蛋白的亚细胞定位。在此基础上,通过细胞病变观察和荧光定量PCR检测TGEV ORF7蛋白对TGEV复制的影响。结果显示,本研究正确构建了真核表达载体pGFP-ORF7和pORF7-GFP,western blot检测结果表明融合蛋白GFP-ORF7和ORF7-GFP均正确表达,TGEV ORF7蛋白大小约为9 ku;结合生物信息学分析和激光共聚焦共定位结果显示TGEV ORF7特异性的定位于ST细胞的内质网中,其定位和其N端的信号肽序列有关;荧光定量PCR检测结果显示,过表达ORF7蛋白后TGEV mRNA转录水平降低99%,表明ORF7蛋白参与调控TGEV的复制。本研究为TGEV ORF7蛋白功能的研究提供了参考依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 ORF7蛋白 亚细胞定位 过表达 病毒复制
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肠小体感染猪传染性胃肠炎病毒模型的建立 认领
5
作者 尹灵丹 张鑫 +5 位作者 薛美 李亮 郭珊珊 罗毅 冯力 刘平黄 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期887-892,共6页
来源于肠隐窝干细胞的肠小体能模拟体内肠上皮复杂的生理特性,已成为研究宿主与肠道病原相互作用的理想的体外细胞模型。为探究肠小体能否作为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染模型,本研究从仔猪的回肠组织分离培养隐窝干细胞,在培养第7 d... 来源于肠隐窝干细胞的肠小体能模拟体内肠上皮复杂的生理特性,已成为研究宿主与肠道病原相互作用的理想的体外细胞模型。为探究肠小体能否作为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染模型,本研究从仔猪的回肠组织分离培养隐窝干细胞,在培养第7 d后能形成具有隐窝-绒毛样结构的肠小体。分别采用MOI 1、0.1和0.01 TGEV感染肠小体后,通过荧光定量PCR(qPCR)方法检测TGEV在肠小体中的复制情况,结果显示肠小体支持TGEV复制;进一步用MOI 1 TGEV感染肠小体后,通过qPCR检测并绘制TGEV在肠小体中的病毒复制曲线,结果显示,与2 hpi相比,在12 hpi病毒的mRNA转录水平增加了321倍,在24 hpi病毒复制达到峰值;通过间接免疫荧光(IFA)检测TGEV N蛋白的表达,结果显示N蛋白的表达情况与上述mRNA检测结果相符。通过双荧光标记IFA检测TGEV N蛋白与肠上皮细胞类型标志物的共定位情况,结果显示TGEV能感染多种肠上皮细胞类型,包括肠细胞、干细胞和杯状细胞。此外,通过qPCR检测TGEV感染肠小体的干扰素(IFN)mRNA转录水平,结果显示TGEV感染肠小体能显著增加IFN的产生。以上结果表明肠小体对TGEV易感,肠小体可以作为TGEV感染的体外细胞模型。本研究为探究TGEV与宿主之间的相互作用提供了一个全新的体外细胞模型,将有助于深入理解TGEV的致病机制。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 肠小体 肠上皮细胞
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猪传染性胃肠炎病毒半巢式RT-PCR检测方法的建立及应用 认领
6
作者 孙斌 李明月 +6 位作者 林思雨 申贵男 毛瑞锋 颜子涵 王一 孙东波 原冬伟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期556-562,共7页
为建立一种高效、敏感、特异的用于检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的半巢式RT-PCR方法,本研究依据GenBank发表TGEV的N基因序列设计3条特异性引物,通过优化反应体系,建立了检测TGEV的半巢式RT-PCR方法,并对反应体系特异性和敏感性进行了... 为建立一种高效、敏感、特异的用于检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的半巢式RT-PCR方法,本研究依据GenBank发表TGEV的N基因序列设计3条特异性引物,通过优化反应体系,建立了检测TGEV的半巢式RT-PCR方法,并对反应体系特异性和敏感性进行了检测。结果显示,该方法能够成功扩增483 bp和338 bp两条目的条带;对TGEV具有良好的特异性,与猪流行性腹泻病毒、猪轮状病毒、猪博卡病毒、猪德尔塔冠状病毒均无交叉反应;最低可检测到1.86×10^-1pg/μL的TGEV cDNA。用所建半巢式RT-PCR对临床50份猪腹泻样品进行检测,结果显示,阳性率为36%,高于普通RT-PCR阳性检出率,且阳性样品符合率为100%。本试验所建立的半巢式RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性好,可准确地对TGEV感染做出诊断,为TGEV的临床检测、流行病学调查提供了有效手段。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 半巢式RT-PCR 检测方法
猪传染性胃肠炎病毒HB-FP株的分离鉴定及其S基因序列分析 认领
7
作者 袁广富 肖娜 +5 位作者 刘立辉 陈少杰 王晶 韩磊 范京惠 左玉柱 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期90-95,共6页
为了解目前河北地区流行的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的生物学特征及基因的遗传进化关系,从河北某地采集仔猪粪便或小肠内容物,病料处理后在PK-15细胞上进行盲传,通过RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)验证,成功分离出1株猪传染性胃肠炎病毒,命... 为了解目前河北地区流行的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的生物学特征及基因的遗传进化关系,从河北某地采集仔猪粪便或小肠内容物,病料处理后在PK-15细胞上进行盲传,通过RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)验证,成功分离出1株猪传染性胃肠炎病毒,命名为HB-FP株。对HB-FP株S基因进行RT-PCR扩增,获得的分离株S全基因与国内外TGEV毒株进行序列比对和遗传进化分析:结果显示,HB-FP株S基因与其他参考毒株的核苷酸同源性为94.9%~98.8%,编码氨基酸同源性为65%~98%,与我国的TGEV JS2012(KT696544)株核苷酸同源性最高为98.8%,氨基酸同源性为98%。由进化树分析表明,HB-FP株除与英国TGEV株(AF104420)不在一个分支上外,与其他参考毒株都在同一分支上,中国的TGEV JS2012(KT696544)株、美国的TOY56-165(M94103)株、韩国的TGEV(AF298211)株与分离株HB-FP株亲缘关系最近。氨基酸变异情况分析表明,分离株与常用疫苗株相比在S蛋白的抗原表位区有7处点突变,这种抗原位点的突变对TGEV生物学特性的影响还有待进一步研究。本试验成功从河北省分离鉴定得到1株猪传染性胃肠炎病毒,为该地区TGEV防控及候选疫苗毒株的筛选提供了物质基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 分离鉴定 S蛋白 序列分析
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猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR检测方法的建立及应用 认领 被引量:3
8
作者 杜雅楠 李静 +2 位作者 刘艳成 杜鹏 包福祥 《动物医学进展》 北大核心 2019年第9期29-33,共5页
为建立一种操作简便、准确率高的检测方法,对内蒙古地区猪传染性胃肠炎流行情况进行调查,参考GenBank中收录的猪传染性胃肠炎病毒的N基因序列,设计合成了一对特异性引物,针对该基因建立了TGEV的RT-PCR检测方法。应用建立的RT-PCR方法对... 为建立一种操作简便、准确率高的检测方法,对内蒙古地区猪传染性胃肠炎流行情况进行调查,参考GenBank中收录的猪传染性胃肠炎病毒的N基因序列,设计合成了一对特异性引物,针对该基因建立了TGEV的RT-PCR检测方法。应用建立的RT-PCR方法对从内蒙古地区7个盟市采集的204份猪腹泻样品进行了TGEV检测。结果显示,受检的204份样品中有24份样品呈现TGEV阳性,阳性率为11.76%。其中从赤峰市采集的样品TGEV阳性率最高,为20.83%;不同类型样品TGEV的检出率也有差异,其中肛门拭子的检出率最高(15.56%),其次是肠道样品(12.00%),粪便样品的检出率最低(7.87%)。表明所建立的RT-PCR检测方法灵敏度高、特异性强,可用于猪传染性胃肠炎病毒的快速检测。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 反转录-聚合酶链反应 检测
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猪传染性胃肠炎病毒诱导PK-15细胞凋亡相关基因mRNA转录水平变化的研究 认领
9
作者 龚双燕 李小璟 +2 位作者 李幽幽 朱玲 徐志文 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期256-260,共5页
为探究PK-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染PK-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导PK-15细胞发... 为探究PK-15细胞感染猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)后相关凋亡基因Bcl-XL、MCL-1及PUMA mRNA转录水平差异以及TGEV增殖与细胞凋亡之间的关联,本研究在TGEV感染PK-15细胞前后,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,结果显示TGEV具有诱导PK-15细胞发生凋亡的能力;并利用建立的q PCR方法对凋亡相关基因Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA的转录水平进行测定,结果显示,感染TGEV (实验组)后Bcl-XL、MCL-1和PUMA mRNA转录水平与未感染病毒组(对照组)有明显差异,进一步表明TGEV感染PK-15细胞诱导了细胞凋亡的进程。本研究为了解TGEV诱导PK-15细胞凋亡的机制提供了实验依据。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 PK-15 细胞凋亡 BCL-XL MCL-1 PUMA
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γ干扰素通过上调I型干扰素表达协同抑制猪传染性胃肠炎病毒的复制 认领 被引量:2
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作者 单玲玲 符芳 +2 位作者 薛美 李亮 刘平黄 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期723-729,共7页
为探索干扰素(IFN)在猪消化道冠状病毒的预防和治疗中的作用,通过反转录定量PCR(reverse transcription-q PCR,RT-qPCR)和间接免疫荧光试验,分别检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)拷贝数和TGEV核衣壳蛋白的表达,发现猪源IFN-γ能够显著抑制T... 为探索干扰素(IFN)在猪消化道冠状病毒的预防和治疗中的作用,通过反转录定量PCR(reverse transcription-q PCR,RT-qPCR)和间接免疫荧光试验,分别检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)拷贝数和TGEV核衣壳蛋白的表达,发现猪源IFN-γ能够显著抑制TGEV在猪睾丸细胞中的复制,并且相同质量浓度的IFN-γ比IFN-α能更有效地抑制TGEV的复制,与猪源IFN-α有明显的协同抑制作用。对其机制进一步探索,发现IFN-γ能够不依赖于I型干扰素发挥直接抗病毒活性,但是能够通过诱导I型干扰素表达水平的上调,增加其抗病毒活性。结果表明,IFN-γ通过诱导I型干扰素的表达与I型干扰素协同抑制TGEV的复制,对预防和治疗TGEV感染有重要意义。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 Γ干扰素 Α干扰素
猪传染性胃肠炎病毒感染对仔猪肠道屏障功能的影响及营养调控 认领 被引量:4
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作者 罗钧秋 杜建 +4 位作者 王岚 毛湘冰 何军 余冰 陈代文 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期787-792,共6页
猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染仔猪能够引起仔猪肠道损伤,导致仔猪腹泻脱水甚至死亡,其致病机制主要在于破坏猪小肠黏膜,引起肠道黏膜上皮屏障功能受损,具体主要表现为:TGEV破坏仔猪肠道上皮机械... 猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染仔猪能够引起仔猪肠道损伤,导致仔猪腹泻脱水甚至死亡,其致病机制主要在于破坏猪小肠黏膜,引起肠道黏膜上皮屏障功能受损,具体主要表现为:TGEV破坏仔猪肠道上皮机械屏障完整和电解质平衡,扰乱生物菌群结构,降低局部免疫功能。TGEV诱导炎症及先天免疫反应的作用机制主要通过激活维甲酸诱导基因Ⅰ样受体(RLR)和Toll样受体(TLR),使核转录因子(NF-κB)活化,进一步诱导细胞因子和干扰素表达。通过饲粮中添加氨基酸、维生素和中草药等营养调控措施可以达到缓解TGEV损伤肠道屏障功能的目的,为预防及治疗TGEV感染对仔猪肠道屏障功能的影响提供参考。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 肠道屏障 先天免疫 营养
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我国部分地区原种猪场3种猪腹泻病毒的血清学调查 认领 被引量:7
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作者 王婧怡 申之义 +4 位作者 原霖 倪建强 张瑜 陈亚娜 李文杰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期255-258,共4页
为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在我国原种猪场的流行情况,采用ELISA检测方法对2016年1—6月采集的896份发病种猪血清样品进行了血清学检测。结果显示,PEDV、PoRV、TGEV抗体阳性率... 为了解猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在我国原种猪场的流行情况,采用ELISA检测方法对2016年1—6月采集的896份发病种猪血清样品进行了血清学检测。结果显示,PEDV、PoRV、TGEV抗体阳性率分别为62.3%,89.0%,23.0%,且存在混合感染情况,其中PEDV+PoRV、PEDV+TGEV、PoRV+TGEV混合感染率分别为42.3%,8.5%,5.6%,PEDV+PoRV+TGEV混合感染率为8.9%;同时对检测样品进行了不同种猪类别的比较和不同日龄段的比较,发现不同类别种猪抗体阳性率和不同目龄种猪抗体阳性率的分布特征显著。结果说明我国原种猪场3种腹泻病毒中PoRV感染率最高,其次是PEDV和TGEV,且在不同种猪类别和不同日龄段的种猪中呈现规律性分布。本试验对国内原种猪场猪血清进行PEDV、PoRV和TGEV抗体阳性率检测,为我国种猪病毒性腹泻的防控提供了参考。 展开更多
关键词 种猪 猪流行性腹泻病毒 猪轮状病毒 猪传染性胃肠炎病毒 血清学检测
猪流行性腹泻传染性胃肠炎双重RT-PCR检测方法的建立及优化 认领 被引量:4
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作者 赵光伟 涂少宇 +6 位作者 汪洋 贺然 赖靖尧 谭阳春 郭道兵 牛晨霞 杨晓伟 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第10期45-47,51共4页
为了临床上能够快速检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV)以及传染性胃肠炎病毒(TGEV),本研究根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特异性引物,针对本实验室保存的毒株进行了双重RT-PCR检测方法的建立及条件的优化,结果特异... 为了临床上能够快速检测出猪流行性腹泻病毒(PEDV)以及传染性胃肠炎病毒(TGEV),本研究根据GenBank中收录的PEDV和TGEV的基因序列,分别设计两对特异性引物,针对本实验室保存的毒株进行了双重RT-PCR检测方法的建立及条件的优化,结果特异性良好,表明该研究建立的双重RT-PCR检测方法操作简单、特异性好,具有较高的检测灵敏性,为PEDV和TGEV的快速鉴别诊断和流行病学调查研究提供了更为敏感、快捷、可靠的技术手段。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 传染性胃肠炎病毒 双重RT-PCR
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四重荧光qRT-PCR检测猪腹泻相关病毒方法的建立 认领
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作者 包雯骏 张强 +3 位作者 李树清 林颖峥 李健 严亚贤 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第6期42-47,共6页
为建立同时检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪delta冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV)... 为建立同时检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪delta冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV)的四重荧光qRT-PCR检测方法,本研究以PEDV的N基因、TGEV的S基因、PDCoV的M基因和PTV基因组5'非编码基因为检测对象,建立同时检测4种病毒的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法可以特异扩增4种病毒的基因,不能扩增猪呼吸道冠状病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的基因;PEDV、TGEV、PDCoV和PTV的最低核酸检出量分别为141、68、8和11拷贝数;对100份送检样品进行检测,其中PEDV、TGEV、PDCoV和PTV感染检出率分别为10%、6%、2%和55%。结果表明本研究建立的检测方法具有良好的特异性和敏感性,而且操作快速简便,可用于猪腹泻疫病的临床诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪delta冠状病毒 猪捷申病毒 四重荧光RT-PCR 检测
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PEDV、TGEV和PoRV三重PCR检测方法的建立及初步应用 认领 被引量:3
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作者 蒲翠敏 冯旭芳 +7 位作者 张双翔 胡兴义 张海 丁尊俄 王开功 周碧君 文明 程振涛 《动物医学进展》 北大核心 2018年第2期19-25,共7页
为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)三重PCR检测方法,根据GenBank登录的PEDVS基因、TGEVM基因和PoRVVP7基因参考序列,设计3对特异性引物,以克隆的质粒为模板,进行反... 为建立一种快速、敏感的猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪轮状病毒(PoRV)三重PCR检测方法,根据GenBank登录的PEDVS基因、TGEVM基因和PoRVVP7基因参考序列,设计3对特异性引物,以克隆的质粒为模板,进行反应条件的优化以及特异性、敏感性试验。结果采用所建立的方法能够扩增出PEDV、TGEV和PoRV特异性片段,且不能检出PCV2、CSFV、PRRSV;对PEDV、TGEV和PoRV质粒模板的最低检测量分别为1×10^2拷贝/gL、1x10^2拷贝gL、1X10^2拷贝/μL;对102份临床病料进行检测,结果PNDV、TGEV和PoRV的检出率分别为37.25%、1.96%和6.86%,与单项PCR检测结果进行比较,符合率均为100%。结果表明,所建立的三重PCR检测方法可为猪病毒性腹泻病的快速诊断及流行病学调查提供技术支持。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 三重PCR
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2011-2017年浙江省猪病毒性腹泻病的流行病学调查 认领 被引量:11
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作者 徐丽华 李军星 +4 位作者 苏菲 余斌 王赛 田瑞雨 袁秀芳 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期625-630,共6页
为了解浙江省不同地区猪群中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(Po RV)和猪Delta冠状病毒(PDCo V)导致猪病毒性腹泻的感染情况,本研究应用RT-PCR方法对2011—2017年收集的浙江省不同地区猪腹泻样... 为了解浙江省不同地区猪群中猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(Po RV)和猪Delta冠状病毒(PDCo V)导致猪病毒性腹泻的感染情况,本研究应用RT-PCR方法对2011—2017年收集的浙江省不同地区猪腹泻样品进行4种病毒的检测与分析。结果显示,2011年至今,PEDV阳性率为71.25%,TGEV阳性率为3.05%,Po RV阳性率为17.67%,PDCo V阳性率为8.75%;单独感染中PEDV阳性率为51.89%,TGEV阳性率为0.94%,Po RV阳性率为5.19%,PDCo V阳性率为4.25%;混合感染中PEDV/TGEV阳性率为2.4%,PEDV/Po RV阳性率为15.1%,PEDV/PDCo V阳性率为2.8%,Po RV/PDCo V阳性率为0.5%,PEDV/TGEV/PDCo V阳性率为0.5%。结果表明,浙江省不同地区存在这4种病毒所导致的猪病毒性腹泻病,其中在单独感染中以PEDV感染为主,混合感染中以PEDV/Po RV二重混合感染为主。不同年份中以PEDV感染最为严重,阳性率均在50%以上;Po RV感染在2015年上半年阳性率高达60.9%,其余年份均稳定在20%左右;TGEV每年均有零星发病;PDCo V在2016年感染最为严重,阳性率为22.9%。该结果为浙江省猪病毒性腹泻病的诊断和防控积累了资料。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒 猪传染性胃肠炎病毒 猪轮状病毒 猪Delta冠状病毒 RT-PCR 流行病学调查
猪传染性胃肠炎病毒的分离与鉴定 认领 被引量:5
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作者 李嘉琛 吴华伟 +4 位作者 陈晓春 邓永 曹明慧 韩爽 夏业才 《中国兽药杂志》 2018年第3期25-30,共6页
将经胶体金试纸条和RT-PCR鉴定为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性的内蒙古某猪场的粪便样品,经ST细胞分离培养后,得到一株能产生明显细胞病变的毒株。纯净性检测结果显示,该毒株无细菌生长,无支原体及无外源病毒污染。特异性检测结果表... 将经胶体金试纸条和RT-PCR鉴定为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)阳性的内蒙古某猪场的粪便样品,经ST细胞分离培养后,得到一株能产生明显细胞病变的毒株。纯净性检测结果显示,该毒株无细菌生长,无支原体及无外源病毒污染。特异性检测结果表明:该分离株能被TGEV特异性阳性血清中和,且能被TGEV FA荧光抗体识别。采用TGEV N基因特异性引物,经RT-PCR可扩增出1215 bp特异性片段,将该片段测序后与GenBank中已发表的13株TGEV N基因的序列进行同源性比较,同源性为98.1%~100%,其中与我国分离的H16、JS2012以及Miller M6毒株同源性关系最近,均为100%。结果表明,分离到的毒株为TGEV,命名为TGEV NMG株。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 分离 特异性 纯净性
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猪传染性胃肠炎病毒血清抗体Dot-ELISA检测方法的建立 认领 被引量:1
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作者 于天飞 董慧莹 +3 位作者 张喜文 谢鹏宇 孙婉姝 王有祺 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期956-959,共4页
为快速检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体,本研究以原核表达系统串联表达的含有TGEVS蛋白抗原表位C的重组蛋白r-(C1C2)6为包被抗原建立TGEV血清抗体的Dot—ELISA检测方法。经反应条件优化结果显示,抗原最适包被量为62.5ng/点;... 为快速检测猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)抗体,本研究以原核表达系统串联表达的含有TGEVS蛋白抗原表位C的重组蛋白r-(C1C2)6为包被抗原建立TGEV血清抗体的Dot—ELISA检测方法。经反应条件优化结果显示,抗原最适包被量为62.5ng/点;血清最佳工作浓度和工作时间分别为1:80和45min;羊抗猪IgG—HRP最佳工作浓度和工作时间分别为1:800和45min;最适封闭条件分别为5%脱脂乳37℃,45min;血清和酶标抗体最适反应温度均为37℃;最佳显色时间7.5min。结果显示该方法与猪轮状病毒和猪流行性腹泻病毒阳性血清无交叉反应,表明其具有良好的特异性。该方法对TGEV阳性血清最低检测限为1:1280。采用建立的Dot-ELISA对27份临床猪血清样品进行检测,结果显示Dot-ELISA与TGEV/PRCV抗体检测试剂盒检测结果的符合率为92.6%。本研究建立的Dot-ELISA检测方法简便、快速、灵敏、特异,适合用于TGE快速诊断。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 纤突(S)蛋白 抗原表位c DOT-ELISA
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表达猪传染性胃肠炎病毒SLN基因的重组乳酸乳球菌的构建及其免疫原性的研究 认领
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作者 宋子杰 商纪娟 +6 位作者 盖春云 解倩倩 张洪亮 宫照欣 孙鑫鹏 单虎 黄娟 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期838-843,共6页
为探究表达猪传染性胃肠炎病毒SLN基因的重组乳酸乳球菌口服免疫动物诱导的特异性免疫应答,本研究构建了p MG36e-SLN重组质粒并将其电转化至乳酸乳球菌感受态细胞MG1363中,制备表达猪传染性胃肠炎病毒SLN基因的重组乳酸乳球菌,经SDS-PAG... 为探究表达猪传染性胃肠炎病毒SLN基因的重组乳酸乳球菌口服免疫动物诱导的特异性免疫应答,本研究构建了p MG36e-SLN重组质粒并将其电转化至乳酸乳球菌感受态细胞MG1363中,制备表达猪传染性胃肠炎病毒SLN基因的重组乳酸乳球菌,经SDS-PAGE、Western-blot分析鉴定目的基因表达,并将重组菌口服免疫新西兰大白兔,利用间接ELISA方法测定家兔小肠黏膜和血清中抗SLN蛋白特异性Ig G和Ig A。结果显示,表达重组SLN蛋白的重组菌经口服能够有效引起动物体产生较高水平抗SLN蛋白Ig G和一定量的抗SLN蛋白Ig A,表明该重组菌表达系统能刺激动物免疫系统产生应答,具有作为口服疫苗的潜在应用价值。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 SLN基因 免疫原性 ELISA
中药防治猪传染性胃肠炎作用研究进展 认领 被引量:2
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作者 朱买勋 林渝宁 周雪 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期1255-1259,共5页
中药具有防治猪传染性胃肠炎(TGE)的作用,直接抑制病毒的增殖、阻滞病毒对宿主细胞的入侵、抑制病毒的繁殖、增强动物机体自身免疫力、激发相关抗病毒因子产生等都可以有效地参与抗病毒作用,且不同种类的中药在不N的抗病毒途径中发... 中药具有防治猪传染性胃肠炎(TGE)的作用,直接抑制病毒的增殖、阻滞病毒对宿主细胞的入侵、抑制病毒的繁殖、增强动物机体自身免疫力、激发相关抗病毒因子产生等都可以有效地参与抗病毒作用,且不同种类的中药在不N的抗病毒途径中发挥着不N的作用,分析中药防治TGE的作用效果,为TGE的防治提供参考。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 中药 抗病毒
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